Ribotyping and virulence markers of Yersinia pseudotuberculosis strains isolated from animals in Brazil

Ribotyping and virulence markers has been used to investigate 68 Yersinia pseudotuberculosis strains of serogroups O:1a and O:3. The strains were isolated from clinical material obtained from healthy and sick animals in the Southern region of Brazil. Ribotypes were identified by double digestion of extracted DNA with the restriction endonucleases SmaI and PstI, separation by electrophoresis and hybridization with a digoxigenin-labeled cDNA probe. The presence of the chromosomal virulence marker genes inv, irp1, irp2, psn, ybtE, ybtP-ybtQ, and ybtX-ybtS, of the IS100 insertion sequence, and of the plasmid gene lcrF was detected by polymerase chain reaction. The strains were grouped into four distinct ribotypes, all of them comprising several strains. Ribotypes 1 and 4 presented distinct profiles, with 57.3 percent genetic similarity, ribotypes 2 and 3 presented 52.5 percent genetic similarity, and genetic similarity was 45 percent between these two groups (1/4 and 2/3). All strains possessed the inv, irp1, and irp2 genes. Additionally, strains of serogroup O:1a carried psn, ybtE, ybtP-ybtQ, ybtX-ybtS, and IS100. As expected lcrF was only detected in strains harboring the virulence plasmid. These data demonstrate the presence of Y. pseudotuberculosis strains harboring genotypic virulence markers in the livestock from Southern Brazil and that the dissemination of these bacteria may occur between herds.

Experimental kinetics of infection induced by Yersinia pseudotuberculosis isolated from stock animals

The course of in vivo infection of five isolates of Yersinia pseudotuberculosis was followed for three weeks in Swiss mice. The strains were isolated from diarrheic and normal feces and mesenteric lymph nodes of healthy and sick stock animals. Four strains of serogroup O:3 and one of serogroup O:1a, with and without the virulence plasmid, were inoculated intragastrically and intravenously in the mice. Groups of five animals were sacrificed at 6 h and 3, 6, 10, 15, and 21 days after inoculation, and organs and tissues were checked for possible macroscopic alterations. Development of infection was monitored at these times by performing viable bacterial counts in homogenates of selected tissues. The animals were cheked daily for clinical alterations. The results of the study showed that strains with the virulence plasmid infected organs and tissues at various times and at varying intensity by both routes of infection, the strain of type O:1a being the most invasive. Moreover, clinical and pathological alterations occurred only in animals inoculated with bacteria carrying the virulence plasmid, regardless of the route of infection.

Monitoring of the dissemination of Salmonella in the chicken Frankfurt-sausage productionline of a sausage factory in the state of São Paulo, Brazil

Poultry meat and its derivatives are among the foodstuffs considered by environmental health authorities to present the highest risks to the public. A total of 185 samples were collected in five monthly batches, from different processing stages in a sausage plant that uses mechanically-deboned chicken meat (MDCM), and testedfor the presence of Salmonella. Enrichment was carried out in both Kauffman's tetrathionate broth and Rappaport-Vassiliadis broth and isolation on Salmonella-Shigella agar and brilliant-green agar. Live Salmonella bacteria were isolated from six samples of the raw meat and from the emulsion, in batches three, four, and five, but not from any sample in batches one or two. The six isolated strains were all classified as Salmonella Albany, which has not previously been reported in MDCM. Of the two enrichment broths, Rappaport-Vassiliadis gave the better results. The pattern of contamination suggests a probable common source, given that a new supplier was used in the third, fourth, and fifth months. It was also shown that the industrial cooking was effective in preventing Salmonella surviving in the final product.

Epidemiologia da Yersinia pseudotuberculosis no Brasil / Epidemiology of the Yersinia pseudotuberculosis in Brazil

O Laboratório de Referência em Yersinia no Brasil, responsável pela identificaçäo e biossorofagotipagem de bactérias isoladas no país, caracterizou, durante os anos de 1982 a 1990, 105 cepas de Yersinia pseudotuberculosis, isoladas de animais sadios ou doentes, nos Estados do Paraná e do Rio Grande do Sul. Cepas adicionais näo foram recebidas pelo Laboratório após aquele período, bem como näo foram caracterizadas amostras de Y. pseudotuberculosis isoladas do homem. As bactérias foram isoladas de diferentes materiais clínicos de bubalinos, bovinos e de um suíno. Após a biossorotipagem, a grande maioria (97,14 por cento) dos isolados foi classificada no biotipo 2 e sorogrupo O3, ao passo que 2,8 por cento deles no biotipo 1 e sorogrupo 1b.

