Human papillomavirus (HPV) detection and Papanicolaou cytology in low-resource women in Posadas city, Misiones, Argentina / Detección del virus papiloma humano (HPV) y citología de Papanicolaou en mujeres de bajos recursos de la ciudad de Posadas, Misiones, Argentina

The objective of this study was to determine the prevalence of HPV infection and cervical lesions present in women who attended a health center in a low-resource area of the city of Posadas, Misiones, Argentina. Cervical cell samples (n = 163) were processed for Papanicolaou cytology and HPV-PCR tests. Socio-cultural risk factors were estimated using the odds ratio (OR, CI 95 %). Cervical lesions were detected in 14.7 % of women. The general prevalence of HPV infection was of 38 %. The most common types among the total population were HPV-16 (9.8 %) and HPV-33 (9.3 %). HPV-16 was detected in association with 29.2 % and 6.5 % of women with and without cervical lesions, respectively, the OR being 5.3 (1.8-15.8). Risk factors for HPV-16 infection were a smoking habit and a history of previous sexually-transmitted diseases. These data are important for the implementation of prevention programs, including an appropriate introduction of vaccination and the baseline for virological surveillance in the vaccine era.

El objetivo de este estudio fue determinar la prevalencia de la infección por HPV y de lesiones cervicales en mujeres asistidas en un centro de salud situado en un área de bajos recursos de la ciudad de Posadas, Misiones, Argentina. Las muestras (n = 163) fueron examinadas mediante las pruebas de Papanicolaou y de PCR para HPV. Los factores socio-culturales de riesgo fueron identifcados mediante el cálculo de la odds ratio (OR, IC 95 %). Se detectaron lesiones cervicales en el 14,7 % de las mujeres. La prevalencia de infección por HPV fue de 38 %. Los tipos más frecuentes en la población total fueron HPV-16 (9,8 %) y HPV-33 (9,3 %). El HPV-16 se detectó asociado al 29,2 % y al 6,5 % de las mujeres con lesiones del cuello uterino y sin ellas, respectivamente, con un OR de 5,3 (1,8-15,8). Los factores de riesgo para la infección por HPV-16 fueron el hábito de fumar y el antecedente de enfermedades de transmisión sexual. Estos datos son importantes para la ejecución de los programas de prevención, incluyendo una introducción adecuada de la vacunación y la línea de base para la vigilancia virológica en la era de la vacuna.

Comparative analysis of three methods for HPV DNA detection in cervical samples / Análisis comparativo de tres métodos para la detección del ADN de VPH en muestras de cuello uterino

High risk HPV infection is considered to play a central role in cervical carcinogenesis. HPV DNA testing has shown to be a very useful tool for screening and following cervical infections. The aim of this study was to compare three methods for HPV DNA detection, along with cytology and colposcopy analysis. Cervical samples were collected from 100 sexually active women in Mérida, western Venezuela. HPV infection was screened using Hybrid-Capture 2 (HC2), L1-Nested-PCR and E6/E7-PCR assays. 40% of the samples (40/100) were HPV positive by at least one of the DNA detection methods. HC2 detected HPV in 12% specimens. L1- and E6/E7-PCRs showed 50% sensitivity and 77% specificity.The agreement rate between HC2 and both PCR assays was 65%. Kappa value showed moderate concordance between HC2 and both PCR methods (κ=0.55; CI 95%). Also moderate concordance was seen when L1- and E6/E7-PCRs were compared (κ=0.48; CI 95%). There was a significant association between the Schiller test and E6/E7-PCR (p=0.006) for HPV infection. An acceptable agreement between all three assays for HPV detection was observed. Nevertheless, different PCR formats need to be further analyzed in order to make the right choice of method for HPV testing.

La infección con VPH de alto riesgo es el principal factor etiológico asociado al desarrollo de carcinogénesis cervical y las pruebas de detección de ADN-VPH han mostrado ser una herramienta esencial para la pesquisa y seguimiento de estas infecciones. El objetivo del estudio ha sido comparar tres métodos para la detección del ADN viral, en combinación con los análisis colposcópico y citológico. Se obtuvieron muestras cervicales de 100 mujeres sexualmente activas, en Mérida, Venezuela. La detección de infecciones por VPH se realizó por Captura Híbrida 2 (CH2) y los ensayos de PCR “L1-Nested-PCR” y “E6/E7-PCR”. 40% de las muestras (40/100) fueron positivas para VPH por al menos uno de los métodos aplicados. 12% de las muestras analizadas fueron positivas para VPH por CH2. Las dos PCR utilizadas mostraron un 50% de sensibilidad y 77% de especificidad. La coincidencia observada entre CH2 y las dos PCR fue del 65%. La determinación del valor Kappa mostró una concordancia moderada entre CH2 y ambos métodos de PCR (κ=0,55; CI 95%). También existió concordancia moderada al comparar las PCR de las regiones L1 y E6/E7 de VPH (κ=0,48; CI 95%). Hubo una asociación significativa entre el resultado del test de Schiller y la PCR E6/E7 (p=0,006) para la infección por VPH. Se determinó una concordancia aceptable entre los tres métodos aplicados para la detección de VPH; sin embargo, las PCR deben ser analizadas en trabajos futuros con el fin de establecer las pruebas más adecuadas para la detección viral.

