Isolamento no território federal do Amapá de um vírus nôvo relacionado sorològicamente aos agentes responsáveis pelas febres hemorrágicas da Argentina e da Bolívia / Isolation in the Federal Territory of Amapá of a new virus serologically related to the agents responsible for hemorrhagic fever in Argentina and Bolivia

Um nôvo membro do grupo Tacaribe, o vírus Amapari, tem sido inoculado repetidas vêzes das vísceras e sangue de Oryzomys e Neacomys, capturados em SN, Território Federal do Amapá. Um único isolamento foi obtido da urina das crias e de ectoparasitos dêsses animais. Os autores analisam algumas implicações ecológicas, bem como do ponto de vista de patogenicidade humana do referido agente. Referem, ainda, a importância da prova de FC’ como recurso de grande valor no isolamento dêste vírus, uma vez que os camundongos inoculados com os espécimens provenientes de animais infectados freqüentemente desenvolvem infecção inaparente.

A new member of the Tacaribe group, Amapari virus, has been repeatedly isolated from the viscera and blood of rodents belonging to the genera Oryzomys and Neacomys captured in the Serra do Navio region, Federal Territory of Amapá, Brazil. Single isolations were also obtained from the urine, young, and ectoparasites of these animals. The authors discuss certain aspects of the epizootiology of the above mentioned virus, with special reference to its pathogenicity in man. They also refer the importance of FC’ test as a tool of great value for isolation of this virus, since mice inoculated with specimens obtained from infected animals frequently develop inapparent infection.

Inmonopatología inducida en la rata por virus Junín / Immunopathology induced in the rat by Junin virus

La infección de la rata de 10 días de vida por vía intracerebral con la cepa XJ del virus Junín, da lugar a un cuadro encefalítico con un 100% de mortalidad. Los presentes experimentos con suero antitimocito (SAT) demuestran la participación de la respuesta celular en la patología de este grupo etario. En cuanto al tratmiento con SAT, se utilizaron tres esquemas, siendo el más efectivo el que consistió en dosis desde el día -1 hasta el día +9, y en los días +12, +14 y +16, siendo el día 0 el de la inoculación de virus. Se alcanzó un 54% de sobrevida y un retraso en el día promedio de muerte de 12 días. No hubo diferencias en el título en cerebro de los animales tratados y los controles infectados. Las ratas de 2 días de vida al recibir el virus presentan persistencia. Cuando a estos animales se les transfirieron esplenocitos de ratas infectadas a los 10 días de edad se produjo una mortalidad de 40% en los receptores. Por lo tanto puede concluirse que: a) la encefalitis en el animal de 10 días de vida es de origen inmunológico y b) la rata de 10 días presenta una población linfocitaria que al ser transferida al animal persistente, provoca enfermedad y muerte

Infeccíon intracerebral de ratones atímicos con una cepa atenuada de virus Junín / Intracerebral infection of athymic mice with an attenuated strain of junín virus

La infección del ratón lactante inmunocompetente eutímico (nu/+) con la cepa XJ del viru Junín provoca una encefalitis mortal debida a la respuesta inmune celular del huésped. Por el contrario, esa cepa inoculada en ratones atímicos (nu/nu) induce una infección persistente asintompatica. El objetivo del presente trabajo fue determinar el comportamiento de la cepa atenuada XJCl3 en el ratón nu/nu. Se inocularon por vía intracerebral (ic) 55 ratones lactantes nu/nu y 45 nu/+ con 10**3 UFP de la cepa XJCl3. Como controles se utilizaron 20 ratones nu/nu y 20 nu/+ infectar. Se observó en los ratones nu/nu y nu/+ una mortalidad similar (86%, respectivamente), mientras que no se observó mortalidad en los controles, que se mantuvieron en el mismo bioterio. Se detectaron altos títulos virales en cerebro y pulmón de los nu/nu infectados a los 7, 14, 21 y 70 días pi. Los títulos de virus en sangre fueron de 1 a 2 log más que en esos órganos. Estudios inmunohistoquímicos de cerebro mostraron antígeno viral intracitoplasmático en neuronas corticales a los 21 y 70 días pi. En el estudio histopatológico de pulmón de los nu/nu infectados se observó una neurmonbitis intersticial con focos de hemorragia a los 7 y 21 días pi. En cerebro y bazo no se detectó patología. Se muestra así que la cepa XJCl3 se comporta en el ratón lactante nu/nu en forma muy diferente a la cepa patógena XJ, siendo necesarios otros estudios para determinar cuáles son los mecanismos patogénicos involucrados

Atenuación en la virulencia para ratón lactante de una mutante de virus Junin / Attenuation of virulence in suckling mice of a mutant of Junin virus

