Chromosome 17 abnormalities and mutation of the TP53 gene: correlation between cytogenetics, flow cytometry and molecular analysis in three cases of chronic myeloid leukemia

Alterations involving the short arm of chromosome 17 (17p) during the progression of chronic myeloid leukemia (CML) have been described. This chromosomal region contains the tumor suppressor gene TP53 that may be an important factor in the evolution of this disease. In this study, we used flow cytometry and western blotting to assess p53 protein expression and single stranded conformational polymorphism to examine TP53 gene alterations in three patients with CML who showed alterations in 17p. Only the case with del(17)(p11) had p53 expression positive by flow cytometry and an abnormal migration pattern by SSCP analysis. The importance of the correlation between the results obtained with these techniques, as well as the clinical course of the patients, are discussed.

Burkitt-like lymphoma in an infant: a case report

Childhood non-Hodgkin's lymphomas, including Burkitt and Burkitt-like, are rarely diagnosed in infants. A case of B-cell lymphoma in a 13-month-old girl with extensive abdominal disease, ascites, pleural effusion, and tumor lysis syndrome is reported. Phenotypic analysis showed a germinal center B-cell phenotype, and a B-cell clonality was confirmed by polymerase chain reaction. There was no evidence of Epstein-Barr and HIV infection. The case herein reported emphasizes the need for considering the diagnosis of lymphoma even in very young children

p53 gene analysis in childhood B non - Hodgkin's lymphoma

CONTEXT: Mutations or deletions in the tumor-suppressor gene p53 are among the commonest genetic changes found in human neoplasms including breast, lung and bowel cancers. In hematological malignancies, p53 is most often mutated in Burkitt's lymphoma, with p53 mutations present in 30 to 40 percent of tumor samples and in 70 percent of cell lines. OBJECTIVE: To analyze the p53 gene alterations in child patients with B non-Hodgkin's lymphoma. DESIGN: Descriptive study. SETTING: Tertiary oncology care center. PARTICIPANTS: The study investigated 12 patients with childhood B non-Hodgkin's lymphoma (Burkitt's lymphoma). Screening for p53 mutations was done by polymerase chain reaction - single strand conformational polymorphism (PCR-SSCP) analysis of exon 5 to 8/9 of the gene. RESULTS: Abnormal polymerase chain reaction - single strand conformational polymorphism migration pattern was observed in 4 patients (33.3 percent), one on exon 6 and three on exon 7. Positive cases included 2 patients who died from disease. CONCLUSION: These preliminary results suggest that p53 mutations are quite frequent in children with Burkitt's lymphoma and may play a role in lymphoma genesis or disease progression

Correlaçäo entre a expressäo celular do CD44 e formas tumorais das leucemias linfoblásticas / Correlation between the cellular expression of CD44 and the forms of acute lymphoblastic

O CD44 é uma molécula de adesäo que se expressa em linfócitos-B e T, participa na mediaçäo de adesäo destas células e dos componentes da matriz extracelular e na adesäo a células endoteliais vasculares. A proposta deste estudo foi a de investigar a expressäo celular do CD44 em 108 pacientes portadores de leucemias linfoblásticas (57 leucemias linfóides agudas de linhagem B e 51 de células-T), através de uma metodologia que inclui a análise citomorfológica e imunofenotipagem, com um painel de anticorpos monoclonais detectados pelas técnicas da imunoperoxidase conjugada, e imunofluorescência com análise por citometria de fluxo. Inicialmente, investigamos a correlaçäo do CD44 com as distintas fases de diferenciaçäo celular destas leucemias, determinadas pela expressäo antigênica. Em seguida, investigamos a correlaçäo desta molécula com os achados clínico-patológicos, como a presença de massas tumorais, adenomegalias, infiltraçäo de células leucêmicas no sistema nervoso central e em outros órgäos, além da presença de células blásticas no sangue periférico. Paralelamente ao estudo das leucemias, também investigamos a expressäo de CD44 em linfócitos do sangue periférico oriundos de 11 indivíduos sadios. A expressäo de CD44 foi positiva em 83 casos (76,8 porcento) das leucemias linfóides agudas, sendo 46 casos (80,7 porcento) das LLA de linhagem B, e em 37 casos (72,5 porcento) de LLA de células-T. Nos quatro subgrupos que compöem as LLA de linhagem B, observamos a expressäo desta molécula em dois casos (66,7 porcento) das LLA do tipo null; em 34 casos (77,3 porcento) das LLA do tipo comum e em todos os casos de LLA pré-B (cu+) e LLA-B (Smlg+). Já nas LLA de células-T, a expressäo do CD44 mostrou-se variável nos três subgrupos que compöem estas leucemias. No subgrupo I (LLA pré-T), todos os nove casos (100 por cento) foram CD44 positivos; nos 14 casos do Subgrupo II (LLA-T intermediária), quatro casos (28,6 porcento) foram CD44 positivos e no Subgrupo III (LLA-T-medular) o CD44 foi positivo em 24 casos (85,7 porcento). A correlaçäo da expressäo de CD44 com o perfil...

