Desenvolvimento de material de referência para microbiologia de alimentos contendo Listeria monocytogenes em matriz queijo / Development of reference material for food microbiology containing Listeria monocytogenes in matrix

A NBR ISO/IEC 17025:2005, uma das normas mais utilizadas em laboratórios de ensaio, descreve como um de seus critérios para a garantia da qualidade dos resultados analíticos a participação periódica dos laboratórios em ensaios de proficiência (EP). Os analitos, utilizados nos EP são materiais de referência (MR) provenientes de um mesmo lote, e devem apresentar características de homogeneidade e estabilidade. O objetivo deste estudo foi produzir um MR qualitativo destinado ao ensaio de pesquisa de Listeria monocytogenes em matriz queijo pela técnica de liofilização. Para a produção do MR, foi utilizado como matriz o queijo Minas frescal (QMF) ultrafiltrado. A matriz foi distribuída em frascos, contaminada com a bactéria alvo e submetida à liofilização, tendo a sacarose como crioprotetor. O MR produzido foi considerado homogêneo e estável na temperatura de ≤-70°C durante todo o período estudado (10 meses). O material apresentou estabilidade a 4, 25, 30 e 35°C por quatro dias e a -20°C por 48 dias, e os resultados estatísticos indicam tendência à estabilidade. Conclui-se que o material apresentou todos os requisitos necessários de um MR de qualidade e poderia ser transportado aos laboratórios participantes de um EP à temperatura máxima de 35°C por até quatro dias, uma vez que os resultados indicaram a manutenção da concentração celular nesse período. Esse foi o primeiro trabalho a descrever uma metodologia de produção de MR contendo L. monocytogenes em matriz queijo.

The standard most used in testing laboratories, ISO/IEC 17025:2005, describes the participation of laboratories in periodic proficiency testing (PT), as a criteria for quality assurance of analytical results. The analyses used in PT are reference materials (MR) from the same lot, and must have characteristics of homogeneity and stability. This study aimed to produce a qualitative RM for detection of Listeria monocytogenes assays in cheese matrix. For the production of RM, Minas Frescal cheese (MFQ) was used as matrix. The matrix was distributed in flasks, contaminated with the target bacteria and submitted to freeze-drying. Sucrose was used as cryoprotector. The RM produced was considered homogeneous and stable at -70°C during the entire period of study (10 months). The material showed stability at 4, 25, 30 and 35°C for 4 days and at -20°C the RM showed stability for 48 days, and the statistical results indicate a tendency to maintain stability. It was concluded that the material showed all the requirements of an RM quality and could be transported to the laboratory participants of a PT at 35°C up to 4 days, since the results indicate the maintenance of cell concentration during this period. This is the first study to describe a methodology for producing MR containing L. monocytogenes in cheese matrix.

Listeria monocytogenes em hortaliças: isolamento e sorotipagem / Listeria monocytogenes in green vegetables: isolation and serotyping

A ingestão de alimentos contaminados com Listeria monocytogenes representa um risco à saúde humana.A pesquisa de L. monocytogenes por meio de técnica de enriquecimento seletivo foi efetuada em 97amostras de hortaliças, comercializadas no Estado do Rio de Janeiro. Foram analisadas 35 hortaliças innatura, 32 minimamente processadas e 30 pratos de saladas cruas prontas para consumo. Os isoladosforam sorotipados por soroaglutinação clássica utilizando-se antissoro policlonal flagelar e somático.Sete amostras (7,2 %) apresentaram L. monocytogenes, sendo duas hortaliças in natura e cinco emforma de salada. Todos os isolados foram identificados como sorovar 1/2a. Em virtude da ocorrência decontaminação de hortaliças in natura com L. monocytogenes, é fundamental que os consumidores estejamesclarecidos quanto à possível presença deste patógeno nesse tipo de alimento, e ficarem cientes quantoà realização de corretos procedimentos de sanitização e de cuidados para evitar a contaminação cruzadacom outros alimentos. A presença de L. monocytogenes em saladas prontas para consumo representa umrisco à saúde dos consumidores, principalmente para indivíduos pertencentes ao grupo de risco.

Avaliação de crioprotetores na produção de material de referência para enumeração de coliformes em leite em pó a ser utilizado em ensaio de proficiência / Evaluation of cryoprotectants in the production of reference material for coliforms counting in milk powder to be used for proficiency testing

O desafio na produção de materiais de referência (MR) destinados a ensaios microbiológicos é ainstabilidade natural dos micro-organismos. A liofilização é indicada para criopreservação de culturasbacterianas quando o número de células deve ser resguardado. Agentes protetores podem ser adicionadosantes do congelamento para aumentar a estabilidade do material. Neste trabalho foram avaliados oscrioprotetores na produção de MR liofilizados a serem utilizados em ensaio de proficiência para contagemde coliformes. Foram produzidos quatro lotes utilizando-se diferentes crioprotetores: solução de leitedesnatado a 10 % (EC1), a mesma solução contendo glicerol (EC2), sacarose (EC3) e trealose (EC4). Umacepa de Escherichia coli foi empregada no preparo dos materiais. A homogeneidade foi avaliada conforme oProtocolo Internacional Harmonizado. A estabilidade foi estudada durante quatro meses à ≤ -70 ºC (longaduração) e às temperaturas de -20 ºC, 4 ºC, 25 ºC e 35 ºC durante cinco dias (curta duração), segundo aISO/GUIDE 35. Apenas EC1 foi considerado não homogêneo. Os lotes permaneceram estáveis à ≤ -70 ºCdurante quatro meses. EC2 apresentou resultados insatisfatórios na estabilidade de curta duração. EC3 eEC4 foram homogêneos e estáveis nas temperaturas estudadas. A sacarose e a trealose foram consideradascrioprotetores adequados para o preparo do MR em questão.

