Anatomical and Clinical Education in Physical and Occupational Therapy: Influence of Integration and Soft Preservation / Educación Anatómica y Clínica en Terapia Física y Ocupacional: Influencia de la Integración y la Preservación Blanda

SUMMARY: Anatomy and clinical skills are taught separately to physical and occupational therapy students. Formaldehyde is the primary chemical used to embalm donors which creates a challenge in integrating clinical skills into the anatomy curriculum. This study aimed to evaluate the integration of clinical skills into anatomical education using Imperial College London- Soft Preservation (ICL-SP) and formaldehyde embalming through the evaluation of student perceived learning and confidence. Students were invited to complete a survey after dissecting an ICL-SP and formaldehyde embalmed donors and perform clinical tests. It was easier to dissect and identify neurovascular structures on ICL-SP donors compared to formaldehyde. Clinical tests, like measuring range of motion and ligament tests were also more realistic on ICL-SP donors. The integration of clinical skills in the anatomical curriculum increased student perceived understanding of associated anatomy (p < 0.001), gave better understanding of how anatomy is important to their professions (p < 0.001) and increased motivation to learn anatomy (p < 0.001). The integration of clinical skills into anatomical education can facilitate student learning with higher confidence performing clinical skills and is complemented by the utilization of the new ICL-SP methodology instead of the traditional formaldehyde preservation.

Las habilidades anatómicas y clínicas se enseñan por separado a los estudiantes de terapia física y ocupacional. El formaldehído es el químico principal que se usa para embalsamar a los donantes, lo que crea un desafío para integrar las habilidades clínicas en el plan de estudios de anatomía. Este estudio tuvo como objetivo evaluar la integración de habilidades clínicas en la educación anatómica utilizando Imperial College London-Soft Preservation (ICL-SP) y embalsamamiento de formaldehído a través de la evaluación del aprendizaje y la confianza percibidos por los estudiantes. Se invitó a los estudiantes a completar una encuesta después de diseccionar un ICL-SP y donantes embalsamados formolizados y realizar pruebas clínicas. Fue más fácil diseccionar e identificar estructuras neurovasculares en donantes ICL-SP en comparación con los fijados en formaldehído. Las pruebas clínicas, como la medición del rango de movimiento y las pruebas de ligamentos, también fueron más realistas en los donantes de ICL-SP. La integración de habilidades clínicas en el plan de estudios anatómico aumentó la comprensión percibida por los estudiantes de anatomía asociada (p < 0,001), dio una mejor comprensión de cómo la anatomía es importante para sus profesiones (p < 0,001) y aumentó la motivación para aprender anatomía (p < 0,001). La integración de las habilidades clínicas en la educación anatómica puede facilitar el aprendizaje de los estudiantes con mayor confianza en el desempeño de las habilidades clínicas y se complementa con la utilización de la nueva metodología ICL-SP en lugar de la conservación tradicional con formaldehído.

Conservation of Organs (Heart, Brain and Kidney) of Canine by Cold-Temperature Silicone Plastination in an Animal Anatomy Laboratory in Ecuador / Conservación de Órganos (Corazón, Encéfalo y Riñón) de Canino Mediante la Técnica de Plastinación en Silicona al Frío Realizada en Laboratorio de Anatomía Animal en Ecuador

SUMMARY: For the purposes of teaching anatomy, the use of cadaver preparations is considered the most efficient way of ensuring that students retain knowledge. Nevertheless, in Ecuador the use of animal specimens in universities must comply with the internationally accepted principles of replacement, reduction and refinement (3Rs). Plastination is an alternative technique which allows organs to be conserved in the long term and complies with the 3Rs. The object of the present work was to use cold-temperature silicone plastination with Biodur® products to obtain long-lasting, easy-to-handle canine organs for use as tools for the teaching of animal anatomy. Six canine cadavers were obtained from local animal protection charities. The hearts, brains and kidneys of the cadavers were dissected and fixed with formaldehyde 10 %. They were then dehydrated with acetone at -20 °C. The specimens were impregnated with Biodur® S10:S3 (-20 °C) and finally cured with Biodur® S6. We plastinated six hearts, twelve kidneys, four brains and one encephalic slice of canine. The application of cold-temperature plastination to canine organs followed the parameters established for the conventional protocol, enabling us to obtain organs of brilliant appearance, free of odours, in which the anatomical form was preserved. Thus the technique helped us to comply with the 3Rs, as we obtained easy-to-handle teaching models to replace fresh or formaldehyde-fixed samples for the teaching-learning of the canine anatomy.

En la enseñanza de la Anatomía, el uso de preparaciones cadavéricas se considera el método que permite a los estudiantes retener el conocimiento de una forma más eficiente. No obstante, en Ecuador, el uso de especímenes animales en las universidades se debe realizar bajo el principio internacional de reemplazo, reducción y refinamiento (3Rs). La técnica de plastinación es una técnica alternativa que permite preservar órganos a largo plazo y que se adapta al principio de las 3Rs. El objetivo del trabajo fue utilizar la técnica de plastinación en silicona al frío con productos Biodur® para obtener órganos caninos duraderos y manejables útiles como herramienta para la enseñanza de la anatomía animal. Se obtuvieron seis cadáveres de caninos de fundaciones locales para la protección animal. Se realizaron disecciones de corazones, cerebros y riñones de los cadáveres caninos. Los órganos se fijaron con formalina al 10 %. A continuación, se llevó a cabo la deshidratación con acetona a -20 °C. Los especímenes fueron impregnados con S10:S3 Biodur® (-20 °C) y al final fueron curados con Biodur® S6. Se lograron plastinar seis corazones, doce riñones, cinco encéfalos y un tallo encefálico de canino. La técnica de plastinación al frío utilizada para obtener órganos de canino conservó los parámetros empleados en el protocolo convencional y permitió obtener órganos que presentaron aspecto brillante, ausencia de olores y mantuvieron la forma anatómica. Por lo que, la técnica facilitó cumplir con el principio de las 3Rs al obtenerse modelos didácticos fáciles de manipular que pueden reemplazar muestras frescas o formolizadas en el proceso de enseñanza-aprendizaje de la anatomía del canino.

