Susceptibility of Phytomonas serpens to calpain inhibitors in vitro: interference on the proliferation, ultrastructure, cysteine peptidase expression and interaction with the invertebrate host

A pleiotropic response to the calpain inhibitor MDL28170 was detected in the tomato parasite Phytomonas serpens. Ultrastructural studies revealed that MDL28170 caused mitochondrial swelling, shortening of flagellum and disruption of trans Golgi network. This effect was correlated to the inhibition in processing of cruzipain-like molecules, which presented an increase in expression paralleled by decreased proteolytic activity. Concomitantly, a calcium-dependent cysteine peptidase was detected in the parasite extract, the activity of which was repressed by pre-incubation of parasites with MDL28170. Flow cytometry and Western blotting analyses revealed the differential expression of calpain-like proteins (CALPs) in response to the pre-incubation of parasites with the MDL28170, and confocal fluorescence microscopy confirmed their surface location. The interaction of promastigotes with explanted salivary glands of the insect Oncopeltus fasciatus was reduced when parasites were pre-treated with MDL28170, which was correlated to reduced levels of surface cruzipain-like and gp63-like molecules. Treatment of parasites with anti-Drosophila melanogaster (Dm) calpain antibody also decreased the adhesion process. Additionally, parasites recovered from the interaction process presented higher levels of surface cruzipain-like and gp63-like molecules, with similar levels of CALPs cross-reactive to anti-Dm-calpain antibody. The results confirm the importance of exploring the use of calpain inhibitors in studying parasites’ physiology.

Relationship between Neutrophil-To-Lymphocyte Ratio and Electrocardiographic Ischemia Grade in STEMI / Associação entre a Relação Neutrófilos/Linfócitos e o Grau de Isquemia Eletrocardiográfica no IAMEST

Background: Neutrophil-to-lymphocyte ratio (NLR) has been found to be a good predictor of future adverse cardiovascular outcomes in patients with ST-segment elevation myocardial infarction (STEMI). Changes in the QRS terminal portion have also been associated with adverse outcomes following STEMI. Objective: To investigate the relationship between ECG ischemia grade and NLR in patients presenting with STEMI, in order to determine additional conventional risk factors for early risk stratification. Methods: Patients with STEMI were investigated. The grade of ischemia was analyzed from the ECG performed on admission. White blood cells and subtypes were measured as part of the automated complete blood count (CBC) analysis. Patients were classified into two groups according to the ischemia grade presented on the admission ECG, as grade 2 ischemia (G2I) and grade 3 ischemia (G3I). Results: Patients with G3I had significantly lower mean left ventricular ejection fraction than those in G2I (44.58 ± 7.23 vs. 48.44 ± 7.61, p = 0.001). As expected, in-hospital mortality rate increased proportionally with the increase in ischemia grade (p = 0.036). There were significant differences in percentage of lymphocytes (p = 0.010) and percentage of neutrophils (p = 0.004), and therefore, NLR was significantly different between G2I and G3I patients (p < 0.001). Multivariate logistic regression analysis revealed that only NLR was the independent variable with a significant effect on ECG ischemia grade (odds ratio = 1.254, 95% confidence interval 1.120–1.403, p < 0.001). Conclusion: We found an association between G3I and elevated NLR in patients with STEMI. We believe that such an association might provide an additional prognostic value for risk stratification in patients with STEMI when combined with standardized risk scores. .

