ABSTRACT
Immobilized lectins are a powerful biotechnological tool for separation and isolation of glycoconjugates. In the present study, polyvinyl alcohol (PVA) and glutaraldehyde (GA) were used as a support for Concanavalin A (Con A) covalent immobilization and for entrapment of Parkia pendula seed gum (PpeG). Con A immobilization yielded approximately 30% and 0.6 M glucose solution was the minimum concentration able to elute fetuin from column. PVA-GA-PpeG column was efficiently recognized by pure P. pendula lectin (PpeL) . These findings indicate that PVA-GA interpenetrated network showed to be an efficient support for lectin covalent immobilization and as affinity chromatography matrix after trapping of PpeG.
Lectinas imobilizadas são uma poderosa ferramenta biotecnológica para a separação e isolamento de glicoconjugados. No presente trabalho álcool polivinílico (PVA) e glutaraldeído (GA) foram utilizados como um suporte para a imobilização covalente da Concanavalina A (Con A) e para aprisionamento da goma de semente de Parkia pendula (PpeG). A eficiência da imobilização da Con A foi aproximadamente 30 % e a concentração mínima de glucose capaz de eluir a fetuína da coluna foi 0,6 M. Coluna de PVA - GA - PpeG foi eficientemente reconhecida pela lectina de P. pendula (PpeL) pura. Estes resultados indicam que a rede interpenetrada de PVA-GA mostrou-se um suporte eficiente para a imobilização covalente de lectina e como matriz de cromatografia de afinidade após aprisionamento de PpeG.
Subject(s)
Glycoconjugates , Chromatography, Affinity , LectinsABSTRACT
AbstractThe Neotropical catfish Corydoras paleatus is a facultative air-breather and the caudal half of the intestine is involved in gas exchange. In South America, air-breathing fishes are found in tropical or sub-tropical freshwaters where the probability of hypoxia is high. The aim of this study was to characterize by traditional histochemical and lectinhistochemical methods the pattern of carbohydrate in the intestinal mucosa. Intestine samples were taken from 25 healthy adult specimens collected in Buenos Aires (Argentina). Samples were fixed by immersion in 10 % buffered formalin and routinely processed and embedded in paraffin wax. Subsequently, these sections were incubated in the biotinylated lectins battery. Labeled Streptavidin-Biotin (LSAB) system was used for detection, diaminobenzidine as chromogen and haematoxylin as a contrast. To locate and distinguish glycoconjugates (GCs) of the globet cells, we used the following histochemical methods: PAS; PAS*S; KOH/ PA*S; PA/Bh/KOH/PAS; KOH/PA*/Bh/PAS; Alcian Blue and Toluidine Blue at different pHs. Microscopically, the general structure of vertebrate intestine was observed and showed all the cell types characteristic of the intestinal epithelium. The cranial sector of catfish intestine is a site of digestion and absorption and its structure is similar to other fish groups. In contrast, enterocytes of the caudal portion are low cuboidal cells; and between these, globet cells and capillaries are observed, these latter may reach the mucosal lumen. Underlying the epithelium, observed a well-developed lamina propria-submucosa made of connective tissue; this layer was highly vascularized and did not exhibit glands. According to histochemistry, the diverse GCs elaborated and secreted in the intestine are associated with specific functions in relation to their physiological significance, with special reference to their role in lubrication, buffering effect and prevention of proteolytic damage to the epithelium together with other biological processes, such as osmoregulation and ion exchange. The lectinhistochemical analysis of the intestinal mucosa reveals the presence of terminal residues of glucose, mannose and galactose. In conclusion, this study has shown that GCs synthesized in the intestine of C. paleatus exhibit a high level of histochemical complexity and that the lectin binding pattern of the intestinal mucosa is characteristic of each species and the variations are related with the multiple functions performed by the mucus in the digestive tract. The information generated here may be a relevant biological tool for comparing and analyzing the possible glycosidic changes in the intestinal mucus under different conditions, such as changes in diet or different pathological stages. Rev. Biol. Trop. 64 (1): 327-340. Epub 2016 March 01.
