Bioestructura de la piel de la aleta caudal del salmón del atlántico, en estado smolt y sus interacciones con el estado chalimus del Caligus rogercresseyi / Biostructure of the atlantic salmon skin of the caudal fin, in the smolt stage and its interactions with the chalimus stage of Caligus rogercresseyi

RESUMEN: Caligus rogercresseyi es un copépodo que representa uno de los principales desafíos de la industria del cultivo de salmónidos en Chile, ya que afecta profusamente a la piel. Es preciso destacar que los peces en agua dulce y estuario no son afectados, a diferencia del salmón, que desde el post-smolt resulta muy parasitado cuando es trasladado al mar. Se han realizado múltiples estudios sobre el ciclo de vida del parásito y desarrollado tratamientos químicos, físicos y mecánicos para eliminarlos. Sin embargo, a la fecha, los tratamientos no han sido eficaces, lo que produce un problema permanente para el bienestar del animal. El propósito de este estudio fue el de reconocer la bioestructura de la piel de la aleta caudal del salmón del atlántico en los sitios de la interacción con chalimus. Para esto, se utilizaron 15 post-smolt infectados con Caligus y 5 post-smolt controles, sin Caligus. Los salmones fueron aportados por Fundación Chile y la experiencia se realizó en su propio centro experimental. Una vez realizada la eutanasia, mediante sobredosis del anestésico benzocaína, se obtubieron muestras de las aletas caudales, las cuales fueron fijadas en formalina al 10%, incluidas en paraplast para realizar cortes de 5 µm de espesor y teñidas con Tricrómico de Masson y PAS. Los resultados indicaron que la piel de la aleta caudal de los post-smolt afectados presentan mayor altura de la epidermis, escasa células secretoras de mucus y solución de continuidad en la epidermis. Además, la membrana basal se descontinúa y ocurre un aumento de melanomacrófagos en la dermis.

SUMMARY: Caligus rogercresseyi is a copepod that represents one of the main challenges of the salmon farming industry in Chile, since it profusely affects the skin. It should be noted that fish in freshwater and estuaries are not affected, unlike salmon, which from post-smolt is highly parasitized when transferred to the sea. Multiple studies have been carried out on the life cycle of the parasite and chemical, physical and mechanical treatments have been developed to eliminate them. However, to date, the treatments have not been effective, which produces a permanent problem for the welfare of the animal. The purpose of this study was to recognize the biostructure of Atlantic salmon caudal fin skin at sites of interaction with chalimus. For this, 15 post-smolt infected with Caligus and 5 post-smolt controls, without Caligus, were used. The salmon were provided by Fundación Chile and the experience was carried out in its own experimental center. Once the euthanasia was carried out, by means of an overdose of the anesthetic benzocaine, samples of the caudal fins were obtained, which were fixed in 10 % formalin, included in paraplast to make 5 µm-thick sections and stained with Masson's Trichrome and PAS. The results indicated that the skin of the caudal fin of the affected post-smolt presented a greater height of the epidermis, few mucus-secreting cells and a solution of continuity in the epidermis. In addition, the basement membrane is discontinued and an increase in melanomacrophages occurs in the dermis.

La relevancia moral del dolor de animales de experimentación y de producción / The moral relevance of pain in experimental and production animals

RESUMEN: El aspecto emocional del dolor no solo es controvertido en aves, peces y roedores, sino también en los seres humanos autoconscientes. Cuando el dolor emocional, o la insatisfacción, es vista como un mal intrínseco, evitarla o, al menos, minimizarla es un deber moral directo. El objetivo de este artículo es mostrar que no solo los modelos animales mamíferos que se utilizan en experimentación -rata (Rattus norvegicus) y ratón (Mus musculus)- sienten dolor, como reconocen universalmente las instituciones que se ocupan del bienestar animal, sino también los peces de laboratorio (Danio rerio) y los de producción (Salmo salar), y que este hecho es moralmente relevante desde el punto de vista de todas las concepciones de la moral que suelen enfrentarse en los debates morales públicos y académicos. En consecuencia, también en el caso de los peces habría que tener en cuenta indicadores de bienestar animal.

SUMMARY: The emotional aspect of pain is not only controversial in fish and rodents, but also in self-conscious humans. When pain or dissatisfaction is seen as an intrinsic evil, avoiding it or at least minimizing it is a moral duty direct. The objective of this article is to refer to pain, stress and the most widely used indices of animal welfare both in laboratory fish (Danio rerio) and production fish (Salmo salar) as well as in rat experimental animal models (Rattus norvegicus) and mouse (Mus musculus).

Effects of elderflower extract enriched with polyphenols on antioxidant defense of salmon leukocytes

BACKGROUND: In fish farming, the plant extracts containing antioxidant compounds have been added to the diet for enhancing pathogen resistance. In vitro studies evaluating the antioxidant effect of herbal extracts on fish cell models have focused on ROS production and the respiratory burst mechanism. However, the effects on enzymatic antioxidant defense on salmon leukocytes have not been evaluated. This study aims to evaluate the enzymatic antioxidant defense and ROS-induced cell damage in Salmon Head Kidney-1 (SHK-1) cell line exposed to polyphenol-enriched extract from Sambucus nigra flowers. RESULTS: Firstly, the Total Reactive Antioxidant Power (TRAP) assay of elderflower polyphenol (EP) was evaluated, showing 459 and 489 times more active than gallic acid and butyl hydroxy toluene (BHT), respectively. The toxic effect of EP on salmon cells was not significant at concentrations below 120 mg/ mL and no hemolysis activity was observed between 20 and 400 mg/mL. The treatment of SHK-1 cell line with EP decreased both the lipid peroxidation and protein oxidation induced by H2O2, which could be associated with decreasing oxidative stress in the SHK-1 cells since the GSH/GSSG ratio increased when only EP was added. CONCLUSIONS: These results suggest that plant extracts enriched with polyphenols could improve the enzymatic antioxidant defense of salmon leukocytes and protect the cells against ROS-induced cell damage

