Armonización de la determinación de ANCA por inmunofluorescencia indirecta: primera reunión argentina / Harmonization of the determination of ANCA by indirect immunofluorescence: first argentine meeting / Harmonização da determinação de ANCA por imunofluorescência indireta: primeira reunião argentina

Resumen La determinación de anticuerpos anti-citoplasma de neutrófilos (ANCA) es utilizada en la clínica diaria como una herramienta diagnóstica en distintas formas de vasculitis de pequeños vasos (vasculitis asociadas a ANCA), incluyendo la granulomatosis con poliangeítis (antes: granulomatosis de Wegener), poliangeítis microscópica y granulomatosis eosinofílica con poliangeítis (antes: síndrome de Churg-Strauss), y como apoyo diagnóstico de colitis ulcerosa, colangitis esclerosante primaria y enfermedad de Crohn. Estos anticuerpos están dirigidos contra distintos epítopos antigénicos de diferentes proteínas presentes en el citoplasma del neutrófilo. La determinación de ANCA, habitualmente realizada por la técnica de inmunofluorescencia indirecta (IFI), presenta cierto grado de complejidad en la definición de las imágenes de los diferentes patrones, variabilidad en la forma de trabajo y expresión de resultados. El 24 de octubre de 2018 en el marco del X Congreso Argentino de la Calidad en el Laboratorio Clínico y VIII Jornadas Latinoamericanas de la Calidad en el Laboratorio Clínico, en la Ciudad de Buenos Aires, se realizó una reunión de Armonización de la Determinación de ANCA por IFI con el objeto de presentar, discutir y consensuar los distintos aspectos que se presentan en esta técnica. Las propuestas iniciales fueron discutidas arribándose a recomendaciones generales para proporcionar estándares de trabajo e interpretación de imágenes con el objeto de disminuir la variabilidad de resultados entre los laboratorios clínico-inmunológicos.

Abstract Anti-neutrophil cytoplasmic antibodies (ANCA) tests are widely used in daily clinical practice as a useful tool for the diagnosis of pathologies such as granulomatosis with polyangiitis, microscopic polyangiitis, pauci-immune necrotizing segmental glomerulonephritis and eosinophilic granulomatosis with polyangiitis, ulcerative colitis, primary sclerosing cholangitis, Crohn's disease, etc. These antibodies are directed against different antigenic epitopes of various proteins which are present in the neutrophil cytoplasm. ANCA testing is usually carried out by using indirect immunofluorescence (IIF) method. The determination of ANCA presents some difficulties in the definition of the images of the different patterns, work protocols and result reports uniformity. The "Harmonization Conference on the Determination of ANCA by IIF" was held within the framework of the X Argentine Congress on Quality in the Clinical Laboratory and VIII Latin American Conference on Quality in the Clinical Laboratory, in Buenos Aires, Argentina, on October 24, 2018, in order to present, discuss and agree on different aspects of this method. Some initial proposals were discussed, arriving at general recommendations to provide standards of work and an image interpretation, with the aim of reducing the variability of results among the clinical-immunological laboratories.

Resumo A determinação de anticorpos anti-citoplasma de neutrófilos (ANCA) é utilizada na prática clínica diária como um suporte diagnóstico para várias patologias, como granulomatose com poliangiite, poliangiite microscópica, glomerulonefrite segmentar necrotizante pauci-imune e granulomatose eosinofílica com poliangiite, poliarterite nodosa, colite ulcerosa, colangite esclerosante primária, doença de Crohn. Esses anticorpos são dirigidos contra diferentes epítopos antigênicos de diferentes proteínas presentes no citoplasma do neutrófilo. A determinação de ANCA, normalmente realizada pela técnica de imunofluorescência indireta IFI, apresenta certo grau de complexidade na definição das imagens dos diferentes padrões, variabilidade na forma de trabalho e expressão de resultados. Em 24 de outubro de 2018, no âmbito do X Congreso Argentino de la Calidad en el Laboratorio Clínico (X Congresso Argentino da Qualidade no Laboratório Clínico) e VIII Jornadas Latinoamericanas de la Calidad en el Laboratorio Clínico (VIII Jornadas Latino-americanas da Qualidade no Laboratório), na cidade de Buenos Aires, foi realizada uma Jornada de Harmonização da Determinação de ANCA pelo IFI a fim de apresentar, discutir e concordar sobre os diferentes aspectos que são apresentados nesta técnica. As propostas iniciais foram discutidas, chegando a recomendações gerais para fornecer padrões de trabalho e interpretação de imagens visando reduzir a variabilidade de resultados entre os laboratórios clínico-imunológicos.