Detección de virus papiloma humano (HPV) a partir de muestras celulares de cuello uterino en base líquida: Correlación con la inmunorreactividad de la proteína p16INK4a / Detection of human papilloma virus (HPV) in liquid-based cervical samples: Correlation with protein p16INK4a expression

La citología del cuello uterino en base líquida mejora la calidad de la muestra y el material residual podría ser utilizado para realizar pruebas complementarias, como la detección del virus papiloma humano (HPV) y estudio inmunocitoquímico de biomarcadores. El propósito de este estudio fue correlacionar la presencia de HPV y la inmunoexpresión de p16INK4a en las muestras citológicas en base líquida para examinar la utilidad de estas nuevas herramientas en la detección de cáncer de cuello uterino. Las pacientes incluidas (n=67) presentaban una citología anormal o patología cervical previa. La detección y genotipificación de HPV se realizó con PCR-SPF10/LiPA (INNOLiPA Extra Amp) y para la inmunodetección de p16INK4a se utilizó el anticuerpo clon E6H4. La citología convencional proporcionó los mismos hallazgos citológicos que la citología en base líquida. La prevalencia general del HPV fue de 43,3% (29/67). El HPV16 fue el tipo viral mas frecuente (31,03%) y el 48,3% de los casos presentó infección múltiple. En el 35,8% de las muestras cervicales se detectó inmunoexpresión de la p16INK4a y ésta fue significativamente (p<0,020) asociada a la presencia de HPV. Estos resultados apoyan la evidencia que la implementación de nuevas tecnologías en la rutina diaria del laboratorio contribuye significativamente en la detección precoz del cáncer de cuello uterino y en el aporte de datos importantes para facilitar en el manejo clínico adecuado de la paciente. La detección de HPV combinada con la p16INK4a podría ser utilizado en la evaluación de pacientes con mayor riesgo a desarrollar lesiones cervicales significativas.

The liquid-based cervical cytology improves the quality of the sample and the residual sample could be used efficiently to carry out complementary tests, such as the detection of HPV DNA and the immunocytochemical biomarkers study. The purpose of this study was to correlate the presence of HPV and immunoexpression of p16INK4a in liquid-based cervical samples to examine the utility of these new tools in the detection of cervical cancer. The included patients (n=67) presented an abnormal cytology or previous cervical pathology. The HPV detection and genotyping were carried out with PCR-SPF10/LiPA (INNOLiPA Extra Amp) and for p16INK4a immunodetection was used antibody clone E6H4. The conventional cytology provided the same cytologic interpretations that those of liquid-based cytology. The overall HPV prevalence was 43.3% (29/67). HPV16 was the most frequent viral type (31.03%) and 48.3% of the cases were infected with multiple HPV types. p16INK4a immunoexpression was observed in 35.8% of liquid-based cytological samples and this was significantly (p < 0.020) associated to the HPV presence. These results support the evidence that the implementation of new technologies in the daily routine of the laboratory, contribute significantly in the early detection of cervical cancer and provide important data to help in the patient’s efficient management. The combined use of HPV detection and p16INK4a expression could be used for evaluation of patients with more risk to develop significant cervical lesions.

Short-term risk of cervical intraepithelial neoplasia grades 2 and 3 for women with normal cytology and human papillomavirus infection / Riesgo a corto plazo de lesiones intraepiteliales cervicales grados 2 y 3 en mujeres con citología vaginal normal e infección por el virus del papiloma humano