Deformación de la aleta caudal en alevín de salmón del atlántico (Salmo salar), en etapa de saco vitelino / Deformation of the caudal fin in atlantic salmon fry (Salmo salar), in the yolk sac stage

RESUMEN: En este estudio se analiza una deformación que afectó la aleta caudal de los alevines de salmón del Atlántico (Salmo salar) y que les proporcionó un aspecto de "cola aguzada". Al momento de la eclosión se observaron completamente normales pero la deformación se detectó con posterioridad. El objetivo de este trabajo es describir los cambios anatómicos e histológicos de la aleta caudal deformada del alevín de salmón del Atlántico (Salmo salar). Para esto se utilizaron 60 alevines para realizar análisis de laboratorio y descartar la presencia de patógenos virales o bacterianos. Otros 60 alevines con un estado de desarrollo entre 600 y 700 Unidades térmicas acumuladas (UTAs) fueron anestesiados con Benzocaína 5 %, fijados en formalina al 10 % pesados y medidos. De estos un grupo de 30 alevines (15 normales y 15 deformes) fueron sometidos a la técnica de Hanken y Wassersug para evaluar Lepidotriquias. Los otros 30 alevines (15 normales y 15 deformes), fueron procesados mediante las técnicas histoquímicas: H&E/azul de Alcián para evaluar las características histológicas generales. Adicionalmente se utilizó técnicas inmunohistoquímicas para reconocer la ubicación y la presencia de los centros de señales Sonic hedgehog (Shh) para la formación de Lepidotriquias. A los valores obtenidos para las variables cuantitativas peso y longitud de cuerpo, largo y ancho de aleta caudal, se les realizó estadística descriptiva y fueron sometidos a prueba de normalidad de Shapiro-Wilk. Las diferencias observadas entre peces normales y deformes, fueron analizadas mediante prueba t de Student o U de Mann Whitney, utilizando el paquete estadístico IBM SPSS 20.0. La deformación se observó desde las 600 UTA. El peso de los alevines deformes fue similar al de los peces normales (p>0,05), lo mismo sucedió con la longitud de la aleta (p>0,05). Por el contrario, el ancho de la aleta de los deformes fue muy reducida (p<0,05). El fenotipo de aleta aguzada presentó un cambio en la integridad de los bordes, fracturas de Lepidotriquias. La epidermis de la aleta caudal de los alevines deformados presentó sus centros de señalización Shh activos, pero el blastema interrayos presentó vasodilatación, congestión y hemorragias. La presentación de este caso se relacionó con incrementos bruscos de temperatura peri eclosional.

SUMMARY: This study analyzes the deformity of Atlantic salmon fry (Salmo salar) caudal fin, which gives it a "pointed tail" appearance. Although at hatching specimens were normal, the deformities were detected later. The objective of this work is to describe the anatomical and histological changes of the deformed caudal fin of the Atlantic salmon fry (Salmo salar). In this analysis we used 60 specimens for laboratory analyses, to rule out the presence of viral or bacterial pathogens. Another 60 fry, developmental stage between 600 and 700 Accumulated Thermal Units (UTAs) were anesthetized with 5 % Benzocaine, fixed in 10 % formalin, weighed and measured. Of these, a group of 30 fry (15 normal and 15 deformed) underwent the Hanken and Wassersug technique to evaluate lepidotrychia or dermal rays. The remaining 30 fry (15 normal and 15 deformed) were processed using H & E / Alcián blue histochemical techniques to evaluate general histological characteristics. Additionally, immunohistochemical techniques were used to determine the location and presence of Sonic hedgehog (Shh) signal centers for lepidotrychia development. The values obtained for the quantitative variables body weight, length and width of the tail fin were described using the arithmetic mean and standard deviation. The deformity was observed from 600 UTA. Weight of deformed fry was less than normal fish, length of the fin was similar in normal and deformed fish. In contrast, width of the deformed fin was significantly reduced. The sharp fin phenotype presented a change in the conformity of the edges, lepidotrychia fractures. The epidermis presented active Shh signaling centers, but the interray blastema showed vasodilation, congestion and hemorrhages. The presentation of this case was related to sudden increases in perieclosional temperature.