Utilidad Clínica de los anticuerpos anticitoplasma de neutrófilos en lupus eritematoso sitémico juvenil / Clinical usefulness of anti-neutrophil cytoplasmic antibodies in childhood systemic lupus erythematosus / Utilidade clínica dos anticorpos anti-citoplasma de neutrófilos no lúpus eritematoso sistêmico juvenil

En lupus eritematoso sistémico juvenil (LES) no existen suficientes antecedentes como para obtener resultados concluyentes entre la prevalencia de anticuerpos anticitoplasma de neutrófilos (ANCA) y la importancia clínica en esta enfermedad. Sumada a la falta de estudios se encuentra la dificultad de detectar ANCA en presencia de anticuerpos anti nucleares (ANA). Este estudio tiene como objetivos determinar: a) la frecuencia de ANCA en LES juvenil, evitando por absorción las imágenes interferentes de ANA, b) las especificidades antigénicas de los ANCA y c) la asociación de ANCA con el grado de actividad de la enfermedad y con las diferentes manifestaciones clínicas. Ingresaron al estudio un grupo de 51 pacientes (media de edad: 14,6 años) con LES juvenil (American College of Rheumatology, 1982). La actividad clínica se evaluó utilizando el índice de actividad para LES (SLE-DAI). Los ANCA fueron detectados por inmunofluorescencia indirecta (IFI) y los antígenos asociados a ANCA, por intermedio de un inmunoensayo lineal cualitativo desarrollado (LIA-Blot). La interferencia por ANA y por anti ADN nativo (aADNn) fue eliminada por absorción con absorbentes desarrollados específicamente para este fin. Se verificó la ausencia de ANA y aADNn en los sobrenadantes de los sueros absorbidos realizando IFI sobre sustratos específicos. La prevalencia de pANCA y aANCA fue de 9,8% (5/51) y 5,9% (3/51) respectivamente. La frecuencia detectada por LIA-Blot para antimieloperoxidasa (aMPO) fue 9,8% (5/51) y para antilactoferrina (aLf) 13,7% (7/51). En ningún suero se detectó cANCA, ni anti proteinasa 3 (aPR3) o antielastasa (aHLE)...

Anticuerpos anti-citoplasma de neutrófilos: aspectos bioquímicos y metodológicos, importancia en diferentes patologías / Antineutrophil cytoplasmic antibodies: biochemical and methodological aspects, their importance in diferents pathologies

Los anticuerpos anticitoplasma de neutrófilos, ANCA, se encuentran involucrados en la patogénesis de las diferentes formas de las vasculitis inmunes. Su descubrimiento y posterior estudio ha permitido su utilización como elemento de ayuda diagnóstica y de seguimiento en enfermedades tales como la granulomatosis de Wegener, panarteritis microscópica y glomerulonefritis cresenticas necrotizantes. El objetivo de esta revisión es tratar de comprender las diferentes formas de vasculitis y así orientarse con respecto al diagnóstico de las mismas. La técnica de inmunofluorescencia indirecta (IFI) que hasta el momento es la única normatizada, sigue siendo una herramienta fundamental para la detección de ANCA dada su elevada especificidad; pero no debe olvidarse que posee como interferentes a los anticuerpos antinucleares (ANA). Se desarrolló un absorvente a partir de un extracto nucleoproteico de timo vacuno que permite eliminar la interferencia que producen los ANA cuando están presente en una muestra donde se quiere determinar ANCA. De esta manera se logró optimizar la IFI-ANCA, lo cual quedó demostrado que los resultados obtenidos cuando se utilizó esta técnica en conjunto con ELISA antígeno específico, LIA blot antígeno específico y Dot blot gránulos Ó desarrollados. Resultados preexistentes en relación con los ANCA y colangenopatías como el lupus eritematoso sistémico (LES) pediátrico y la artritis reumatoidea (AR) mostraban resultados dispares entre diferentes autores, lo que generó la inquietud de estudiar la seroprevalencia en estas enfermedades y su importancia clínica. Se demostró relación entre ANCA e insuficiencia renal en LES pediátrico, no así en AR. Se generó la hipótesis que la presencia de ANCA sea un epifenómeno derivado de la respuesta inflamatoria. También se pudo demostrar la presenciade ANCA en pacientes con glomerulopatías sin evidencias clínicas ni anatomopatológicas de vasculitis como son las glomerulopatías: de la diabetes, IgA, membranoproliferativas, mesangial, membranosa, nefroesclerosis, esclerosis focal y segmentaria, todas ellas asociadas a microhematuria y/o proteinuria en diferentes grados. Finalmente la revisión de este tema y en particular el desarrollo y optimización de los métodos de detección ha permitido ampliar y profundizar el campo de estudio en relación con los ANCA arribando a las conclusiones aquí expresadas

Anticuerpos IgM e IgA anti Treponema pallidum en pacientes en distintos estadíos de sífilis / Anti treponema pallidum IgM and IgA antibodies in patients in different stages

