RESUMEN
INTRODUCCIÓN: La detección de patrones de resistencia de Mycobacterium tuberculosis se basa en pruebas de susceptibilidad fenotípicas y genotípicas. Los resultados discordantes entre ellas son un desafío clínico para el manejo de pacientes con tuberculosis resistente a fármacos. OBJETIVO: Evaluar la concordancia entre pruebas fenotípicas y moleculares en pacientes con tuberculosis resistente a fármacos atendidos en una institución de Cali, Colombia. MATERIALES Y MÉTODOS: Se realizó un estudio transversal en el que se obtuvo el perfil de sensibilidad fenotípico de cultivos de micobacterias y la susceptibilidad genotípica con las pruebas moleculares Xpert-MTB/ RIF® o Genotype-MDRTBplus ®. Se evaluó el porcentaje de resistencia y porcentaje de acuerdo entre los resultados de las pruebas fenotípicas y genotípicas. Se estimó un coeficiente de kappa de Cohen (κ) para cada tipo de resistencia según la prueba utilizada. RESULTADOS: Se incluyeron 30 casos con resultados de pruebas genotípicas y fenotípicas. Las pruebas fenotípicas detectaron resistencia a fármacos de primera línea en 29/30 casos, mientras que las moleculares detectaron la resistencia en todos los casos evaluados. El porcentaje de resistencia a rifampicina detectado entre la prueba fenotípica y Genotype-MDRTBplus ® &e 61,5% (acuerdo global 41,1%, κ = 0,40, p = 0,96), mientras que el porcentaje de resistencia detectado con Xpert-MTB/RIF® fue 100% (acuerdo global 81,82%, κ: 0,00, p < 0,001) para este mismo medicamento. El porcentaje de resistencia a isoniacida detectado entre la prueba fenotípica y Genotype-MDRTBplus ® fue 94,4% (acuerdo global 89,47%, κ: -0,055 p = 0,59). CONCLUSIONES: La discordancia entre los resultados de las pruebas genotípicas y fenotípicas es posible, por lo que es importante usar e interpretar ambos tipos de pruebas de manera complementaria en el diagnóstico de la resistencia a fármacos de primera línea en la infección por M. tuberculosis.
BACKGROUND: The detection of Mycobacterium tuberculosis resistance patterns is based on phenotypic and genotypic susceptibility tests. The discordant results between them are a clinical challenge for the management of patients with drug-resistant tuberculosis. Aim: To evaluate the concordance between phenotypic and molecular tests in patients with drug-resistant tuberculosis treated in an institution in Cali, Colombia. METHODS: A cross-sectional study was conducted. A phenotypic sensitivity profile was obtained from mycobacterial cultures. The genotypic susceptibility was obtained with Xpert-MTB/ RIF® or Genotype-MDRTBplus ®. The percentage of resistance and percentage of agreement between the results of the phenotypic and genotypic tests were evaluated. A Cohen's kappa coefficient (κ) was estimated for each type of resistance according to the test used. RESULTS: A total of 30 cases with both genotypic and phenotypic testing were included. The phenotypic tests detected resistance to first-line drugs in 29/30 cases, while the molecular tests detected resistance in all the cases evaluated. The percentage of resistance detected between Genotype-MDRTBplus® and the phenotypic test for rifampicin was 61.5% (overall agreement 41.1%, κ = 0.40, p = 0.96), while the percentage of resistance detected with XpertMTB/RIF® was 100% (overall agreement 81.82%, κ: 0.00, p < 0.001) for this same drug. Resistance to isoniazid detected by both types of tests was 94.4% (overall agreement 89.47%, κ: -0.055 p = 0.59). CONCLUSIONS: Discordance between the results of genotypic and phenotypic tests is possible, so it is important to use and interpret both types of tests in a complementary way in the diagnosis of resistance to first-line drugs in M. tuberculosis infection.