Padronização de uma PCR para a autenticação do Salmo salar em pratos da culinária japonesa / Standardization of a PCR for the authentication of Salmo salar in dishes of Japanese cuisine

O objetivo deste trabalho foi padronizar uma PCR para a detecção do Salmo salar, a qual possa ser usada na autenticação do salmão utilizado em pratos da culinária japonesa e do pescado comercializado in natura. Para isso, dois lotes de sushi foram produzidos experimentalmente. Além disso, foram visitados 38 estabelecimentos que comercializam comida japonesa e 10 peixarias na região metropolitana de Belém, visando à coleta do sushi, do temaki e do pescado pertencente à espécie Salmo salar. Os dados demonstraram que a técnica foi eficiente para a autenticação de Salmo salar, visto que a espécie foi detectada tanto nas amostras de sushis preparados experimentalmente quanto nas alíquotas de pescados isolados, utilizados para a preparação do sushi. Em contrapartida, a espécie Salmo trutta não foi detectada nas amostras de sushis preparados com esta espécie nem nas alíquotas de pescado isolado. Além disso, foi possível a confirmação da utilização da espécie Salmo salar no preparo das amostras de sushi, temaki e de pescado. Portanto, concluiu-se que a técnica foi capaz de amplificar o DNA da referida espécie e não gerou identificação inespecífica quando a espécie Salmo trutta foi analisada, podendo ser uma ferramenta adequada para a autenticação do Salmo salar.(AU)

The objective of this work was to standardize a PCR for the detection of Salmo salar, which can be used in the authentication of salmon used in Japanese dishes and fish commercialized in natura. For this, two batches of sushi were produced experimentally. In addition, 38 establishments that sell Japanese food and 10 fishmongers in the metropolitan area of Belém were visited, aiming to collect sushi, temaki and fish belonging to the species Salmo salar. The data demonstrated that the technique was efficient for the authentication of Salmo salar, since the species was detected in both the experimentally prepared sushi samples and the isolated fish aliquots used for the preparation of sushi. In contrast, the species Salmo trutta was not detected in the sushi samples prepared with this species nor in the isolated fish aliquots. In addition, it was possible to confirm the use of the Salmo salar species in the preparation of sushi, temaki and fish samples. Therefore, it was concluded that the technique was able to amplify the DNA of this species and did not generate nonspecific identification when the species Salmo trutta was analyzed, being able to be a suitable tool for the authentication of Salmo salar.(AU)

Water management applied to the processing of Atlantic Salmon (Salmo salar) and Dolphinfish (Coryphaena hippurus) in a fish cold storage warehouse in Rio de Janeiro, Brazil / Gerenciamento hídrico aplicado ao beneficiamento de Salmão-do-Atlântico (Salmo salar) e Dourado-do-mar (Coryphaena hippurus) em entreposto de pescado no Rio de Janeiro, Brasil

The high consumption of water and uncontrolled wastewater generation commonly seen in fish processing plants are a matter of concern. Sustainable actions must be taken to addres this issue. The present study aimed to quantify the water used in the processing of Atlantic Salmon (Salmo salar) and Dolphinfish (Coryphaena hippurus) in a fish warehouse in Rio de Janeiro, Brazil, through water balance and mass balance at each development stage. According to the data obtained, the warehouse showed higher total water use, both in general (7,173.28±265.77m3/month), with most water use intended for processing support activities, approximately 45.00% (3,186.82±407.57m3/month); specifically, in the processing of the selected raw materials, with greater consumption of water for obtaining one kg of Dolphinfish fillets and slices, around 4.80 x 103m3/kg in both. This suggests the use of sustainable methodologies that result in decreased water consumption and in reuse of solid waste, since the three processing stages studied generated a high amount of solid waste, with emphasis to filleting in both species, with 55.00% of residual production each. The present study will also serve as the basis to other studies on the same issue in the fishing area.(AU)

Comumente relacionado à indústria de pescado, o alto consumo de água e geração de efluentes de forma não controlada é preocupante. Ações sustentáveis são necessárias diante do problema. Objetivou-se, com o presente estudo, quantificar a água utilizada no processamento de salmão-do-atlântico (Salmo salar) e dourado-do-mar (Coryphaena hippurus), em um entreposto de pescado localizado no Rio de Janeiro, Brasil, por meio dos balanços hídrico e de massa de cada etapa de processamento. Com base nos dados obtidos, observou-se que o entreposto apresentou um elevado uso de água total, tanto de forma geral, 7.173,28±265,77m3/mês, com o maior gasto destinado às atividades de apoio ao processamento, aproximadamente 45,00%, quanto de forma específica, no processamento das matéria-prima selecionada, com o maior consumo de água para obtenção de um kg de filé e um kg de posta de dourado, cerca de 4,80 x 103m3/kg em ambos os processos. Sugere-se a aplicação de metodologias sustentáveis de redução no uso hídrico, além do reaproveitamento de resíduos sólidos, uma vez que os três beneficiamentos estudados geram elevada quantidade de resíduos sólidos, com destaque para a filetagem em ambas as espécies, com produção residual de 55,00% cada. O presente estudo também serve como base para outros de mesma temática na área de pescado.(AU)

Resíduos de antimicrobianos em salmão do atlântico (Salmo salar L. 1758): aspectos econômicos, ambientais e sanitários / Antimicrobial residues in Atlantic salmon (Salmo salar L. 1758): economic, environmental and sanitary aspects

