Enzyme production by Candida albicans and Candida dubliniensis in periodontal HIV-positive patients receiving and not receiving antiretroviral therapy / Producción enzimática de Candida albicans y Candida dubliniensis de pacientes con periodontitis VIH+ con y sin tratamiento antirretroviral

ABSTRACT Candida dubliniensis (Cd) and Candida albicans (Ca) are the most frequently isolated yeasts in HIV+ patients. Some of the enzymes produced by these yeasts are considered virulence factors since they contribute to pathogenicity of Candida spp. The aim of the present study was to compare production of enzymes such as phospholipase (Ph), proteinase (P), and hemolysin (H) by Cd and Ca strains isolated from periodontal HIV-positive patients receiving and not receiving highly active antiretroviral therapy (HAART). Subgingival biofilm samples were obtained using paper points, and a sample of oral mucosa was taken using a swab. Phenotypic and molecular methods were used to isolate 39 strains of Candida, including 25 strains of Cd and 14 strains of Ca, obtained from 33 periodontal pocket samples and 6 oral mucosa samples collected from 15 HIV+ patients (8 receiving and 7 not receiving HAART). Malt egg-yolk agar, albumin agar and blood agar were used to evaluate pH, P and H production respectively. The strains were inoculated in duplicate and incubated at 37 ºC. Colony and halo diameters were measured. A greater proportion of Ca was observed in patients not receiving HAART, and a higher proportion of Cd was observed in those under HAART, Chi2 p< 0.001. Phospholipase production was observed in 92.9% percent of isolated Ca strains but in none of the isolated Cd strains. Proteinase production was high in Ca and Cd strains isolated from patients not receiving HAART. Hemolysin production was observed in all the studied strains, though it was significantly higher (p=0.04) in Ca and Cd strains isolated from patients not receiving HAART. To sum up, the proportion of Candida dubliniensis strains was highest in the subgingival biofilm of patients receiving HAART, and Cd strains were found to express fewer virulence factors than Ca strains.

RESUMEN Las levaduras más aisladas en pacientes VIH+ son Candida dubliniensis (Cd) y Candida albicans (Ca). Algunas de sus enzimas constituyen factores de virulencia ya que favorecen la diseminación tisular. El objetivo fue comparar la producción de enzimas como fosfolipasa (F), proteinasa (P) y hemolisina (H) en cepas de Cd y Ca aisladas de pacientes VIH+ tratados y no tratados con antirretrovirales (TARGA). Se realizó la toma del biofilm de placa subgingival con conos de papel y la muestra de la mucosa bucal con hisopo. Se aislaron y tipificaron por métodos fenotípicos y moleculares 39 cepas: 25 de Cd y 14 Ca, obtenidas 33 de bolsas periodontales y 6 de mucosa bucal de 15 pacientes VIH+ (8 con y 7 sin tratamiento). Se utilizó agar malta con yema de huevo, agar albúmina y agar sangre para demostrar la producción de F, P y H, respectivamente. Se inocularon por duplicado e incubaron a 37°C. Se midieron los diámetros de las colonias y los de hidrólisis alrededor de las mismas. Se observó mayor proporción de Ca en los pacientes sin tratamiento y mayor proporción de Cd en los con tratamiento; Chi2 p< 0.001. El 92,9% de las Ca estudiadas, fueron productoras de fosfolipasa. En tanto que ninguna Cd produjo la enzima. En cuanto a la producción de proteinasa se observa una alta producción tanto en las cepas de Ca, como en las Cd aisladas en los pacientes no tratados. Todas las cepas estudiadas produjeron hemolisina, observándose una diferencia estadísticamente significativa (p=0,04) en ambas especies a favor de la alta producción de la enzima en las cepas obtenidas de pacientes no tratados. Podemos concluir que en el biofilm subgingival, en los pacientes bajo TARGA, se aíslan mayor proporción de Candida dubliniensis las cuales expresan menos factores de virulencia.

