ABSTRACT
La técnica de ADN polimórfico amplificado al azar (RAPD) es un método simple para detectar el polimorfismo genético del ADN. Diferentes factores afectan los perfiles de amplificación lo que se manifiesta en la presencia de bandas falsas y en la reproducibilidad del ensayo. En nuestro trabajo analizamos los cambios de la concentración de cebador, ADN molde, cloruro de magnesio y de Taq ADN polimerasa con el objetivo de determinar su concentración optima, quedando optimizada la técnica del RAPD para su utilización en estudios genéticos de Triatomíneos cubanos. Empleando una concentración de cebador de 5 pmol, 2.5 mM de MgCl2, 25 ng de ADN molde y 2 U de Taq ADN polimerasa en 25 µL de reacción, se obtuvieron patrones de amplificación reproducibles. Un total de cinco cebadores al azar fueron usados para evaluar la variabilidad genética de T. flavida. Tres de ellos (OPA-1, OPA-2 y OPA-4) produjeron patrones distinguibles y reproducibles de triatomineos. El análisis numérico según la técnica de UPGMA usando el coeficiente de similitud de Jaccard a partir de las 52 bandas de amplificación de RAPD generadas por los cinco cebadores, fue usado en la construcción del dendograma. Se obtuvieron 2 grupos bien definidos según el análisis del RAPD, mostrando concordancia con el origen geográfico, las poblaciones capturadas en áreas del occidente y el oriente de Guanahacabibes, Pinar del Río, respectivamente. T. flavida presentó una baja variabilidad genética inter-poblacional y esto puede resultar en una mayor susceptibilidad al uso de insecticidas en los programas de control. La técnica de RAPD optimizada y los cebadores seleccionados son útiles para la caracterización molecular de Triatomíneos cubanos.
Subject(s)
Animals , Female , Male , DNA , Polymorphism, Genetic/genetics , Random Amplified Polymorphic DNA Technique/methods , Triatoma/genetics , Cuba , Reproducibility of Results , Random Amplified Polymorphic DNA Technique/standardsABSTRACT
Los marcadores moleculares constituyen una herramienta útil en diferentes campos de la investigación, salud, producción, etc. Con éstos se pueden establecer: relaciones genéticas entre organismos y definir el estatus de especie, diagnóstico de enfermedades interviniendo directamente en la ubicación del gen en cuestión o identificando organismos que causan la enfermedad, igualmente en la producción de alimentos con ciertas características, como en la detección de alimentos transgénicos. Actualmente los investigadores están buscando moleculares que se tienen a mano, cada una de éstas tienen ventajas y desventajas. En este trabajo se pretende mostrar de manera general muchos aspectos de estos marcadores, haciendo énfasis en la técnica de RAPD.
Subject(s)
Antigens, Differentiation , Genetic Markers , Random Amplified Polymorphic DNA Technique/instrumentation , Random Amplified Polymorphic DNA Technique/standardsABSTRACT
The genetic diversity of 41 typical and atypical enteropathogenic Ëscherichia coli" (EPEC) strains of the serogroup O55 was analysed by using the random amplified polymorphic DNA (RAPD) method. All typical EPEC O55 strains were grouped in two clusters (A and C) and belonged to serotype O55:H6, while cluster B included all atypical strains, which were of the serotype O55:H7. The three groups also included non-motile strains. RAPD may be a useful method for epidemiological studies on "E. coli" O55 infection
Subject(s)
Escherichia coli/isolation & purification , Escherichia coli/pathogenicity , Escherichia coli Infections/diagnosis , Escherichia coli Infections/pathology , Genetic Variation/genetics , Random Amplified Polymorphic DNA Technique/standardsABSTRACT
RT-PCR was compared with tissue culture to detect RSV from nasopharyngeal aspirates. RT-PCR was more sensitive and specific than tissue culture method. RT-PCR has sensitivity and specificity of 100% and 97%, respectively. The results indicate that RT-PCR can be used for detection of RSV in clinical specimens.