Fundamento: A relação neutrófilos/linfócitos (N/L) tem sido descrita como boa preditora de eventos cardiovasculares adversos futuros em pacientes com infarto agudo do miocárdio com elevação do segmento ST (IAMEST). Mudanças na porção terminal do complexo QRS também têm sido associadas a eventos adversos após IAMEST. Objetivo: Investigar a associação entre o grau de isquemia no ECG e a relação N/L em pacientes com IAMEST para determinar fatores de risco convencionais adicionais na estratificação precoce de risco. Métodos: Pacientes com IAMEST foram investigados. O grau de isquemia foi analisado a partir do ECG obtido à admissão. A contagem de leucócitos e seus subtipos foi realizada a partir de hemograma automatizado. De acordo com o grau de isquemia presente no ECG de admissão, os pacientes foram classificados em dois grupos, isquemia grau 2 (IG2) e isquemia grau 3 (IG3). Resultados: Pacientes com IG3 apresentaram valores médios significativamente menores de fração de ejeção do ventrículo esquerdo do que os pacientes com IG2 (44,58 ± 7,23 versus 48,44 ± 7,61; p = 0,001). Como esperado, a taxa de mortalidade intra-hospitalar aumentou proporcionalmente com o aumento no grau de isquemia (p = 0,036). Houve diferenças significativas nas porcentagens de linfócitos (p = 0,010) e de neutrófilos (p = 0,004) e, portanto, a relação N/L diferiu significativamente entre pacientes com IG2 e IG3 (p < 0,001). À análise de regressão logística multivariada, apenas a relação N/L emergiu como variável independente com efeito significativo sobre o grau de isquemia no ECG (odds ratio = 1,254; intervalo de confiança de 95% 1,120-1,403; p < 0,001). Conclusão: Nós encontramos uma associação entre IG3 e relação N/L aumentada em pacientes com IAMEST. Acreditamos que esta associação possa oferecer um valor prognóstico adicional para estratificação de risco em pacientes com IAMEST quando usado em combinação com escores de risco padronizados. .

Anopheles gambiae eicosanoids modulate Plasmodium berghei survival from oocyst to salivary gland invasion

Eicosanoids affect the immunity of several pathogen/insect models, but their role on the Anopheles gambiae response to Plasmodium is still unknown. Plasmodium berghei-infected mosquitoes were injected with an eicosanoid biosynthesis inhibitor, indomethacin (IN), or a substrate, arachidonic acid (AA), at day 7 or day 12 post-infection (p.i.). Salivary gland invasion was evaluated by sporozoite counts at day 21 p.i. IN promoted infection upon sporozoite release from oocysts, but inhibited infection when sporozoites were still maturing within the oocysts, as observed by a reduction in the number of sporozoites reaching the salivary glands. AA treatment had the opposite effect. We show for the first time that An. gambiae can modulate parasite survival through eicosanoids by exerting an antagonistic or agonistic effect on the parasite, depending on its stage of development.

Infecção por L. (L. ) chagasi e associação entre anticorpos anti-saliva da Lutzomyia longipalpis e o teste cutâneo anti-leishmania em crianças resintes em áreas endêmicas der leishmaniose visceral, na ilha de São Luís, Maranhão / Infection L. (L. ) chagasi and association between anti-saliva of Lutzomyia longipalpis and the skin test to Leishmania in children in endemic areas Resinto der visceral leishmaniasis on the island of São Luis, Maranhão