OBJECTIVE. To assess the risk of cervical intraepithelial neoplasia grades 2, 3 or higher (CIN 2/3+) for women with normal cytology and concurrent high-risk human papillomavirus infection (HR-HPV). MATERIAL AND METHODS. We examined 2 200 women every 6 months for an average of 9 years. Cervical smears and samples for HPV DNA were obtained at each visit. Absolute risk of subsequent CIN2/CIN3+ was estimated using the Kaplan-Meier method. RESULTS. The absolute risk of CIN2/CIN3+ among HR-HPV-positive women with normal Pap smear results was 1.06 percent (95 percentCI, 0.57-2.20), 5 times higher the risk among all women with normal Pap smears (0.20 percent; 95 percentCI, 0.12-0.32) but 7 times lower than that for women with HR-HPV infection and LSIL (7.24 percent; 95 percentCI, 3.78-15.2). CONCLUSION. Short-term absolute risk of CIN2/3+ after a normal Pap smear with concurrent HR-HPV infection is low (~1 percent), suggesting that the HR-HPV test has limited utility in short-term clinical decision-making for women with normal cytology.

OBJETIVO. Evaluar el riesgo a corto plazo de neoplasia intraepitelial cervical de alto grado (CIN2/CIN3+) en mujeres con citologí-a cervicouterina normal e infección por virus del papiloma humano de alto riesgo (HR-HPV). MATERIAL Y MÉTODOS. Cohorte prospectiva de 2200 mujeres evaluadas cada seis meses durante 9 años en promedio. En cada visita se tomó muestra cervical para extendido y detección de HPV DNA. El riesgo absoluto de CIN2/CIN3+ a la siguiente visita fue calculado utilizando el método de Kaplan-Meier. RESULTADOS. En mujeres con citologí-a normal e infección concomitante por HR-HPV el riesgo absoluto de presentar CIN2/CIN3+ fue de 1.06 por ciento (95 por cientoCI, 0.57-2.20). Este riesgo fue cinco veces mayor al observado en todas las mujeres con citologí-a normal (0.20 por ciento; 95 por cientoCI, 0.12-0.32) pero siete veces menor que el observado en mujeres con lesiones intraepiteliales escamosas de bajo grado con infección concomitante (7.24 por ciento; 95 por cientoCI, 3.78-15.2). CONCLUSIÓN. El riesgo absoluto de CIN2/3+ a corto plazo luego de una citologí-a normal e infección por HR-HPV es baja (~1 por ciento), sugiriendo que, a corto plazo, la prueba de HR-HPV tiene utilidad clí-nica muy limitada en mujeres con citologí-a normal.

Nuevos paradigmas y desafíos en la prevención y control del cáncer de cuello uterino en América Latina / New paradigms and challenges in cervical cancer prevention and control in Latin America

El cáncer de cuello uterino sigue siendo un problema de salud pública en Latinoamérica. El uso de la citología para la detección de lesiones pre-cancerosas no ha tenido mayor impacto en las tasas de incidencia y mortalidad, que aún se mantienen altas en la región. La disponibilidad de nuevas técnicas de tamizaje para la detección de lesiones pre-cancerosas y de vacunas altamente eficaces que previenen casi todas las lesiones relacionadas con VPH-16 y VPH-18 en mujeres no expuestas previamente al virus representan una gran oportunidad para la prevención del cáncer de cuello uterino en la región. En este manuscrito resumimos la evidencia científica y la experiencia de la región en i) el uso de pruebas de VPH y de la inspección visual después del ácido acético (IVAA) en tamizaje primario, y ii) la implementación de programas de vacunación en adolescentes. Finalmente enumeramos una serie de recomendaciones adecuadas para distintos escenarios. La factibilidad de implementar un programa nacional de prevención de cáncer de cuello uterino exitoso y sostenible en países latinoamericanos dependerá de las prioridades de salud, la infraestructura y personal de salud disponible, determinadas luego de un riguroso análisis situacional local.

Cervical cancer continues to be a significant health problem in Latin America. The use of conventional cytology to detect precancerous cervical lesions has had almost no major impact on reducing cervical cancer incidence and mortality rates, which are still high in the region. The availability of new screening tools to detect precancerous lesions provide great opportunities for cervical cancer prevention in the region, as do highly efficacious HPV vaccines able to prevent nearly all lesions associated with HPV-16 and -18 when applied before viral exposure. This paper summarizes the scientific evidence and regional experiences related to: i) the use of HPV testing and visual inspection after the application of acetic acid (VIA) in primary screening and ii) the implementation of adolescent HPV vaccination programs. Finally, we outline a number of recommendations for different resource settings. The feasibility of implementing successful and sustainable national cervical cancer prevention programs in Latin American countries in the region will depend on health priorities and the availability of infrastructure and health personnel-as determined by rigorous local situational analysis.