Comparaçäo entre a capacidade ativadora policlonal de Yersinia enterocolitica O: 3 e outros ativadores / Comparison between the polyclonal activation capability of Yersinia enterocolitica O: 3 and others activators

Ativaçäo policlonal de linfócitos induzida por endotoxinas bacterianas e superantígenos pode contribuir para o desenvolvimento de auto-imunidade. O objetivo deste trabalho foi comparar a ativaçäo policlonal de linfócitos B provocada por Yersinia enterocolitica O: 3 com aquela provocada por LPS de E. coli e por hemácias de carneiro. Camundongos Swiss foram infectados por via intraperitoneal com 10µg de LPS de E. coli ou com uma suspensäo de hemácias de carneiro a 2,5 por cento. Um grupo de animais normais foi usado como controle. No quinto dia pós-inoculaçäo, cinco animais de cada grupo foram sacrificados e as células esplênicas secretoras de imunoglobulinas detectadas pelo teste de PFC-Proteína A isotipo específico. No grupo dos animais infectados com Y. enterocolítica O: 3, a maior ativaçäo ocorreu em relaçäo às células secretoras de IgM (13 vezes aumentadas em relaçäo aos animais controles), seguida por IgG2b e IgG1 (ambos nove vezes). No grupo inoculado com LPS de E. coli, a maior ativaçäo ocorreu com relaçäo às células secretoras de IgG1 (cinco vezes), e, no grupo inoculado com hemácias de carneiro, a maior ativaçäo ocorreu com relaçäo às células secretoras de IgG1 (16 vezes) e IgM (oito vezes). O perfil comparativo do número de PFC revelou que Y. enterocolitica O: 3 apresentou maior capacidade de estimular linfócitos B in vivo do que os outros ativadores.

Marcadores de virulência em Aeromonas spp isoladas de materiais clínicos humanos e de água doce / Virulence markers in Aeromonas spp isolated from human clinical materials and fresh water

Foram estudadas 88 cepas de Aeromonas isoladas de materiais clínicos de humanos e de água doce. Dessas, 31 foram isoladas de fezes diarréicas, 10 de fezes näo diarréicas, 39 de material humano extra-intestinal e oito de água. Essas cepas foram estudadas quanto ao perfil de virulência. Foram submetidas aos seguintes testes: adesäo e invasäo em células Hela, produçäo de citotoxina, enterotoxina, hemolisinas alfa e beta, auto-aglutinaçäo a 37ºC, resistência ao soro humano normal, absorçäo do Vermelho Congo, isolamento e extraçäo de plasmídeo. Os marcadores de virulência foram caracterizados em proporçöes variadas: 68,2 por cento aderiram e 45,5 por cento invadiram células HeLa, 36,4 por cento produziram citotoxina, 31,8 por cento enterotoxina, 100 por cento produziram hemolisina ß e 34,1 por cento produziram hemolisina alfa quando semeadas em profundidade nas placas de ágar sangue, 73,9 por cento produziram hemolisina ß e 47,7 por cento hemolisina alfa em microplacas, 17 por cento auto-aglutinaram a 37ºC, 31,8 por cento foram resistentes ao soro humano e 100 por cento absorveram o Vermelho Congo. Das cepas estudadas, 8 por cento apresentaram um ou mais plasmídeos de tamanho variado. Conclui-se pela pouca correlaçäo entre fatores de virulência e tipo de material clínico com exceçäo da citotoxina que foi encontrada com maior freqüência em cepas isoladas de infecçöes extra-intestinais e a enterotoxina mais comum em fezes diarréicas.

Características gerais de enteropatógenos bacterianos / Bacterial enteropathogens: general characteristics

Este trabalho realiza uma revisäo sobre os principais enteropatógenos bacterianos, enfocando principalmente aspectos de sistemática, fatores de virulência e algumas características fisiológicas

Evaluation of different techniques for the differentiation of pathogenic and non pathogenic strains of Yersinia enterocolitica

