El laboratorio de fertilidad masculina, su evolución en los últimos 20 años / The male fertility laboratory, its evolution over the last 20 years / O laboratório de fertilidade masculina, sua evolução ao longo dos últimos 20 anos

Resumen La mayor accesibilidad a los tratamientos de reproducción asistida (RA) y los avances de la criobiología produjeron cambios en los laboratorios de andrología. El objetivo de este trabajo fue analizar la demanda y evolución de las variables seminales en las últimas dos décadas, caracterizar el laboratorio andrológico actual, evaluar el impacto de la incorporación del aseguramiento de la calidad y la inclusión de los sistemas computarizados (CASA). Se utilizaron datos de las medias mensuales del control de calidad interno (n=22 528) y encuestas a profesionales de laboratorios andrológicos (n=65) y a médicos especialistas en fertilidad (n=33). La demanda global se redujo significativamente con el aumento de las solicitudes de primera vez. El volumen y recuento, variables dependientes de andrógenos, disminuyeron con los años. El criterio estricto en morfología disminuyó el porcentaje de normales; la mitad de los médicos encuestados recibieron resultados entre 0 y 10% y el 40% consideró que ponía en riesgo el valor clínico de la variable. El sistema CASA permitió objetivar la cinética espermática e incrementar el porcentaje de progresivos rápidos, pero pocos laboratorios lo incorporaron. El 66% de los médicos resuelven el factor andrológico severo por tratamientos clínicos y el 95% utiliza técnicas de RA. El análisis de semen es ejecutado fundamentalmente por bioquímicos especializados, con baja adhesión a la automatización y acreditación del laboratorio, pero con participación en programas de evaluación externa de calidad. La demanda disminuyó como consecuencia del aumento del tratamiento por RA. La reducción del porcentaje de formas normales compromete su utilidad clínica.

Abstract Increasing availability to assisted reproduction (AR) treatments in Argentina and advances in cryobiology resulted in changes in andrology laboratories. The aim of this study was to evaluate the demand and evolution of seminal variables in the last two decades, characterise the current andrology laboratory, evaluate the impact of the incorporation of quality assurance and the introduction of computer assisted semen analysis (CASA). Data were taken from internal quality control (IQC) monthly means (n=22 528) and professionals in charge of laboratories (n=65) and fertility physicians' (n=33) surveys. Overall demand decreased significantly while first-time orders increased. Sperm volume and sperm count -androgen dependent parameters- decreased over the years. Strict morphology criteria reduced the percentage of normal results; half of the physicians received results between 0 and 10% and 40% considered that it compromised the clinical value of the variable. The CASA system made it possible to objectify sperm kinetic, increasing the percentage of fast progressives, but few laboratories have incorporated it. Sixty-six percent of physicians resolve severe andrological factor by clinical treatments and 95% use AR techniques in those cases. Semen analysis is mainly performed by specialised biochemists, with low adherence to laboratory automatisation and accreditation, but with participation in external quality assessment programmes. The demand decreased because of the increase in AR treatment. The lower percentage of normal forms compromises their clinical utility.

Resumo O aumento do acesso aos tratamentos de reprodução assistida (RA) e os avanços na criobiologia levaram a mudanças nos laboratórios de andrologia. O objetivo deste trabalho foi analisar a demanda e a evolução das variáveis de sêmen nas últimas duas décadas, caracterizar o laboratório de andrologia atual, avaliar o impacto da incorporação da garantia da qualidade e a inclusão dos sistemas computadorizados (CASA). Foram utilizados dados das médias mensais do controle de qualidade interno (n= 22 528) e pesquisas a profissionais de laboratórios andrológicos e a médicos especialistas em fertilidade (n=33). A demanda geral diminuiu significativamente com o aumento das solicitações de primeira vez. O volume e a contagem de esperma, parâmetros dependentes de andrógenos, diminuíram ao longo dos anos. O critério morfológico rigoroso diminuiu a porcentagem de normais; metade dos médicos entrevistados recebeu resultados entre 0 e 10% e 40% considerou que isso comprometía o valor clínico do parâmetro. O sistema CASA, permitiu objetivar a cinética espermática e aumentar o percentual de progressões rápidas, mas poucos laboratórios o incorporaram. 66% dos médicos resolvem o fator andrológico grave por tratamentos clínicos e 95% utilizam técnicas de RA nesses casos. A análise do sêmen é realizada principalmente por bioquímicos especializados, com baixa aderência à automação e acreditação laboratorial, mas com participação em programas de avalação externa de qualidade. A demanda diminuiu como consequência do aumento do tratamento por RA. A diminuição em percentagem de formas normais compromete sua utilidade clínica.

