Alterações hematológicas na dengue grave ­ uma revisão sistemática / Hematological changes in serious dengue ­ a systematic review

A infecção causada pelo vírus da dengue gera quase 400 milhões de novos casos a cada ano especialmente nos países tropicais e subtropicais, sendo considerada um problema de saúde pública em todo o mundo. Trata-se de uma doença sistêmica e infectocontagiosa, que pode ser classificada como dengue com ou sem sinais de alarme, e dengue grave. As alterações hematológicas estão relacionadas com a gravidade da doença e direcionam condutas médicas. Neste estudo foram realizadas buscas nas plataformas CAPES, LILACS e PubMed no período de janeiro de 2014 a janeiro de 2021 com o objetivo de reunir e avaliar artigos publicados que traziam informações sobre as alterações hematológicas na infecção de dengue grave. Após revisão minuciosa, foram incluídos no estudo um total de 15 artigos e os principais dados observados foram: diminuição da contagem de plaquetas (66,7%), aumento do hematócrito (26,6%), aumento do tempo de tromboplastina parcial ativada (26,6%) e leucopenia (26,6%).

The infection caused by the dengue virus generates almost 400 million new cases each year, especially in tropical and subtropical countries, being considered a public health problem worldwide. It is a systemic and infectious disease, which can be classified as dengue with or without alarm signs, and severe dengue. Hematological changes are related to the severity of the disease and may guide medical procedures. In this study, researches were carried out on the CAPES, LILACS and PubMed platforms with the aim of gathering and evaluating published articles that brought information about hematological changes in severe dengue infection from January 2014 to January 2021. After thorough review, a total of 15 articles were included in the study and the main data observed were: decreased platelet count (66.7%), increased hematocrit (26.6%), increased activated partial thromboplastin time (26.6%) and leukopenia (26.6%).

Desenvolvimento de testes de detecção e quantificação do vírus da Hepatite B em amostras de soro e fluido oral / Development of detection and quantification tests of hepatitis B virus in serum and oral fluid

A detecção e quantificação do DNA do vírus da hepatite B (HBV) são importantes para o diagnóstico da infecção, definição e monitoramento do tratamento antiviral. [...] O objetivo deste estudo foi desenvolver um método para quantificação do DNA do HBV em amostras de soro e fluido oral, e avaliar um método qualitativo in house para detecção do DNA do HBV em comparação com métodos comerciais disponíveis no mercado. Amostras pareadas de soro e fluido oral foram obtidas de 116 indivíduos, onde 66 eram reagentes para HBsAg no soro e 50 não apresentavam nenhum marcador sorológico no soro. As amostras de soro foram submetidas a testes imunoenzimáticos para detecção de marcadores sorológicos do HBV (HBsAg, anti-HBc, anti-HBs, anti-HBcIgM, anti-HBe e HBeAg) e ao PCR em tempo real para quantificação do DNA do HBV (COBAS TaqMan HBV, Roche). O DNA do HBV foi extraído utilizando o conjunto de reagentes High Pure Viral Nucleic Acid kit (Roche Diagnostics, EUA) em amostras de soro e RTP® DNA/RNA Virus Mini kit (Invitek, Alemanha) para amostras de fluido oralPara a detecção qualitativa do HBV foi realizada uma PCR com iniciadores para o gene do core, e para detecção quantitativa do HBV foi utilizada a metodologia de PCR em tempo real com sondas TaqMan® na plataforma Line-Gene 9600 (Bioer Serves Life, Canada). Para obtenção da curva de quantificação foi construído um plasmídeo recombinante obtido a partir de amostras padrão do painel de quantificação do HBV (Optiquant HBV, Acrometrix, Life Technologis, EUA). As seguintes condições da PCR em tempo real foram avaliadas: concentração de DNA (5 e 7,5 microlitros), temperatura de hibridização (60°C e 62°C), e números de ciclos (40 e 45 ciclos).