Se efectuó la detección de anticuerpos treponémicos IgM e IgA en pacientes con distintos estadíos de sífilis por un método de captura de anticuerpos en fase sólida y posterior revelado por hemaglutinación (SPHA-M y SPHA-A). Se evaluaron con SPHA-M 167 muestras séricas, 63 correspondían a pacientes con sífilis sin tratamiento (12 primarias, 18 secundarias, 23 latentes y 10 reinfecciones) y 104 pacientes que habían recibido tratamiento. En 62/167 de las muestras se evaluaron también los anticuerpos IgA, 30 pertenecían a pacientes sin tratamiento (2 primarias, 12 secundarias, 10 latentes y 6 reinfecciones). Las 32 muestras restantes correspondían a pacientes tratados. En la población de los 63 pacientes no tratados se detectó IgM específica en el 25 por ciento de casos de sífilis primaria, en el 100 por ciento de las secundarias y reinfecciones y en el 78,3 por ciento de latencias, pero sólo se encontró IgM específica en el 4,8 por ciento de sífilis tratada. En 30 pacientes no tratados la IgA específica se detectó en 1 de 2 casos de sífilis primaria, en el 100 por ciento de las secundarias y reinfecciones y en el 60 por ciento de sífilis latentes. En sífilis tratada sólo en el 6,2 por ciento se encontró IgA específica. Los anticuerpos IgA coexistieron en todos los casos estudiados con los IgM. El seguimiento post tratamiento de 7 pacientes mediante SPHA-M y VDRL indicó que entre 1 y 5 meses el SPHA-M se negativizaba, mientras la reactividad de la VDRL persistía aún al año de completado el tratamiento. La presencia de IgM y/o IgA específica evaluada según esta metodología permite caracterizar a la sífilis activa en todos los estadíos, excepto en la sífilis primaria. El seguimiento en base a los resultados de SPHA-M reproduce más fielmente la respuesta terapéutica que el seguimiento convencional con VDRL

El impacto del HIV sobre la incidencia de sifilis y gonorrea en un hospital universitario (1985-1994) / The impact of HIV infection on the incidence of syphilis and gonorrhea at a universitary hospital (1985-1994)

La sífilis y la gonorrea son dos enfermedades transmisibles sexualmente (ETS) que continúan persistiendo a pesar de existir tratamientos efectivos. En este trabajo se evaluó la incidencia de estas dos enfermedades entre 1985 y 1994, década en la cual surge la problemática de la infección por HIV. Todos los pacientes que concurrieron al Programa de ETS del Hospital de Clínicas José de San Martín con sospecha de sífilis y/o gonorrea se evaluaron clínicamente y a través de los siguientes estudios de laboratorio: a) búsqueda de Neisseria gonorrhoeae (Ng) e identificación de las cepas productoras de penicinilase (NGPP), b) búsqueda de Treponema pallidum por microscopía de campo oscuro (CO) y c) estudios serológicos para sífilis. Entre 1985 y 1991 el promedio de casos positivos para Ng fue del 14,8 por ciento, mientras que entre 1992 y 1994 fue del 4,0 por ciento (p < 0,0001) observándose el mayor descenso entre 1991 y 1992. Las NGPP aumentaron desde 8,7 por ciento en 1985 hasta 44,6 por ciento en 1988 y luego decrecieron paulatinamente hasta 26,9 por ciento en 1994. Entre 1985 y 1990 el promedio de CO positivos fue del 20,7 por ciento, mientras que entre 1991 y 1994 fue del 12,2 por ciento (p < 0,0001). Los estudios serológicos para sífilis mostraron que entre 1985 y 1988 hubo 45,7 por ciento de casos serorreactivos, mientras que entre 1989 y 1994 se halló un 34,4 por ciento (p < 0,0001). La infección por HIV tuvo una amplia repercusión a nivel mundial generando cambios de conductas y hábitos sexuales que probablemente contribuyeron a prevenir también estas dos ETS. En el caso de la gonorrea influyó también la aparición de nuevos tratamientos efectivos como las quinolonas fluoradas y las cefalosporinas de tercera generación. La población considerada en este trabajo corresponde al área más densamente poblada de Argentina, por lo que estas observaciones no deberían extrapolarse al resto del país.

