Frecuencia de Listeria spp., en quesos colombianos costeños / Frequency of Listeria spp. in coastal Colombian cheeses

Objetivo. Determinar la frecuencia de Listeria spp., en quesos frescos costeños, distribuidos en plazas de mercado populares de las ciudades de Montería y Cereté. Materiales y métodos. Teniendo en cuenta la importancia económica de esta zona ganadera para Colombia se tomaron 217 muestras entre Junio y Agosto de 2005, los aislamientos obtenidos fueron identificados por pruebas bioquímicas presuntivas, PCRMúltiple (L1-U1/LF-LR) y pruebas bioquímicas para confirmación de especie. Adicionalmente, se determinó la frecuencia de las especies del género y se caracterizó la resistencia antimicrobiana de las cepas de mayor frecuencia. Resultados. Las pruebas bioquímicas y la PCR detectaron 49 aislamientos positivos para Listeria (22.58%), de los cuales 16.33% (8/49) correspondieron a Montería y 24.40% (41/168) a Cereté. La frecuencia por especies fue 14.75% para L. ivanovii, 2.30% para L. innocua, 1.84% para L. welshimeri y 1.38% para L. seeligeri, no se detectó L. monocytogenes. Sólo 3/32 cepas de L. ivanovvi (9.38%) mostraron resistencia a penicilina, estreptomicina y eritromicina respectivamente. Conclusiones. Los resultados confirman que los quesos costeños están frecuentemente contaminados con Listeria spp. La presencia de L. ivanovvi patógeno involucrado en algunos casos de infecciones oportunistas en humanos y L. innocua; microorganismo utilizado en muchas industrias de alimento como indicador del grado o calidad de sanitización; demuestra que las condiciones de producción y expendio no son adecuadas y que el consumo de queso costeño no es seguro. La resistencia antimicrobiana aunque baja muestra posibilidades para la transmisión horizontal y/o vertical de los genes de resistencia.

Extracción rápida de DNA y validación por PCR para la detección directa de Listeria monocytogenes en leche cruda

Objective. The aim of this study was to validate a method for detecting L. monocytogenes in raw milk.Materials and methods. The extraction procedure carried out using a chaotropic agent like NaI, to reduce fat in the sample to 0.2 percent w/v, which is the lowest limit for detection in the Gerber method, to avoid the polymerization. The raw milk samples were analyzed by using the traditional gold standard method for L. monocytogenes. Detection PCR was done on the specificity of primers that recognize the Listeria genus by amplifying a specific fragment of about 938bp of the 16S rDNA. Several primer sets were use: L1 CTCCATAAAGGTGACCCT), U1 (CAGCMGCCGCGGTAATWC), LF (CAAACGTTAACAACGCAGTA) and LR (TCCAGAGTGATCGATGTTAA) that recognize the hlyA gene of L. monocytogenes, amplifying a 750bp fragment. Results. The DNA of 39 strains evidenced high specificity of the technique since all the strains of L. monocytogenes amplified the fragments 938bp and 750bp, specifically for genus and species, respectively. The detection limit of the PCR was 101 CFU/ml. T he PCR reproducibility showed a Kappa of 0.85; the specificity and sensitivity of 100 percent were found, predictive positive and negative values were of 100 percent respectively. Conclusions. These results demonstrate that is possible to detect of Listeria spp. by using any of the three methods since they share the same sensitivity and specificity. One hundred percentof the predictive value for PCR (alternative method) provides high reliability, and allows the detection ofthe positive samples. The extraction procedure combined with a PCR method can reduce in 15 days the time of identification of L. monocytogenes in raw milk. This PCR technique could be adapted and validated to be use for other types of food such as poultry, meat products and cheeses.

Caracterización molecular de cepas colombianas de Salmonella spp. a través del RFLP-IS 200m / Molecular characterizacion of Colombian stumps of Salmonella spp. through the RFLP-IS200

Las técnicas moleculares empleadas para el análisis de ADN cromosomal como el RFLP IS200 han demostrado ser eficientes para resolver relaciones filogenéticas y epidemiológicas entre las cepas de Salmonella spp., aisladas de aves y humanos. El presente estudio tuvo como objetivo determinar si la IS200 estaba presente en las cepas de Salmonella aisladas de aves de corral y de humanos para establecer una posible cadena de transmisión entre ambos. El análisis filogenético de las cepas de Salmonella mostró 13 perfiles de IS200 que exhibieron de 1 a 11 copias de la secuencia de inserción, localizadas en un rango entre 13 y 1.71kb. El trabajo permitió concluir que IS200 es un marcador molecular eficiente, sensible y específico, útil para realizar estudios epidemiológicos ya que discriminó entre cepas de diferentes orígenes y comprobó que existe una relación clonal entre las cepas aviares y humanas. Los resultados obtenidos muestran la necesidad de implementar medidas sanitarias que conlleven a que en la producción se minimicen las condiciones que favorezcan la propagación de Salmonella entre las aves

Influencia de la fuente de carbono sobre la expresión de proteínas AOX1-reguladas en Pichia pastoris / Influence of carbon source over the expression of AOX1-regulated proteins in Pichia pastoris

