Use of two multiplex (PCR) reactions as an initial delection screening method for DMD and BMD patients

O gene da distrofina, localizado em Xp21, é um loco gênico enorme, ocupando uma regiäo de mais de 2,3 Mb. Mutaçöes neste gene resultam na distrofia muscular Duchenne (DMD) ou distrofia muscular Becker (DMB). Cerca de 60% das mutaçöes säo deleçöes com um tamanho médio de 200 kb e säo detectáveis por análise de Southern blot usando sondas cDNA. Em 1988 Chamberlain et al. descreveram uma reaçäo multiplex para uma amplificaçäo simultânea de 9 exons do gene da distrofina, o que permitiu detectar cerca de 80% de todas as deleçöes. Recentemente Beggs et al. descreveram um conjunto adicional de primers para um teste multiplex de mais 9 exons. Usamos no Rio de Janeiro ambas as reaçöes multiplex no estudo de 27 pacientes DMD e 4 DMB. A síntese dos primers e o preparo dos kits foram realizados em Leiden. Com a reaçäo multiplex de Vhamberlain detectamos 10 deleçöes. A segunda reaçäo multiplex (Beggs) confirmou 7 dessas deleçöes e detectou mais 2 pacientes com deleçöes, uma para o exon 50 e outra para o exon 52. A análise Southern blot e a hibridizaçäo cDNA foram usadas para confirmar as deleçöes e determinar-lhes a extensäo. As sondas cDNA confirmaram as 12 deleçöes detectadas usando as duas reaçöes multiplex. Nossa experiência é a de que a abordagem multiplex para triagem inicial de deleçöes é um método bom e confiável

DNA probe analysis in the detection of carriers and in the prenatal diagnosis of Duchenne muscular dystrophy

Uma diagnose prenatal na 10ª semana de gestaçäo em um feto do sexo masculino de uma portadora de gene para a distrofia muscular Duchenne será mais rápida se já se souberem previamente os marcadores do tipo RFLP'S para os quais ela possa ser informada. Estudamos uma família brasileira acometida pela DMD com portadores certas em três geraçöes. Duas irmäs do probando, de 19 e 8 anos de idade, haviam sido detectadas por níveis de creatinocinase repetidamente elevados quando comparados com os de mulheres normais da mesma faixa etária. Estudamos todos os indivíduos disponíveis nas três geraçöes da família: avô e avó maternos, mäe, tio materno, pai, probando e suas duas irmäs. Usamos o procedimento para diagnose do grupo de Leiden em sua primeira etapa, que consiste na digestäo do DNA de todos osmembros da família com cinco enzimas e hibridizando os fragmentos com sete sondas. Houve informaçäo suficiente para discriminar na mäe do pacientes o cromossomo potencialmente contendo o gene DMD do originado do avô materno, isto é, a "fase" foi conhecida na mäe. Foi possível confirmar, ao nível de 99% de confiança, que ambas as irmäs do pacientes herdaram o cromossomo contendo o gene DMD. As duas irmäs säo informativas para os dois fragmentos de restriçäo mais próximos, reconhecidos pelas sondas C7 e 754. Há informaçäo suficiente para proceder a uma diagnose prenatal num futuro feto do sexo masculino, com un nível de confiança de 99%. Näo foram encontradas deleçöes no paciente em relaçäo às sondas pERT-87 e XJ1.1. Os crossings detectados näo interferem em nossas conclusöes quanto à condiçäo portadora do gene da DMD nas duas irmäs do paciente