Importância da aplicação de anticorpos monoclonais no diagnóstico laboratorial das leucemias linfóides agudas / The importance to application of monoclonal antibodies in laboratorial diagnostic of lymphoblastic leukemia

Os autores realizaram um estudo em 126 pacientes portadores de leukemia linfóide aguda (LLA) antes do tratamento, com metodologias que incluiu a análise citomorfológica e imunofenotipagem com painel de anticorpos monoclonais (AC.Mo.) específico para leucemias agudas com CD1a, CD2, CD3, CD4, CD7, CD8, CD10, CD13, CD14, CD19, CD22, CD34, anti IgM, antikappa, anti lambda. Anti cadeia mu e anti TdT, através de técnicas como a imunoiperoxidase e citometria de fluxo. Paralelaamente também foram investigadas informações referentes aos pacientes com a idade e sexo, aqssim como dados clínicos e laboratoriais dentre os quais a presença de massas tumorais, linfadenopatia, hepatomegalia, esplenomegalia, infiltração leucêmica no sistema nervoso central (SNC) e contagem de células blásticas no sangue periférico. Os resultados demonstraram que 71 casos (56,7%) foram de LLA de linhagem B (Null, comum, pré-B e B) e 55 LLA de Células T (pré-T, T-intermediária e T-medular). Relacionando-se estes dados com o sexo, observou-se que o sexo masculino foi o mais acometido pela doença, independente da classificação imunológica. Correlacionando-se a idade com os subtipos imunológicos, observou-se que as LLAs de linhagem B foram mais freqüentes em crianças (idade  que 15 anos) ao passo que as LLAs de Células T estiveram mais presentes em indivíduos adultos. A freqüência da r elação destas imunofenotipagens com os subtipos morfológicos da classificação FAB apresentaram uma correlação direta entre o subgrupo L3 e LLA de células B, ao passo que os subgrupos L1 e L2 correlacionaram-se mais freqüentemente com as LLA pré-B e T respectivamente. A análise da correlação entre a imunofenotipagem e o perfil clínico patológico destas LLA demonstraram que as LLA de Células T estavam mais associadas com formas tumorais da doença com uma maior incidência de linfadenopatias, hepatomegalias, esplenomegalias, massas tumorais e infiltração no SNC, apresentando também uma maior contagem de células blásticas no sangue periférico que os demais subgrupos. Finalizando, estes dados, sugerem que a imunofenotipagem é uma importante metodologia no diagnóstico, na monitoração da avaliação prognóstica e na determinação dos mecanismos de evolução patológica das leucemias linfóides agudas.