La levadura Pichia pastoris constituye un excelente modelo para la expresión de proteínas heterólogas, lo que se refleja en el gran número de proteínas que han sido obtenidas en este modelo biológico, bajo el control del promotor AOX1. Esto implica que el número de peroxisomas y la enzima alcohol oxidasa es regulada como respuesta a la inducción por metabolitos como el metanol, el glicerol, el etanol, el acetato y vías metabólicas como la b-oxidación. En esta revisión, se discuten aspectos relacionados con el metabolismo de estos compuestos y su posible influencia en la producción de proteínas recombinantes, específicamente la Iduronato 2- sulfato sulfatasa humana (IDSh)

Influencia del a-Factor sobre la expresión de IDShr en Pichia pastoris: Revisión sistemática de literatura y análisis computacional / Influence of a-Factor over the expression of hrIDS in Pichia pastoris: Literature review and computational analysis

En la búsqueda de alternativas para mejorar la expresión de la enzima Iduronato Sulfatasa (IDSh) en la levaduraPichia pastoris, se realizó una Revisión Sistemática de la Literatura con el fin de recopilar información quepermitiera relacionar los niveles de expresión de proteínas humanas recombinantes con la señal de secreción y las características propias de la molécula a expresar. Se hallaron 349 publicaciones de las cuales sólo 7 (2)porciento reportaron la expresión de proteínas que cumplían con los criterios de inclusión manejados en el estudio. Con la información obtenida en los 7 artículos se realizó una prueba de hipótesis tomando como muestras los datos recopilados y un análisis cualitativo de la información, con los cuales se evidenció que al reemplazar la señal de secreción nativa por el a-Factor como péptido líder se incrementa el nivel de expresión de proteínas humanas recombinantes en P. pastoris (p=0.053). Se encontró que la eliminación de la secuencia que codifica para el péptido nativo heterólogo en el ADNc de la proteína, es imprescindible para que el a-Factor pueda favorecer la secreción de proteínas heterólogas y por consiguiente incrementar el nivel de expresión. En el caso de la IDShr se halló que en la construcción GS115/pPIC9-IDS, aparecen dos secuencias de péptido señal al mismo tiempo, la nativa de la IDSh y la putativa proveniente de Saccharomyces cerevisiae; sin embargo, se han obtenidos expresiones hasta de ~30mmol/h mg de proteína, lo que deja la incógnita de un posible conflicto en el reconocimiento erróneo de una u otra señal de secreción, teniendo en cuenta el grado de hidrofobicidad de ambas.

Utilización del RAPD para detectar clonalidad entre cepas de Escherichia coli enteropatógena (ECEP) aisladas de pacientes pediátricos con diarrea / Use of RAPD to detect clonicity among isolated strains of Escherichia coli enteropatogena (ECEP) in Child Patients suffering from diarrhea

La técnica de RAPD permite amplificar el ADN cromosómico, mediante el uso de iniciadores arbitrarios. El objetivo del presente trabajo fue el de establecer, mediante el uso de RAPD, el grado de polimorfismo en cepas de Escherichia coli enteropatógena (ECEP) aisladas en Bogotá (Colombia). En el estudio se incluyeron 17 serotipos de ECEP distribuidas de la siguiente manera: 41,2% de O126:K71; 23,5% de O111:K59; 23,5% de O55:K59 y 11,8% de O127:K63. En la amplificación del ADN, se utilizó el iniciador OPA-07. La distancia genética entre estos patrones de RAPD generó entre 3 y 13 bandas de ADN con tamaños moleculares que variaron entre los 0,5 y los 6,1 kb. Las cepas estudiadas se pudieron agrupar en 17 patrones de RAPD diferentes y se encontraron distancias proporcionales entre 0,13 y 0,58. Los resultados del análisis de RAPD permiten concluir que, al menos, una única línea clonal de cada uno de los serotipos estudiados estuvo circulando en los hospitales estudiados.

Estudio Molecular de la Resistencia Antimicrobiana de Escherichia coli Enteropatógena Aisladas de Pacientes Pediátricos con Enfermedad Diarréica Aguda / Molecular study of antimicrobian resistance of enteropathogenic Escherichia coli isolated from pediatric patients with acute diarrhea

Introducción. La enfermedad diarréica aguda es una de las enfermedades más frecuentes en Colombia. Esta entidad en algunso casos requiere tratamiento antimicrobiano, convirtiéndose éste último en un importante factor dentro de la prescripción mádica. El objetivo de este estudio fue establecer una relación entre la tenencia de plásmidos y la resistencia a diferentes antibióticos. Materiales y Métodos. Se analizaron cien cepas de Escherichia coli entropatógena aisladas de niños con enfermedad diarréica aguda. Para la extracción del ADN plasmídico se utilizó el método descrito por Sambrook y cols y para determinar los genes de resistencia presentes en los plásmidos aislados, se realizó una trasformación con una cepa competente de E. coli k12 y Y1090. Resultados. El 60 por ciento de las cepas aisladas (60/100) fueron resistentes a antibióticos, cuyas resistencias se encontraron distribuidas de la siguiente manera, ampicilina 60 por ciento (36/60), tetraciclina 65 por ciento (39/60) y 55 por ciento (33/60) para trimetropin sulfametoxazol. El experimentao de transformación demostró que el 45.5 por ciento (15/33) de los plásmidos aislados transformaron, mientras que el 54.5 por ciento (18/33) restantes no. La resistencia en los plásmidos transformados se distribuyó de igual manera para cada antibiótico, 53.3 por ciento (8/15). Conclusión. El estudio permitió concluir quu hay un alto porcentaje de multirresistencia en las cepas de E. coli enteropatógena, lo cual está mediado por ADN plasmídico