Diferentes métodos e testes para avaliar o potencial patogênico de Y. enterocolitica de sorotipos diversos têm sido utilizados. Testamos 60 cepas do microrganismo, sendo 25 de origem humana (sorotipo 03 biotipo 4 e sorotipo 05 biotipo 1): 6 de origem animal (sorotipo 03 biotipo 4 ); 19 isoladas do meio ambiente (sorotipo 05.27 biotipos 1 e 2 ) isoladas de alimentos (sorotipo 05 biotipo 1 e sorotipo 05.27 biotipo 1 ). Foram utilizados testes relacionadosà expressäo de genes plasmidiais (autoaglutinaçäo, dependência ao cálcio a 37ºC e absorçäo do corante Vermelho Congo), de genes cromossomais (presença de enzima pirazinamidase, fermentaçäo da salicina e hidrólise da esculina) além do teste de invasäo em células HEp-2. Todas as Y enterocolitica 03 exceto uma, foram potencialmente patogênico frente aos testes pirazinamidase-salicina-escalina, o mesmo näo ocorrendo com os testes relacionados a genes plasmidiais, quando os resultados näo foram täo uniformes, provavelmente pela perda do plasmídeo; o teste de invasibilidade em células HEp-2 apresentou os resultados monos uniformes. As cepas de Y. enterocolitica 05 também tiveram comportamento uniforme, sendo näo potogênicas frente aos dois grupos de testes (plasmidiais e cromossomais); em relaçäo ao teste de invasäo em células HEp-2 näo houve uniformidade. As cepas do sorotipo 05.27 biotipo 1, mostraram-se uniformes em relaçäo aos testes cromossomais, sendo näo patogênicas; näo apresentaram no entanto, resultados conclusivos nos testes relacionados à genes plasmidiais e invasäo em células HEp-2. Conclui-se que os testes relacionados a genes cromossomais (esculinasalicina-pirazinamidase) säo simples e muito eficazes na detecçäo de Y. enterocolitica potencialmente patogênicas, originárias de caos clínicos

Characterization of plasmid-related antigen of Yersinia enterocolitica by immunological techniques

Yersínia enterocolitica tem sua virulência relacionada a plasmídeo de 40-48-MDa que codifica proteínas que podem ser expressas nas membranas ou excretadas no meio de cultura. Procurou-se determinar o perfil dessas proteínas em cepas de Y. enterocolitica com e sem o plasmídeo de 40-48-MDa, através de gel de poliacrilamida com SDS (SDS-PAGE). Procurou-se também estudar as condiçöes ótimas de cultura de bactérias para expressäo dessas proteínas e finalmente analisá-las empregando a técnica de Immunoblot e utilizando anti-soro preparado com a amostra com e sem plasmídeo. Esses estudos resultaram na demonstraçäo da ocorrência, entre outros, de uma proteína de 38-kDa, presente apenas na cepa com plasmídeo e que era excretada quando o cultivo era realizado a 37ºC em meio de MOX

Rotavirus and adenovirus in diarrheic and non-diarrheic feces of children, in Araraquara, SP, Brazil

Procurando verificar a participaçäo de rotavirus e adenovirus na etiologia da gastrenterite infantil, 280 amostras de fezes de crianças da faixa etária de 0 a 5 anos foram coletadas em Araraquara-SP, sendo 140 de crianças com diarréia e 140 do grupo de controle. A pesquisa desses vírus foi realizada através de um ensaio imunoenzimático (EIARA) e adicionalmente, rotavirus foi pesquisado através da eletroforese em gel de poliacrilamida (PAGE). No grupo diarréico, rotavirus foi detectado em 8,6% das amostras usando EIARA e em 7,9% usando PAGE. Nenhuma das amostras do grupo controle se mostrou positiva para esse vírus. Adenovirus foi detectado em 2,9% das amostras do grupo diarréico e em 1,4 % das fezes do grupo controle. Os resultados mostram que o rotavirus participam ativamente da etiologia da diarreia infantil em nossa cidade

Prevalência e distribuiçäo de micobactérias nas águas de algumas regiöes do Estado de Säo Paulo - Brasil / Prevalence and distribution of mycobacteria in water of some regions of Säo Paulo State - Brazil