Effect of articaine on calcium transport in sarcoplasmic reticulum membranes isolated from medial pterygoid muscle

Local anesthetics used in dentistry have myotoxic effects. Articaine, also known as carticaine, is one of the local anesthetics most widely used in clinical dentistry. The aim of this work was to describe its effect on the sarcoplasmic reticulum Ca-ATPase isolated from medial pterygoid muscle. Ca-ATPase enzymatic activity was determined by a colorimetric method and ATP-dependent calcium uptake with a radioisotopic technique. Articaine inhibited both Ca-ATPase activity and calcium uptake in a concentrationdependent manner. Both inhibitory effects became evident at articaine concentrations lower than those employed in clinical dentistry. Half-maximal inhibitory concentrations (Ki) were 15.1± 1.8 mM (n = 6) and 25.2 ± 1.6 mM (n = 6) for enzymatic activity and calcium uptake, respectively. Preincubation of sarcoplasmic reticulum membranes with articaine enhanced Ca-ATPase activity in the absence of calcium ionophore, suggesting an ionophoriclike effect of the local anesthetic. We conclude that the inhibitory effect of articaine on the sarcoplasmic reticulum Ca-ATPase isolated from medial pterygoid muscle is due to a direct interaction of the anesthetic with the enzyme and to the increased membrane permeability to calcium induced by this drug.

Los anestésicos locales de uso odontológico tienen efectos miotóxicos. La carticaína, también conocida como articaína, es uno de los anestésicos locales más usados en la clínica odontológica actual. El objetivo del trabajo fue describir el efecto de la carticaína sobre la Ca-ATPasa del retículo sarcoplásmico aislada del músculo pterigoideo interno. La actividad enzimática de la bomba de calcio se determinó por un método colorimétrico y se utilizó un método radioisotópico a fin de determinar la captación de calcio dependiente de ATP. La carticaína inhibió la actividad enzimática y la captación de calcio en función de su concentración. Ambos efectos se observaron a concentraciones de carticaína menores a las utilizadas en la clínica. Las concentraciones de carticaína necesarias para inhibir la actividad Ca-ATPásica y la captación de calcio a la mitad de su valor máximo (Ki) fueron 15.1 ± 1.8 mM (n = 6) y 25.2 ± 1.6 mM (n = 6) respectivamente. La preincubación con carticaína de las membranas de retículo sarcoplásmico del músculo pterigoideo interno, en ausencia de ionóforo de calcio, incrementó la actividad de la enzima, evidenciando un efecto ionofórico del anestésico local. Concluimos que el efecto inhibitorio de la carticaína sobre la Ca-ATPasa de retículo sarcoplásmico del músculo pterigoideo interno se debe a la acción directa del anestésico local sobre la enzima y al incremento de la permeabilidad de la membrana del retículo sarcoplásmico al calcio inducido por esta droga.

Relationship between dental status and family, school and socioeconomic level / Relación entre el estado dentario de escolares y los conocimientos, actitudes y prácticas y nivel de escolaridad de los padres

El objetivo de este estudio fue analizar la asociación entre conocimientos, actitudes, práctica y escolaridad formal de los padres y el estado dentario de escolares asistentes en institucionesde diferente nivel socioeconómico, empleando la caries dental como enfermedad trazadora. Fue seleccionadauna muestra intencionada de 300 escolares de 6 a 14 años de edad, asistentes a escuelas representantes de tres niveles de ingresos familiares. Los niños fueron agrupados en 3 nivelesetarios (6-8, 9-11 y 12-14 años de edad). Un cuestionario validadoreferido a conocimientos, actitudes y prácticas fue administrado a los padres (Anrup et al, 2001). Los niños fueronexaminados clínicamente y determinados los índices CPOS,ceos, índice de biofilm de placa y sangrado gingival. Las medias y el error standard y la frecuencia de distribución de cada variable fue establecida y calculada según ANOVA, chi2, Yates chi2 y tests de Scheffé (p < 0.05). La asociación entre variables fue calculada por medio del test chi2. Los resultadosrevelaron que los niños pertenecientes a familias con menores ingresos presentaban mayores niveles de enfermedad bucal en todos los grupos de edad. Estas familias revelan menos prácticas y actitudes saludables coincidentes con un menor nivel deescolaridad. Los indicadores dentarios, el sangrado gingival y el índice de biofilm resultaron inversa y sigficativamente asociados con los conocimientos, las actitudes y la escolaridad formal de los padres. Los conocimientos, la escolaridad formal,las actitudes y prácticas de los padres resultaron variables intervinientes sobre el estado de salud bucal de escolares yconstituyen un campo de intervención con potencial impacto sobre el componente bucal de la salud de los escolares.