A aquicultura é um setor da produção animal que apresenta crescimento em grande escala e, como em todo sistema intensivo, nele também é necessário o uso de medicamentos veterinários, como os antimicrobianos. O uso indiscriminado ou em excesso, porém, pode levar à ocorrência de inúmeras questões de caráter sanitário, entre as quais a possibilidade de seleção de estirpes bacterianas resistentes ao agente originariamente utilizado, o qual tem sua eficácia seriamente reduzida ou anulada e favorecendo, por essa razão, uma série de bacterioses que podem afetar decisivamente a produção e a produtividade da exploração aquícola. O uso incorreto dos antimicrobianos, portanto, põe em risco tanto a saúde animal quanto a humana, já que o homem pode se contaminar por meio de resíduos das substâncias aplicadas, afetando tanto sua saúde quanto a do meio ambiente. Ademais, a economia da produção estará ameaçada, porquanto toda a cadeia produtiva estará depreciada em seu rendimento. O cultivo do salmão do Atlântico (Salmo salar L, 1758) foi tomado como paradigma da situação descrita, sendo o Chile o país produtor referenciado, já que ocupa o segundo lugar no ranking mundial dos produtores de salmonídeos, tendo sua produção exportada para muitos países e sendo o Brasil um de seus importadores. Buscou-se neste trabalho, portanto, balizar os riscos representados pela utilização incorreta dessas substâncias na produção desse salmonídeo, que podem afetar a produtividade da exploração e, ao mesmo tempo, tornar o alimento não tão seguro para o consumidor. Conclui-se que, embora indispensáveis para a produção animal, uma vez que evitam perdas pelo controle das bacterioses, os antimicrobianos devem ser administrados de forma responsável e seguindo um manual de boas práticas, sob risco de, não o fazendo, tornar a exploração economicamente inviável e, sobretudo, comprometendo a saúde do consumidor e do meio ambiente. Compete às autoridades sanitárias, especificamente ao Serviço de Inspeção Federal, do Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento, zelar para a correta aplicação de tais agentes e, acima de tudo, controlar os seus resíduos nos alimentos de origem animal produzidos.

Immunolocalization of morphogen sonic Hedgehog in salmon fry (Salmo salar) / Inmunolocalización del morfógeno sonic Hedhehog en alevines de salmón (Salmo salar)

With the purpose of carrying out a diagnosis of the different pathologies that affect the salmon fry stage (Salmo salar) and analyze the regeneration phases of the organizational centers and subjacent tissue in case of an amputation, we realized a study that allowed identifying the temporary and spatial location of the Sonic Hedgehog (Shh) morphogen in hatched fry stage. Fifteen salmon fry (Salmo salar) were used. They were anesthetized with 5 % benzocaine (BZ-20®, Veterquímica), fixed in 10 % buffered formalin, and embedded in paraffin, Shh polyclonal antibody (Santa Cruz H-160, rabbit) was used diluted at 1/100. They were subsequently rinsed in PBS-1 % Triton and incubated with anti-rabbit conjugated polymer antibody and HRP for 10-15 min. The development was done with DAB (Vector) for 1-5 min. The negative control was incubated without primary antibody. As an internal positive control the notochord was considered. Serial sagittal sections were analyzed consigning tissues and organs marked positively and were described morphologically. The objective of recognizing the spatial and temporal location of Shh was achieved. The notochord, spinal cord neurons and ganglia, the basal layer of the skin and also the lepidotriquias escleroblastos were positively identified for Shh. Finally positivity was also observed in the intestine and renal tubules. The heterogeneity observed in the location of the Shh morphogen suggests its potential use as a marker of regulatory centers in Salmo salar, and a potential advantage in the diagnosis of malformations of salmon fry stage, in addition to a better understanding of tissue regeneration.

Con el fin de llevar a cabo un diagnóstico de las diferentes patologías que afectan a la etapa de alevín de salmón (Salmo salar) y analizar las fases de regeneración de los centros de organización y el tejido subyacente en caso de una amputación, se realizó un estudio que permitió identificar la ubicación temporal y espacial del morfógeno Sonic hedgehog (Shh) en la etapa de alevines eclosionados. Se utilizaron quince alevines de salmón (Salmo salar). Fueron anestesiados con benzocaína al 5% (BZ-20®, Veterquímica), se fijaron en formalina tamponada al 10%, e incluidos en paraplast. Se utilizó Shh anticuerpo policlonal (Santa Cruz H-160, conejo) dilución 1/100. Se enjuagaron posteriormente en PBS-1% Triton y se incubaron con anticuerpo conjugado con polímero anti-conejo y HRP durante 10-15 minutos. Se utilizó como sustrato DAB (Vector) durante 1-5 minutos. El control negativo se incubó sin anticuerpo primario. Como un control positivo interno se consideró la notocorda. Se analizaron secciones sagitales en serie consignando los tejidos y órganos marcados positivamente y se describieron morfológicamente. Se logró el objetivo de reconocer la localización espacial y temporal de Shh. La notocorda, las neuronas de la médula espinal y los ganglios, la capa basal de la piel y también los escleroblastos de las lepidotriquias fueron identificados positivamente para Shh. También se observó positivo el intestino y los túbulos renales. La heterogeneidad observada en la ubicación del morfógeno Shh sugiere su uso potencial como un marcador de los centros de regulación en Salmo salar, y una ventaja potencial en el diagnóstico de las malformaciones de la etapa de alevines de salmón, además de una mejor comprensión de la regeneración de tejidos.