A resposta humoral anti-saliva do flebotomíneo está associada à presença de anticorpos anti-Leishmania, em crianças residentes em áreas endêmicas para leishmaniose visceral (LV). Tais achados, entretanto, baseiam-se em um estudo seccional com uma pequena amostra. O presente estudo, de coorte prospectivo (janeiro 2003 a janeiro 2005) com 1080 crianças (idade inferior a 10 anos), objetiva avaliar o desenvolvimento de anticorpos anti-saliva do flebotomíneo, bem como, anticorpos anti-Leishmania e reação de hipersensibilidade tipo tardia (DTH) ao antígeno de Leishmania, e identificar possíveis fatores de risco para a infecção. As características demográficas da população estudada eram: 1 a 6 anos de idade (66,6 por cento), sexo feminino (52,0 por cento), cor parda (77,1 por cento) e residência em casa com cinco a sete pessoas (57,8 por cento). A cobertura de telha foi mencionada em 77,0 por cento dos domicílios e desses, 96,1 por cento eram servidas por rede de água tratada, 68,5 por cento queimavam o lixo produzido e em 51,2 por cento o destino dos dejetos era a fossa negra. A criação de animais foi referida por 52,3 por cento das famílias, e a proximidade destes (principalmente cães) por 93,7 por cento. Chiqueiro (20,6 por cento) e galinheiro (61.3 por cento) foram, frequentemente, relatados na proximidade das casas. A presença de flebotomíneos foi mencionada por 30,6 por cento dos familiares. História anterior de LV na família foi referida por 205 (19,0 por cento) das crianças envolvidas no estudo. A DHT no inquérito inicial mostrou prevalência de 31,8 por cento, com incidências de 24,6 por cento e 7,2 por cento, nos 12° e 24° meses de observação, respectivamente. A positividade ao teste ELlSA anti-leishmania a prevalência foi de 17,1 por cento (inquérito inicial) com incidências de 6,6 por cento, 3,8 por cento, 17,2 por cento e 37,3 por cento aos 6°, 12°, 18° e 24° meses, respectivamente. Apesar da positividade de anticorpos anti-leishmania, nenhuma criança desenvolveu sintomas de LV. A variável criação de animais esteve associada ao risco de infecção por L. (L.) chagasi, quando o exame utilizado foi o ELlSA, enquanto que, as variáveis abastecimento com água de poço, criação de animais e resposta negativa quanto a presença de flebotomíneo mostraram-se associadas quando o teste utilizado foi a DTH. Os anticorpos anti-saliva do flebotomíneo apresentaram prevalência de 16,1 por cento no inquérito inicial e incidências no 6°, 12°, 18° e 24° meses de, respectivamente, 0,4 por cento, 3,8 por cento, 1,9 por cento e 2,7 por cento. Não houve diferença estatisticamente significante nos níveis de anticorpos IgG anti-saliva nas diferentes faixas etárias (menores de 1 ano, de um a três, de quatro a seis, e de sete a nove anos de idade) no inquérito inicial (teste de Kruskal-Wallis usado para comparar os níveis de anticorpos nos diferentes grupos de idade e pontos de estudo). Com exceção do grupo de menores de 1 ano, os anticorpos IgG anti-saliva, declinaram em função do tempo (p<0.01 nos demais grupos de idade). A associação entre anticorpos anti-saliva e DTH anti-Leishmania foi estatisticamente significante (p< 0.0006 pela análise de sobrevivência de Kaplan-Meyer). Nossos resultados mostram que: a) altos títulos de anticorpos anti-leishmania nem sempre se correlacionam com o desenvolvimento de LV; b) a sensibilidade de anticorpos anti-saliva é baixa, uma vez que, muitas crianças foram expostas (evidenciado pelos anticorpos anti-leishmania ou DTH positivos), mas não exibiram reação anti-saliva positiva. Mais importante, este estudo de coorte forneceu evidências de associação estatisticamente significante entre anticorpos IgG anti-saliva do flebotomíneo positivos e resposta imuno-celular anti-leishmania.

Effects of anti-mosquito salivary glands and deglycosylated midgut antibodies of anapheles stephensi on fecundity and longevity

With the aim of controlling malaria by reducing vector population, the effects of antibodies produced against salivary glands and deglycosylated midgut antigens of Anopheles stephensi mosquitoes on fecundity and longevity of the same species were tested. Three deglycosylated preparations of midgut and two preparations of salivary glands were produced, conjugated with aluminum hydroxide gel, and subcutaneously injected to shoulders of TO [Turner Out-bred] mice. After 4 immunizations and assurance of enough antibody production against utilized antigenic suspensions, effects of blood feeding on immunized and control mice were assayed. Insoluble preparation of midgut showed the strongest effect with 23.5% reduction in egg laying, and increasing death rate of vectors in third day after feeding. No significant reduction in fecundity or survivorship was seen with other preparations. Anopheles midgut insoluble antigens are potential candidates for designing vaccines against malaria vectors and further investigations need to be done to find effective antigens and the best way of their use

Estudos do intestino médio (influência da alimentação sangüínea na musculatura e síntese da matriz peritrófica) e da glândula salivar de flebotomíneos vetores e a descrição de um nematódeo entomoparasito / Studies of the midgut (influence of blood supply in the muscles and synthesis of the peritrophic matrix) and the salivary glands of phlebotomine vectors and the description of one nematode medical entomology