Iimpact of oral health care needs on health-related quality of life in adult HIV+ patients

El propósito de este trabajo fue determinar el impacto social del estado de salud bucal sobre la calidad de vida de los pacientes VIH+ y establecer un modelo predictivo. El cuestionario correspondiente al perfil del impacto social de la salud bucal, OHIP-49, se administró aleatoriamente a 200 pacientes adultos VIH+ de ambos géneros enla Clínica para la Atención de Pacientes de alto riesgo I (CLAPAR I) de la Facultad de Odontología de la Universidad de Buenos Aires, Argentina. Los pacientes indicaron su respuesta a cada una de las 49 preguntas del cuestionario en una escala de frecuencia tipo Likert (nunca, casi nunca, casi siempre, siempre). La necesidad de tratamiento odontológico se determinó haciendo uso del Indice de Necesidad de Tratamiento de Caries (INTC) y del Indice de Necesidad de Tratamiento Periodontal (INTP). La prueba de Mann-Whitney se utilizó para analizar la diferencia del puntaje global del OHIP-49 entre hombres y mujeres. La prueba de Kruskal-Wallis se empleó para evaluar las diferencias de los puntajes observados entre los diferentes dominios del OHIP-49. La influencia de la necesidad de tratamiento odontológico, la edad y el género se desempeñaron como variables independientes. El 50 por ciento de los pacientes eran de sexo masculino con una edad promedio de 36.45 +- 0.70 años y el otro 50 por ciento correspondió al sexo emenino, con una edad promedio de 38.03 +- 0.78 años. La evaluación del estado bucodental evidenció una alta necesidad de tratamiento odontológico. El valor medio del INTC fue 11.15 +- 0.35 y el del INTPC fue 2,41 +- 0.12. La media del puntaje registrado en el OHIP-49 (83) reveló un alto nivel de impacto social de las condiciones de salud bucal, siendo dicho impacto mayor en mujeres que en hombres (Z(t)=2.08, p=0.037). Los dominios relativos a la limitación funciona (dominio 1), al dolor físico (dominio 2) y al discomfort psicológico (dominio 3) mostraron mayores niveles de impacto social (H=395.06, p<0.0001).

Inhibitory effect of lidocaine on the sarcoplasmic reticulum Ca2+- dependent ATPase from temporalis muscle

Myotoxic effects of local anesthetics on skeletal muscle fibers involve the inhibition of sarcoplasmic reticulum Ca2+-dependent ATPase activity and Ca2+ transport. Lidocaine is a local anesthetic frequently used to relieve the symptoms of trigeminal neuralgia. The aim of this work was to test the inhibitory and/or stimulatory effect of lidocaine on sarcoplasmic reticulum Ca2+-dependent ATPase isolated from rabbit temporalis muscle. Ca2+-dependent ATPase activity was determined by a colorimetric method. Calcium-binding to the Ca2+- dependent ATPase, Ca2+ transport, and phosphorylation of the enzyme by ATP were determined with radioisotopic techniques. Lidocaine inhibited the Ca2+-dependent ATPase activity in a concentration- dependent manner. The preincubation of the sarcoplasmic reticulum membranes with lidocaine enhanced the Ca2+- dependent ATPase activity in the absence of calcium ionophore. Lidocaine also inhibited both Ca2+ uptake and enzyme phosphorylation by ATP but had no effect on Ca2+-binding to the enzyme. We conclude that the effect of lidocaine on the sarcoplasmic reticulum Ca2+-dependent ATPase from temporalis muscle is due to the drug's direct interaction with the enzyme and the increased permeability of the sarcoplasmic reticulum membrane to Ca.

La toxicidad de los anestesicos locales sobre las fibras musculares esqueleticas involucra a la inhibicion de la actividad de la calcio ATPasa del reticulo sarcoplasmico y a la inhibicion del transporte del calcio. Tales efectos inhibitorios no han sido aun descriptos en el musculo temporal. La lidocaina es un anestesico local habitualmente usado para aliviar los sintomas de la neuralgia del trigemino por medio de la anestesia infiltrativa de la region temporal. El objetivo del trabajo fue demostrar el efecto inhibitorio y/o activador de la lidocaina sobre la calcio ATPasa del reticulo sarcoplasmico del musculo temporal del conejo. La actividad de la calcio ATPasa se determino empleando un metodo colorimetrico. La union del calcio a la enzima, el transporte del calcio y la fosforilacion de la ATPasa por ATP se determinaron mediante el empleo de tecnicas radioisotopicas. La lidocaina inhibio a la actividad de la calcio ATPasa. El efecto inhibitorio incremento en funcion de la concentracion del anestesico. La preincubacion de las membranas del reticulo sarcoplasmico en lidocaina incremento la actividad de la calcio ATPasa en ausencia de un ionoforo de calcio. Tal resultado avala el efecto permeabilizante del anestesico local sobre las membranas del reticulo sarcoplasmico del musculo temporal. La lidocaina inhibio la captacion del calcio y la fosforilacion de la calcio ATPasa por ATP, pero no evidencio efecto sobre la union del calcio a la enzima. Concluimos que el efecto de la lidocaina sobre la calcio ATPasa del reticulo sarcoplasmico del musculo temporal se debe a la accion directa de la droga sobre la enzima y al incremento inducido de la permeabilidad de la membrana del reticulo sarcoplasmico al Ca.