Morphology of the eyeball, orbit and retina of Atlantic salmon (Salmo salar) alevins under hypoxic conditions / Morfología del bulbo ocular, órbita y retina de alevines del salmón del Atlántico (Salmo salar) bajo condiciones hipóxicas

It has been demonstrated that hypoxia retards the growth of fish, reduces the survival of their larvae, deforms their vertebral column, but despite this teleost fish have the ability to completely regenerate many of their tissues, particularly the retina. As we do not have enough information about the effects of hypoxia on the eyeball, orbit and retina of Atlantic salmon (Salmo salar), we propose the following objectives: 1) Compare the morphological changes of the eyeball of fish subject to hypoxia and normoxia. 2) Determine changes in the orbit structure. 3) Describe the retina of salmon alevins. 4). Recognize hypoxic cells using the anti-Hif1a antibody in the retina of alevins as a sensor. 5) Determine the Shh morphogenic expression in alevins exposed to different times of hypoxia. Around 1,000 Salmo salar alevins were placed in a continuous water flow of 9 °C at 100 % SatO2 and alevins maintained at a hypoxia of 60 % SatO2. The latter were transferred to normoxia (at days two, four, and eight after hatching). A control group maintained at continuous normoxia and another at continuous hypoxia was also considered. All the alevins were euthanized at 950 UTAs (±2 months after hatching). Diaphonization (double-stain) according to the Hanken & Wassersug technique was undertaken to describe the morphology of the periocular cartilage and to measure the ocular diameter. The HIF-1a factor antibody 1:50, and the anti-Shh antibody dilution of 1:100 were used. The alevins after hatching had large eyeballs with the optic cup having an embryonic shape, even a choroidal fissure. The greatest thickness was observed in the nasal ventral zone which corresponds to a zone of pluripotent cells. The optic cup aspect with embryonic characteristics has only been reported in salmonids. The central retina of the alevins those were cultivated with a 60 % saturation of O2 for two, four or eight days had positive immunostaining when analyzed with the anti-HIF1a antibody hypoxia sensor. The inner ganglion and nuclear layers had immunopositive cells, with the highest in the alevins that were two days in hypoxia and the lowest when the hypoxia was chronic. Nevertheless, in the latter case the alevins had anatomical deformation of the eyeball and periocular cartilage. The anti-Shh antibody clearly shows a gradient that is expressed in the germinative zone and in the cells of the inner ganglion and nuclear layers. The eyeball and particularly the retina in salmon alevins are an example of neuronal plasticity and neurogenesis.

Se ha demostrado que la hipoxia retarda el crecimiento de los peces, reduce la supervivencia de sus larvas, deforma su columna vertebral, pero a pesar de esto, este pez teleósteo tiene la capacidad de regenerar completamente muchos de sus tejidos, en particular la retina. Como no existe suficiente información sobre los efectos de la hipoxia en el bulbo ocular, la órbita y retina del salmón del Atlántico (Salmo salar), los objetivos de este trabajo fueron: 1) Comparar los cambios morfológicos del bulbo ocular del pescado sujetos a hipoxia y normoxia; 2) Determinar los cambios en la estructura de la órbita; 3) Describir la retina de los alevines de salmón; 4) Reconocer las células hipóxicas utilizando el anticuerpo anti-Hif1a en la retina de alevines como un sensor; 5) Determinar la expresión morfogenética de Shh en alevines expuestos a diferentes momentos de hipoxia. Alrededor de 1.000 alevines Salmo salar se colocaron en un flujo continuo de agua a 9 °C, con 100 % de SatO2 y otros alevines se mantuvieron con una hipoxia de 60 % SatO2. Estos últimos fueron trasladados a normoxia (en los días dos, cuatro y ocho después de la eclosión). Un grupo control se mantuvo a normoxia continua y otro grupo a hipoxia continua. Todos los alevines se sacrificaron a 950 UTA (+ dos meses después de la eclosión). Se realizcón una diafonización (doble tinción), de acuerdo con la técnica de Hanken & Wassersug, para describir la morfología del cartílago periocular y para medir el diámetro ocular. Se utilizaron el anticuerpo anti-Hif1a a una dilución 1:50, y el anticuerpo anti-Shh a una dilución de 1:100. Los alevines después de la eclosión presentaron grandes bulbos oculares, con la copa óptica con forma embrionaria, incluso una fisura coroidea. El mayor espesor se observó en la zona ventral nasal que corresponde a una zona de células pluripotentes. El aspecto de la copa óptica con características embrionarias sólo se ha informado en los salmónidos. La retina central de los alevines fueron cultivadas con una saturación de 60 % de O2 para dos, cuatro y ocho días, y presentó inmunotinción positiva cuando se analizó con el sensor de hipoxia, el anticuerpo anti-HIF1a. El ganglio interior y las capas nucleares presentaron células immunopositivas, con los niveles más altos en los alevines con dos días de hipoxia y niveles más bajos en hipoxia crónica. Sin embargo, en éste último caso los alevines presentaron una deformación anatómica del bulbo ocular y el cartílago periocular. El anticuerpo anti-Shh mostró claramente un gradiente expresado en la zona germinativa y en las células del ganglio interior y las capas nucleares. El bulbo ocular y en particular la retina en alevines de salmón son un ejemplo de plasticidad neuronal y neurogénesis.