ResumenEl pez neotropical Corydoras paleatus, de respiración aérea de tipo facultativa, utiliza el sector caudal del intestino para el intercambio gaseoso. En América del Sur, los peces con respiración aérea se encuentran en las aguas dulceacuícolas tropicales y subtropicales, donde la probabilidad de hipoxia es alta. El objetivo de este trabajo fue caracterizar mediante técnicas histoquímicas tradicionales y de lectinhistoquímica el patrón de carbohidratos de la mucosa intestinal. Para ello se utilizaron muestras de intestino de 25 ejemplares sanos adultos recolectados en la provincia de Buenos Aires (Argentina). Las muestras fueron fijadas en formol amortiguado al 10 % y se procesaron para su inclusión en parafina. Posteriormente, los cortes fueron incubados con una batería de lectinas biotiniladas. Se utilizó el sistema de marcado con estreptavidina-biotina (LSAB) para su detección, diaminobencidina como cromógeno y hematoxilina como colorante de contraste. Para localizar y diferenciar los glicoconjugados (GCs) de las células caliciformes, se utilizaron las siguientes técnicas histoquímicas: PAS, PAS*S, PAPS, KOH/PA*S, PA/Bh/KOH/PAS, KOH/PA*/Bh/PAS, Azul Alcian y Azul de Toluidina a diferentes pHs. Microscópicamente, se observa la estructura general del intestino de los vertebrados y el epitelio intestinal presenta todos los tipos celulares característicos de esta región. El sector craneal del intestino de este teleósteo, es el sitio de digestión y absorción, y posee una estructura similar a la de otros grupos de peces. En cambio, los enterocitos de la porción caudal, son células cúbicas bajas, entre ellos se observan células caliciformes y capilares sanguíneas que llegan hasta el lumen de la mucosa. Por fuera del epitelio, se observa una lámina propia-submucosa muy desarrollada compuesta por tejido conectivo, altamente vascularizada que no presenta glándulas. De acuerdo con las técnicas histoquímicas, los diversos GCs elaborados y secretados por la mucosa intestinal se encuentran asociados con funciones específicas de importancia fisiológica, como su rol en la lubricación, su efecto amortiguador y la prevención de daños proteolíticos del epitelio junto con otros procesos biológicos, tales como la osmorregulación y el intercambio iónico. El análisis lectinhistoquímico de la mucosa intestinal revela la presencia de residuos terminales de glucosa, manosa y galactosa. En conclusión, en este estudio se demuestra que los GCs sintetizados en el intestino de C. paleatus muestran un alto nivel de complejidad histoquímica y que el patrón de unión de lectina de la mucosa intestinal es característico para cada especie y las variaciones se hallan relacionadas con las múltiples funciones realizadas por el mucus en el tracto digestivo. La información brindada en este trabajo es una herramienta de relevancia biológica para comparar y analizar los posibles cambios glicosídicos del mucus intestinal bajo diferentes condiciones como los cambios en la dieta o diferentes estados patológicos.
Subject(s)
Animals , Male , Female , Catfishes/classification , Glycoconjugates/analysis , Intestines/chemistry , Histocytochemistry , Intestinal Mucosa/cytology , Intestinal Mucosa/chemistry , Intestines/cytologyABSTRACT
We studied both the presence of some carbohydrate compounds in a three-dimensional [3D] matrix harvested from human gingiva and the cell behavior in this matrix. In this experimental research, in order to prepare 3D scaffolds, human palatal gingival biopsies were harvested and physically decellularized by freeze-thawing and sodium dodecyl sulfate [SDS]. The scaffolds were placed within the rings of blastema tissues obtained from a pinna rabbit, in vitro. We evaluated the presence of glycoconjugates and cellular behavior according to histological, histochemical and spectrophotometry techniques at one, two and three weeks after culture. One-way analysis of variance [ANOVA] compared the groups. Extracellular matrix [ECM] remained after decellularization of tissue with 1% SDS. Glycoconjugate contents decreased meaningfully at a higher SDS concentration [p<0.0001]. After culture of the ECM scaffold with blastema, we observed increased staining of alcian blue, periodic acid-Schiff [PAS] and toluidine blue in the scaffold and a number of other migrant cells which was caused by cell penetration into the scaffold. Spectrophotometry results showed an increase in glycosaminoglycans [GAGs] of the decellularized scaffolds at three weeks after culture. The present study has shown that a scaffold generated from palatal gingival tissue ECM is a suitable substrate for blastema cell migration and activity. This scaffold may potentially be useful as a biological scaffold in tissue engineering applications
Subject(s)
Animals , Gingiva , Cell Culture Techniques , Glycoconjugates , Extracellular Matrix , Acellular Dermis , RabbitsABSTRACT
Because of the changed metabolic behaviors of cancer cells, tumor cells uptake a corresponding larger amount of glucose in physiological condition when compared with normal cells. And they were prone to metabolize glucose for generating energy in anaerobic glycolysis ways in order to grow quickly. Anaerobic glycolysis consumes more glucose than aerobic way when the same amount of energy is obtained, which also results in large demand of glucose in tumor cells. This review briefly describes therapy methods related to characteristic mentioned above, and summarizes the research progress of drugs, diagnostic reagents and carriers conjugated with glucose, glucose derivatives or other kinds of sugars for cancer targeting. Furthermore, typically relative research reports from 2012 till now were listed and analyzed.
Subject(s)
Animals , Humans , Antineoplastic Agents , Therapeutic Uses , Drug Carriers , Energy Metabolism , Glucose , Chemistry , Metabolism , Therapeutic Uses , Glycoconjugates , Chemistry , Therapeutic Uses , Glycolysis , Glycosides , Chemistry , Ifosfamide , Chemistry , Therapeutic Uses , Neoplasms , Diagnosis , Drug Therapy , Metabolism , Nitroimidazoles , Chemistry , Radiation-Sensitizing Agents , ChemistryABSTRACT
The composition and distribution of the glycoconjugates (GCs) secreted by the epithelium of ovarian lamellae with reference to the reproductive biology of Genypterus blacodes (Schneider, 1801) through lectin hi stochemistry is here discussed. In this species, the epithelial cells that line the ovarian cavity presented sharp morphological variations along the reproductive cycle related to the mucus secretion that accompanies oocyte ma turation. During sp awning season, residues of mannose and N-acetylglucosamine were detected in the glycocalyx of those cells using lectinhistochemistry. N- acetylgalactosamine and fucose were also observed in the same zone. The greatest variations in the lectinhistochemical pattern were found in the apical cytoplasm composition in comparison to the basal zone of the cells. The results of the present study were discussed by comparing their possible functional implications.