A ocorrência de micobactérias em águas de diferentes regiöes do Estado de Säo Paulo foi pesquisada em 302 amostras de origem diversa, como águas naturais (lago, rio, mina, poço artesiano e raso), águas tratadas (potável de torneira e piscina) e águas destinadas à criaçäo de peixes (aquários e tanque de psicicultura). As amostras de águas provenientes de aquários apresentaram a maior frequência de positividade (88,6%), seguidas pelas amostras de águas de poços rasos (33,3%), de lagos e rios (29,4%), de piscinas (28,2%) de tanque de psicicultura (16,6%), de minas (12,5% e de águas de torneira (4,2%). Näo foram encontradas micobactérias em águas de poços artesianos. Das cepas isoladas, 63,3% foram caracterizadas como micobactérias de crescimento rápido e as demais como de crescimento lento. M. fortuitum esteve presente nos diversos tipos de águas, constituindo 36,7% das cepas isoladas. Outras micobactérias potencialmente patogências foram encontradas em menor frequência. Verificou-se que a maioria das águas examinadas estavam contaminadas por micobactérias potencialmente patogênicas ou saprofíticas, sendo os principais reservatórios as águas que entram em contato com peixes e humanos como as de aquário e piscina

Presence of Mycobacterium marinum and other opportunist Mycobacteria in swimming pool waters in Araraquara, SP

O isolamento de Mycobacterium marinum é relatado pela primeira vez no Brasil. Analisaram-se amostras de águas de piscinas quanto à presença de micobactérias, para avaliar a participaçäo dessas águas como possível fonte de micobactérias patogênicas. Isolaram-se 24 cepas de micobactérias a partir de 72 amostras analisadas. A freqüência de isolamento foi de 37,5% para M. gordonae, de 20,8% para M. chelonae, de 4,2% para M. marinum, de 4,2% para M. scrofulaceum, de 4,2% para M. avium-intracellulare e de 29,2% para cepas näo pertencentes a qualquer espécie de micobactérias conhecida. As cepas näo identificadas constituem um novo grupo de micobactérias com características morfológicas e bioquímicas semelhantes às de M. gordonae mas com um perfil de ácidos micólicos distinto. Salienta-se, em conseqüência, a importância do estudo dos ácidos micólicos no rastreio de identificaçäo de micobactérias do ambiente. Concluiu-se que as águas das piscinas de Araraquara contêm micobactérias oportunistas potencialmente patogênicas para o homem

Isolamento de yersinia pseudotuberculosis de bezerros, na regiäo de Londrina, Paraná, Brasil / Isolation of yersinia psudotuberculosis from calves, in Londrina, Paraná, Brazil

Säo relatados o isolamento, características bioquímicas e sensibilidade a drogas antimicrobianas de 3 cepas de Yersinia pseudotuberculosis pertencentes ao grupo O-III. As cepas foram isoladas de bezerros com diarréia, na regiäo de Londrina, Paraná, Brazil

Presença de aglutininas anti-yersinia no soro de pacientes com doenças auto-imunes / Anti-Yersinia agglutinins in the sera of patients with autoimmune diseases

Foi realizado um estudo em 177 amostras de soro humano com o objetivo de se pesquisar anticorpos anti-Yersinia enterocolitica sorotipos 0:3, 0:5, 0:527, 0:6, 31, 0:7, 8, 0:8 e 0:9 em pacientes com manifestaçöes auto-imunes e outras; 142 soros eram de pacientes com doenças auto-imunes; 26 de pacientes com outras doenças e 9 de pessoas normais. A técnica utilizada foi aglutinaçäo em lâminas e em tubos. Soros com título igual ou superior a 1/80 foram considerados positivos. Anticorpos anti-Yersinia enterocolitica 0:6, 31 num título de 1/320 foram detectados em um soro de pacientes do grupo de doenças auto-imunes. Conclui-se que existe uma baixa incidência de anticorpos anti-Yersinia enterocolitica entre os pacientes examinados

Indicadores de contaminaçäo fecal e enteropatógenos em águas de recreaçäo / Indicators of fecal contamination and enteropathogens in recreational waters

As águas de recreaçäo desempenham importante papel na disseminaçäo de infecçöes entre seus usuários. En 108 amostras de água de recreaçäo (72 de piscinas e 36 de lagos com praias) pesquisaram-se Salmonella, Shigella, Yersinia, E. coli enteropatogênica clássica e E. coli enteroinvasora; determinou-se o NMP de coliformes fecais e de E. coli; realizaram-se contagens de microrganismos heterotróficos e de estreptococos fecais. Näo foram isoladas Shigella, Yersinia e E. colli enteroinvasora. Observaram-se reaçöes positivas para todos os outros microrganismos ou grupos de microrganismos, em proporçöes variáveis. Conclui-se pelo perigo potencial que estas águas representam para os banhistas que as utilizam