Estudio morfológico de la retina de salmones (Salmo salar) / Morphological study of the retina of salmon (Salmo salar)

La retina de peces teleósteos como pez cebra, se ha transformado en un importante modelo para el estudio de la plasticidad neuronal y la neurogénesis. Se ha demostrado además que la retina experimenta cambios ontogenéticos para adaptarse a distintos medios ambientes durante su vida. Este estudio tiene como objetivo describir el desarrollo ontogenético de la retina del alevín de salmón desde la eclosión hasta la fase de juvenil. Se trabajó con 30 salmones divididos en tres grupos de 10. Grupo I: recién eclosionados, con saco vitelino y 18 mm de longitud. Grupo II: sin saco vitelino y 30 mm de longitud. Grupo III: 100 mm de longitud. Cinco alevinesde cada grupo fueron procesados según el protocolo de Hanken & Wassersug para medir los diámetros dorsoventral y nasal-temporal utilizando el cartílago que protege al globo ocular. Los restantes cinco ejemplares fueron seccionados con micrótomo Microm en forma seriada (5 µm) y procesados con técnica H&E/Azul de Alcián. Se midieron las capas de la retina en un microscopio óptico Zeiss, con cámara Powershot incorporada y con un software Image Tool 3.0. El Grupo 1 presentó grandes ojos pigmentados, con aspecto de copa óptica embrionaria, la retina está estratificada en capas. La Capa Nuclear Interna (CNI) mide 62±10 µm y la capa plexiforme interna (CPI) 10±2 µm. El Grupo 2 presenta cambios en el espesor de ellas. La CNI disminuye su espesor a 45±8 µm y la Plexiforme aumenta a 25±5 µm. En los peces juveniles del Grupo 3, la CNI alcanza el espesor mínimo (15±3 µm), por el contrario, la capa Plexiforme interna aumenta su espesor hasta alcanzar (70±10 µm). En los tres grupos estudiados observamos en la periferia de la retina una zona proliferativa germinativa, que corresponde a un remanente del neuroepitelio embrionario, responsable del crecimiento continuado de la retina. La retina de los salmones puede ser también un importante modelo para el estudio de la ontogenia, la plasticidad neuronal y la neurogénesis. Esta neurogénesis en la retina de peces facilita la reordenación celular a lo largo de la ontogenia, lo que potencialmente permite la optimización del sistema visual a los cambios en las demandas visuales. Este estudio puede ser de utilidad para facilitar el diagnóstico en las patologías de ojo en salmonicultura y también puede contribuir a conocer mejor la regeneración de tejidos. Por otro lado, con estudios posteriores, la neurogénesis de la retina de peces podría extrapolarse al tratamiento de enfermedades humanas con daño a nivel retineal, tales como glaucoma, desprendimiento de retina y retinopatía diabética.

The retina of teleost fish zebrafish, has become an important model for studying neuronal plasticity and neurogenesis. It was further shown that the retina undergoes ontogenetic changes to adapt to different environments during their lifetime. This study aims to describe the ontogenetic development of the retina of juvenile salmon from hatching to the juvenile stage. We worked with 30 salmon divided into three groups of 10. Group I: newly hatched with yolk sac and 18 mm in length. Group II: without yolk sac and 30 mm in length. Group III: 100 mm long. Five fry each group were processed according to the protocol of Hanken & Wassersug to measure dorsoventral and nasal-temporal diameters using the cartilage that protects the eyeball. The remaining five specimens were sectioned with a microtome Microm serially (5 µm) and processed with technical H-E / Alcian blue. The layers of the retina were measured on a Zeiss optical microscope with camera Powershot built and with Image Tool 3.0 software. Group 1 showed large pigmented eyes, looking embryonic optic cup, the retina is stratified in layers. The inner nuclear layer (CNI) measured 62±10 microns and the inner plexiform layer (CPI) 10±2 µm. Group 2 presents changes in the thickness of them. The CNI decreases in thickness to 45±8 µm and the plexiform increased to 25±5 µm. In juvenile fish of group 3, the CNI reaches the minimum thickness (15±3 µm), by contrast, the inner plexiform layer thickness increases up to (70±10 µm). In the three groups observed in the periphery of the retina one proliferative germinative zone, which corresponds to a remnant of the embryonic neural epithelium responsible for the continued growth of the retina. The retina of the salmon can also be an important model for the study of ontogeny, neuronal plasticity and neurogenesis. This retinal neurogenesis fish rearrangement facilitates cell along ontogeny, potentially allowing optimization of the visual system to changes in the visual demands. This study may be useful to help diagnose pathologies in eye salmon and can also contribute to better understand tissue regeneration. On the other hand, with later studies, fish's retinal neurogenesis could be extrapolated to the treatment of human retinal diseases, such us glaucoma, retinal detachment o diabetic retinopathy.

Desarrollo de la aleta caudal del salmón (Salmo salar) / Salmon caudal fin development (Salmo salar)