A composição e distribuição dos glicoconjugados (GCs) secretado pelo epitélio do ovário de lamelas com referência à biologia reprodutiva de Genypterus blacodes (Schneider, 1801) através da histoquímica com lectinas é aqui discutida. Nesta espécie, as células epiteliais que revestem a cavidade do ovário apresentou acentuada variação morfológica ao longo do ciclo reprodutivo relacionados com a secreção de muco que acompanha a maturação do oócito. Durante a época de desova, de resíduos de manose e N-acetilglicosamina foram detectados no glicocálix dessas células usando histoquímica de lectinas. N-acetilgalactosamina e fucose também foram observados na mesma zona. As maiores variações no padrão de lectinas foram encontradas na composição do citoplasma apical, em comparação com a zona basal das células. Os resultados do presente estudo foram discutidos, comparando as suas possíveis implicações funcionais.
Subject(s)
Animals , Female , Epithelium/metabolism , Glycoconjugates/chemistry , Ovary/metabolism , Fishes/anatomy & histology , Cytoplasm/chemistry , Histocytochemistry/veterinary , LectinsABSTRACT
Os glicoconjugados de Leishmania tem sido extensivamente estudados, mas ainda poucose sabe sobre o quanto polimorfismos intra e interespecíficos contribuem com o desenvolvimentodas diferentes imunopatologias das leishmanioses. Por este motivo, duas espécies de importânciaepidemiológica foram examinadas, L. braziliensis e L. infantum, agentes causadores dasleishmanioses cutânea e visceral, respectivamente. O LPG de L. braziliensis não possui cadeiaslaterais enquanto o LPG de L. infantum carrega em sua estrutura oligômeros de até três β-glicoses como cadeias laterais. Por outro lado a estrutura dos GIPLs destas espécies eradesconhecida e foi objeto de estudo deste trabalho.A análise estrutural dos GIPLs mostrou que L. infantum possui GIPLs pequenos e ricosem manose, sugerindo predominância de GIPLs do tipo I e híbridos enquanto L. braziliensisapresenta GIPLs grandes e ricos em galactose, sugestivo do tipo II. Para analisar o papel destasmoléculas na interação com o hospedeiro, macrófagos peritoneais murinos foram tratados comLPG ou GIPLs e a produção de nitrito, citocinas, bem como a ativação de MAPKs foramavaliados.De forma geral, macrófagos estimulados com LPG de L. braziliensis, demonstraram umaprodução maior de TNF-α, IL-1β, IL-6 e NO do que os estimulados com LPG de L. infantum,adicionalmente, células tratadas com LPG de ambas as espécies mostraram uma resposta proinflamatória mais proeminente. Além disto, os GIPLs mostraram a capacidade de inibir aprodução de IL-12 e NO em macrófagos estimulados com IFN-γ e LPS. Finalmente, osglicoconjugados destas duas espécies resultaram em uma cinética diferencial na ativação deMAPKs. O LPG de L. braziliensis mostrou uma ativação transiente enquanto o de L. infantumuma ativação gradual. Os GIPLs de ambas espécies falharam em ativar MAPKs
Subject(s)
Animals , Guinea Pigs , Mice , Glycoconjugates/immunology , Leishmania braziliensis/immunology , Leishmaniasis, Diffuse Cutaneous/immunologyABSTRACT
The development of vertebrae is a complex phenomenon that is correlated with distinct morphological and biochemical alterations in the paraxial mesenchyme and glycoconjugates. The purpose of this study is to investigate the glycosylation pattern in paraxial mesenchyme-forming vertebrae by using the lectin histochemical technique. In this descriptive-analytic study, B4G fixed paraffin sections of 9 to 15 day Balb/c mouse embryos were processed for histochemical studies using seven different HRP-labelled lectins: Glycin max [SBA], Maclura pomifera [MPA], Wistaria floribunda [WFA], Vicia villosa [VVA] which all of them are specific for N-acetylgalactosamine [GalNAc], Ulex europius [UEA1, binds to alpha-L-fucose], wheat germ agglutinin [WGA, binds to sialic acid], and Griffonia simplicifolia [GSA1-B4, binds to galactose terminal sugars]. The sections were observed separately by three examiners who were blinded to the lectins. Grading was done according to the intensity of the tested lectins' reactions with the specimen, from negative [-] to severe [+++]. Data was analysed with SPSS software [version 11.5] and the non-parametric Kruskal Wallis test; p<0.05 was considered significant. Our findings showed that among the tested lectins, only GalNAc residue sensitive lectins showed regulated changes in paraxial mesenchyme. Reactions of WFA and MPA lectins with paraxial mesenchyme were severe on GD9. Reactions of WFA continued to GD15 constantly, while MPA reactions continued strongly to GD12, significantly decreased thereafter [p<0.001], and then disappeared. VVA and SBA bindings initiated weakly on GD10 and continued to GD12 without changing. These reactions increased significantly [p<0.001] thereafter, became severe to GD14, and later disappeared. The other tested lectins did not reveal regulated changes. According to these findings it can be concluded that only the GalNAc terminal sugar showed temporally regulated changes during the early embryonic development of vertebrae in mice. Therefore it most likely plays a key role [s] in the development of vertebrae, especially in the conversion of mesenchymal cells into chondroblasts. The other tested terminal sugars may have no role in this phenomenon
