Improved immunodetection of human papillomavirus E7

Human papillomavirus E7 (HPV E7) is a viral oncoprotein that plays an important role in cervical carcinogenesis through binding with retinoblastoma protein (Rb). Inactivation of Rb by E7 is necessary but not sufficient for cellular transformation, suggesting other protein-protein interactions are required for E7-mediated cellular transformation aside from the interaction with Rb. However, studies on the oncogenic function of HPV E7 have been limited by its poor immunoreactivity. In this report, we show that the fixation of purified recombinant HPV E7 on blotted nitrocellulose membrane with glutaldehyde markedly enhanced the immunoreactivity of HPV E7 protein. Using HeLa and Caski cell line which are infected with HPV 18 and HPV 16, respectively, we demonstrated that native HPV E7 proteins also could be detected by this method. These results therefore can provide the experimental conditions for detection of HPV E7 proteins with greater sensitivity and may help to analyze E7 functions.

Determinaçäo da fraçäo de proliferaçäo celular no carcinoma de mama pela marcaçäo imunoistoquímica do antígeno nuclear Ki-67: comparaçäo dos métodos quanttitativo e semi-quantitativo / Breast carcinoma proliferation fraction evaluation by immunostaining with Ki-67 nuclear antigen: a comparison of quantitative and semiquantitative methods

O percentual de núcleos para o antígeno Ki-67 por métodos imunoistoquímicos apresenta estreita relaçäo com a fraçäo de crescimento das neoplasias. Este método de avaliaçäo da proliferaçäo celular tem sido cada vez mais utilizado, ancorado em sua validade biológica e aplicabilidade em tecido parafinado, através do anticorpo MIB-I. No carcinoma de mama esta prática estendeu-se à rotina de muitos laboratórios de imunoistoquímica, que incluem a avaliaçäo do Ki-67 em suas baterias prognósticas. Supreendentemente, ainda näo há uma forma padronizada de avaliaçäo deste marcador. Nas publicaçöes científicas predominam os métodos de contagem, enquanto na prática diária costuma-se fazer uma estimativa do percentual de núcleos marcados pela reaçäo imunoistoquímica. Neste estudo, comparamos o método de contagem com a estimativa do percentual de núcleos marcados. Comparamos, também, os resultados da avaliaçäo na área de maior proliferaçäo do tumor com a do padräo geral de proliferaçäo. A estimativa apresentou grande concordância com a contagem, quando a área mais proliferativa era avaliada, pois esta é uma área pequena que determina uma variabilidade menor dos campos selecionados para avaliaçäo. A concordância näo foi täo elevada quando o padräo geral da neoplasia era avaliado. Os presentes resultados apontam para avalidade da estimativa da fraçäo proliferativa na prática da avaliçäo prognóstica em carcinoma de mama, principalmente quando selecionada a área de maior proliferaçäo

Expresion de MIB-1/KI-67 y de Bcl-2 en el carcinoma gástrico: relación con factores clínico-patológicos / Expression of MIB-1/K-67 and of Bcl-2 in gastric carcinoma: relationship with clinico-pathological factors

El desarrollo de las neoplasias depende, en parte, del balance entre la actividad prliferativa de las células y el eventual bloqueo del mecanismo de eliminación de células anómalas o apoptosis. La actividad proliferativa puede estimarse mediante la cuantificación del antígeno KI-67, el cual aparece en las fases G1, S, G2 y M del ciclo celular, mientras que el bloqueo de la apoptosis se evidencia por la expresión de la proteína bcl- 2. En este trabajo estudiamos por inmunohistoquímica la presencia de los antígenos KI-67 y bcl-2 en una serie de 97 adenocarcinomas gástricos para ver su relación con diversos factores clínico-patológicos. Los resultados mostraron que la expresión de KI-67 se asoció únicamente al grado histológico y no tuvo valor pronóstico. En cambio sí se asociaron a mejor sobrevida a los 5 años la invasión de la pared sin sobrepasar la muscular, los ganglios linfáticos, el sexo femenino y la localización en el antro. La proteína bcl-2 fue negativa en todos los casos lo cual llamó la atención teniendo en cuenta la descripción previa de sobreexpresión de bcl-2 en casos de displasia gástrica. Se postula que la expresión de bcl-2 puede ser una etapa temprana en la carcinogénesis de las neoplasias gástricas y que sólo una pequeña proporción de los tumores malignos mantendrían esa sobreexpresión