Asunto(s)
Humanos , Masculino , Femenino , Adulto , Tuberculosis Resistente a Múltiples Medicamentos/diagnóstico , Tuberculosis Resistente a Múltiples Medicamentos/genética , Fenotipo , Rifampin/farmacología , Pruebas de Sensibilidad Microbiana , Estudios Transversales , Colombia , Técnicas de Genotipaje , Isoniazida/farmacología , Mycobacterium tuberculosis/efectos de los fármacosRESUMEN
RESUMEN: Porphyromonas gingivalis (P. gingivalis) es un microorganismo frecuentemente aislado en pacientes con periodontitis, en los que también se incluye los de la población chilena. El modelo de "Keystone bacteria" demostró que P. gingivalis induce la disbiosis del biofilm subgingival y permite el desarrollo de algunas especies sobre otras, modulando la patogenicidad de la comunidad microbiológica completa. El tratamiento de la periodontitis es principalmente mecánico, pero en condiciones específicas es necesario el complemento con antibioterapia. Los estudios globales de antibióticos evaluados en ensayos clínicos y estudios in vitro han mostrado resultados mixtos en cuanto a eficacia y susceptibilidad. Este estudio descriptivo tuvo como objetivo evaluar el perfil de susceptibilidad antimicrobiana in vitro a metronidazol, clindamicina, amoxicilina más ácido clavulánico, moxifloxacino y azitromicina de P. gingivalis aisladas de pacientes periodontales chilenos. Se obtuvieron muestras microbiológicas de pacientes con diagnóstico de periodontitis estadíos III y IV generalizada, las que se sometieron a procesos de identificación mediante un espectrómetro de masas (MALDI-TOF MS). Posteriormente, a cada muestra positiva a P. gingivalis se aplicó el protocolo gold standard de susceptibilidad para los cinco antimicrobianos evaluados (Dilución en Agar Sangre Brucella- McFarland 0.5). Se seleccionaron 50 pacientes (25 mujeres, 25 hombres) entre 34-69 años. Finalmente, se recuperaron 25 cepas de P. gingivalis (50 %) para el análisis de susceptibilidad y todas ellas fueron sensibles a todos los antibióticos evaluados (100 % susceptibilidad). Las cepas de P. gingivalis fueron altamente sensibles a los cinco antibióticos evaluados en esta población, lo que podría implicar contar con diferentes alternativas de tratamiento farmacológico antimicrobi ano como complemento al tratamiento mecánico convencional en pacientes específicos.
ABSTRACT: Porphyromonas gingivalis (P. gingivalis) is a microorganism frequently isolated in patients with periodontitis, which also include those of Chilean population. The "Keystone bacteria" model demonstrated that P. gingivalis induces dysbiosis of the subgingival biofilm and allows the development of some species over others, modulating the pathogenicity of the entire microbiological community. The treatment of periodontitis is mainly mechanical; nevertheless, under specific conditions the complement with antibiotherapy is needed. Global studies of antibiotics evaluated in clinical trials and in vitro studies have shown mixed results in terms of efficacy and susceptibility. This descriptive study aimed to evaluate antimicrobial susceptibility profile in vitro to metronidazole, clindamycin, amoxicillin plus clavulanic acid, moxifloxacin and azithromycin of P. gingivalis isolated from Chilean periodontal patients. Microbiological samples were obtained from patients with a diagnosis of generalized periodontitis stages III and IV, which were exposed to identification processes by a mass spectrometer (MALDI-TOF MS). Subsequently, the gold standard susceptibility protocol for the five antimicrobials evaluated was applied to each P. gingivalis- positive sample (Dilution in Brucella-McFarland Blood Agar 0.5). 50 patients (25 women, 25 men) between 34-69 years old were selected. Finally, 25 P. gingivalis strains (50 %) were recovered for susceptibility testing and all of them were susceptible to all antibiotics tested (100 % susceptibility). P. gingivalis strains were highly susceptible to the five antibiotics evaluated in this population, which could implies counting different antimicrobial pharmacological treatment alternatives as a complement to conventional mechanical treatment in specific patients.
RESUMEN
Five issues were reviewed in depth at the 2014 annual meeting of Colaborative Group Against Bacterial Resistance and the antecedents and conclusions are detailed in this document. I.- News in CLSI 2014: the difficulties and implications on its implementation at the local level were reviewed and recommendations were set. II.- Criteria for determining the incidence of multi-resistant microorganism in critical care units where indicators and monitoring methodology for better quantification of microorganisms were defined. III.- Quality requirements were established to be considered by the professionals involved in the selection of antimicrobials in the hospital. IV.- Transfer policies, screening and contact precautions for the control of transmission of multiresistant bacteria. V.- Recommendations for health facilities when a carbapenemase producing enterobacteriacea is detected, in a checklist format for rapid deployment in hospitals without endemia of these agents. These are suggestions that arise from the joint work of specialists from many hospitals that do not represent consensus or recommendation, but may help to control the resistance level of each health facility in the country.