Las patologías y traumas de la aleta caudal afectan la natación, dificultan la alimentación y la eficiencia de escape de los peces, además aumentan la susceptibilidad a las infecciones bacterianas y fúngicas. Los salmones adultos pueden regenerar rápida y completamente su aleta si esta es amputada. Sin embargo, se han reportado en el sur de Chile, alevines que expresan defectos anatómicos en la aleta caudal asociados a un alto índice de mortalidad donde no ocurre regeneración. Existen múltiples estudios sobre la aleta caudal de peces adultos pero esta descripción no concuerda con la morfología de la fase de alevín. Nuestro objetivo es describir la anatomía e histología de la aleta caudal del salmón de 15 mm, 30 mm y 60 mm para facilitar el diagnóstico de las patologías tempranas de la aleta caudal. Se trabajó con 60 salmones divididos en tres grupos de 20 en etapas de 15, 30 y 60 mm. Diez salmones de cada grupo fueron procesados con técnicas anatómicas de Hanken & Wassersug . Otros 10 alevines de cada grupo fueron procesados mediante técnicas H&E/azul de Alcian pH 2,5: para glicosaminoglicanos y técnica Histoquímica Picrosirius de Junqueira para colágeno I y III. Al momento de la eclosión de los peces (grupo 1) la aleta caudal no tiene su forma definitiva pero ha iniciado la formación de lepidotriquias. En el grupo 2, la aleta caudal comprende entre 19-20 lepidotriquias y se constituyen dos lóbulos uno dorsal y otro ventral, ambos bajo la notocorda. Los rayos de cada lóbulo crecen más rápido que los rayos que se encuentran entre los lóbulos y se forma un surco entre ellos. En el grupo 3 se observa claramente la aleta bilobulada, se mantienen 19 lepidotriquias que ahora están en proceso de calcificación. Cada lepidotriquia crece distalmente mediante la formación de articulaciones y segmentos. En el grupo 2 se consignó un promedio de 4­5 articulaciones por lepidotriquia y en el grupo 3 han aumentado a 6­10 articulaciones. Esta descripción de la aleta del alevín normal facilita el diagnóstico de la aleta deformada y aporta conocimientos para comparar el desarrollo ontogenético con las fases de la regeneración después de la amputación de la aleta caudal.

Caudal fin pathologies and traumas can affect swimming, impede food and exhaust efficiency, and also increase susceptibility to bacterial and fungal infections. Adult salmon can regenerate their fin quickly and completely if it is amputated. However, yolk sac fry expressing anatomical defects in the caudal fin have been reported in southern Chile and are associated to a high mortality rate where regeneration does not occur. There are many studies on adult salmon but this description does not match the morphology of the juvenile phase. We describe the anatomy and histology of the caudal fin in salmon 15mm, 30 mm and 60 mm to facilitate the early diagnosis of diseases of the caudal fin. We worked with 60 salmon divided into three groups of 20 in steps of 15, 30 and 60 mm. 10 salmon from each group were processed with Hanken & Wassersug anatomical techniques. Another 10 fry from each group were processed using H&E/Alcian blue pH 2.5 techniques: for glycosaminoglycans and technical histochemistry Picrosirius Junqueira for collagen I and III. Upon hatching of fish (group 1) the caudal fin has no definitive form but has commenced training ray or lepidotriquias. In group 2, the caudal fin comprises from 19 to 20 lepidotriquias and two lobes one dorsal and one ventral, both are constituted under the notochord. Each lobe ray grows faster than the rays that lie between the lobes and a groove is formed between them. In group 3clearly shows the bilobed flap, 19 lepidotriquias that are now in the process of calcification are maintained. Each lepidotriquia grows distally by forming joints and segments. In group 2 an average of 4­5 lepidotriquia joints were recorded and in group 3 there was an increase at 6­10 joints. This description of normal fry flap facilitates comparative study of the deformed fin.

Desarrollo de la médula espinal de salmón (Salmo salar) durante el período post-eclosional / Development of spinal cord of the salmon (Salmo salar) during the period post eclosional

En este estudio se describe el desarrollo post-eclosional de la médula espinal del salmón. Salmo salar. Se utilizaron 200 alevines recién eclosionados, los que fueron cultivados en el Centro de Estudios Acuícolas de la Universidad de Chile. Las condiciones ambientales de cultivo fueron de un 90% de saturación de oxigeno. La temperatura ambiental se mantuvo en 7°C. A los días 1, 3, 5 7 ds post-eclosión, 50 alevines por grupo etario fueron anestesiados y sacrificados por exposición a 5% Benzocaina diluida en agua (Kalmagin 20®, Farquímica). Posteriormente fueron fijados en formalina tamponada al 10% y procesados mediante técnica histológica. Para cada alevín se tomaron a nivel de la aleta dorsal un total de 40 cortes coronales seriados de 5µm de grosor, los que fueron procesados de acuerdo a las técnicas Cresil violeta. La cuantificación neuronal se realizó sobre imágenes microscópicas mediante el método del disector. Los resultados obtenidos se sometieron a una prueba de Coeficiente de Kurtosis con el propósito de analizar el grado de concentración que presentan los valores alrededor de la zona central de la distribución. La médula espinal de los alevines de 1 día es poco diferenciada. En los alevines de 3, 5 y 7 días se diferencian gradualmente las neuronas de la sustancia gris, pero no presenta la distribución característica en forma de "Y" invertida del salmón adulto. El número de neuronas aumenta desde 67+1.7 en el día 1 hasta 88+2.1 en el día 7. Esta observación se puede relacionar con la ausencia de movimientos natatorios de los peces durante los primeros días ya que estos caen sobre la gravilla al fondo de las bateas. Un factor determinante en la adquisición de la morfología de la médula espinal es el inicio de los movimientos natatorios, lo que ocurre aproximadamente al quinto día post-eclosión. La actividad motriz activa permite que las neuronas de la médula espinal sean reclutadas y se formen y activen las redes neurales, permaneciendo finalmente los circuitos más eficientes. El aumento del número de neuronas se puede explicar por neurogénesis post-eclosión, como ocurre en otros teleósteos. Este estudio indica que al momento de la eclosión, el sistema nervioso está muy indiferenciando, y que durante las primeras semanas de vida del alevín ocurre la diferenciación de las neuronas y neurogénesis. Este conocimiento es muy importante debido a que en las pisciculturas se cuidan las ovas, y se descuida la fase del alevinaje en la creencia que los tejidos están constituidos.