Flebotomíneos são insetos hematófagos e vetores Leishmania, a qual é transmitida durante a sua alimentação sangüínea. Durante este processo, o hospedeiro responde com reações inflamatória e hemostática. Todavia, a saliva do flebotomíneo contém substâncias farmacológicas ativas que são capazes de prevenir a contração vascular, e conseqüentemente, a retenção do sangue. O alimento sangüíneo é armazenado e digerido no intestino médio que se distende. As células do intestino médio sintetizam uma estrutura sacular que circunda o alimento, denominada matriz peritrófica (MP). Com o intuito de melhor compreender a biologia do vetor, este estudo analisa em detalhes, a morfologia, anatomia e ultra estrutura da glândula salivar, a musculatura do intestino médio e a formação da MP, assim como a contaminação do inseto com um entomoparasito, o qual não permite a sua alimentação sangüínea. Nossos resultados demonstraram que a os aspectos gerais da glândula salivar em diferentes flebotomíneos são similares. O órgão é composto por dois pequenos lobos ligados entre si, os quais são constituídos por pequenas quantidades de células. É relevante que estas células, de acordo com as suas ultra-estruturas e ligações por lectinas, podem ser classificadas em diferentes sub-populações mostrando distintos processos de secreção. Depois da alimentação sangüínea, a cinética da formação da MP e sua degradação no flebotomíneo foi totalmente relacionada com a ingestão e com o tempo de digestão. A MP apareceu bem formada e grossa 24 h após a alimentação sangüínea. Existem pelo menos cinco bandas protéicas na MP do flebotomíneo. A presença de quitina foi demonstrada através de imunomarcação. Além disso, depois da ingestão sangüínea e durante o curso da digestão, o intestino médio muda completamente o seu tamanho e morfologia. A marcação da actina e a microscopia eletrônica de varredura mostraram uma organização muscular no intestino médio. Os componentes musculares estão distribuídos sobre todo o intestino médio como fibras circulares e longitudinais, formando uma bem organizada rede muscular. O intestino médio abdominal sofre muitas modificações na organização desta rede muscular, a qual parece estar relacionada com a passagem do alimento sangüíneo. Finalmente, nós detectamos pela primeira vez, e morfologicamente caracterizamos, um novo entomoparasito infectando o L. longipalpis. Este achado pode ser aplicado no futuro para estudos de controle biológico do flebotomíneos vetores. Além disso, os conhecimentos relacionados com a glândula salivar e com a fisiologia do intestino médio são importantes para uma melhor compreensão do inseto vetor, o qual tem um papel fundamental na transmissão da Leishmania.

Estudos do intestino médio (influência da alimentação sangüínea na musculatura e síntese da matriz peritrófica) e da glândula salivar de flebotomíneos vetores e a descrição de um nematódeo entomoparasito

Flebotomíneos são insetos hematófagos e vetores Leishmania, a qual é transmitida durante a sua alimentação sangüínea. Durante este processo, o hospedeiro responde com reações inflamatória e hemostática. Todavia, a saliva do flebotomíneo contém substâncias farmacológicas ativas que são capazes de prevenir a contração vascular, e conseqüentemente, a retenção do sangue. O alimento sangüíneo é armazenado e digerido no intestino médio que se distende. As células do intestino médio sintetizam uma estrutura sacular que circunda o alimento, denominada matriz peritrófica (MP), Com o intuito de melhor compreender a biologia do vetor, este estudo analisa em detalhes, a morfologia, anatomia e ultra estrutura da glândula salivar, a musculatura do intestino médio e a formação da MP, assim como a contaminação do inseto com um entomoparasito, o qual não permite a sua alimentação sangüínea. Nossos resultados demonstraram que a os aspectos gerais da glândula salivar em diferentes flebotomíneos são similares. O órgão é composto por dois pequenos lobos ligados entre si, os quais são constituídos por pequenas quantidades de células. É relevante que estas células, de acordo com as suas ultra-estruturas e ligações por lectinas, podem ser classificadas em diferentes sub-populações mostrando distintos processos de secreção