A sensibilidade analítica da PCR em tempo real foi estimada em 10 cópias de HBV DNA/mL e a faixa de quantificação abrangeu cerca de 8 logs de 10. Para quantificação do DNA do HBV em soro e fluido oral foi necessário o aumento da temperatura de hibridização, e para o fluido oral também foi necessário o aumento da concentração de DNA (7,5 microlitrosL) e do número de ciclos (45). Entre as amostras de soro HBsAg reagentes, 64 foram quantificadas pela PCR em tempo real comercial e 28 pelo teste quantitativo in house com carga viral média igual a 3,993 ± 1,922 e 3,761± 1,829 log cópias de HBV DNA/mL (r=0,7643; p<0,0001), respectivamente, e concordância de 37,87 porcento. Por outro lado, 8 amostras de fluido oral amplificaram pelo método quantitativo in house, com carga viral média igual a 4,459 ± 1,127 log cópias de HBV DNA/mL (r=- 0,2994; p= 0,9453). A PCR qualitativa in house foi capaz de detectar o DNA do HBV em 50 amostras de soro HBsAg reagentes apresentando 75 porcento de concordância com o teste comercial quantitativo (p=1,000), porém somente uma amostra de fluido oral foi detectada por este método. [...]

The detection and quantification of the DNA of Hepatitis B virus (HBV) are important todiagnose the infection, determine and monitore the antiviral treatment. [...] The objective of this study was to develop a method forquantification of HBV DNA in serum and oral fluid samples, and to evaluate an in housequalitative method for HBV DNA detection compared to commercial methods available inthe market. Paired serum and oral fluid were obtained from 116 individuals, where 66were HBsAg reactive in their sera and 50 did not present any HBV serological marker insera. Serum samples were submitted to enzyme immunoassays for detection of HBVserological markers (HBsAg, anti-HBc, anti-HBs, anti-HBcIgM, HBeAg and anti-HBe) andquantified by commercial real time PCR (COBAS® TaqMan HBV Test, RocheDiagnostics, EUA). HBV DNA was extracted using the commercial kit High Pure ViralNucleic Acid Kit (Roche Diagnostics, USA) in serum samples and RTP ® DNA / RNAVirus Mini Kit (Invitek, Germany) for oral fluid samples. For HBV qualitative detection itwas employed a PCR using primers for Core gene, and for quantitative detection of HBVit was employed a real time PCR methodology with TaqMan ® probes in the Line-Gene9600 (Bioer Serves Life, Canada) platform. To obtain the quantification curve, arecombinant plasmid was constructed using standard quantification panel of HBV(Optiquant HBV, Acrometrix, Life Technologis, USA). The following PCR conditions wereevaluated in real time PCR: DNA concentration (7.5 and 5 microlitersL), annealing temperature(60° C and 62° C), number of cycles (cycles 40 and 45).

The analytical sensitivity of realtimePCR was estimated at 10 HBV DNA copies/mL and the quantitation rangecomprised about 8 logs of 10. For quantification of HBV DNA in serum and oral fluid, itwas necessary to increase the annealing temperature, and for oral fluid, it was alsonecessary to increase the concentration of DNA (7.5 microlitersL) and the number of cycles (45).Among HBsAg reactive serum samples, 64 were quantified by commercial real time PCRand 28 by in house quantitative test, with mean viral load equal to 3,993 ± 1,922 e3,761± 1,829 log copies of HBV DNA/mL (r=0,7643; p<0,0001), respectively, andconcordance of 66.6 percent. Moreover, eight oral fluid samples were amplified by quantitative in house method, with average viral load equal to 4,459 ± 1,127 log copies of HBVDNA/mL (r=-0.2994, p=0,9453). The qualitative in house PCR was able to detect HBVDNA in 50 HBsAg reactive serum samples, showing 75 percent of agreement with thecommercial test (p=1.000), but only 1 oral fluid sample has been detected by thismethod. We concluded that the qualitative and quantitative methods for the detection ofHBV DNA analyzed in this study presented good efficiency in serum samples, but theywere not effective among oral fluid samples. [...]