Comparación de resultados entre soluciones con y sin formol como medios de fijación y conservación en corazones de Gallus gallus domesticus / Comparison of results between solutions with and without formaldehyde as means of fixation and conservation in Gallus gallus domesticus hearts

RESUMEN: La solución de formol es utilizada en las Escuelas de medicina como medio de fijación y conservación de cadáveres para el estudio de la Anatomía, a la que están expuestos estudiantes, técnicos y personal docente; es alergénica e irritante a las mucosas, y reconocida carcinogénica en humanos por International Agency for Research on Cancer (2006). El objetivo del presente estudio fue comparar resultados cuantitativos y cualitativos entre corazones de Gallus gallus domesticus, luego de aplicarles soluciones con y sin formol. Se formaron dos grupos al azar, a uno se le aplicó solución de formol al 10 %, y al otro solución libre de formol. Se realizaron medidas antropométricas, organolépticas, y de fotografía (Pretest, durante y Postest). Se elaboró base datos en Microsoft Excel (2019), y su procesamiento en SPSS Statistics 2017 Versión 25. Para variables cuantitativas se aplicó la prueba de Shapiro-Wilk, y t-Student pareada. Para variables cualitativas el test Alfa de Cronbach, Chi cuadrado (X2) y los correspondientes coeficientes de asociación (D de Somers y Tau b de Kendal). Los resultados obtenidos de las variables peso, largo, y altura presentaron diferencia estadística significativa (p-valor <0,05), siendo diferente para el ancho y grosor de la pared del ventrículo izquierdo. Las variables color y consistencia presentaron diferencias significativa (p-valor <0,05). El olor irritante a las mucosas estuvo presente durante todo el estudio con la solución con formol. A la inspección, ninguno de los dos grupos presento colonización - descomposición. Se concluye que, los órganos en experimentación que se les aplicó solución libre de formol, presentaron mejores resultados con respecto a los que se les aplico formol al 10 %.

SUMMARY: The formaldehyde solution is used in medical schools as a means of fixing and preserving corpses for the study of Anatomy, to which students, technicians and teaching personnel are exposed; it is allergenic and irritant to the mucosa, and recognized as a human carcinogen by the International Agency for Research on Cancer (2006). The objective of the present study was to compare quantitative and qualitative results between Gallus gallus domesticus hearts, after applying solutions with and without formaldehyde. Two groups were formed at random, to one a 10 % formaldehyde solution was applied, and to the other formaldehyde- free solution. Anthropometric, organoleptic, and photographic measurements were carried out (Pretest, during and Posttest). A database was prepared in Microsoft Excel (2019), and its processing in SPSS Statistics 2017 Version 25. For quantitative variables, the Shapiro-Wilk test and t-Student paired were applied. For qualitative variables the Cronbach's Alpha test, Chi square (X2) and the corresponding association coefficients (Somers D and Kendal's Tau b). The results obtained from the variables weight, length, and height presented a statistically significant difference (p-value <0.05), being different for the width and thickness of the left ventricular wall. The variables color and consistency showed significant differences (p-value <0.05). The irritating smell to the mucous membranes was present throughout the study with the formaldehyde solution. Upon inspection, neither group showed colonization - decomposition. It is concluded that the organs in experimentation that were applied formaldehyde-free solution presented better results compared to those that were applied 10 % formaldehyde.

Use of Chilean conservative fixative solution in veterinary anatomical parts / Uso de la solución conservadora chilena en piezas anatómicas veterinarias

SUMMARY: The conservation of anatomical pieces goes back five thousand years, beyond ancient Egypt for political and religious purposes. In the 12th century, with the appearance of the University, new techniques were implemented as the corpse became a necessary tool for teaching. During the last two centuries, since the year of its discovery in 1867, formaldehyde has been used as the main source for conservation. However, several years ago, anatomy laboratories around the world have resorted to new techniques and mixtures in order to reduce its use and its reported negative effects on health, such as cancer. This work shows the obtaining of anatomical pieces, by means of the Chilean Conservative Fixative Solution (SFCCh), its process, analysis and experience are described in the following pages.

RESUMEN: La conservación de piezas anatómicas se remonta a cinco mil años, más allá del antiguo Egipto por motivos políticos y religiosos. En el siglo XII, con la aparición de la Universidad, se implementaron nuevas técnicas ya que el cadáver se convirtió en una herramienta necesaria para la enseñanza. Durante los dos últimos siglos, desde el año de su descubrimiento en 1867, el formaldehído se ha utilizado como principal fuente de conservación. Sin embargo, hace varios años, los laboratorios de anatomía de todo el mundo han recurrido a nuevas técnicas y mezclas con el fin de reducir su uso y sus reportados efectos negativos en la salud, como el cáncer. En este trabajo se muestra la obtención de piezas anatómicas, mediante la Solución Fijadora Conservadora Chilena (SFCCh), su proceso, análisis y experiencia se describen en las siguientes páginas.

Comparação dos meios de preparação e preservação de membrana amniótica humana para uso no tratamento de doenças da superfície ocular / Comparison of the preparation and preservation techniques of amniotic membrane used in the treatment of ocular surface diseases

Resumo Atualmente a membra amniótica (MA) tem obtido importância devido à comprovada capacidade de reduzir inflamação, auxiliar a cicatrização e epitelização, possuindo propriedades antimicrobianas e antivirais, além de baixa imunogenicidade. As indicações de seu uso na oftalmologia têm aumentado muito nas duas últimas décadas. Objetivo: Descrever a estrutura básica e as propriedades biológicas da MA em relação aos componentes da sua matriz extracelular e fatores de crescimento, as consequências de diferentes técnicas empregadas na sua preservação e esterilização, métodos para remoção do epitélio e a comparação dos custos dos diferentes meios de conservação atualmente empregados. Métodos: Pesquisa nas bases de dados do Portal da Biblioteca Virtual em Saúde (BVS), Pubmed, Cochrane, Scielo e Lilacs com as palavras-chave: membrana amniótica, transplante, reconstrução da córnea, doenças da conjuntiva. Resultados: A literatura é vasta na descrição dos efeitos de diversos agentes e técnicas na preparação da MA, dentre elas sua preservação, esterilização e desepitelização. A membrana desnuda tem sido a escolha para a reconstrução da superfície ocular, pois facilita a cicatrização. Em relação aos agentes conservantes, o glicerol é o meio mais utilizado mundialmente pelo baixo custo e facilidade de manuseio. Conclusão: A comparação das diversas técnicas nos guia na elaboração de protocolos de preparo da MA para uso oftalmológico. A membrana desnuda facilita a cicatrização em relação a com células epiteliais. O glicerol é o meio de conservação mais utilizado pelo baixo custo e facilidade de manuseio.