Acreditación de los laboratorios de Andrología en la República Argentina / Accreditation of Andrology laboratories in Argentina / Credenciamento dos laboratórios de Andrologia na República Argentina

La acreditación de laboratorios especializados en Andrología tiene como objetivo promover, mejorar y asegurar la calidad del servicio. Las especialidades requieren de la participación de expertos que asesoren a los organismos autónomos que efectúan las auditorías de tercera parte. El objetivo del trabajo es comunicar la experiencia de trabajo cooperativo llevado a cabo por una sociedad científica, la Sociedad Argentina de Andrología (SAA) y el Programa de Acreditación de Laboratorios (PAL) de la Fundación Bioquímica Argentina (FBA) para el aseguramiento de la calidad de la prestación bioquímica en el área andrológica. Con tal fin se firmó un convenio marco y específico de colaboración para la acreditación de laboratorios especializados en Andrología. La FBA llevaría a cabo la logística del proceso, con su plantel de auditores, aplicando como instrumento el Manual de Acreditación MA3 y la SAA proveería asesoramiento científico. Junto con las autoridades del PAL se elaboró un documento que especifica los apartados correspondientes al MA3 capítulo Nº 4 Anexo Nº 4, "Estándares para la acreditación de laboratorios especializados". Se realizó capacitación para la elaboración de la documentación y formación de los auditores en la especialidad. Esta experiencia demuestra que el trabajo cooperativo entre organizaciones permite alcanzar logros a favor de la seguridad del paciente.

Laboratory accreditation aims to promote, improve and ensure the quality of the service. The specialties require the participation of experts who advise the autonomous bodies that carry out third-party audits. The objective is to communicate the experience of cooperative work carried out by a scientific society, the Sociedad Argentina de Andrología (SAA) (Argentine Society of Andrology) and the Laboratory Certification Programme (PAL for its name in Spanish) of Fundación Bioquímica Argentina (FBA) (Argentine Biochemistry Foundation) for quality assurance of the biochemical work in the andrology area. To reach this goal, a framework and specific collaboration agreement was signed for the certification of specialized laboratories in Andrology. The FBA will carry out the logistics of the process, with its auditors' staff, applying the MA3 Accreditation Manual as an instrument, and the SAA will provide scientific advice. Together with the PAL authorities, a document was drawn to specify the sections corresponding to the MA3 chapter No. 4 Annex No. 4, "Standards for the certification of specialized laboratories". Training was carried out to prepare the documentation and the auditors in the specialty were trained as well. This experience has proven that cooperative work between organizations can achieve results favouring the patient's safety.

O credenciamento dos laboratórios visa promover, melhorar e garantir a qualidade do serviço. As especialidades requerem a participação de profissionais que assessoram os órgãos autônomos que realizam auditorias de terceiros. O objetivo é comunicar a experiência do trabalho cooperativo realizado por uma sociedade científica, a Sociedade Argentina de Andrologia (SAA) e o Programa de Credenciamento (PAL) da Fundação Bioquímica Argentina (FBA) para garantir a qualidade do trabalho bioquímico na área andrológica. Para esse fim, foi assinado um acordo-quadro e específico de cooperação para o credenciamento de laboratórios especializados em Andrologia. A FBA iria executar a logística do processo, com a sua equipe de auditores, por meio do Manual de Credenciamento MA3 como instrumento e a SAA como um instrumento e a SAA forneceria assessoramento científico. Junto com as autoridades do PAL foi elaborado um documento especificando as seções relativas ao MA3 capítulo Nº 4 Anexo Nº 4, "Normas para a credenciamento de laboratórios especializados". O treinamento foi realizado para a elaboração da documentação e formação dos auditores na especialidade. Essa experiência tem demonstrado que o trabalho cooperativo entre organizações permite atingir resultados positivos para a segurança do paciente.