Utilização de caldo Bolton no enriquecimento seletivo em comparação ao plaqueamento direto na pesquisa de Campylobacter spp. em carcaças resfriadas de frango / Use of Bolton broth for selective enrichment and comparative analysis of its performance with direct plating methodology for isolating

O objetivo deste estudo foi comparar o enriquecimento seletivo e o plaqueamento direto no isolamento das espécies termofílicas de Campylobacter spp. em 30 amostras de carcaças de frango resfriadas adquiridas em supermercados, feiras livres e abatedouros no município do Rio de Janeiro, no período de julho de 2009 a julho de 2010. Foi realizada a enxaguadura da carcaça com água peptonada tamponada a 1% para recuperação das bactérias. Para o plaqueamento direto, foram utilizados ágar carvão cefoperazone de soxicolato modificado e ágar campy-cefex. Para o enriquecimento seletivo, foi empregado o caldo Bolton em concentrações simples e dupla. Foi detectada a presença de Campylobacter spp. em 21 amostras(70%), sendo 6 (28,6%) de abatedouros (3 com Serviço de Inspeção Estadual e 3 sem inspeção), 8 (38,1%) de supermercados e 7 (33,3%) de feiras livres. Não houve diferença estatisticamente significativa entre os resultados obtidos nesses estabelecimentos. As 21 amostras positivas foram isoladas do plaqueamento direto, 2 (9,5%) foram isoladas também no caldo Bolton simples e nenhuma no caldo Bolton duplo. O plaqueamento direto foi considerado o método mais rápido e eficiente, e apresenta menor custo que o enriquecimento seletivo na recuperação de Campylobacter spp. em carcaças resfriadas de frango.

Comparação das técnicas do número mais provável (NMP) e de filtração em membrana na avaliação da qualidade microbiológica de água mineral natural / Comparison of most probable number (MNP) and membrane filtration techniques for analyzing the natural mineral water microbiological quality

O consumo de água mineral tem sido associado a um estilo de vida saudável e à crença, por parte dos consumidores, de que esse produto é relativamente seguro. A RDC n. 275/05 determina os padrões microbiológicos para água mineral natural e água natural no Brasil. Este trabalho teve como objetivo comparar as técnicas de filtração em membrana e de número mais provável (NMP) pela avaliação da qualidade microbiológica de amostras de água mineral natural envasilhadas em garrafões de 20 litros, comercializadas no Município do Rio de Janeiro, Brasil. Das 31 amostras representativas (no total de 155 unidades amostrais) analisadas, 22 (70,97%) apresentaram-se insatisfatórias em virtude de ocorrência de coliformes termotolerantes em duas (6,45%) amostras, independentemente da técnica utilizada. A contagem de coliformes totais acima do limite especificado foi evidenciada em três amostras (9,68%), de enterococos em uma amostra (3,23%), de P. aeruginosa em 21 (67,74%) e de clostrídios sulfito redutores em duas amostras (6,46%). A técnica do NMP apresentou maior sensibilidade na detecção dos grupos de micro-organismos relacionados na resolução supracitada. Portanto, esta técnica demonstrou ser mais eficiente para executar o controle da qualidade microbiológica de água potável.

Desenvolvimento de material de referência para ensaio de proficiência em microbiologia de alimentos / Development of reference materials for proficiency tests in food microbiology

Ensaios de proficiência (EP) são considerados importantes ferramentas para a condução de programas controle de qualidade, que possibilitam efetuar a avaliação da habilidade de laboratórios em obter resultados precisos. No Brasil é restrita a oferta de EP na área de microbiologia de alimentos. Além disso, os altos custos diminuem a participação regular de laboratórios nacionais nesses ensaios. O presente estudo teve como objetivo realizar a avaliação da técnica de liofilização no preparo de materiais de referência (MR) para EP destinados ao ensaio de detecção de Salmonella spp. em leite. Foi determinada a concentração do inóculo utilizado no preparo de dois lotes e, também, foi padronizado o procedimento de contaminação da matriz. Para monitorar a qualidade dos MR produzidos foram estabelecidos ensaios de controle, dentre eles o teste da homogeneidade e da estabilidade em longo e curto prazo. A técnica de liofilização mostrou ser adequada para a produção de MR de qualidade e aplicável para EP. Os MR apresentaram estabilidade à temperatura de estoque (-20ºC) durante os três primeiros meses, porém foi observada perda de viabilidade após doze meses de armazenamento. Na estabilidade em curto prazo, os MR foram estáveis a 4°C, contudo apresentaram redução significativa no número de células quando mantidos a temperaturas de 25ºC e 37ºC durante sete dias.

Proficiency tests are considered relevant tools of quality control programs used to monitor the laboratory performance and to assess the reliability of tests results. In Brazil, the provision of proficiency testing (PT) is restricted to food microbiology area. Furthermore, high costs reduce the regular participationof national laboratories in these tests. This study evaluated the freeze-drying technique employed forpreparing reference materials (RM) to be used in the PT schemes for detecting Salmonella spp. in milk.The concentration of inoculums used for preparing two batches of RM was determined, and the proceduresfor matrix contamination were standardized. The control trials were established in order to monitor thequality of the produced RM, and among them, there are long and short-term homogeneity and stability assays. The freeze-drying technique proved to be a suitable procedure for producing RM for PT. The RM were stable for the first three months when stored at -20ºC, nevertheless, viability loss could be observed after 12-month storage. The RM were stable at 4°C at short-term stability, although when the products were kept at 25°C and 37°C for seven days, a significant reduction in the number of cells could be observed.