En este trabajo se describen las características de una mutante termosensible de virus Junín, denominada C167, que se destaca por su marcada atenuación para ratón lactante. La menor patogenicidad de C167 para este huésped experimental respecto de XJC13 se manifiesta en animales de distintas edades al momento de la inoculación, que van desde los 2 hasta los 14 días de edad. Las mayores diferencias entre ambos virus se registran para el ratón de 2 días de edad, en el que los índices de letalidad, expresados como la relación DICT50/DL50, son de 4,4 y >- 580, para XJC13 y C167, respectivamente. Esta atenuación tambien se manifiesta por un sensible retraso en el día promedio de muerte en los pocos animales que mueren por inoculación de C167. Además, la mutante muestra un crescimiento sumamente restringido y lento en cerebro de ratón lactante respecto de la cepa parental, mientras que las curvas de crecimiento en células Vero para ambos virus siguen un patrón similar. Por otra parte, no se detectaron diferencias a nivel antigénico entre la mutante y la cepa parenteral a través de reacciones de neutralización cruzada con sueros hiperinmunes

Susceptibilidad del ratón de 11 días a la infección con virus Junin propagado en distintos huéspedes / Susceptibility of 11 days old mice to infection with Junin virus propagated in several different hosts

Se analizaron algunas propiedades de doce clones de virus Junín obtenidos en células Vero, comparándolos entre sí, y respecto del "stock" parental preparado en cerebro de ratón lactante. No se encontraron diferencias significativas entre los mismos y en relación al virus parental cuando se determinaron la termolabilidad, termosensibilidad y patogenicidad para ratón lactante de 2 días de edad. En cambio el índice de virulencia (UFP/DL) para el ratón de 11 días resultó entre 50 y 100 veces menor para los clones analizados. Se pudo demostrar que esta variación en la virulencia era dependiente del huésped donde multiplicó en virus ya que un solo pasaje del "stock" parental por células Vero o BHK redujo 100 a 1000 veces el índice de virulencia para el ratón de 11 días, mientras que un pasaje posterior por cerebro de ratón, revirtió el índice a valores semejantes al obtenido para el "stock" de cerebro. Significativamente cuando el virus de cerebro sufrió un pasaje por células de embrión de ratón originó una población de virulencia intermedia. La dependencia de la virulencia con el huésped se obtuvo en forma independiente de la cepa de virus utilizada y solo se manifestó entre los 10 y 12 días de edad, antes y después de ese período las curvas de mortalidad de los ratones siguieron patrones similares. Estos resultados sugieren que la presencia de antígenos histocompatibles desempeñan un rol principal en la producción de la encefalitis, lo que se manifiesta claramente a la edad de 11 días

In vitro induction of human polymorphonuclear leuckocyte damage by junin virus

Diferentes modelos experimentales, utilizando cepas patógenas de virus Junín (VJ), han reproducido la característica leucopenia con que cursa la enfermedad humana. Los mecanismos responsables de esta leucopenia son poco conocidos. Con el fin de indagar si el VJ posee algún efecto citopatógeno directo sobre leucocitos polimorfonucleares (PMN), se incubó una suspensión de PMN humanos con VJ, cepa XJCl3. Las células se obtuvieron de doadores sanos de banco de sangre y fueron separados en gradientes de Ficoll Hypaque, lográndose 98% de pureza. Se obtuvieron muestras secuenciales del sobrenadante y de las células para determinación de actividad enzimática (peroxidasa, betaglucuronidasa y lisozina), titulación de VJ y estudios morfológicos con microscopía de luz y electrónica. Se observó una pérdida gradual y constante de las granulaciones citoplásmicas entre las 2 y 10 horas post-infección (pi) disminución del número de células viables según prueba de exclusión de azul tripan, entre las 10 y 20 horas pi y un aumento de la concentración de enzimas lisosomales en el sobrenadante a partir de las 10h pi. Aparentemente no hubo replicación viral ya que luego de las 11h pi no pudo rescatarse infectividad por medio de técnicas convencionales. Para la producción de estos efectos, el virus necesita poseer su capacidad infectante intacta ya que el tratamiento previo con irradiación ultravioleta o con suero inmune anti-VJ previene cambios. Estas observaciones indican que el virus Junín infectante induce alteraciones tempranas irreversibles sobre los PMN

Actividad del virus Junin en humanos y roedores de áreas no endémicas de la provincia de Buenos Aires / Junín virus activity in human subjects and rodents of no-endemic areas of the province of Buenos Aires