Subject(s)
Animals, Laboratory , Embryo, Mammalian , Mice, Inbred BALB C , Mesoderm , GlycoconjugatesABSTRACT
Histochemical patterns of lectin binding during development of the rat vomeronasal organ (VNO) were studied to determine whether glycoconjugates are differently expressed after birth. Three types of lectins, Dolichos biflorus agglutinin (DBA), wheat germ agglutinin (WGA), and Ulex europaeus agglutinin I (UEA-I), were studied histochemically in the rat VNO at various stages post-birth: postnatal days 1 and 7, the preweaning period (4 weeks after birth), and at sexual maturity (8 weeks after birth). The free border of the vomeronasal sensory epithelium was positive for both WGA and UEA-I in rats of all ages; whereas, VNO receptor cells and supporting cells were positive only for both WGA and UEA-I from 4 weeks after birth. DBA reactivity was detected in the free border but less so in receptor cells and supporting cells. WGA and UEA-I, but not DBA, showed similar patterns in various ages. In the Jacobson's gland, WGA, UEA-I and DBA were detected in some acini from 4 weeks after birth but not at postnatal days 1 or 7. Collectively, reactivity for three lectins, WGA, UEA-I and DBA, increased in receptor cells and gland acini during postnatal development, possibly contributing to the enhanced chemoreception in rats.
Subject(s)
Animals , Rats , Dolichos , Epithelium , Glycoconjugates , Lectins , Parturition , Plant Lectins , Triticum , Ulex , Vomeronasal OrganABSTRACT
Os glicoconjugados de Leishmania tem sido extensivamente estudados, mas ainda poucose sabe sobre o quanto polimorfismos intra e interespecíficos contribuem com o desenvolvimentodas diferentes imunopatologias das leishmanioses. Por este motivo, duas espécies de importânciaepidemiológica foram examinadas, L. braziliensis e L. infantum, agentes causadores dasleishmanioses cutânea e visceral, respectivamente. O LPG de L. braziliensis não possui cadeiaslaterais enquanto o LPG de L. infantum carrega em sua estrutura oligômeros de até três β-glicoses como cadeias laterais. Por outro lado a estrutura dos GIPLs destas espécies eradesconhecida e foi objeto de estudo deste trabalho.A análise estrutural dos GIPLs mostrou que L. infantum possui GIPLs pequenos e ricosem manose, sugerindo predominância de GIPLs do tipo I e híbridos enquanto L. braziliensisapresenta GIPLs grandes e ricos em galactose, sugestivo do tipo II. Para analisar o papel destasmoléculas na interação com o hospedeiro, macrófagos peritoneais murinos foram tratados comLPG ou GIPLs e a produção de nitrito, citocinas, bem como a ativação de MAPKs foramavaliados.De forma geral, macrófagos estimulados com LPG de L. braziliensis, demonstraram umaprodução maior de TNF-α, IL-1β, IL-6 e NO do que os estimulados com LPG de L. infantum,adicionalmente, células tratadas com LPG de ambas as espécies mostraram uma resposta proinflamatória mais proeminente. Além disto, os GIPLs mostraram a capacidade de inibir aprodução de IL-12 e NO em macrófagos estimulados com IFN-γ e LPS. Finalmente, osglicoconjugados destas duas espécies resultaram em uma cinética diferencial na ativação deMAPKs. O LPG de L. braziliensis mostrou uma ativação transiente enquanto o de L. infantumuma ativação gradual. Os GIPLs de ambas espécies falharam em ativar MAPKs
Subject(s)
Animals , Guinea Pigs , Mice , Glycoconjugates/immunology , Leishmania braziliensis/immunology , Leishmaniasis, Diffuse Cutaneous/immunologyABSTRACT
The abnormal glycans expressing on the surface of tumor cells are good targets to develop carbohydrate-based anti-cancer vaccines. However, one of the major problems is that carbohydrate antigens possess weak immunogenicity. This review summarizes the recent efforts to overcome this problem: glycoconjugates produced by coupling the carbohydrate antigens and proper carrier proteins improve their immunogenicity, many glycoconjugates have entered clinical trials; the vaccines become chemically well-defined when coupling the carbohydrate antigens with a T-cell peptide epitope and an immunostimulant to form fully synthetic multi-component glycoconjugate vaccines; the modification of carbohydrate antigens in combination with the technology of metabolic oligosaccharide engineering of tumor cells induces a strong immune response; and the fact that the antibodies elicited against the unnatural carbohydrate antigens can recognize the native carbohydrate antigens on tumor cells provides a new promising strategy for the development of anti-cancer vaccines.