En la reunión anual del Grupo Colaborativo de Resistencia Bacteriana del año 2014 se revisaron en profundidad cinco tópicos cuyos antecedentes y conclusiones se detallan en este documento. Los temas fueron: I.- Novedades del CLSI 2014: se revisaron las dificultades e implicancias de su implementación a nivel local y se establecen recomendaciones. II.- Criterios para la determinación de incidencia de microoganismos multi-resistentes en unidades de pacientes críticos, donde se definieron los indicadores y la metodología de vigilancia para una mejor cuantificación del problema. III.- Se establecieron requisitos de calidad a considerar por los profesionales que participan en la selección de antimicrobianos en el hospital. IV.- Se discutieron las políticas de traslado, tamizaje y precauciones de contacto para el control de la transmisión de bacterias multiresistentes. V.- Se establecieron recomendaciones para los establecimientos de salud frente a la pesquisa de una enterobacteria productora de carbapenemasa en formato de lista de chequeo para la implementación rápida en hospitales sin endemia de estos agentes. Estas sugerencias nacen del trabajo conjunto de especialistas de muchos hospitales, no representan un consenso o normativa pero pueden ser de ayuda para el control de la resistencia en cada establecimiento de salud del país.
Asunto(s)
Humanos , Antibacterianos/farmacología , Infecciones Bacterianas/microbiología , Farmacorresistencia Bacteriana , Control de Infecciones , Chile , Conducta Cooperativa , Pruebas de Sensibilidad MicrobianaRESUMEN
El Complejo Fusarium solani (CFS) se encuentra distribuido en la naturaleza, causando un amplio espectro de infecciones en los humanos, desde superficiales, como la queratitis, hasta infecciones fúngicas invasoras, caracterizándose por su resistencia a los antimicóticos. El objetivo de esta investigación fue determinar la susceptibilidad in vitro del CFS frente a cinco antifúngicos. Se utilizaron 30 aislados obtenidos de úlceras corneales provenientes de la colección de cultivos del Departamento de Micología del Instituto Nacional de Higiene Rafael Rangel y se siguió el protocolo descrito en el documento M38-A2 del Instituto de Estándares Clínicos y de Laboratorio (CLSI), determinando las Concentraciones Mínimas Inhibitorias (CMI) por microdilución en caldo para anfotericina B, itraconazol, posaconazol, voriconazol y fluconazol. En general, todas las drogas presentaron CMI elevadas, siendo voriconazol y anfotericina B los antifúngicos que exhibieron mejor actividad, mientras que itraconazol, posaconazol y fluconazol mostraron actividad nula. Los resultados de este estudio aportaron información importante sobre el comportamiento del CFS frente a los antifúngicos de uso común en la práctica clínica por primera vez en Venezuela. Es imprescindible que el médico conozca la actividad de estas drogas para poder tomar decisiones y orientar una conducta terapéutica adecuada.
The Fusarium solani Complex (FSC) is distributed in nature, producing a wide spectrum of infections in humans, from superficial ones such as keratitis, to invasive fungal infections, characterized by their resistance to antimycotics. The purpose of this investigation was to determine the in vitro susceptibility of the FSC to five antifungals. We used 30 isolates obtained from corneal ulcers kept at the culture collection of the Instituto Nacional de Higiene Rafael Rangel and we followed the protocol described in the M38-A2 document of the Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) determining the Minimal Inhibitory Concentrations (MIC) by broth microdilution for amphotericin B, itraconazole, posaconazole, voriconazole and fluconazole. In general, all the drugs presented high MICs, voriconazole and amphotericin B being the antifungals which showed the best activity, while itraconazole, posaconazole and fluconazole showed a null activity. The results of this study provided, for the first time in Venezuela, important information about the behavior of the FSC towards commonly used antifungals. It is mandatory that physicians know the activity of these drugs in order to be able to take decisions and devise an guide an appropriate therapeutic management.
RESUMEN
El objetivo de este trabajo fue validar la preparación del inóculo por densitometría para las pruebas de susceptibilidad a los antifúngicos en especies del género Fusarium. Se emplearon 15 aislamientos clínicos de Fusarium spp. para preparar los inóculos por espectrofotometría y contaje de unidades formadoras de colonias en cámara de Neubauer, siguiendo los protocolos establecidos por los documentos de referencia M38-A2 del Instituto de Estándares Clínicos y de Laboratorio (CLSI) y E.DEF 9.1 del Comité Europeo para Pruebas de Susceptibilidad a los Antimicrobianos (EUCAST), respectivamente. En paralelo se determinaron las lecturas por densitometría para ambos procedimientos. Se estableció un rango de 0,5-0,7 unidades McFarland para la preparación del inóculo por densitometría según el CLSI, y un rango de 0,2-0,8 unidades McFarland para la metodología descrita por el EUCAST. Con este estudio, se logró validar la preparación del inóculo para las pruebas de susceptibilidad en Fusarium spp., utilizando la densitometría como método alternativo de los procedimientos descritos internacionalmente, con considerables ventajas para ser implementado en los laboratorios de microbiología clínica. La variabilidad en cuanto a la capacidad de esporulación y tamaño de las conidias, sobre todo en especies poco frecuentes de Fusarium, sugiere la necesidad de validar el inóculo por especie.