Abstract Currently, the amniotic membrane (AM) has obtained importance due to its ability to reduce inflammation, helping in the healing and epithelialization processes, having antimicrobial and antiviral properties and low immunogenicity. Its indications in ophthalmology have increased considerably in the past two decades. Objective: To describe the basic structure and biological properties of the AM, the components of the extracellular matrix and growth factors, the consequences of different techniques used in its preservation, and sterilization methods for the epithelium removal. To compare the costs of the different preservation solutions currently employed. Study design: literature review. Methods: Research in BVS databases, PubMed, Cochrane, Scielo and Lilacs with keywords: amniotic membrane transplantation, corneal reconstruction, conjunctival diseases. Results: The literature is vast in describing the effects of different agents and techniques used in the preparation of MA, including its preservation, sterilization and desepithelization. The naked membrane is the choice to reconstruct the ocular surface, as it facilitates the healing course. Regarding the preservatives, glycerol is the most used worldwide due its low cost and easy handling. Conclusion: Comparing different techniques guides us in developing a MA preparation protocol for ophthalmic use. The naked membrane facilitates the healing process compared with the presence of epithelial cells. The glycerol is the most used preservation method because of its low cost and easy handling.

Preparación de hemisferios cerebrales para disección de tractos / Preparation of cerebral hemispheres for tracts dissection

Desde la antigüedad se han desarrollado técnicas para el estudio del cerebro con fines didácticos o neuroquirúrgicos. Hacia 1934 Josef Klingler desarrolla una técnica de preparación de hemisferios cerebrales que basada en la fijación con formalina y el congelamiento para aislar los tractos cerebrales. El objetivo de la presente artículo ha sido analizar los métodos de preparación utilizados para la disección de tractos en cerebros humanos y de animales. Se realizó una revisión de la literatura en las bases de datos Web of Science, Scopus, Pubmed, Medline y Scielo, utilizando como descriptores: Disección, Cerebro, Tracto, con el operador booleano "AND" entre ellos, en los idiomas inglés y español, hasta junio de 2018. Fueron seleccionados 26 documentos, para el análisis se determinaron las variables: espécimen, número de hemisferios cerebrales, concentración de formalina, tiempo de fijación, temperatura, tiempo de congelamiento y tractos identificados. En la literatura seleccionada, un total de 410 hemisferios cerebrales fueron analizados, 372 de humanos y 38 de animales; 330 fueron conservados en formalina al 10 %, 20 en formalina al 5 % y el resto en otras concentraciones. El tiempo de fijación fue variable entre 10 y 180 días, así como la temperatura y tiempo de congelación (-10 ºC y -20 ºC, entre 8 y 30 días). En todos los casos se reportó que, en su totalidad o parcialmente, los fascículos cerebrales de asociación fueron aislados. En la preparación de hemisferios cerebrales para disección de tractos, Ludwig & Klingler (1956) recomiendan que en la fijación de los especímenes se utilice formalina al 5 %, sin embargo, el 80 % de los hemisferios utilizados fueron fijados en formalina al 10%, y en esta concentración, el tiempo de fijación, temperatura y tiempo de congelación fue variable, lográndose, en todos los casos analizados, la disección parcial o total de los tractos.

Since ancient times, techniques for the study of the brain have been developed for didactic or neurosurgical purposes. By 1934, Josef Klingler developed a cerebral hemisphere preparation technique based on formalin fixation and freezing to isolate the cerebral tracts. The aim of this article was to analyze the preparation methods used for tracts dissection in human and animal brains. A review of the literature using Web of Science, Scopus, Pubmed, Medline and Scielo databases, with the following descriptors: Dissection, Brain, Tract, with the boolean operator "AND" among them, also in spanish, until June 2018. Twenty-six documents were selected, and we analized the following variables: specimen, number of cerebral hemispheres, formalin concentration, fixing time, temperature, freezing time and tracts. In the selected literature, a total of 410 cerebral hemispheres were analyzed, 372 from humans and 38 from animals; 330 were preserved in 10 % formalin, 20 in 5 % formalin and the rest in other concentrations. The fixation time was variable between 10 and 180 days, as well as the temperature and freezing time (-10 ºC and -20 ºC, between 8 and 30 days). In all cases it was reported that, in whole or in part, the cerebral fascicles of association were isolated. In the preparation of cerebral hemispheres for dissection of tracts, Klingler recommend that 5 % formalin for the fixation of specimens; however, 80 % of the hemispheres used were fixed in 10 % formalin, and in this concentration, the time of fixation, temperature and time of freezing was variable, achieving, in all the cases analyzed, the partial or total dissection of the tracts.

Conceptos fundamentales del protocolo modificado de plastinación a temperatura ambiente con silicona, con posterior pigmentación, y su aplicación para la conservación de placenta humana / Fundamental concepts of the modified room temperature plastination protocol with silicone, with subsequent pigmentation, and its application for the conservation of human placenta

RESUMEN: El auge experimentado en los últimos años en la aplicación de las técnicas anatómicas para la conservación de muestras anatómicas está directamente relacionado con la necesidad de preservación de los escasos especímenes con que cuentan las instituciones universitarias en relación a aumentar el tiempo de utilización del mismo. En este sentido, la plastinación es la técnica anatómica que más se destaca y que permite preservar por tiempo indeterminado, sin toxicidad, las preparaciones anatómicas. Presentamos el protocolo modificado de plastinación a temperatura ambiente con silicona, desarrollado en el Laboratorio de Plastinación y Técnicas Anatómicas de la Universidad de La Frontera, con el objetivo de aplicarla a la conservación de una placenta humana, la cual posteriormente fue pigmentada para otorgarle un aspecto más cercano a lo real.