Isolamento de Yersinia sp. em alimentos diversos / Isolation of Yersinia sp. in foods

Yersinia sp. foi pesquisada em 138 amostras de alimentos, assim distribuídas: 30 amostras de leite cru, 33 de leite pasteurizado, 15 de carne moída, 15 de fígado de boi, 15 de fígado de suíno e 30 amostras de alface, todas coletadas ou adquiridas na regiäo da cidade de Araraquara, Estado de Säo Paulo. Foram isoladas: Y. enterocolitica de diferentes sorotipos e Y. intermedia 5,27/Xz em 9,1% das amostras de leite pasteurizado; em 3,3% das de alface, Y. intermedia NAG/Xz; em 20% das de carne moída Y. enterocolitica (celobiose, sacarose, sorbitol-, citrato+)/25/Xz e Y. intermedia de diversos sorotipos, e, em 13,3% das amostras de fígado bovino, Y. intermedia também de diferentes sorotipos. Näo se isolou Yersinia sp. de leite cru e fígado suíno. Apesar de nenhuma das cepas isoladas pertencer a sorogrupos reconhecidamente patogênicos, a presença dessa bactéria nesses alimentos, mantidos sob refrigeraçäo, deve ser vista com restriçäo, uma vez que cepas de sorotipos de Y. enterocolitica consideradas näo patogênicas estäo se adaptando ao homem

Período de infectividade de animais inoculados experimentalmente com Yersinia sp / Period of infectivity of animals challenged by Yersinia sp

Lotes de camundongos suiços convencionais foram inoculados tanto por via intragástrica (IG) quanto por via intravenosa (IV) com Yersinia enterocolitica dos sorotipos 0:3, 0:8 e 0:9 e com amostras de yersinias atípicas. Foi mantido um lote de animais näo inoculados como controle. Verificou-se qual o período de permanência dessas bactérias no intestino dos animais inoculados. Yesinia enterocolitica dos sorotipos 0:3, 0:8 e 0:9, considerados adaptados ao homem, permaneceram no intestino dos animais inoculados por um período muito maior do que as amostras de Yersinia näo adaptadas, quer inoculadas por via intragástrica, quer por via intravenosa

Análise microbiológica de alimentos infantis / Microbiological analysis of infant foods

Realizou-se exame microbiológico em 54 amostras de alimentos infantis destinados a crianças de 0 a 2 anos de idade, sendo 23 amostras de produtos industrializados adquiridos em supermercados e 16 amostras de sopas e 15 mamadeiras, coletadas em creches da cidade de Araraquara, no Estado de Säo Paulo. Realizaram-se as seguintes análises: contagens de bactérias aeróbicas ou facultativas mesófilas e termófilas, de Staphylococcus aureus, de Bacillus cereus, de organismos anaeróbios clostrídios sulfito-redutores, de bolores e leveduras, pesquisa de Salmonella e Yersinia enterocolitica e a determinaçäo do Número Mais Provável de coliformes totais e fecais. Näo foram encontrados S. aureus, Salmonella, Y. enterocolitica, clostrídios sulfito redutores em nenhuma das amostas. Em proporçöes variáveis foram encontrados, nos três tipos de alimentos analisados, B. cereus, microrganismos aeróbios ou facultativos mesófilos e bolores e leveduras. Coliformes totais e fecais foram constatadas em amostras de mamadeiras

Estudo da cinética de produçäo de anticorpos aglutinantes em camundongos infectados experimentalmente com Yersinia sp / Kinetics of production of agglutinating antibodies in experimentally infected mice with Yersinia sp

Lotes de camundongos suiços convencionais foram inoculados por via intragástrica (I.G.) e por via intravenosa (I.V.) com amostras de Yersinia enterocolitica de diferentes sorotipos (0:3, 0:5,0:8 e 0:9) e com amostras de Yersinias atípicas, mantendo-se um lote controle, näo inoculado. Grupos de 5 animais de cada lote foram sangrados semanalmente, perfazendo um total de 10 semanas. Os soros foram separados e submetidos a testes de aglutinaçäo em lâmina e tubo. anticorpos aglutinantes-Yersinia foram detectados apenas nos soros de camundongos inoculados por via I.V. com os sorotipos 0:3 e 0:9, sendo que o título máximo ocorreu entre a 4ª e a 6ª semana após inoculaçäo. Conclui-se pela pouca sensibilidade do sistema utilizado na detecçäo de anticorpos anti-Yersinia