The purpose of this work was to validate the preparation of the inoculum by densitometry for antifungal susceptibility testing in Fusarium species. Fifteen clinical isolates of Fusarium spp. were used to prepare the inocula by spectrophotometry and counting of colony forming units in a Neubauer chamber, according to the protocols established by the reference documents M38-A2 of the Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI), and E.DEF 9.1 of the European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing (EUCAST), respectively. Densitometry readings were determined in parallel for both procedures. A range of 0.5-0.7 McFarland units was established for inocula preparation by densitometry according to the CLSI, and a range of 0.2-0.8 McFarland units was established for the methodology described by EUCAST. This study allowed validating the preparation of the inocula for antifungal susceptibility testing in Fusarium spp., using densitometry as an alternative method for other procedures described internationally, with considerable advantages that can be implemented at clinical microbiology laboratories. The variability regarding sporulation capacity and conidia size, especially in less frequent Fusarium species, suggests the need of validating inocula per species.
RESUMEN
El complejo Fusarium solani (CFS) se encuentra ampliamente distribuido en la naturaleza, causando un amplio espectro de infecciones en los humanos, desde superficiales, como la queratitis, hasta infecciones fúngicas invasoras, caracterizándose por presentar una escasa actividad frente a los antifúngicos. El objetivo de esta investigación fue determinar la susceptibilidad in vitro del CFS frente a 5 antifúngicos según el método M38-A2 del Instituto de Estándares Clínicos y de Laboratorio (CLSI). Se utilizaron 30 aislamientos clínicos de úlceras corneales provenientes de la colección de cultivos del Departamento de Micología del Instituto Nacional de Higiene "Rafael Rangel" y del Hospital Universitario de Caracas. Se siguió el protocolo descrito en el documento M38-A2, que consistió en determinar las Concentraciones Mínimas Inhibitorias (CMI) por microdilución en caldo para anfotericina b (AB), itraconazol (IZ), posaconazol (POS), voriconazol (VZ) y fluconazol (FZ). En general, todas las drogas presentaron CMI elevadas, siendo VZ y AB los antifúngicos que mostraron mejor actividad, mientras que para IZ, POS y FZ la actividad fue nula. Los resultados de este estudio aportaron información importante sobre el comportamiento del CFS ante los antifúngicos de uso común en la práctica clínica por primera vez en Venezuela. Es imprescindible conocer la actividad de estas drogas para poder tomar decisiones y orientar una conducta terapéutica adecuada.
The Fusarium solani species complex (FSSC) is widely distributed in nature, causing a wide spectrum of human infections, from superficial as keratitis to invasive fungal infections, characterized by having low antifungal activity. The objective of this research was to determine the in vitro susceptibility of FSSC to 5 antifungal agents, according to the M38-A2 method of the Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). It was used 30 clinical isolates of corneal ulcers, coming from the culture collection of the Departamento de Micología del Instituto Nacional de Higiene Rafael Rangel and the Hospital Universitario de Caracas. It was followed the protocol described in the document M38-A2 to determine the minimum inhibitory concentrations (MIC) by broth microdilution for amphotericin B (AB), itraconazole (IZ), (POS), voriconazole (VZ), and fluconazole (FZ). In general, all the drugs showed elevated MICs, being VZ and AB the drugs presenting the best antifungal activity, while IZ, POS and FZ showed no activity. The results of this study provided important information about the behavior of the FSSC against antifungal agents commonly used in clinical practice for the first time in Venezuela. It is essential to know the activity of these drugs in order to make decisions and to orient an appropriate therapeutic behaviour.