SUMMARY: The surge experienced in recent years in the application of anatomical techniques for the conservation of anatomical samples is directly related to the need to preserve the few specimens that university institutions have in relation to increase the time of use of the same. In this sense, the plastination is the anatomical technique that stands out and that allows to preserve indefinitely, without toxicity, the anatomical preparations. We present the modified plastination protocol at room temperature with silicone, developed in the Laboratory of Plastination and Anatomical Techniques of the University of La Frontera, with the aim of applying it to the conservation of a human placenta, which was subsequently pigmented to give it an appearance closer to the real.

Conservation of body sections and organs of the narrownose smooth-hound, Mustelus schmitti (Pisces, Chondrichthyes), by silicone injection at room temperature to be used in comparative anatomy learning / Conservación de secciones corporales y órganos de gatuzo, Mustelus schmitti (Pisces, Chondrichthyes), por inyección de silicona a temperatura ambiente para ser utilizados en el aprendizaje de anatomía comparada

Comparative Anatomy deals with the study of the ontogenetic and phylogenetic changes of the vertebrates, requiring complementing the theoretical aspects with the observation of structures in specimens belonging to different taxonomic groups. The aim of the present study was to test the injection of silicone at room temperature in organs and trunk sections of Mustelus schmitti as an alternative to the plastination technique. Samples consisted in brain, eyes, heart, proximal end of the ventral aorta, digestive tract, spleen, pancreas, kidneys, testis and cross body section at a pre-caudal level. Material was fixed with formalin (10-5 %), dehydrated with growing concentrations of isopropyl (30 % - 50 % - 70 % - 90 % - 100 % - 100 %), impregnated with diluted commercial silicone and cured at room temperature. The whole process took 66 days. The brain was the unique organ that could not undergo the complete procedure because it did not resist the injection of silicone. The other pieces resulted in materials that characterised by being off-colour, dry, semi-flexible, lightweight, odourless, and non-toxic. They showed no signs of fungal colonization or bacterial degradation after two years of being obtained. Shrinkage was observed, which ranged among 2-25 % for total length, and from 5-26 % for maximum width (mean values: 14 and 15 %, respectively), being testicle the organ that suffered greater shrinkage in both dimensions. The degree of contraction in length and width for each of the samples was generally similar (difference £ 3 %), indicating that not striking deformation occurred. Deformation was observed only for the trunk section, eye, stomach, pancreas and valvular intestine. The technique did not affect the morphology of the structures, allowing the correct visualization of all the basic features required to recognise them. We conclude that this simple and economic method is an adequate alternative to be implemented for the conservation of small-size materials with educational purposes in Comparative Anatomy courses.

La Anatomía Comparada abarca el estudio de los cambios ontogenéticos y filogenéticos sufridos por los vertebrados, requiriendo complementar los aspectos teóricos conla observación de estructuras en especímenes pertenecientes a los distintos grupos taxonómicos. El objetivo del presente trabajo fue testear la inyección de silicona a temperatura ambiente en órganos y secciones corporales de Mustelus schmitti como alternativa a la técnica de plastinación. Las estructuras seleccionadas fueron encéfalo, ojos, corazón, extremo proximal de aorta ventral, tracto digestivo, bazo, páncreas, riñón, testículo y sección transversal del cuerpo a nivel pre-caudal. El material se fijó con formaldehído (10-5 %), se deshidrató con concentraciones crecientes de alcohol isopropílico (30 % - 50 % - 70 % - 90 % - 100 % - 100 %), se impregnó con silicona comercial diluida y se curó a temperatura ambiente. El proceso completo duró 66 días. El encéfalo fue el único órgano que no resistió el tratamiento debido a su friabilidad. Las demás piezas dieron como resultado materiales incoloros, secos, semi-flexibles, livianos, inodoros y no-tóxicos. No se evidenciaron síntomas de colonización fúngica ni bacteriana luego de dos años de obtenidos. Se observó contracción del material que osciló entre 2-25 % para la longitud total, y entre 5-26 % para el ancho máximo (promedios: 14 y 15 %, respectivamente), siendo el testículo el órgano que mayor disminución registró en ambas dimensiones. El grado de contracción en longitud y en ancho fue generalmente similar para cada una de las muestras (diferencia £ 3 %), indicando que no ocurrió una deformación notoria. Solo se observó deformación en la sección corporal, ojo, estómago, páncreas e intestino valvular. La técnica no afectó la morfología de las estructuras, permitiendo la correcta visualización de todas las características diagnósticas requeridas para su reconocimiento. Concluimos que este método simple y económico representa una alternativa adecuada para ser implementada en la conservación de materiales de pequeño tamaño con fines educativos en los cursos de Anatomía Comparada.

Culture of human dental pulp cells at variable times post-tooth extraction

Abstract The aim of this study was to investigate the viability of human dental pulp cells from extracted teeth kept at standard room temperature and atmospheric pressure for different periods of time. Twenty-one healthy permanent teeth were used. They were divided into five groups according to the expected time from extraction to processing. One group was tested immediately after extraction; the other groups were each tested at one of the following time points: 30 minutes, 1 hour, 2 hours, and 5 hours post-extraction. Cell morphology was analysed by light microscopy; cell proliferation was analysed using MTT assay and by counting the viable cells in a haemocytometer. Similar results were observed in all groups (p < 0.05). A delay of up to five hours for tooth processing and tissue collection does not preclude the establishment of dental pulp cell cultures, affect the morphology of these cells, or reduce their proliferative potential.