Verificación de los valores de referencia del estudio del semen según OMS 2010 en Buenos Aires / Verification of reference values for semen analysis according to WHO 2010 in Buenos Aires / Verificação dos valores de referência da análise do sêmen de acordo com a OMS 2010 em Buenos Aires

La Organización Mundial de la Salud en su edición 2010 ha publicado valores de referencia para los parámetros seminales. Sin embargo, los laboratorios deben verificarlos en su población para transferirlos a su práctica clínica. Para cumplimentar este requerimiento se propuso verificar los intervalos de referencia OMS 2010 en la población de la provincia y Ciudad Autónoma de Buenos Aires. También se determinó el rango de resultados para: número total de espermatozoides móviles progresivos y morfología normal en el eyaculado, parámetros cinéticos y pruebas funcionales. El proceso de verificación fue llevado a cabo de acuerdo a la guía C28-A2 CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute). Mediante difusión se convocó a hombres (n:20) argentinos residentes en Buenos Aires, con fertilidad probada en los últimos 12 meses. Se excluyeron individuos con patología andrológica. Las muestras se procesaron de acuerdo con los criterios OMS 2010. De los resultados se establece que los intervalos de referencia publicados en la última versión han sido verificados, con excepción del volumen seminal. Los rangos de valores obtenidos para los parámetros de movilidad progresiva y morfología en número totales, como también de los parámetros cinéticos y de las pruebas funcionales contribuirán a establecer futuros valores de referencia.

WHO 2010 provided reference values for semen analysis; however clinical laboratories should verify them in healthy fertile males. In order to be able to transfer this reference interval to our unit, it was proposed to examine the available data in the Buenos Aires population. The range of data obtained in this population was also provided for the following: total number of progressively motile and morphologically normal spermatozoa in the ejaculate,nematic parameter values and functional tests, in an attempt to establish standardization in these parameters. The process of reference value verification was carried out according to C28-A2 CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute) guidelines; to that aim, twenty men born in Argentina who reside in Buenos Aires province or city were recruited to participate. They were of proven fertility in the last 12 months. Individuals with pathologies by andrological consultation were excluded. Samples were processed according to 2010 WHO. In Buenos Aires City, WHO reference values were confirmed whereas semen volume was not confirmed. The range of values for total progressive and morphologically normal spermatozoa as well as kinetic parameter values, enrichment by swim up and functional test results were established for the male fertile population studied in an attempt to contribute to the construction of future reference values.

Organização Mundial da Saúde, em sua edição de 2010, tem publicado valores de referência para os parâmetros seminais. No entanto, os laboratórios devem verificá-los em sua população para serem transferidos a sua prática clínica. Para cumprir com esse requisito, decidiu-se verificar os intervalos de referência da OMS 2010, na população da província e da cidade de Buenos Aires. Também foram definidos intervalos de resultados para o número total de espermatozoides móveis progressivos e para a morfologia normal no ejaculado, os parâmetros cinéticos e os testes funcionáis. O processo de verificação foi realizado de acordo com o guia CLSI C28 A2 (Clinical and Laboratory Standards Institute). Por meio de uma convocação, (N 20) homens argentinos residentes em Buenos Aires, com comprovada fertilidade nos últimos 12 meses foram convidados. Indivíduos com patologia andrológica foram excluídos. As amostras foram processadas de acordo com os critérios da OMS de 2010. A partir dos resultados estabeleceu-se que os intervalos de referência publicados na versão mais recente foram verificados, com exceção do volume seminal. Os intervalos de valores obtidos para os parâmetros de motilidade progressiva e morfologia em número total, bem como os parâmetros cinéticos e os dos testes funcionais ajudarão a estabelecer valores de referência futura.