Asunto(s)
Humanos , Masculino , Femenino , Infecciones Fúngicas Invasoras , Fusarium , Micología , AntifúngicosRESUMEN
La tinea capitis (tiña de la cabeza) es una infección por dermatofitos del folículo piloso del cuero cabelludo y la piel en relación. Afecta principalmente a niños y su prevalencia varía entre regiones, siendo el Microsporum canis el agente más aislado en todo el mundo. Existen diversos medicamentos para el tratamiento de esta patología con reconocida eficacia terapéutica. Sin embargo, la disponibilidad, costos y tolerabilidad a algunos de estos hace limitado su uso en la población pediátrica. Con el objetivo de evaluar desde el punto de vista clínico y determinar la susceptibilidad in vitro a la terbinafina siguiendo las recomendaciones del Clinical Laboratory Standards Institute, de acuerdo al documento M38-A2, se diseñó una investigación observacional, descriptiva, experimental y prospectiva, en pacientes pediátricos con diagnóstico de tinea capitis por Microsporum canis de la consulta de micología del servicio de Dermatología del Hospital Universitario de Caracas- Venezuela. Fueron evaluados 72 pacientes, con edad entre menos de 1 y 11 años, 73,61 % fueron masculinos. En la mayoría la dermatofitosis se presentó de forma clínica tonsurante, el examen directo micológico evidenció el ataque ectothrix al pelo en el 98,6 % de los casos. 69,60 % tuvieron una evolución satisfactoria una vez instaurado el tratamiento con terbinafina oral. Según la actividad in vitro la Terbinafina resultó eficaz contra el 100 % de los aislados, con un rango de concentración mínima inhibitoria entre menos de 0,0019 µg/ml y 0,0156 µg/ml. Se concluye que la caracterización desde el punto de vista clínico y el conocimiento de los patrones de susceptibilidad a los antifúngicos se hace necesaria para la adecuada terapéutica.
Tinea capitis (ringworm of the head) is a dermatophyte infection of the scalp hair follicle and skin on. It affects mainly childrens and its prevalence varies between regions, Microsporum canis is the most isolated agent worldwide. There are different medications to treat this condition with proven therapeutic efficacy. However, the availability, cost and tolerability of these makes some limited use in the pediatric population. With the aim to evaluate from the clinical viewpoint and determine the in vitro susceptibility to terbinafine as recommended by the Clinical Laboratory Standards Institute, according to the document M38-A2, was designed an observational, descriptive, experimental and prospectively investigation, in pediatric patients diagnosed with tinea capitis by Microsporum canis from the consultation of service of Dermatology, University Hospital of Caracas, Venezuela. Were assessed 72 patients, aged less than 1 and 11 years, 73.61% were male. In most of dermatophytosis presented clinically tonsurans, direct mycological examination showed the hair ectothrix attack in 98.6% of cases. 69.60% had a satisfactory evolution once established treatment with oral terbinafine. According to the in vitro activity of terbinafine was effective against 100% of isolates with a minimum inhibitory concentration range from less than 0.0019 According to the in vitro activity of terbinafine was effective against 100% of isolates with range of values for minimum inhibitory concentration from less than 0.0019 µg/ml and 0.0156 µg/ml. Is concluded that the characterization from the clinical perspective and knowledge of the patterns of susceptibility to antifungal agents is necessary for proper treatment.
Asunto(s)
Humanos , Masculino , Femenino , Tiña del Cuero Cabelludo , Susceptibilidad a Enfermedades , Terbinafina , Microsporum , Pruebas de Sensibilidad Microbiana , MicologíaRESUMEN
Las especies del género Fusarium han emergido como patógenos oportunistas en las últimas décadas. La aparición de cepas resistentes y la introducción de nuevos antifúngicos, hace necesaria la realización de las pruebas de susceptibilidad en los laboratorios de microbiología clínica. El objetivo de este estudio fue estandarizar la preparación del inóculo por densitometría para las pruebas de susceptibilidad a los antifúngicos en especies de Fusarium. Se utilizaron 15 aislamientos clínicos de Fusarium spp. y se prepararon los inóculos por espectrofotometría y por contaje de unidades formadoras de conidias en cámara de Neubauer, siguiendo los protocolos establecidos por el CLSI y EUCAST respectivamente, determinando en paralelo sus lecturas por densitometría para ambos procedimientos. Las lecturas densitométricas a través del uso del Densimat®, permitieron establecer un intervalo de 0,5 0,7 unidades Mc Farland para la preparación del inóculo por la metodología descrita por el CLSI y un rango de 0,2 0,8 unidades Mc Farland para la metodología según el EUCAST. Con este estudio, pionero en Venezuela, se logró estandarizar la preparación del inóculo óptimo en las pruebas de susceptibilidad para Fusarium spp. utilizando la densitometría como método alternativo, comparable y sustitutivo de los procedimientos descritos internacionalmente, con considerables ventajas (útil, disponible y reproducible) para ser implementado en los laboratorios de microbiología clínica. La variabilidad en cuanto a la capacidad de esporulación y tamaño de las conidias, sobre todo en las especies poco frecuentes de Fusarium, sugiere la necesidad de estandarizar el inóculo por especie.