Estabelecimento de protocolo para armazenamento de pele autógena refrigerada / Establishment of a protocol for storage of refrigerated autologous skin

Introdução: Enxertos de pele autólogos são utilizados em tratamento de pacientes queimados. Esses enxertos podem ser armazenados e preservados, desde que o processo de armazenamento seja realizado com rígido controle de qualidade, para garantir a redução dos riscos de infecção. Métodos: Foi realizado um estudo de coorte retrospectivo na Unidade de Queimados do Hospital das Clínicas de São Paulo no período de fevereiro de 2015 a julho de 2016, em que foi estabelecido um protocolo para armazenamento de pele refrigerada com controle de coleta, preservação, embalagem e registro de todos os processos. Para garantia de qualidade, foram coletadas biópsias dos enxertos para microbiologia pré e pós-armazenamento e realizado um estudo transversal de prevalência de contaminação pré e pós-estocagem. Resultados: Os pontos críticos encontrados foram inadequação de embalagem, ausência de registros de processos, falta de coleta de biópsias para microbiologia e falhas no descarte. A maior parte das amostras estava contaminada tanto pré como pós-estocagem (84,2%). Apenas dois pacientes apresentaram microbiologia estéril no pré e contaminada no pós, porém foram encontrados germes da pele do tipo gram+. Conclusão: Foi estabelecido um método promissor de armazenamento de pele refrigerada que necessita alguns pequenos ajustes para adequação ao controle de qualidade.

Introduction: Autologous skin grafts are used for treatment of burn patients. These grafts can be stored and preserved, as long as the storage process is performed with strict quality control to reduce the risk of infection. Methods: A retrospective cohort study was conducted in the Burn Unit of the Hospital das Clínicas de São Paulo from February 2015 to July 2016. During this period, a protocol was established to store refrigerated skin, with control of collection, preservation, and packaging, and recording of all processes. To ensure quality, graft biopsies were collected for pre- and poststorage microbiology testing and a cross-sectional study for contamination was performed. Results: Critical deficiencies included inadequate packaging, lack of processing records, lack of biopsies for microbiology testing, and failure to discard specimens. Most of the samples were contaminated before and after storage (84.2%). Only two samples were sterile before storage but became contaminated after storage, with growth of Gram-positive skin bacteria. Conclusion: A promising method for the storage of refrigerated skin was established, but requires minor adjustments in quality control.

Corrosion casting, a known technique for the study and teaching of vascular and duct structure in anatomy / Inyección corrosión, una técnica conocida para el estudio y enseñanza de ductos y estructuras vasculares en anatomía

Teaching and learning anatomy, as a process, has changed. Fresh cadavers were once used as a tool for the student to approach the human body in order to overcome theoretical knowledge and gain applied expertise. Today, techniques such as corrosion casting are known to be a more effective way of achieving optimal results with the students. This paper examines a method to apply this technique to an organ using different polymers. The concentrations for acrylic, epoxy resin, polyester resin, and room temperature vulcanization (RTV) silicone are described, as well as the corresponding diameter of the duct to be injected with each one. A variety of specimens obtained using this technique, their qualities and characteristics are presented. The results of using these procedures while involving the students, showed increased sense of responsibility, dedication and awareness, which led them to take the class more seriously and enjoy the process of learning. Additionally, the specimens left by the students will help future classes reduce the number of specimens needed.

El proceso de aprendizaje y enseñanza en anatomía ha cambiado recientemente, el cadáver fue la primera herramienta que permitía al estudiante una aproximación practica al cuerpo humano, facilitando que este se sobrepusiera al conocimiento teórico adquirido en el aula, y desarrollara experticia aplicada. Hoy en día, técnicas como la inyección corrosión son conocidas por lograr mejores resultados con los estudiantes. Este trabajo presenta un método para aplicar esta técnica a un órgano, mediante el uso de diferentes polímeros. Las concentraciones adecuadas de acrílico, resina epoxica, resina poliéster, y silicona RTV (room temperature vulcanization) son descritas, así como el diámetro sugerido para el uso de cada polímero. Se presenta una variedad de especímenes obtenidos mediante esta técnica, así como sus cualidades y características. Al integrar a los estudiantes en el proceso de creación de los especímenes, estos demuestran mayor sentido de responsabilidad, dedicación y autoconciencia, generando mayor compromiso, y entusiasmo con la clase y el proceso de aprendizaje. Adicionalmente, los especímenes producidos por ellos, serán de gran utilidad para clases a futuro.

Diaphanization: a standardized protocol for non-fetal tissue preservation / Diafanización: un protocolo estandarizado para la preservación de tejido adulto

In response to the arising difficulty of dissection use during anatomy courses, medical schools have been forced to research alternative teaching methods. These are meant to help students develop three dimensional mental images of the human body and increase spatial reasoning, thus improving the learning process of human morphology. One of those methods, used at the Universidad de los Andes is the Diaphanization process. This technique is a well-known method for specimen preservation, used as an anatomy research and teaching tool. Even though it is frequently used, finding a standardized protocol in indexed journals is not possible, which hinders the use of the technique. The standardization of an updated protocol is a need in order to continue exploiting the maximum educational capacity of the specimens used during classwork. The process used at the Universidad de los Andes for non-fetal tissue preservation by Diaphanization is described, with a detailed explanation of its five main stages: Injection, Fixation, Dehydration, Bleaching (or Maceration) and Final preservation. The final result should be an organ preserved in an acrylic box which allows clear three dimensional visualization of anatomical structures that can be used for the study and description of general anatomy and vascular structure. It also helps with spatial reasoning and represents little to no biological risk, leading to a new level of anatomical teaching and experimenting. Several specimens obtained at our laboratory through this technique are presented.

Como respuesta a la dificultad del uso de disección como una herramienta en el curso de anatomía, las escuelas de medicina se han visto forzadas a investigar y desarrollar métodos alternativos que la reemplacen. Estos pretenden estimular el desarrollo de la percepción tridimensional de los estudiantes, logrando mejor racionamiento espacial, y así, mejorando el proceso de aprendizaje de la morfología humana. Uno de estos métodos, en uso en la Universidad de los Andes, es el proceso de diafanización. Esta técnica es ampliamente conocida en el ámbito de preservación de tejidos, y empleada en investigación y educación. Aún con su uso frecuente, un protocolo estandarizado que la describa no está disponible en la literatura indexada, lo cual limita su uso. La estandarización de un protocolo actualizado es necesaria para permitir el continuo uso de esta técnica. Se describe el proceso de preservación de tejido adulto mediante la diafanización, con una explicación detallada de los 5 pasos que la componen: Inyección, Fijación, Deshidratación, Macerado y Preservación final. El resultado es un órgano inmerso en glicerina en un contenedor de acrílico que permite una visualización tridimensional de las estructuras anatómicas del espécimen, que puede ser empleado por los estudiantes para su estudio, y permite una descripción de la anatomía general del modelo y su estructura vascular. Adicionalmente incrementa el razonamiento espacial de los estudiantes, y no presenta ningún riesgo biológico. Se presentan una variedad de especímenes de características particulares obtenidos mediante la aplicación de esta técnica.