Estudio del semen humano: Implementación de un método objetivo / Study of human semen: implementation of an objective method / Estudo do sêmem humano: implementação de um método objetivo

El objetivo del presente trabajo fue estandarizar y validar un sistema computarizado de análisis de semen CASA, SCA (Sperm Class Analyzer) para los parámetros de concentración y movilidad espermática de acuerdo a normativas internacionales. Se estandarizó el tipo de velocidad para la clasificación en grados y la profundidad adecuada de la cámara. Para la validación se determinó precisión, límite de detección, intervalo de medición y estudio de comparación de métodos. Se halló alta correlación lineal en la clasificación del movimiento empleando Velocidad Curvilínea o Velocidad Promedio (r=0,99; p<0,001), estableciendo el uso de la primera para obtener resultados comparables con otros sistemas objetivos. También, se normatizó el empleo de cámaras de 10 µm de profundidad debido a que se obtienen mejores imágenes para el análisis sin afectar la movilidad. La imprecisión media fue 13,29%, 14,26% y 18,75% para recuento, móviles progresivos y móviles grado (a) respectivamente. Se halló alta correlación con el método manual, tanto en concentración (r=0,97, p<0,0001), móviles progresivos (r=0,84; (p<0,001) y móviles grado (a) (r=0,82; p<0,0001). Se comprobó linealidad (r=0,99; p<0,001), entre 0,98 x 106 y 125 x 106 esp/mL. Se concluye que el método propuesto cumple con los requisitos necesarios para su empleo en la clínica, siendo indispensable la edición de las imágenes por parte de un operador calificado.

Utilidad clínica de la citología espermática / Clinical usefulness of seminal cytology / Utilidade clínica da citologia espermática

En el examen del semen son importantes las determinaciones de la movilidad, el número y la morfología espermática, sin embargo no resultan suficientes. La observación de las células de la progenie espermática o de otras células epiteliales puede contribuir al mejoramiento del diagnóstico clínico. En el presente trabajo se presentan tres casos de estudios de muestras de sémenes donde la observación citológica fue el criterio más importante para la definición de la patología. Finalmente se discuten imágenes celulares publicadas en el Manual de OMS para el Examen y Procesamiento de Semen Humano, 5a edición, donde se confunden células germinales inmaduras con macrófagos. El propósito del trabajo es poner en evidencia la importancia del conocimiento citológico para una correcta interpretación de ciertas patologías seminales.

Control de calidad externo en el estudio del semen / External quality control sperm analysis

En diciembre de 2005 se inició el Programa de Evaluación Externa de la Calidad (PEEC) para Laboratorios Andrológicos, organizado por la Facultad de Farmacia y Bioquimica, UBA y la Fundación Bioquímica Argentina. El objetivo del presente trabajo es informar la respuesta obtenida a la convocatoria de participar en el PEEC, dar a conocer los resultados de las primeras encuestas y compararlos con los relatados por otros programas extranjeros. Los parámetros evaluados fueron movilidad (video), morfología (fotografías digitales en CD) y recuento espermático (RE) (suspensiones de espermatozoides). Se solicitó utilizar la estandarización OMS 1999. Participaron 60 laboratorios. Los valores de Error de Medida Permitidos (EMP) fueron de 60%, 50%, 15% y 30% para morfología, movilidad progresiva rápida (MPR), movilidad progresiva (MP) y RE, respectivamente. Los resultados hallados fueron similares a los publicados por el Programa de Control de Calidad Externo del ASEBIR-España para el "nivel óptimo" de las especificaciones de calidad del "estado del arte". Cuando el requerimiento de calidad fue "variabilidad biológica", los EMP disminuyeron significativamente para morfología y MPR: 28,2% y 29,3% no así para MP y RE. La alta aceptación de la convocatoria pone de manifiesto la necesidad de un PEEC-Andrología. El elevado Error de Medida obtenido para morfología y movilidad progresiva rápida denota la necesidad de estandarizar los procedimientos y criterios para lograr el requerimiento de calidad de variabilidad biológica.