Dental beliefs in HIV+ patients with different oral health care needs

The aim of this work was to assess the score variation of scales 1 and 2 of the DCBS (Dental Coping Beliefs Scale) of beliefs on oral health regarding oral health needs, clinical progression of the viral infection, medical care needs, age and gender in HIV+ patients. The DCBS was randomly administered to 102 HIV+ patients at the "Juan A. Fernandez Hospital", Buenos Aires, Argentina. For each of the 29 items, patients indicated their responses on a five point scale ranging from "strongly disagree" to "strongly agree". Oral health needs were assessed through the CCITN (Community Caries Index of Treatment Need) and the CPITN (Community Periodontal Index of Treatment Need). Data on CD4 cell count, pharyngeal-esophageal candidiasis, tuberculosis, pneumonia and hospitalization because of HIV-related opportunistic diseases were recorded. A linear regression model was built in which the number of items reporting wrong dental beliefs was the dependent variable and the remaining variables were independent. Altogether 65.7% were male (36.0 ± 0.87 y.o.) and 34.3% were female (36.11 ± 1.21 y.o.) patients. The eight independent variables were significant for the model (F(8,93) = 93.20, p < 0.05; R = 0.80). The estimated parameters were all positive except for CD4 cell counts. The results demonstrate that the DCBS was useful to identify HIV+ patients as a caries and periodontal disease risk group because of their wrong dental beliefs and suggests the need of dental education interventions.

El propósito de este trabajo fue evaluar la variación del puntaje registrado para las subescalas 1 y 2 de la escala de creencias relativas a la salud bucal (DCBS) en relación a la necesidad de tratamiento odontológico, la progresión clínica de la infección viral, la necesidad de tratamiento medico, la edad y el genero de pacientes VIH+. El cuestionario correspondiente a la DCBS se administro aleatoriamente a 102 pacientes VIH+ concurrentes al Hospital Juan A. Fernandez, Buenos Aires, Argentina. Para cada una de las 29 proposiciones de las subescalas 1 y 2 de la DCBS los pacientes indicaron su parecer en una escala tipo Likert de 5 grados que iban desde “completamente en desacuerdo” hasta “completamente de acuerdo”. La necesidad de tratamiento odontológico se determino a través del Índice de Necesidad de Tratamiento de Caries de la Comunidad (INTCC) y del Índice de Necesidad de Tratamiento Periodontal de la Comunidad (INTPC). De la historia clínica medica de cada paciente se recabaron datos correspondientes al recuento de linfocitos T CD4, episodios de candidiasis faringoesofagica, tuberculosis, neumonía y hospitalización a raíz de enfermedades oportunistas afines a la infección por el VIH. Se construyo un modelo de regresión lineal tomando como variable dependiente el numero de proposiciones que reflejaban creencias erróneas sobre salud bucal mientras que las restantes variables en estudio se tomaron como independientes. El 65.7% de los pacientes en estudio correspondió a pacientes de genero masculino (36.0 ± 0.87 anos de edad) y el 34.3% restante a pacientes de genero femenino (36.11 ± 1.21 anos de edad). Las ocho variables independientes resultaron significativas para el modelo lineal (F(8,93) = 93.20, p < 0.05; R = 0.80). Los parámetros estimados para el modelo resultaron positivos excepto para el recuento de linfocitos T CD4. Los resultados indican que la DCBS resulta un instrumento útil para identificar a los pacientes VIH+ como un grupo de riesgo de caries y enfermedad periodontal dadas las creencias erróneas sobre salud bucal que poseen y sugieren la necesidad de intervenciones educativas de salud bucal en estos pacientes.