Combinación de osteotecnia más conservación de músculos en montaje único de Canis lupus familiaris / Combination of osteotecnia and preservation of muscles in unique assembly of Canis lupus familiaris

Para la enseñanza de la Anatomía siempre se está en búsqueda de alternativas para la conservación y presentación de preparados anatómicos, realizando variaciones de diferentes técnicas, que permitan presentar especímenes con fines didácticos, para lograr un mejor aprendizaje, comprensión y motivación por la Morfología. El objetivo de este trabajo fue utilizar una combinación de osteotecnia más la conservación de músculos, en un montaje único que permite estudiar en una mitad el esqueleto, y en la otra, la musculatura superficial de un Canis lupus familiaris. Se utilizó un cadáver del especimen fijado por congelación, luego se realizó una limpieza general, extracción de vísceras y retiro de tegumentos previo al corte sagital. En la mitad derecha se realizó la limpieza de los huesos mediante ebullición combinada con métodos mecánicos y posteriormente, el desengrasado y blanqueado de ellos previo al ensamble del esqueleto. Para la conservación de músculos la mitad izquierda del cuerpo fue sumergida en "solución fijadora conservadora chilena" libre de formol, por 31 días, tras lo cual se realizó la disección de fascias y tejido graso para delimitar músculos superficiales. Una vez tratado cada segmento, se procedió al montaje combinado de las mitades en posición anatómica del espécimen, usando suturas desde craneal a caudal, sobre pedestales. La técnica utilizada de montaje combinado proporciona un material anatómico-didáctico flexible, de bajo costo y escasa toxicidad, con la potencialidad de permitir reforzar de manera interactiva el aprendizaje significativo de los estudiantes, facilitando la observación y estudio de la topografía de huesos y músculos.

The teaching of anatomy is always in search of alternatives for the preservation and presentation of anatomical preparations, doing variations of different techniques that allow to present specimens with didactic goals so as to get a better learning, comprehension and motivation for morphology. The purpose of this study was to use a combination of osteotecnia and the preservations of muscles in a unique assembly allowing to study half of the skeleton and, in the other, the superficial muscles of a Canis lupus familiaris. A corpse of the specimen was used, fixed by freezing; then, a general cleaning was carried out, extraction of viscera and removal of teguments before the sagittal cut. On the right half, using boiling combined with mechanical methods and, subsequently, their degreasing and bleaching, prior to the skeleton's assembly carried out the cleaning of the bones. For the preservation of muscles, the left half of the body was submerged in a "Chilean preserving and fixative solution" free from formaldehyde for 31 days, following the dissection of fascia and fatty tissue to delimit superficial muscles. Once each segment is treated, the combined assembly of the halves is made in anatomical position of the specimen, using stitches from cranial to caudal, over pedestals. The utilized technique of combined assembly provides a flexible didactic-anatomical material, of low-cost and low-toxicity, with the potentiality to allow reinforcing in an interactive way the meaningful learning of the students, making the observation easier as well as the study of topography of bones and muscles.

Avaliação de diferentes fixadores na preservação das características histológicas de pele de orelha de cães / Evaluation of different fixatives for histological studies in canine ear skin

Os fixadores biológicos desempenham um papel importante na qualidade final da histologia. Na rotina veterinária, a biópsia de pele é um procedimento comum e a escolha do fixador é primordial para resultado final adequado. Os fixadores mais usados são à base de formalina, ainda que sejam tóxicos, cancerígenos, de baixa penetração e de fixação lenta. Mesmo assim, não existe um fixador ideal que substitua as suas qualidades. O objetivo deste trabalho foi avaliar qualitativamente a preservação das características histológicas de pele de cão utilizando diferentes fixadores de tecidos incluídos em parafina, cortados e corados pela hematoxilina-eosina. Utilizou-se uma caneta Punch de 4 milímetros para coletar amostras de pele de orelha em seis cadáveres de cães. Após coleta, os tecidos foram fixados em: (1) Bouin, durante seis horas; (2) Carnoy, durante quatro horas; (3) formaldeído tamponado 10% durante 24 horas, todos sob refrigeração (4ºC). Posteriormente, os tecidos foram processados, cortados e corados em hematoxilina e eosina. As lâminas foram avaliadas, às cegas, por quatro patologistas diferentes, que consideraram aspectos qualitativos a seguir: (1) qualidade da coloração; (2) preservação das características histológicas; e (3) preservação dos limites citoplasmáticos utilizando a escala de LIKERT de pontuação para cada lâmina. O fixador com a maior média de pontuação em todos os itens foi o formol tamponado com 3,76 pontos, seguido pelo Bouin (3,39) e pelo Carnoy (2,52). O formol pode trazer riscos à saúde do profissional que rotineiramente o manuseia, portanto se faz necessária a busca por fixadores com as mesmas qualidades, mas menos nocivos à saúde.(AU)