Depois da alimentação sangüínea, a cinética da formação da MP e sua degradação no flebotomíneo foi totalmente relacionada com a ingestão e com o tempo de digestão. A MP apareceu bem formada e grossa 24 h após a alimentação sangüínea. Existem pelo menos cinco bandas protéicas na MP do flebotomíneo. A presença de quitina foi demonstrada através de imunomarcação. Além disso, depois da ingestão sangüínea e durante o curso da digestão, o intestino médio muda completamente o seu tamanho e morfologia. A marcação da actina e a microscopia eletrônica de varredura mostraram uma organização muscular no intestino médio. Os componentes musculares estão distribuídos sobre todo o intestino médio como fibras circulares e longitudinais, formando uma bem organizada rede muscular. O intestino médio abdominal sofre muitas modificações na organização desta rede muscular, a qual parece estar relacionada com a passagem do alimento sangüíneo. Finalmente, nós detectamos pela primeira vez, e morfologicamente caracterizamos, um novo entomoparasito infectando o L. longipalpis. Este achado pode ser aplicado no futuro para estudos de controle biológico do flebotomíneos vetores. Além disso, os conhecimentos relacionados com a glândula salivar e com a fisiologia do intestino médio são importantes para uma melhor compreensão do inseto vetor, o qual tem um papel fundamental na transmissão da Leishmania

Ultrastructural observations on trypanosoma herpetosoma rangeli in the salivary glands of rhodnius ecuadoriensis, hemiptera, reduvidae

Fue realizado un estudio ultraestructural de las glándulas salivares del triatomino rhodnius ecuadoriensis experimentalmente infectado por el tripanosomatídeo, trypanosoma (herpetosoma) rangeli, con la finalidad de documentar los aspectos básicos de la infección glandular por este flagelado. Gran número de formas epimastigotes fueron encontradas en la hemolinfa que baña la parte externa de las glándulas en el hemoceloma. Algunos flagelados parecían intimamente asociados a la membrana basal del epitelio glandular y varios de ellos parecían estar iniciando el proceso de su invasión, rompiendo la lámina basal con el flagelo. En el interior de las células glandulares observamos que, T. rangeli se presentaba en la forma de esteromastigotes, células redondeadas rodeadas externamente por un flagelo, que envolvía apretadamente el parásito. En la luz glandular también observamos gran número de epimastigotes mezclados con los productos de la secreción glandular, el material presentó apenas pocas formas paramastigotes y trypomastigotes identificadas de manera inquívoca. El significado de los paramastigotes en el ciclo evolutivo del T. rangeli aguarda futuros estudios

Estudios de infectividad de la especie Anopheles albimanus Wiedemann, 1820 (Diptera: Culicidae): cepa Cartagena, con plasmodios humanos / Infectivity of Anopheles albimanus Wiedemann species, 1820 (Diptera: Culicidae): Cartagena strain, with human Plasmodium

Con el propósito de evaluar la infectividad del mosquito Anopheles albimanus Wiedemann, 1820, cepa Cartagena, se realizaron infecciones a partir de pacientes naturalmente infectados con Plasmodium falciparum y Plasmodium vivax y de primates del género Aotus experimentalmente infectados con ambas especies de Plasmodium. 67 intentos de infección de Anopheles albimanus se realizaron a partir de pacientes con P. falciparum y 36 a partir de pacientes con P. vivax. Se examinaron 654 glándulas salivares en hembras An. albimanus infectadas con P. falciparum de las cuales el 11.9% presentaron esporozoitos, mientras que el 31.2% de 93 glándulas salivares examinadas desarrollaron esporozoitos de P. vivax. Un total de 4 intentos de infección de Anopheles albimanus se realizaron a partir de un Aotus infectado con P. falciparum en los cuales los mosquitos no desarrollaron esporozoitos. A partir de 14 Aotus infectados con P. vivax se realizaron 75 intentos de infección de Anopheles albimanus; solo el 5.2% de un total de 810 glándulas salivares examinadas produjeron esporozoitos. Los resultados obtenidos sugieren que esta cepa Anopheles albimanus tiene una baja infectividad en condiciones experimentales