Fusarium species have emerged like opportunistic pathogens in the last decades. The appearance of new resistant strains and the introduction of new antifungal agents, make necessary susceptibility tests in clinical microbiology laboratories. The objective of this study was to standardize inoculum preparation by densitometry for antifungal susceptibility testing in Fusarium species. Fifteen clinical isolates of Fusarium spp. were used, and the inocula were prepared by spectrophotometry and by conidia forming count in Neubauer chamber, following the establishment protocols of CLSI and EUCAST, respectively, determining in parallel their densitometry readings for both procedures. Densitometry readings by Densimat® allowed to establish an interval of 0.5 - 0.7 Mc Farland units for the inoculum preparation by the CLSI methodology, and a rank of 0.2 - 0.8 Mc Farland units for the methodology according to the EUCAST. With this study, pioneer in Venezuela, it was achieved the standardization of the optimal inoculums preparation for the susceptibility tests in Fusarium spp., using densitometry like an alternative, comparable and substitute method of the described internationally standard procedures, with considerable advantages (useful, available and reproducible) to be applied in clinical microbiology laboratories. The variability as far as both sporulation capability and conidia's size, mainly in less frequent species of Fusarium, suggests the needs to standardize the inoculums by species.
Asunto(s)
Humanos , Masculino , Femenino , Densitometría , Fusarium , Antifúngicos , LaboratoriosRESUMEN
En los últimos años, la enfermedad invasora causada por Aspergillus spp. ha constituido un problema creciente en pacientes inmunosuprimidos, debido a su elevada incidencia y mortalidad. La aparición de nuevas alternativas terapéuticas como el voriconazol y la caspofungina, aunada a la resistencia documentada de especies de Aspergillus a la anfotericina B e itraconazol, conllevan a la realización de pruebas de susceptibilidad antifúngica de aislados clínicos de Aspergillus spp. Actualmente existen dos documentos de referencia aprobados par a las pruebas de susceptibilidad de Aspergillus spp., el M38-A2 y el E.DEF 9.1. Una de las variables que influye significativamente en éstas pruebas, es la preparación del inoculo; en tal sentido, los documentos mencionados presentan diferentes metodologías, el M38-A2 refiere que la preparación del inóculo se realice mediante el uso de, mientras que E.DEF 9. 1 indica que dicha preparación se realice mediante el contaje de conidias en una cámara de Neubauer. Por otra parte, algunos investigadores han obtenido resultados controversiales al evaluar y/o comparar la reproducibilidad de las metodologías de preparación del inóculo de ambos métodos de referencia En ésta investigación se estandarizó una metodología alternativa para la preparación del inóculo, la densitometría, que resultó ser un método adecuado, sencillo y rápido. Para la preparación de los inóculos y se estableció los siguientes rangos de unidades: MacFarland: de 0.4 a 0.6 para A.flavus, y A. nidulans. De 0.3 a 0.4 para A.fumigatus, y A.terreus y de 0.2 a 0.8 para A.niger.
In recent years, invasive disease caused by Aspergillus spp. has become an increasing problem in immunosuppressed patients because of its high incidence and mortality. The emergence of new therapies such as voriconazole and caspofungin, coupled with documented resistance of Aspergillus species to amphotericin B and itraconazole, leading to the realization of antifungal susceptibility testing of clinical isolates of Aspergillus spp .Currently there are two reference documents approved for susceptibility testing of Aspergillus spp., the M38-A2 and E. DEF 9.1. One of the variables that significantly influence these tests, is the preparation of inoculum; in this way, the documents before mentioned show differ entmethodologies, the M38-A2 refers to the preparation of the inoculum was performed by using spectrophotometry, while E. DEF 9.1 indicates that this preparation is executing by counting conidia in a Neubauer chamber. On the other hand, some researchers have obtained controversial results when evaluating and or compare the reproducibility of the methods of preparing the inoculum of the two methods of reference. For this study, it was standardized an alternative methodology for the preparation of inoculum, "densitometry", and this resulting an appropriate method, simple and fast. For preparation of inocula by densitometry was established the following range s of units MacFarland: 0.4 to 0.6 for A.flavus, and A. nidulans. from 0.3 to 0.4 for A.fumigatus, and A. terreus and from 0.2 to 0.8 for A.niger.
Asunto(s)
Humanos , Masculino , Femenino , Aspergillus , Densitometría , Susceptibilidad a Enfermedades , AntifúngicosRESUMEN
The frequency of invasive mycosis caused by Candida sp has increased significantly in immuno-compromised patients and in those under medical/surgical treatment; along with it, the use of azoles has fostered resistance. Objective: To compare in vitro susceptibility techniques, susceptibility to fluconazol was determined by the M27-A2 method of CLSI (Clinical Laboratory Standard Institute), the disk diffusion technique in 90 invasive Candida sp isolated species (49 C albicans, 30 C. tropicalis, 5 C parapsilosis, 4 C . guilliermondii and 2 C. lusitaniae) and the E-test in 16 isolated. Results: Over 90 percent of strains were susceptible to fluconazol. A straight correlation between disk-diffusion technique and the E-test was observed regarding the reference method (0.944 and 0.938, respectively). Conclusión: In our institution the use of fluconazol for invasive candidiasis is recommended, as well as the routine use of the disk-diffusion or E-test techniques in high complex hospitals in Colombia.