Resistência a múltiplas drogas nas leucemias: a interface entre pesquisa básica e a clínica / Resistance the multiple drugs in the leukemias: the interface between basic research and the clinic

Este trabalho teve como objetivo realizar uma pesquisa que se iniciasse na área básica e pudesse ser desenvolvida até o campo da pesquisa clínica aplicada. Neste contexto, iniciou-se um estudo que incluia uma linhagem celular resistente à vincristina, à partir de uma linhagem eritroleucêmica sensível, 228 amostras de células leucêmica e células normais. A caracterizaçäo do fenótipo MDR foi baseada em várias abordagens incluindo: 1-testes funcionais da extrusäo ou acúmulo de corante e drogas fluorescentes, 2-análise imunocitoquímica com anticorpo monoclonal anti-gpP, e 3-modulaçäo do fenótipo MDR. Os resultados estäo de acordo com a literatura para os testes de efluxo e para a expressäo da gpP nas células leucêmicas. Em algumas amostras normais e leucêmicas foi possível distinguir uma eficácia diferenciada entre um ou dois dos três agentes moduladores testados: verapamil, ciclosporina A e trifluoperazina. Este modelo permitiu, inclusive, testar e atribuir à heparina uma atividade dulaçäo da MDR em pacientes leucêmicos, resistentes ao tratamento convencional, utilizou-se a associaçäo etoposido-ciclosporina A em 15 pacientes. Este estudo demonstrou que modulaçäo clínica é possível mesmo em pacientes com doença avançada e que a toxicidade foi aceitável e reversível

Resistência a múltiplas drogas nas leucemias: a interface entre pesquisa básica e a clínica

Este trabalho teve como objetivo realizar uma pesquisa que se iniciasse na área básica e pudesse ser desenvolvida até o campo da pesquisa clínica aplicada. Neste contexto, iniciou-se um estudo que incluia uma linhagem celular resistente à vincristina, à partir de uma linhagem eritroleucêmica sensível, 228 amostras de células leucêmica e células normais. A caracterização do fenótipo MDR foi baseada em várias abordagens incluindo: 1-testes funcionais da extrusão ou acúmulo de corante e drogas fluorescentes, 2-análise imunocitoquímica com anticorpo monoclonal anti-gpP, e 3-modulação do fenótipo MDR. Os resultados estão de acordo com a literatura para os testes de efluxo e para a expressão da gpP nas células leucêmicas. Em algumas amostras normais e leucêmicas foi possível distinguir uma eficácia diferenciada entre um ou dois dos três agentes moduladores testados: verapamil, ciclosporina A e trifluoperazina. Este modelo permitiu, inclusive, testar e atribuir à heparina uma atividade dulação da MDR em pacientes leucêmicos, resistentes ao tratamento convencional, utilizou-se a associação etoposido-ciclosporina A em 15 pacientes. Este estudo demonstrou que modulação clínica é possível mesmo em pacientes com doença avançada e que a toxicidade foi aceitável e reversível

Multidrug resistance (MDR) represents cross-resistance among a number of unrelated chemotherapeutic drugs. It is the result of the functional expression at the plasma membrane of an efflux pump known as P-glycoprotein (Pgp). The activity of this pump can be regulated by a number of substances known as MDR modulators. This work aimed at a study that starting at the level of basic research could proceed to the field of applied clinical research. With this is mind, a study was initiated involving the development of a vincristine-resistant cell line derived from a vincristinesensitive erythroleukaemia, using 228 samples of leukaemic cells obtained from patients and comparing them to normal cells. Several approaches were used to characterize the MDR phenotype: 1- Functional tests measuring the extrusion or accumulation of fluorescent dye or drugs, 2- Immunocytochemistry assays using anti-Pgp monoclonal antibodies e 3Modulation of the MDR phenotype. Our results are in accordance with those reported by other authors for extrusion tests and for Pgp expression in leukaemic cells. In some samples of normal leukaemic cells it has been possible to distinguish different efficaces just one or two of the three modulatory agents tested: veraparnil, cyclosporin A and trifluoperazine. This model allowed us to investigate and ascribe a potential MDR modulatory activity to heparin. In an attempt to modulate MDR in leukaemic patients, already resistant to conventional treatment, the association etoposide-cyclosporin A was employed in 15 patients. This study demonstrated that clinical modulation is possible even in heavily treated patients and that toxicity was acceptable and reversible.