AgNOR polymorphism association with squamous intraepithelial lesions and invasive carcinoma with HPV infection / Asociación de los polimorfismos AgNORs con lesiones intraepiteliales escamosas, carcinoma cervical e infección por VPH

OBJECTIVE: Evaluate the relationships between AgNORs polymorphisms and squamous intraepithelial lesions (SIL) and squamous cell carcinoma (SCC) with HPV infection. MATERIALS AND METHODS: A study was carried out on sixty women from the state of Guerrero, Mexico. HPV detection was performed by PCR. AgNORs were identified by argentic impregnation. One hundred cells per slide were counted and classified according to the polymorphism of AgNORs dots; typical (spherical) and atypical (large, kidney-shaped and clustered). RESULTS: A total of 100 percent of the cases were positive for HPV infection. Nine different high-risk HPV genotypes were found, type16 was the most common (48.6 percent). The AgNORs showed a significant decrease in spherical shape according to neoplastic development. The three atypical shapes showed a significant increase in SIL and SCC (p-trend<0.001). CONCLUSIONS: AgNORs polymorphism rises progressively according to the grade of histological lesions that can be useful as a prognosis for progression of SCC.

OBJETIVO: Evaluar la relación entre los polimorfismos de AgNORs con las lesiones intraepiteliales escamosas (LIE) y carcinoma de células escamosas (CCE). MATERIAL Y MÉTODOS: Se estudiaron sesenta mujeres del estado de Guerrero, México. La detección del VPH fue por PCR y los AgNORs por impregnación argéntica; se contaron 100 células y se clasificaron por tipo de polimorfismo de AgNORs: típico (esférico) y atípicos (largo, forma de riñón o de racimo). RESULTADOS: El 100 por ciento de los casos presentaron infección por VPH, se encontraron nueve genotipos diferentes de VPH de alto riesgo, el 16 fue el más común (48.6 por ciento). La forma esférica de los polimorfismos de AgNORs mostró una disminución con el desarrollo neoplásico y las atípicas incrementaron progresivamente con SIL y SCC (p-tendencia<0.001). CONCLUSIONES: Los polimorfismos AgNORs se incrementan progresivamente con el grado de lesión histológica, y pueden ser útiles en el pronóstico de progresión del carcinoma cervical.

Epidemiología de la infección cervical por virus Papiloma humano en Ushuaia: Argentina / Cervical infection epidemiology of human papillomavirus in Ushuaia: Argentina

El virus Papiloma humano (HPV) es un factor necesario para el desarrollo del cáncer cervical. El objetivo del estudio fue conocer la epidemiología de dicha infección en Ushuaia, Provincia de Tierra del Fuego, Argentina. Se realizó un estudio de caso-control de 132 cepillados endocervicales. La detección y tipificación del genoma viral fue realizada por la reacción en cadena de la polimerasa, con posterior análisis de polimorfismos de fragmentos de restricción o hibridación. La prevalencia general de la infección fue 41%, correspondiendo 26% a los controles y 71% a los casos. El grupo etario con mayor prevalencia de HPV fue el de 14 a 24 años. Los tipos virales más frecuentes en la población infectada fueron HPV16 (23%), HPV18 (11%) y HPV33/35 (8% cada uno), resultando infectados con tipos virales de alto riesgo el 30% de las muestras, 16% de los controles y 60% de los casos. El trabajo aporta los primeros datos sobre los tipos virales predominantes en Ushuaia. Los resultados demostraron una prevalencia menor que en regiones con alta incidencia de cáncer cervical, siendo el HPV16 el más frecuente. La información obtenida permitiría estimar la efectividad de las vacunas en vías de aprobación, en la población estudiada.

Genital infection with human papillomavirus (HPV) is decisive in the causation of cervical cancer. In order to evaluate the epidemiology of HPV infection in Ushuaia, Province of Tierra del Fuego, Argentina, 132 endocervical cytobrushes from preneoplastic and neoplastic cases and controls were studied. Detection and typing of the viral genome was performed by polymerase chain reaction, combined with a restriction fragment length polymorphism assay or hybridization. The overall prevalence of HPV infection was 41% in the population examined, with a frequency of 26% in the controls and 71% in the cases under study. The 14-24 age group showed the highest HPV prevalence. The most common viral types in the infected population were HPV 16 (23%), HPV 18 (11%), HPV 33 (8%) and HPV 35 (8%), while high risk viral types were detected in 30% of the samples, 16% of the controls and 60% of the cases. This study provides the first data on the predominant viral types in Ushuaia. Our results show lower levels of infection than in regions with a high incidence of cervical cancer, HPV 16 being the most prevalent viral type. This research may be useful for selecting a specific vaccine targeting the population examined.