La frecuencia de micosis invasoras causadas por Candida sp en pacientes inmunocomprometidos o con tratamientos médico-quirúrgicos ha aumentado y con ello, el uso de azoles, facilitando la aparición de resistencia. Objetivo: Comparar tres métodos de detección de susceptibilidad in vitro a fluconazol: el método de referencia M27-A2 del CLSI (Clinical Laboratory Standard Institute), técnica de difusión en disco a 90 aislados obtenidos en procesos infecciosos invasores (49 C. albicans; 30 C. tropicalis; 5 C. parapsilosis; 4 C. guilliermondii y 2 C. lusitaniaé) y la epsilometría (E-test®) en 16 aislados. Resultados: La susceptibilidad fue mayor a 90 por ciento. Se encontró un buen porcentaje de concordancia entre las técnicas de difusión de disco y E-test® con respecto al método de referencia (0,944 y 0,938, respectivamente). Conclusión: En nuestra institución se considera de elección fluconazol para tratar infecciones micóticas invasoras y recomendamos las técnica de difusión en disco o E-test® para determinar la susceptibilidad en la rutina en hospitales de alta complejidad en Colombia.
Asunto(s)
Humanos , Antifúngicos/farmacología , Candida/efectos de los fármacos , Fluconazol/farmacología , Pruebas de Sensibilidad Microbiana/métodos , Colombia , Candida/clasificación , Candida/aislamiento & purificaciónRESUMEN
La criptococosis es la cuarta infección en importancia más frecuente y grave en pacientes VIH/SIDA, con una alta tasa de morbimortalidad, siendo en muchos casos de difícil resolución. El objetivo de este trabajo fue determinar la susceptibilidad in vitro de Cryptococcus spp., a fluconazol y voriconazol por el método de difusión en agar. Se recolectaron 79 aislados de Cryptococcus spp., provenientes de pacientes VIH/SIDA con impresión diagnóstica de meningitis criptocóccica desde el año 2000 hasta el 2008. Para la identificación de especie se utilizó el medio de L-canavanina-glicina-azul de bromotimol. Las pruebas de susceptibilidad se realizaron por el método de difusión con disco según el documento M44-A del CLSI y el método de difusión por E-test según el documento M27-A2 para fluconazol (FZ) y voriconazol (VZ). La lectura se realizó a las 48 y 72 horas de incubación a 35º C. Para la lectura de los discos se midió en milímetros el diámetro de la zona de inhibición que producía una reducción significativa ≥ 50% y por el método de E- test, las CMI de los azoles se interpretaron como la concentración más baja que produce una reducción sustancial de crecimiento ≥ al 50%, donde la elipse de inhibición interceptaba la escala de medición de la tira del antifúngico. Cryptococcus neoformans (83,5%) predominó sobre Cryptococcus gattii (16,5%). El porcentaje de susceptibilidad varió entre ambos métodos. Cryptococccus neoformans resultó ser mas susceptible a fluconazol que Cryptococcus gattii y ambas especies resultaron ser muy sensibles a voriconazol. El método de difusión con disco se correlacionó bien con el método de difusión E-test, pero en el primero se obtuvo una baja especificidad, por lo tanto se recomienda confirmar por métodos de concentración mínima inhibitoria aquellos aislados que muestren resultados susceptibles dosis dependientes y resistentes a fluconazol.
Cryptococcosis is the fourth largest infection more frequent and severe in patients HIV/AIDS, with a high rate of morbidity and mortality is often difficult to solve. The aim of this study was to determine in vitro antifungal susceptibility of Cryptococcus spp. to fluconazole and voriconazole by agar diffusion method. It collected 79 Cryptococcus spp. isolated from patients HIV/AIDS with diagnostic impression cryptococcal meningitis since 2000 until 2008. For the identification of species using the means of L-canavanine, glycine, bromothymol blue. The susceptibility tests were performed by disk diffusion method (M44-A CLSI) and method E-test (M27-A2) for fluconazole (FZ) and voriconazole (VZ). The reading took place between 48 to 72 hours of incubation at 35°C. To read the discs was measured in millimetres diameter of the zone of inhibition that produced a significant reduction ≥ 50%. For the E-test method according to the CLSI (M27-A2) of the WCC azoles was read as the lowest concentration where there is a substantial reduction in growth of approximately 50% where the ellipse inhibition intercepts scale strip. Cryptococcus neoformans (83.5%) predominance on Cryptococcus gattii (16.5%). The percentage of several susceptibility between the two methods. Cryptococccus neoformans proved more susceptible to fluconazole that Cryptococcus gattii both isolated and proved very susceptible to voriconazole. The disk diffusion method is well correlated with E-test but received a low specificity, therefore it is recommended that when you get dose-dependent susceptible strains and resistant isolates of this method are confirmed by minimum concentration inhibitory.