The biological fixatives have an important role in the final histology quality. In veterinary, routine skin biopsy is a common procedure and the choice of fixative is essential for the final result. The most common fixative is Formalin, even though it is toxic, carcinogenic, and has low and slow penetration. Still, there isn't a fixer which can replace the qualities of formalin. The aim of this study was to evaluate qualitatively the preservation of the histological features of dog skin using different tissue fixative embedded in paraffin, sectioned and stained with hematoxylin - eosin. We used a 4 mm punch pen to collect ear skin samples in six dog cadavers. After collection, the tissues were fixed in: (1) Bouin for 6 hours; (2) Carnoy for 4 hours; (3) 10% buffered formaldehyde for 24 hours, all under refrigeration (4 ° C). The tissues were then processed, sectioned and stained with hematoxylin and eosin. The slides were evaluated blindly by four different pathologists who considered the qualitative aspects below: (1) quality of coloring; (2) preservation of the histological characteristics; (3) preservation of cytoplasmic boundaries using a Likert scale score for each blade. The fixative with the highest mean score on all items was buffered formalin with 3.76 points followed by Bouin (3.39) and Carnoy (2.52). Formaldehyde can bring health a risk of professional routine handling, so it is necessary to search for a biological fixative with the same qualities being less harmful to health.(AU)

Preservación de la glándula submandibular en las disecciones linfonodulares de cuello / Preservation of the submandibular gland in lymph node neck dissections

Introducción: el desarrollo acelerado de la oncología ha condicionado recientes modificaciones terapéuticas que pudieran incluir la preservación de la glándula submandibular en las disecciones de cuello. Objetivos: identificar los criterios para preservar quirúrgicamente la glándula submandibular y exponer los fundamentos científico-teóricos que permitan plantear una modificación actual a la técnica de disección de cuello para conservar esta glándula. Métodos: se realizó una búsqueda exhaustiva retrospectiva de artículos publicados en las bases de datos electrónicas Pubmed, Medline, Cochrane e Hinari desde enero de 2009 hasta julio de 2014, en las revistas Head and Neck, Otolaryngology and Head and Neck Surgery y The Laryngoscope con los términos: preservación glándula submandibular, criterios oncológicos conservar glándula submandibular, modificaciones disecciones linfonodulares cervicales, sin restricciones idiomáticas. Se incluyeron solo los artículos publicados durante los últimos cinco años, cuyo material y método reflejara: estudios poblacionales, disecciones de cuello como tratamiento oncoespecífico y confirmación anatomo-patológica para concluir el diagnóstico. Análisis e integración de la información: de 3 estudios que conformaron una metapoblación de 829 pacientes, donde se preservó la glándula submandibular en un grupo de pacientes con tumores de cavidad bucal y orofaringe y disecciones de cuello simultáneas, se evidenció que no hubo diferencias en cuanto a recaída local, regional, a distancia ni sobrevida al compararlos con otro grupo de pacientes donde la disección de cuello no incluyó este proceder. Conclusión: los estudios coinciden en el bajo riesgo de metástasis ocultas a la glándula por carcinomas escamosos de cabeza y cuello, xerostomía posquirúrgica y factibilidad de la técnica quirúrgica como fundamentos para preservar la submandibular, de igual manera en que la ausencia de terapia oncoespecífica anterior, linfonódulos positivos en el subnivel IB y relación entre el tumor primario y la glándula son criterios necesarios en la selección de candidatos para realizar este proceder(AU)

Introduction: as a result of the swift development of oncology, some therapeutic modifications have recently been considered, among them the potential preservation of the submandibular gland in neck dissections. Objectives: identify the criteria to surgically preserve the submandibular gland and expound the theoretical scientific foundations allowing to set forth a modification to neck dissection technique with a view to preserving this gland. Methods: an exhaustive retrospective search was conducted of papers published in the databases Pubmed, Medline, Cochrane and Hinari from January 2009 to July 2014. The journals surveyed were Head and Neck, Otolaryngology and Head and Neck Surgery, and The Laryngoscope. The search terms used were submandibular gland preservation, oncological criteria preserve submandibular gland, modifications cervical lymph node dissections, without any language restrictions. Only papers published in the last five years were included. On the other hand, their materials and methods section should make reference to population studies, neck dissection as an onco-specific treatment, and anatomopathological confirmation of the diagnosis. Data analysis and integration: three studies with a metapopulation of 829 patients referred to a group of patients with oral and oropharyngeal tumors and simultaneous neck dissections whose submandibular gland had been preserved. These studies do not report any difference as to local, regional or distant relapse or survival when compared with another group of patients in whom neck dissection did not include such a procedure. Conclusion: all studies referred to the following aspects: the low risk of occult metastasis to the gland from head and neck squamous cell carcinomas, postsurgical xerostomia, and the feasibility of the surgical technique as foundations for the preservation of the submandibular gland. They also referred to the fact that absence of prior onco-specific therapy, positive lymph nodes in sublevel IB, and the relationship between the primary tumor and the gland are all required criteria for the selection of candidates for the procedure(AU)

Nuevo método de inclusión en resina poliéster P-4 para cortes anatómicos / New method for P-4 polyester resin inclusion for anatomical slices

La resina poliéster (P-4) se ha utilizado en varias técnicas anatómicas, gracias a su bajo costo, fácil manejo y obtención. Entre ellas la inclusión, que se realiza en capas dejando muestras relativamente opacas y de un grosor que no permite ver claramente las estructuras. También encontramos la plastinación de cortes anatómicos, técnica más sofisticada, compleja y de un alto costo económico. El objetivo fue idear un método de inclusión para cortes anatómicos, que mejore la calidad de la técnica clásica. Se utilizaron cortes anatómicos de segmento distal de miembro inferior humano y de un grosor promedio de 0,5 cm fijados con acetona y cortes de encéfalo de vacuno de igual grosor, fijados con formalina acuosa al 10%. La totalidad de las muestras son deshidratadas en acetona a -17 °C. Posteriormente se impregnan e incluyen en resina poliéster (P-4) a temperatura ambiente. Se obtuvieron muestras con una buena transparencia y solidez que permite ver en detalle muchas estructuras, similar a la obtenida con la técnica de plastinación en resina. Mediante un método relativamente fácil de realizar es posible obtener piezas anatómicas de muy buena calidad.