Subject(s)
Animals , Humans , Antigens, Tumor-Associated, Carbohydrate , Chemistry , Allergy and Immunology , Cancer Vaccines , Chemistry , Allergy and Immunology , Therapeutic Uses , Carbohydrates , Chemistry , Allergy and Immunology , Epitopes, T-Lymphocyte , Chemistry , Allergy and Immunology , Glycoconjugates , Chemistry , Allergy and Immunology , Immune Tolerance , Metabolic Engineering , Methods , Neoplasms , Therapeutics , Oligosaccharides , ChemistryABSTRACT
This study was conducted in order to determine distributions and changes of glycoconjugates terminal sugars during skin morphogenesis. Using lectin histochemistry technique, 10% formalin fixed, paraffin embedded rat embryonic sections for days 12, 14, 16 of gestation [1SN30] were incubated with different HRP-lectins from Lotus tetragonolobus [LTA], Maclura pomifera[MPA] and Arachis hypogaea or Peanut [PNA] that are specific for terminal alpha-L Fuc, Gal[beta1->3] GalANC and D-Gal[beta1->3]DGalNAC respectively. On the basis of colonmetery data that was determined by blind's method, sections were graded. SPSS statistic soft ware and Kruskal-Wallis non-parametric statistical test were used to compare different embryonic stages. Our results demonstrated that the reaction of ectodermal cells with LTA observed from gestational day 12 [E12] was weak. This reaction increased E14 significantly [p=0.0001] and then decreased. Extracellular matrix [ECM] of mesenchyme did not react with LTA lectin. Ectodermal cells as well as ECM of mesenchyme reacted with PNA on El2 was fairly weak. It increased E14 [p=0.009]. From E14 to E16 intensity staining remain the same in ectodermal cells but decreased in ECM mesenchyme [p=0.0001]. Ectodermal cells and ECM of mesenchyme reacted with the MPA lectins from E12 to E16. According to our result, it is suggested that the distributions and changes of glycoconjugates with terminal sugars L-Fuc [alpha2-4] GlcNAC, Gal [[beta 1->3] GalNAC and D-Gal [brta1->3] DGalNAC be stage - regulated during rat skin morphogenesis
Subject(s)
Animals, Laboratory , Glycoconjugates , Lectins , RatsABSTRACT
The aim of this study was to investigate glycoconjugates distribution patterns as well as their changes during the course of pituitary portal vasculogenesis and angiogenesis. Formalin fixed paraffin sections of 10 to 20 days of Sprague Dawly rat fetuses were processed for histochemical studies using four different horseradish peroxidase [HRP] conjugated lectins. Orange peel fungus [OFA], Vicica villosa [VVA], Glycine max [SBA] and Wistaria floribunda [WFA] specific for alpha-L-Fucose, D-Gal, alpha, beta-D-GalNAc and D-GalNAc terminal sugars of glycoconjugates respectively. Our finding indicated that adenohypophysal cells reacted with OFA on gestational day 10 E[10] and increased progressively to E[14]. Staining intensity did not change from days 14 to17, then after increased following days to E[20] significantly [P< 0.05]. A few cells around Rathke's pouch reacted with VVA on E[13], increased to E[14] and decreased significantly afterward [P< 0.05]. Reaction of some cells around Rathke's pouch reacted with SBA on E[14]. This visible reaction was the same as E[18] and decreased later [P< 0.05]. Many cells around Rathke's pouch reacted with WFA on E[13] and increased on E[14] and E[15] and decreased thereafter [P<0.05]. Reactions of OFA and other tested lectins with endothelial cells around Rathke's pouch and developing pars distalis were different. These results suggest that embryonic origin of hypophiseal pituitary portal [HPP] system endothelial cells are not the same and our finding also indicated that glycoconjugates with terminal sugars alpha-L-Fucose, D-Gal, alpha, beta-D-GalNAc may play critical role[s] in cell interactions and tissue differentiations such as vasculogensis and angiogenesis as well as other developmental precursors in formation of the pituitary gland
Subject(s)
Female , Animals, Laboratory , Neovascularization, Physiologic , Morphogenesis , Pituitary Gland/growth & development , Rats, Sprague-Dawley , Glycoconjugates , Horseradish PeroxidaseABSTRACT
Estudos da interação Leishmania-vetor são importantes para o entendimento dos processos dedesenvolvimento e transmissão do parasito. Significativas informações têm sido relatadasprincipalmente para espécies de Leishmania do Velho Mundo. No Novo Mundo, existempoucas informações detalhadas sobre o desenvolvimento de Leishmania chagasi em seu vetornatural Lutzomyia longipalpis. O desenvolvimento desse parasito foi investigado em infecçõesexperimentais do vetor com promastigotas e amastigotas axênicas obtidas por transformação invitro. Ambas as formas do parasito geraram alta porcentagem de flebotomíneos infectados. Foiobservado um decréscimo no número de parasitos por intestino no terceiro dia após o repasto.Entretanto, os parasitos sobreviventes nos dois grupos foram capazes de se multiplicar e sedesenvolver no intestino, apresentando densidade máxima entre seis e sete dias. Todos osmorfotipos de promastigotas foram observados. Infecções iniciadas com promastigotas ouamastigotas axênicas mostraram perfis semelhantes de desenvolvimento e produziram formasinfectantes. Assim, promastigotas podem ser preferencialmente utilizadas em experimentos deinfecção por ser este um processo menos laborioso.
