Cysteine-Rich Secretory Proteins (CRISP) and their role in mammalian fertilization

Epididymal protein CRISPI is a member of the CRISP (Cysteine-RIch Secretory proteins) family and is involved in sperm-egg fusion through its interaction with complementary sites on the egg surface. Results from our laboratory have shown that this binding ability resides in a 12-amino-acid region corresponding to a highly conserved motif of the CRISP family, named Signature 2 (S2). In addition to this, our results revealed that CRISP1 could also be involved in the previous step of sperm binding to the zona pellucida, identifying a novel role for this protein in fertilization. As another approach to elucidate the participation of CRISP1 in fertilization, a mouse line containing a targeted disruption of CRISP1 was generated. Although CRISP1-deficient mice exhibited normal fertility, CRISP1-defficient sperm presented a decreased level of protein tyrosine phosphorylation during capacitation, and an impaired ability to fertilize both zona-intact and zona-free eggs in vitro, confirming the proposed roles for the protein in fertilization. Evidence obtained in our laboratory indicated that testicular CRISP2 would also be involved in sperm-egg fusion. Competition assays between CRISP1 and CRISP2, as well as the comparison of their corresponding S2 regions, suggest that both proteins bind to common complementary sites in the egg. Together, these results suggest a functional cooperation between CRISP1 and CRISP2 to ensure the success of fertilization.

Efecto modulador de las secreciones del tracto reproductivo femenino sobre la función del espermatozoide humano / Modulating effect of the secretions of the feminine reproductive tract on the function of the human spermatozoa

El objetivo de éste trabajo fue determinar mediante un modelo in vitro, el efecto que ejerce el fluido peritoneal sobre la función del espermatozoide humano, tomando como control al fluido folicular. Para ello se obtuvieron fluidos peritoneales provenientes de pacientes que realizaron laparascopia diagnóstica en fecha periovulatoria y que no presentaron enfermedad tubo-peritoneal (n=9). El fluido folicular se obtuvo de pacientes que realizaron recuperación ovocitaria en un programa de fertilización in vitro (n=4). Ambos fluidos fueron centrifugados, filtrados y congelados a -20§C. Los sémenes de pacientes normozoospérmicos (n=21) fueron procesados mediante un gradiente discontínuo de Percoll y capacitados en medio sintético Human Tubal Fluid suplementado con albúmina, a una concentración de 2-10 por 10 esp./ml durante 3 a 4 horas. En experimentos apareados, los espermatozoides capacitados fueron expuestos en relación 1:1 v/v al medio control, al fluido folicular o al peritoneal durante 1 hora, luego de lo cual se procedió a estudiar la función espermática mediante los siguientes tests: a) viabilidad b) motilidad progresiva c) la reacción acrosomal inducida por ionóforo de calcio y d) la expresión del receptor espermático para D-manosa. Nuestros resultados muestran que ni la viabilidad ni la motilidad resultaron afectadas por el pre-tratamiento. Si bien la ocurrencia de la reacción acrosomal espontánea no fue diferente entre los distintos grupos (6.3 a 7.5 por ciento, NS), la inducida por ionóforo disminuyó significativamente luego de la exposición al fluido peritoneal y al folicular (18.9ñ5.1 por ciento y 29.0ñ6.1 por ciento vs control 45.6ñ5.0 por ciento, p <0.001 y 0.01 respectivamente). Si bien la detección del receptor para D-manosa aumentó durante la capacitación, resultó significativamente menor a los controles luego del tratamiento previo (FP: 15.4ñ2.9 por ciento y FF: 15.5ñ3.1 por ciento vs control 23.7ñ3.1 por ciento, p<0.05. Nuestros resultados sugieren que al menos in vitro, tanto el fluido peritoneal como el folicular modularían la función del espermatozoide humano manteniéndolo vivo y móvil, pero en un estado no reaccionado