Asunto(s)
Humanos , Masculino , Femenino , Fluconazol , Síndrome de Inmunodeficiencia Adquirida , Criptococosis , Voriconazol , Antifúngicos , Técnicas In VitroRESUMEN
En las dos últimas décadas, el aumento de la prevalencia de las candidosis ha sido constante. En nuestro país existe un incremento notable y progresivo de especies distintas a Candida albicans asociado a candidemias, lo que señala la necesidad de identificar las levaduras del genero Candida a nivel de especie, así como la realización de las pruebas de susceptibilidad a los antifúngicos. El objetivo de este trabajo fue determinar la susceptibilidad de Candida spp., a Fluconazol (FZ), Voriconazol (VZ) y Caspofungina (CS) por el método de difusión con discos. Se recolectaron 80 aislados de Candida spp., provenientes de pacientes con candidemia hospitalizados en las UCI de 9 centros hospitalarios del área metropolitana de Caracas (junio 2006 a abril 2008). Los aislados se identificaron por métodos automatizados Vitek-2 YBC® y Walkway MicroScan®, verificando la identificación por métodos convencionales, Chromagar-Candida y morfología en agar harina de maíz. La prueba de difusión con disco se realizó según el documento CLSI M44-A, utilizando discos comerciales de FZ (25µg), VZ (1µg) y discos de CS (5µg) de preparación artesanal. La lectura se realizó a las 24 h de incubación a 35°C, se midió en milímetros el diámetro de la zona de inhibición que producía una reducción significativa ≥ 50% y el criterio de interpretación fue: FZ (S:≥19mm, S-DD:15-18mm, R:≤14mm), VZ (S:≥17mm, S-DD:14-16 mm, R:≤13mm), CS (S:≥11mm, R:≤10mm). Todas las especies de Candida resultaron susceptibles a los 3 antifúngicos ensayados a excepción de un aislado de C.krusei resistente a FZ. Los valores mínimo, máximo y media geométrica de la susceptibilidad en mm fueron: FZ (25/38/30), VZ (26/39/31) y CS (16/21/18). El método de disco difusión es una alternativa útil, rápida y de fácil ejecución para ser implementado en laboratorios de micología y así ofrecer una orientación en el tratamiento antifúngico adecuado y oportuno en candidosis invasora.
During the last two decades, the increase of prevalence of candidosis has been constant. In our country there has been a notable and progressive increment of different species of Candida albicans associated with candidemis, which indicate the need to identify the yeasts of the Candida gender at the specie level, as well as the execution of the susceptibility testing on the antifungal. The purpose of this work was to determine the susceptibility of Candida spp., to Fluconazole (FZ), Voriconazole (VZ) and Caspofungin (CS) by the method of diffusion with disc. There were collected 80 isolates of Candida spp., sampled from patients with candidemia hospitalized at the ICU of 9 hospital centers of the metropolitan area of Caracas (June 2006 to April 2008). The isolates were identified by automated methods, Vitek-2 YBC® and Walkway MicroScan®, and then the identification was verified by a conventional method, Chromagar-Candida and the morphology in corn meal agar. The test of diffusion with disc was performed as per document CLSI M44-A, using commercially available disc of FZ (25µg), VZ (1µg) and discs of CS (5µg) of in-house preparation. The readings were made at 24 h of incubation, at 35°C, thereby measuring in millimeters the diameter of the inhibition zone that generated a significant reduction ≥ 50%, being the criteria of interpretation: FZ (S:≥19mm, S-DD:15-18mm, R:≤14mm), VZ (S:≥17mm, S-DD:14-16 mm, R:≤13mm), CS (S:≥11mm, R:≤10mm). All species of Candida were susceptible against the 3 antifungal assayed with the exception of an isolate of C.krusei which was resistant to FZ. The minimum, maximum and geometric media values for the susceptibility in mm were: FZ (25/38/30), VZ (26/39/31) and CS (16/21/18). The method of diffusion with disc is a useful, quick, and easy to execute and implement alternative by mycology laboratories, in order to offer an orientation regarding the proper and opportune antifungal treatment of invasive candidosis.