Anticuerpos anticitoplasma de neutrófilos (ANCA): su utilidad en el diagnóstico de las vasculitis autoinmunes / Anti-neutrophil cytoplasmic antibodies (ANCA): their usefulness in autoimmune vasculitis prognosis

Se determinó la asociación de ANCA con distintos tipos de entidades clínicas utilizando como técnica de tamizaje la inmunofluorescencia indirecta (IFI). Se determinó la especificidad antigénica utilizando enzimoinmunoanálisis (EIA). Se detectaron los isotipos de la inmunoglobulinas involucradas y su asociación con las manifestaciones clínicas. Para ello se examinaron los sueros de 102 pacientes con diagnóstico confirmado de vasculitis, de enfermedades del tejido conectivo, insuficiencia respiratoria y desórdenes renales. Se incorporó otra serie de 144 pacientes con distintas enfermedades que involucran o que pueden involucrar órganos y sistemas del mismo modo que las vasculitis inmunes. Del total de muestras, 29 fueron reactivadas por IFI y de éstas se estudiaron 16 por EIA, siendo 14 reactivas. Se detectó ANCA en 8/11 (73 por ciento) sueros de pacientes con granulomatosis de Wegener (GW); 7 presentaron cANCA (87,5 por ciento) y 1 pANCA. En Lupus Eritematoso Sistémico (LES), 4/32 (12,5 por ciento) fueron reactivos para ANCA (1 cANCA y 3 pANCA), y en Poliarteritis Nodosa (PAN) 6/8 (75 por ciento) fueron reactivos para pANCA. La imagen cANCA se asoció en forma significativa (p < 0,01) a GW respecto de las demás enfermedades y/o pacientes con manifestaciones clínicas relacionadas a vasculitis. Al agrupar los pacientes con LES, PAN, Hepatitis Autoinmune (3/8) e Insuficiencia Renal de causa desconocida (3/7), la imagen pANCA se asoció significativamente (p < 0,01) a estas enfermedades, en comparación al resto de los ANCA reactivos. El antígeno PR3 se asoció 1/1 con cANCA y 1/1 con pANCA, 12/16 MPO dieron imágenes pANCA y 2/12 imágenes pANCA no reaccionaron con ninguno de los antígenos estudiados. La asociación entre IgG ANCA con IgA e IgM Anca en el total de los pacientes fue no significativa (p > 0,01). En los tres casos clínicos reactivos para IgG e IgM se observó correlación entre su presencia y la afectación renal. El estudio sistemático de los ANCA y en particular de su especificidad antigénica, podrá sumar parámetros de evolución y pronóstico a los ya existentes y también mejorar el entendimiento de la fisiopatogenia de los fenómenos vasculíticos en diferentes enfermedades

Incidencia de gammopatías monoclonales en pacientes infectados por HIV-1 / Incidence of monoclonal gammopathies in HIV-1 infected patients

Se estudió la incidencia de gammopatías monoclonales (GM) en pacientes infectados por HIV-1 y su posible asociación con neoplasias malignas. Se estudiaron 236 pacientes reactivos a la prueba de detección de anticuerpos anti-HVI-1, siguiendo con los criterios para el diagnóstico clínico y serológico propuestos por el CDC (Atlanta). Se observó GM en 24 casos (10,2%). Se clasificaron en GM de baja conc.: menor de 1 g/dl de suero (92%); de mediana conc.: entre 1-2 g/dl (0,4%) y de elevada conc.: mayor de 2 g/dl (0,4%). Los isotipos de las cadenas pesadas fueron identificados como IgG (94,5%) e IgM (5,5%). Del total de pacientes, en seis se diagnosticó Sarcoma de Kaposi y de éstos dos presentaron GM. Las GM que se describen en este trabajo deberían considerarse de significado incierto. Su hallazgo, la identificación, la purificación y el estudio de la actividad de anticuerpos de las mismas, serían de utilidad para dilucidar aspectos de la fisiopatología de este síndrome y para la mejor comprensión de procesos neoplásicos malignos asociados

Elevada concentracion de inmunoglobulinas séricas en distintos estadios clínicos de infección por HIV-1 / Concentration elevated of serum immunoglobulins in different clinical stages of infection for HIV-1

La concentración de IgG, IgA e IgM fue determinada por inmunodifusión radial el suero de 127 pacientes, 77 infectados por HIV-1 (Grupo A), agrupados en distintos estadios clínicos, y 50 no infectados por HIV-1 (Grupo B). Se encontraron diferencias estadísticamente significativas entre los niveles séricos de IgG e IgM (Grupo A), y los del Grupo B. En el contraste, discriminando por estadios clínicos, la concentración de IgG Estadio III y IV (Grupo A), fue mayor que IgG Grupo B, al igual que para IgM Estadio IV fue mayor que IgM Grupo B. Las medias de los niveles de inmunoglobulinas entre estadios clínicos, arrojaron diferencias significativas para las distintas inmunoglobulinas, y, especialmente, para IgA Estadio IV, mayor que IgA Estadio III. Resultó notable el aumento de IgM en el estadio IV, el de mayor compromiso clínico e inmunológico; esto podría indicar una respuesta paradógica remanente a nuevos antígenos. Las concentraciones elevadas de inmunoglobulinas séricas estarían dadas por una respuesta inmune inusual, que no es exclusiva de los linfocitos-B, y que ocurre desde los primeros estadios de infección por HIV-1.