Para muitas espécies de Leishmania temsido sugerido que o lipofosfoglicano (LPG) promova a adesão do parasito ao epitélio intestinaldo flebotomíneo. Análises estruturais do LPG de diferentes espécies de Leishmania têmrevelado que o polimorfismo nesses glicoconjugados se deve a variação dos açúcares dascadeias laterais e "cap". A análise das cadeias laterais da cepa BH46 revelou pela primeira vezum LPG poliglicosilado em L. chagasi. A importância do LPG na sobrevivência dessa espécieem L. longipalpis foi investigada usando parasitos mutantes em LPG. Foram observadasreduções na sobrevivência ou no crescimento desses mutantes no período que antecede adefecação e, em 60 horas, a infecção foi perdida. Em todos os pares naturais Leishmania/vetoranalisados até o momento o LPG é requerido para a adesão do parasito ao intestino para evitarsua expulsão com o bolo fecal. Diferentemente, nós observamos que a síntese de LPG foiessencial para a sobrevivência inicial de L. chagasi no intestino de L. longipalpis,provavelmente protegendo o parasito do ataque enzimático. Aspectos morfológicos dessainteração foram investigados por microscopia óptica, eletrônica de varredura e transmissão.Diferente da adesão altamente especializada previamente proposta para L. chagasi em L.longipalpis, poucos parasitos foram observados com corpo e flagelo em contato com o epitéliointestinal e, esporadicamente, com o flagelo superficialmente inserido entre asmicrovilosidades. Diante de nenhuma vacina efetiva contra a doença e de uma variedadelimitada de drogas para o tratamento, detalhes de todos os aspectos da biologia do parasito sãodesejáveis para a formulação de novas estratégias de controle contra o protozoário e o vetor.
Subject(s)
Humans , Animals , Mice , Glycoconjugates/analysis , Leishmania/parasitology , Leishmaniasis/prevention & control , Psychodidae/parasitologyABSTRACT
O LPG é o principal glicoconjugado da superfície de Leishmania sendo constituído por quatro domínios: (I) uma âncora lipídica de 1-O-alquil-2-liso-fosfatidilinositol, (II) uma parte central formada por um heptassacarídeo Gal(α1,6)Gal(α1,3)Galf(β1,3)[Glc(α1)- PO4]Man(α1,3)Man(α1,4)-GlcN(α1), (III) uma região de unidades repetitivas fosforiladas Gal(β1,4)Man(α1)-PO4 e (IV) um oligossacarídeo terminal ("cap"). As variações na seqüência e composição de açúcares ligados às unidades repetitivas e ao cap atribuem polimorfismos à molécula de LPG. O polimorfismo interespecífico do LPG tem sido amplamente estudado para espécies do Velho e do Novo Mundo e demonstra implicações na especificidade da. interação parasito-vetor. Entretanto, pouco se sabe sobre a variabilidade intraespecífica da molécula de LPG. O principal objetivo deste trabalho foi avaliar o grau de polimorfismo das unidades repetitivas do LPG de 16 cepas de Leishmania infantum do Brasil, França, Tunísia e Algéria. Além disso, o papel deste polimorfismo foi avaliado durante a interação in vivo de L. infantum com Lutzomyia longipalpis e na interação in vitro dos parasitos e seus respectivos LPGs com macrófagos murinos.
O polimorfismo das unidades repetitivas do LPG de L. infantum foi considerado relativamente baixo e, de acordo com suas modificações, o LPG foi classificado em três tipos: tipo I, LPG cujas unidades repetitivas não apresentam cadeias laterais; tipo II, LPG cujas unidades repetitivas apresentam cadeias laterais contendo um resíduo de β-glicose e, tipo III, LPG cujas unidades repetitivas apresentam cadeias laterais contendo até três resíduos de glicose. Essas variações no LPG não afetaram a densidade de parasitos no intestino do vetor. No entanto, foi observada uma tendência à maior produção de Óxido Nítrico (NO) por macrófagos estimulados por LPGs glicosilados do tipo II. Juntos, os resultados obtidos neste trabalho indicam que o polimorfismo intraespecífico do LPG de L. infantum não tem efeito sobre a interação do parasito com seu vetor, mas exerce papel regulatório sobre a produção de NO. A caracterização de todos estes LPGs, realizada pela primeira vez com uma ferramenta bioquímica, confirma os dados de estudos moleculares anteriores e nos permitem considerar que L. chagasi e L. infantum são a mesma espécie.
Subject(s)
Animals , Mice , Glycoconjugates/genetics , Leishmania infantum/parasitology , Leishmaniasis/transmissionABSTRACT
Estudos da interação Leishmania-vetor são importantes para o entendimento dos processos dedesenvolvimento e transmissão do parasito. Significativas informações têm sido relatadasprincipalmente para espécies de Leishmania do Velho Mundo. No Novo Mundo, existempoucas informações detalhadas sobre o desenvolvimento de Leishmania chagasi em seu vetornatural Lutzomyia longipalpis. O desenvolvimento desse parasito foi investigado em infecçõesexperimentais do vetor com promastigotas e amastigotas axênicas obtidas por transformação invitro. Ambas as formas do parasito geraram alta porcentagem de flebotomíneos infectados. Foiobservado um decréscimo no número de parasitos por intestino no terceiro dia após o repasto.Entretanto, os parasitos sobreviventes nos dois grupos foram capazes de se multiplicar e sedesenvolver no intestino, apresentando densidade máxima entre seis e sete dias. Todos osmorfotipos de promastigotas foram observados. Infecções iniciadas com promastigotas ouamastigotas axênicas mostraram perfis semelhantes de desenvolvimento e produziram formasinfectantes. Assim, promastigotas podem ser preferencialmente utilizadas em experimentos deinfecção por ser este um processo menos laborioso.