Desde 1958 hasta la fecha se han comunicado alrededor de 20 000 casos humanos de Fiebre Hemorrágica Argentina (FHA) en la zona endémica; estudios realizados en los últimos años revelaron aproximadamente un 4% de infecciones subclínicas entre los habitantes de esa zona, donde es posible aislar regularmente virus Junín de cricétidos de los géneros Calomys y Akodon. El objetivo de este trabajo fue determinar si existía actividad de virus Junín en la localidad de Pila, ubicada a 180 km al sur de la ciudad de Buenos Aires y fueron de la zona conocida como endémica. Se realizó una encuesta serológica sobre 449 sueros humanos en los que se estudiaron anticuerpos anti-virus Junían por neutralización e inmunofluorescencia indirecta (IFI). Se capturaron 311 roedores silvestres en los que se intentó la búsqueda de antígeno viral por IFI en improntas de óorganos, el aislamiento de virus a partir de organos y sangre, por inoculación a ratón lactante y la detección de anticuerpos por neutralización e IFI. Se dectaron 2 sueros humanos con anticuerpos anti-virus Junín por técnicas de neutralización e IFI, en pobladores que nunca habían abandonado la localidad de Pila. En los roedores silvestres se detectó 1 suero positivo por neutralización sobre los 310 sueros estudiados. Asimismo, se pudo observar antígeno de virus por IFI en el cerebro de un Akodon azarae; coincidentemente, del mismo material se aisló un virus que fue capaz de matar ratones lactantes con cuadro neurológico y cobayos con cuadro hemorrágico, inducir anticuerpos en ratones adultos y desarrollar una acción citopatogénica en células Vero que fue totalmente neutralizado por un suero anti-Junín. Estos resultados señalan que el virus aislado en Pila, zona considerada como no endémica, posee las mismas características bológicas y anti-génicas del virus Junín. Este hecho, unido a la detección de 2 casos de infección subclínica en pobladores, demuestra la actividad del virus en la zona y sugiere el riesgo de futuros casos clínicos humanos

Antígenos inactivados de virus Junín / Inactivated Junín virus antigens

El objetivo de este trabajo fue obtener un antígeno inactivado de virus Junín capaz de inducir protección en cobayos contra el desafío con la cepa XJ prototipo. Se utilizó como antígeno, la cepa XJ-Clon 3 replicada en cerebro de ratón y se ensayaron tres métodos de inactivación: formaldehido, acetona y calor. Con formaldehido se emplearon 3 dosis: concentración final de 0,05% durante 24 h, 0,2% durante 2 n y 0,05% durante 3 h. Las curvas de inactivación demostraron que en el primer caso, el virus se inactiva a la h de exposición mientras que en el segundo se logra ya a los 30 min. Aunque el formaldehido demostró ser un inactivante eficaz, ninguno de los antígenos preparados protegió a los cobayos contra el desafío XJ. No se observó retraso significativo en la fecha de muerte ni modificación en las curvas de peso con respecto a los controles desafiados y sin inmunizar. Todos los animales murieron con el cuadro hemorrágico típico de FHA, excepto el grupo que recibió la dosis máxima de antígeno inactivado con formaldehido en el que se observó mortalidad en ausencia de cuadro hemorrágico. Los antígenos inactivados con calor (37-C 48 h) o con acetona tampoco resultaron eficaces en la protección de cobayos. Solamente los antígenos inactivados con formaldehido desencadenaron una respuesta inmune no protectora, evidenciada por los bajos títulos de anticuerpos inmunofluorescentes y fijadores de complemento; por el contrario, no se detectaron anticuerpos neutralizantes. Se discuten las posibles causas de la no protección así como los riesgos de vacunas a virus vivos y atenuados versus vacunas a virus inactivados para Fiebre Hemorrágica Argentina

Attenuation parameters for Junín virus in the newborn rat

Para caracterizar una cepa viral como atenuada es necesario contar con criterios biológicos y bioquímicos. En el caso del virus Junín la rata de 2 días de vida resultó ser un marcador biológico de atenuación con respecto a la moratalidad. En el presente trabajo se investigaron otros aspectos que amplían lo ya conocido sobre el comporatamiento de la cepa prototipo XJ y la atenuada XJC13 en este huésped experimental. En el binomio rata-virus Junín se determinó la acción de las cepas mencionadas a distintos tiempos pi sobre parámetros: a) hematológicos: recuento de leucocitos, hematíes, plaquetas y fórmula leucocitaria. b) esplénicos: Nro. de células e índice de bazo y c) respuesta inmune humoral hacia glóbulos rojos de carnero (GRC). Para la determinación de las células formadoras de anticuerpos (CFA) los animales recibieron 10**9 GRC a los 16 días de vida, realizando el ensayo a los 4 y 6 días post-inmunización, dado que en las ratas controles al día + 4 se obtiene la máxima respuesta, declinando al día + 6. La cepa XJ cualquiera sea la vía de infección produce una significativa leucocitosis con respecto a los animales normales, sin modificación en los otros parámetros hemáticos; la cepa XJC13 no provocó alteraciones (Cuadro 1). Además la cepa XJ produjo una significativa esplenomegalia con incremento del índice esplénico, no así la XJC13 (Cuadros 2 y 3). Con respecto a la respuesta humoral la cepa XJ disminuyó el número de CFA hacia GRC no observándose esta acción con XJC13 (Cuadro 4). Estas diferencias encontradas entre la cepa patógena y atenuada podrían deberse a la mayor replicación y diseminación que presenta la cepa XJ con respecto a la XJC13. La disminución en CFA con la cepa XJ podría deberse a una disfunción general del bazo o bien a una acción del virus sobre una determinada población celular que interviene en la respuesta inmune hacia GRC