In December 2005 began the first External Quality Assessment Scheme (EQAS) for Andrology Laboratories organized by the School of Pharmacy and Biochemistry (University of Buenos Aires) and the Fundación Bioquímica Argentina. The aim of this study was to inform the response obtained after the enrollment to participate in the first Argentine EQAS, to discuss the results obtained in the first surveys and to compare them with the ones reported by other foreign programs. The evaluated parameters were sperm motility (videotapes), morphology (digital photography) and concentration (SC) (suspensions of spermatozoa). Participants were asked to follow WHO 1999. Nearly 60 laboratories throughout Argentine participated. The Total Allowable Error was 60%, 50%, 15% and 30% for morphology, progressive rapid motility (PRM), progressive motility (PM) and SC, respectively. The results found were similar to those published by the External Quality Program of the ASEBIR-Spain for the "optimum quality specification" on the "State of the art". When the established requirement of quality was "Biological Variability", the Total Allowable Error decreased significantly for morphology and PRM: 28.2% and 29.3% but not for PM and SC. The present data confirms the need for a Scheme. The high Total Error obtained for morphology and progressive rapid motility demamds to standardizing the procedures and establishing analytical goals based on Biological Variability.

Anticuerpos de la clase IgG unidos a la superficie espermática: correlación metodológica, cuadro citológico / Antisperm antibody binding on the sperm surface: statistical correlation between method, cytologycal characteristics

Entre el 5 y 10 por ciento de los hombres infértiles presentan en sus eyaculados anticuerpos antiespermatozoides (AcAe) en valores que superan las tasas aceptadas, por lo que la detección de este tipo de anticuerpos debe realizarse al iniciar los estudios de una pareja infértil. En este trabajo se emplearon eyaculados procedentes de hombres integrantes de parejas infértiles, con el objetivo de a) establecer la correlación entre dos métodos utilizados en la detección y cuantificación de AcAe con capacidad de unión a la membrana espermática, los Immunobeads test (IB) y el Mixed Antiglobulin Test: MAR test (Mt) y b) determinar las características citológicas de los eyaculados de hombres con alta tasa de anticuerpos con capacidad de unión a la membrana del espermatozoide. Para el estudio comparativo de ambos test se emplearon 58 muestras. El criterio de selección empleado es que uno de los dos tests superara los valores de referencia. La evaluación citológica se realizó en 250 muestras tomadas al azar y en 53 eyaculados leucospérmicos (concentración de leucocitos polimorfonucleares) (LPN) > 10 a la sexta. Método: Peroxidasa. Los IB para la detección de anticuerpos de clases IgG (IBG) e IgA (IBA) y Mt fueron desarrollados según normas de la OMS, empleándose la técnica directa en todas aquellas muestras con concentración espermática mayor a 5.10 a la sexta espermatozoides/mL y movilidad traslativa (grados [a] + [b]) superior a 40 por ciento, en los restantes casos se usó el método indirecto. En los 58 sémenes seleccionados, los anticuerpos de tipo IgG presentaron valores de (x+/-DS) 88,9+/-15,8 y de 58,8+/-31,6 para Mt e IBG respectivamente (P < 0,001). En el 86,2 por ciento de los casos (n=50) ambos se correlacionaron dando resultados francamente positivos, en el 13,8 por ciento (n=8) frente a IB negativos, se obtuvieron Mt positivos, no habiéndose obtenido valores dudosos en las muestras en estudio. Los valores obtenidos en los dos métodos directos que involucran a la IgG, se correlacionaron significativamente (r=0,58). Los resultados obtenidos con IB en los 58 pacientes seleccionados, mostraron en el 63,8 por ciento (n=37) de los sémenes anticuerpos IgG e IgA, en el 22,4 por ciento (n=13) sólo de clase IgG, no encontrándose ninguna muestra con anticuerpos de clase IgA, únicamente...