Para muitas espécies de Leishmania temsido sugerido que o lipofosfoglicano (LPG) promova a adesão do parasito ao epitélio intestinaldo flebotomíneo. Análises estruturais do LPG de diferentes espécies de Leishmania têmrevelado que o polimorfismo nesses glicoconjugados se deve a variação dos açúcares dascadeias laterais e "cap". A análise das cadeias laterais da cepa BH46 revelou pela primeira vezum LPG poliglicosilado em L. chagasi. A importância do LPG na sobrevivência dessa espécieem L. longipalpis foi investigada usando parasitos mutantes em LPG. Foram observadasreduções na sobrevivência ou no crescimento desses mutantes no período que antecede adefecação e, em 60 horas, a infecção foi perdida. Em todos os pares naturais Leishmania/vetoranalisados até o momento o LPG é requerido para a adesão do parasito ao intestino para evitarsua expulsão com o bolo fecal. Diferentemente, nós observamos que a síntese de LPG foiessencial para a sobrevivência inicial de L. chagasi no intestino de L. longipalpis,provavelmente protegendo o parasito do ataque enzimático. Aspectos morfológicos dessainteração foram investigados por microscopia óptica, eletrônica de varredura e transmissão.Diferente da adesão altamente especializada previamente proposta para L. chagasi em L.longipalpis, poucos parasitos foram observados com corpo e flagelo em contato com o epitéliointestinal e, esporadicamente, com o flagelo superficialmente inserido entre asmicrovilosidades. Diante de nenhuma vacina efetiva contra a doença e de uma variedadelimitada de drogas para o tratamento, detalhes de todos os aspectos da biologia do parasito sãodesejáveis para a formulação de novas estratégias de controle contra o protozoário e o vetor.
Subject(s)
Humans , Animals , Mice , Glycoconjugates/analysis , Leishmania/parasitology , Leishmaniasis/prevention & control , Psychodidae/parasitologyABSTRACT
O LPG é o principal glicoconjugado da superfície de Leishmania sendo constituído por quatro domínios: (I) uma âncora lipídica de 1-O-alquil-2-liso-fosfatidilinositol, (II) uma parte central formada por um heptassacarídeo Gal(α1,6)Gal(α1,3)Galf(β1,3)[Glc(α1)- PO4]Man(α1,3)Man(α1,4)-GlcN(α1), (III) uma região de unidades repetitivas fosforiladas Gal(β1,4)Man(α1)-PO4 e (IV) um oligossacarídeo terminal ("cap"). As variações na seqüência e composição de açúcares ligados às unidades repetitivas e ao cap atribuem polimorfismos à molécula de LPG. O polimorfismo interespecífico do LPG tem sido amplamente estudado para espécies do Velho e do Novo Mundo e demonstra implicações na especificidade da. interação parasito-vetor. Entretanto, pouco se sabe sobre a variabilidade intraespecífica da molécula de LPG. O principal objetivo deste trabalho foi avaliar o grau de polimorfismo das unidades repetitivas do LPG de 16 cepas de Leishmania infantum do Brasil, França, Tunísia e Algéria. Além disso, o papel deste polimorfismo foi avaliado durante a interação in vivo de L. infantum com Lutzomyia longipalpis e na interação in vitro dos parasitos e seus respectivos LPGs com macrófagos murinos.
O polimorfismo das unidades repetitivas do LPG de L. infantum foi considerado relativamente baixo e, de acordo com suas modificações, o LPG foi classificado em três tipos: tipo I, LPG cujas unidades repetitivas não apresentam cadeias laterais; tipo II, LPG cujas unidades repetitivas apresentam cadeias laterais contendo um resíduo de β-glicose e, tipo III, LPG cujas unidades repetitivas apresentam cadeias laterais contendo até três resíduos de glicose. Essas variações no LPG não afetaram a densidade de parasitos no intestino do vetor. No entanto, foi observada uma tendência à maior produção de Óxido Nítrico (NO) por macrófagos estimulados por LPGs glicosilados do tipo II. Juntos, os resultados obtidos neste trabalho indicam que o polimorfismo intraespecífico do LPG de L. infantum não tem efeito sobre a interação do parasito com seu vetor, mas exerce papel regulatório sobre a produção de NO. A caracterização de todos estes LPGs, realizada pela primeira vez com uma ferramenta bioquímica, confirma os dados de estudos moleculares anteriores e nos permitem considerar que L. chagasi e L. infantum são a mesma espécie.