We describe the development of the spinal cord during the post eclosion period of the salmon (Salmo salar).We used a total of 200 newly hatched fry grown in the Aquaculture Research Center of the Universidad de Chile. Environmental conditions were of 90% oxygen saturation. Ambient temperature was maintained at 7° C. At days, 1, 3, 5 and 7, post-hatching, 50 fry were anesthetized and sacrificed by exposure to 5% benzocaine diluted in water, (Kalmagin 20 ®, Farquímica). They were then fixed in 10% buffered formalin and processed by histological technique. For each juvenile a total of 40 serial coronal sections of 5µm were taken at the level of the dorsal fin, which were then processed according to cresyl violet techniques.Neuronal quantitation was performed on microscopic images by dissector method. The results obtained were subjected to coefficient Kurtosis test in order to analyze the degree of concentration of values around the central distribution area.The spinal cord of the one-day fry is poorly differentiated. In fry of 3, 5 and 7 days neurons are gradually differentiated, they do not however present the characteristic neuronal distribution inverted "Y" of the adult salmon. The number of neurons increases from 67±1.7 on day one, to 88±2.1 on day 7.This observation may be related to the absence of fish swimming movements during days one and three as these fall on the gravel at the bottom of the trays. A determining factor in the acquisition of the morphology of the spinal cord is the start of swimming movements, which occur at around the fifth day post-hatching.Active motor activity allows spinal cord neurons to be recruited and form to activate neural networks, to remain finally in the most efficient circuits. Increasing the number of neurons can be explained by post-hatching neurogenesis as in other teleosts.This study indicates that at the time of hatching, the nervous system is very undifferentiated and that neuron differentiation and neurogenesis occur during the first weeks of life. This knowledge is very important as fish farms take care of eggs, neglecting the nursery stage in the belief that tissues are formed.

Histology of the jaw deformation in salmon of southern Chile (salmo salar)

In adult salmon of the sea centres in southern Chile, a jaw deformation (JD) has been identified. It affects the dental and hyomandibular bones, which bend ventrally up to 90° of their normal position. The deformation affects also the dental articular bone. This pathology is related to weight loss and increased mortality of the salmons. It was empirically postulated that a probable cause for this anomaly was food from vegetal origin in the diet of the fishes (which are carnivores) Therefore, the present work aims at comparing the biostructure of jaw bone of salmons fed either with vegetal (soja and gluten) formulation or animal formulation, mostly fish powder. Fifty specimens were analyzed from Puerto Montt, 35 having JD and 15 normal control. Samples were obtained in June, July and September 1999. (group 1) and March, Sept and October, 2000 (group 2). Group 1 was fed mostly with vegetal flour and group 2 with fish flour. Each group was subdivided in two subgroups, one of healthy animals and the other of fishes with JD. Jaw and articular bones were fixed in 10 per cent formaldehyde and 1 per cent glutaraldehyde and processed for histology (hematoxylin.eosin, Alcian blue, Masson trichrome) histochemistry (Syrius red and von Kossa) and scanning electron microscopy (SEM). The mandibular bone of group 1 with JD presented large amounts of osteoid tissue compared with its control. Collagen I disminishes and its architecture and composition changes, collagen III increases. No significant difference was found in calcium content between normal and JD fishes. SEM shows that the dental bone close to the joint in the fishes with JD displayed a disorganized structure and no trabecular formation, compared to controls, In group 2, these pathological findings were less evident, both macro- and microscopically. Results suggest that JD is of multifactorial origin; the primary cause can be a genetic or congenital alteration of the Jaw cartilage. There should be susceptibility for presentation of the defect in this group of fishes, but its expression is triggered by deficit of phosphorous of animal origin in food, so that this pathology is not seen in fishes with adequate nutrition.

Caracterización sensorial de paté a base de descartes de pulpa de salmón (Salmo salar L.) utilizando la metodología superficie de respuesta / Sensory characterization of pate from waste salmon (Salmo salar L.) products utilizing surface methodology

Descartes de pulpa salmón atlantico (Salmo salar L.) fueron utilizados para la formulación de un embutido tipo paté, con el propósito de aprovechar los residuos o desechos de la industria salmonídea y formular un producto de óptima calidad sensorial. Aplicando un diseño central compuesto rotatorio, factorial 2 elevado a la n y utilizando la metodología superficie respuesta, se seleccionaron dos variables independientes, concentración de sal y concetración de goma xantana, a tres niveles de trabajo cada una de ellas. Se prepararon nueve formulaciones experimentales a las que posteriormente se les aplicó el test de puntaje compuesto, para analizar la calidad sensorial usando un panel de 12 jueces entrenados (p>0.05). Consistencia, sabor y apariencia fueron los parámetros que se estudiaron por ser los que más afectan la calidad sensorial del producto. Los resultados del test de calidad sensorial fueron analizados estadísticamente usando el programa computacional Statgraph 7.0, lo que permitió obtener un modelo matemático para predecir la influencia de las variables independientes sobre la respuesta buscada. De acuerdo al gráfico tridimencional de superficie y mapa de contorno, se determinó que los niveles de sal y goma necesarios para obtener una combinación óptima de estos componentes fueron 1,5 por ciento y 1,35 por ciento respectivamente. La vida útil del producto almacenado de 3ºC fue de 18 días, y a temperatura ambiente (18ºC) fue de 8 días, valores que están dentro de los límites de tiempo de vida útil esperados para este tipo de producto