Subject(s)
Animals , Mice , Glycoconjugates/genetics , Leishmania infantum/parasitology , Leishmaniasis/transmissionABSTRACT
Flow cytometry was used to quantify the abundance of mannose-linked glycoconjugates on microalgae precultured using low- or high-nitrate media. Nitrogen-deficient microalgae were richer in cell-surface mannose than nitrogen-sufficient. Findings are discussed in view of recent research which reveals mannose-specific 'feeding receptors' assist prey biorecognition by phagotrophic protozoa that ingest microalgae.
Citometria de fluxo foi usada para quantificar a abundância de glicoconjugados com manose em precultivos de microalgas usando meios com baixo e alto teor de nitrato. Microalgas com deficiências de nitrogênio tinham mais manose na superfície celular do que as com nitrogênio suficiente. Resultados são discutidos com base nas pesquisas recentes que revelam receptores específicos para manose que auxiliam no reconhecimento da presa por protozoários fagotróficos que ingerem microalgas.
Subject(s)
Bacteriophages/isolation & purification , Eukaryota , Flow Cytometry , Glycoconjugates/analysis , Mannose , Nitrogen/analysis , Biomass , Methods , Potency , MethodsABSTRACT
The fate of organochlorine 14C-dicofol in activated sludge process was investigated. Results showed that the major part of radioactivity remained adsorbed on biological sludge. Consequently, its final disposal deserves special attention. The small amounts of dicofol, biotransformed or not, which remained in the treated effluent could contaminate receiving bodies.
Glicoproteínas, glicoesfingolipídios e polissacarídios, expostos nas camadas mais externas da parede celular dos fungos, estão envolvidos em diferentes tipos de interações com o ambiente extracelular. Essas moléculas são componentes essenciais desses organismos, contribuindo para a estrutura, integridade, crescimento celular, diferenciação e sinalização. Alguns são compostos imunologicamente ativos com potencial para regular a patogênese e a resposta imune do hospedeiro, Algumas dessas estruturas podem ser especificamente reconhecidas por anticorpos presentes no soro de pacientes, sugerindo uma possível utilização como ferramenta no diagnóstico das infecções fúngicas.
Subject(s)
Humans , Cell Differentiation , Cell Enlargement , Cell Wall , Fungi , Glycoconjugates , Immunity, Mucosal , In Vitro Techniques , Mycoses , Polysaccharides , Methods , Patients , Diagnostic Techniques and ProceduresABSTRACT
The aim of the present study was to evaluate qualitative changes in the glycoconjugate expression in human gastric tissue of positive and negative patients for Helicobacter pylori, through lectins: Wheat Germ Agglutinin (WGA) and Concanavalin A (Con A). The lectins recognized differently the glycoconjugates in the superficial mucous layer at the gastric tissues. The results suggest a significant change in the carbohydrate moieties present on the surface of the gastric cells during infection.
O objetivo do presente estudo foi avaliar as mudanças qualitativas na expressão de glicoconjugados em tecidos gástrico humano de pacientes infectados ou não pelo Helicobacter pylori, através das lectinas: Wheat germ agglutinin (WGA) e Concanavalina A (Con A). As lectinas reconheceram diferentemente os glicoconjugados nas camadas mucosas superficiais do tecido gástrico. Os resultados sugerem mudanças significantes nas porções de carboidratos presentes nas células gástricas durante a infecção.
Subject(s)
Humans , Gastric Mucosa , Glycoconjugates , Helicobacter Infections , Helicobacter pylori/isolation & purification , In Vitro Techniques , Lectins/isolation & purification , MethodsABSTRACT
The present study was carried out to investigate the glycoconjugate properties of the nasal mucosa in the rat after inhalation of formaldehyde. Sprague-Dawley male rats were inhalated 30 ppm formaldehyde for 3 times with 3 hours exposure. The olfactory and respiratory mucosa in the nasal mucosa were taken from the animals on 3, 6,9 days and 2, 3, 4, 5 weeks after inhalation of formaldehyde. The properties of glycoconjugate of the olfactory and respiratory mucosa were investigated using nine biotinylated lectins (PSA, UEA I, PHA-L, BSL I, PNA, MAL I, DBA, BSL II or sWGA). In experimental groups, the degenerative changes of the olfactory epithelium were observed until 3 weeks after inhalation of formaldehyde, but the respiratory epithelium was no change. In control group, the olfactory cells in the olfactory epithelium reacted with PSA, UEA I, PNA, DBA, BSL II, sWGA, and the supporting cells reacted with PSA, PHA-L, PNA, MAL I, DBA, BSL II, sWGA, and Bowman's glands reacted with all the lectins. In experimental groups, the olfactory cells reacted with UEA I, DBA, and the supporting cells reacted with PHA-L, MAL I, DBA, UEA I, and the positive reaction of Bowman's glands was increased. In control group, the goblet cells in the respiratory epithelium reacted with UEA I, MAL I, and the ciliated columnar cells reacted with PSA, UEA I, PHA-L, BSL I, DBA, BSL II, sWGA, and the septal nasal glands reacted with all the lectins except UEA I. In experimental groups, the goblet cells reacted with UEA I, MAL I and PNA. Conclusively, the olfactory mucosa was shown a lot of changes in the properties of glycoconjugates following inhalation of formaldehyde, but respiratory mucosa was shown feeble change. These results suggest that there were different sugar residues of glycoconjugate in the olfactory and respiratory mucosa following inhalation of formaldehyde, respectively.