The polyester resin (P-4) has been used in several anatomical techniques, due to its low cost, easy handling and elicit. Among them, the inclusion, which is performed on samples leaving relatively opaque layers and an important thickness which does not allow a clear vision of the structures. There is also the plastination of anatomical slices with this polymer which although, technically sophisticated and complex has a high economic cost. The objective is to develop a method for anatomical section inclusion, improving the quality of classic technique. Distal segment of human lower limb anatomical slices were used with an average thickness of 0.5 cm fixed with acetone and bovine brain slices equal thickness, fixed with 10% aqueous formalin. All the samples are dried in acetone at -17 °C. Subsequently, they are impregnated and included on polyester resin (P-4) at room temperature. Samples were obtained with good transparency and solidity that allows observation of details of many structures, similar to that obtained with the resin plastination technique. Using this relatively easy method we can get very good quality anatomical samples.

Plastination technique in laboratory rats: an alternative resource for teaching, surgical training and research development / Técnica de plastinación en ratas de laboratorio: un recurso alternativo para la enseñanza, entrenamiento quirúrgico y desarrollo de la investigación

Today, alternatives methods are developed for the use of laboratory animals for teaching, research and surgical training. In our work we present a novel alternative to the use of rats, by developing a technique of plastination at room temperature. High-quality rat preparations from the anatomical dissection point of view were obtained, in order to indefinitely preserve them dry, the thoracic and abdominal organs conserve its natural volume and shape, maintaining their texture and color. No odors or hassles and toxic vapors of conventional preserving agents were found. This technique allows the collection of dry, completely biosafe and durable specimens in a short time and with excellent quality. Plastination in laboratory rats complements undergraduate and postgraduate anatomy studies perfectly. Also, radiology and surgery may benefit from this technique.

En la actualidad, se desarrollan alternativas para el uso de animales de laboratorio para enseñanza, investigación y entrenamiento quirúrgico. En nuestro trabajo presentamos una novedosa alternativa para el uso de ratas, a través del desarrollo de una técnica de plastinación a temperatura ambiente. Se obtuvieron preparados de alta calidad desde el punto de vista de la disección anatómica, con órganos torácicos y abdominales que conservaron su volumen, forma, textura y color. Además, los especímenes carecen de olores y no emiten vapores tóxicos, debido a la ausencia de agentes conservantes convencionales. Esta técnica permite desarrollar especÌmenes secos de excelente calidad, completamente bioseguros y duraderos, en muy poco tiempo. La plastinación en ratas de laboratorio complementa los estudios de anatomía de pregrado y postgrado perfectamente. Además, las áreas de radiología y cirugía también pueden beneficiarse de esta técnica.

Método de recuperación para piezas anatómicas del sistema nervioso central / Recovery method for anatomical pieces from the central nervous system

El material anatómico del sistema nervioso central es cada vez más difícil de obtener. A pesar de estar fijado, es muy lábil y al ser expuesto a diversas condiciones ambientales durante las actividades docentes, se va deteriorando, resecándose, adquiriendo una consistencia rígida y un aspecto oscuro que finalmente hace difícil el reconocimiento de estructuras. De la misma manera, cuando obtenemos una pieza de un cadáver con larga data de fallecido, nos podemos encontrar con un encéfalo que por lo reseco de su estado, no presta mayor utilidad. El objetivo de esta técnica es recuperar estas muestras, para que puedan ser utilizadas convenientemente en el estudio anatómico. Se usaron distintos segmentos de encéfalo, incluidos algunos contaminados por hongos y otros obtenidos de cadáveres antiguos. Los materiales utilizados fueron, agua oxigenada, agua destilada, formalina y recipientes plásticos. Se comienza limpiando manualmente las muestras de restos de polvo y cuerpos extraños que se encuentren en su superficie. Se continúa con baños en agua oxigenada, intercalando con rehidrataciones en agua destilada, hasta obtener el color y textura deseados que permitan distinguir macroscópicamente estructuras de la muestra. Posteriormente se refuerza la fijación sumergiéndolas en formalina, para luego conservarlas en forma indefinida, humedecidas con este fijador en bolsas plásticas selladas y dentro de caja plásticas tapadas. Otras muestras fueron plastinadas posteriormente. Al finalizar la técnica la mayoría de las muestras se recuperaron notoriamente, permitiendo reconocer estructuras que por su deterioro era imposible apreciar con anterioridad. En conclusión, este método permite recuperar y darle uso a muestras que estaban prácticamente desechadas.

The anatomical material of the central nervous system is increasingly difficult to obtain. Despite being fixed, is very labile and when exposed to various environmental conditions during teaching, becomes deteriorated and drier, acquiring a rigid consistency and darker appearance, which eventually makes it difficult to recognize structures. At the same time, when we obtain a piece of a long-standing cadaver, we can come across a brain so dry, that its state does not provide any use. The aim of this technique was to recover these samples so they can be conveniently used for anatomical studies. We used various brain segments, including some contaminated with fungi and others obtained from old cadavers. The materials used were, hydrogen peroxide, distilled water, formaldehyde and plastic containers. We begin by manually cleaning the samples from any dust and foreign bodies that could be found on their surface. Then, continues with hydrogen peroxide baths, interspersing with re-hydration in distilled water, until we obtain the desired color and texture that allows us to macroscopically distinguish the structures. Subsequently, we reinforce fixation by immersing in formaldehyde. Subsequently, we keep them moistened with this fixation agent in sealed plastic bags indefinitely, inside covered plastic boxes. Other samples were subsequently plastinated. After we applied this technique, most of the samples were noticeably recovered, allowing recognition of structures that, previously because of their deterioration, were impossible to see. In conclusion, this method allows the recovering and gives use to samples that had been previously discarded.

Avaliação d qualidade do DNA obtido de amostras preservadas em parafina / Quality evaluation of DNA from samples preserved in parafin

A obtenção de um material genético íntegro e com concentrações satisfatórias para a amplificação de de uma determinada sequência são os principais desafios para o processamento de amostras de tecido preservados em parafina. O presente estudo teve como objetivo comparar três diferentes protocolos de extração de DNA que têm em comum entre si o princípio de extração por silica-gel. Vinte e sete amostras de tecidos tireoidianos preservados em parafina foram processadas por meio de cortes em triplicata de 20um. O método A utilizou tr~es horas na etapa de digestão do tecido, os métodos B e C utilizaram 16 horas para a digestão, sendo que o último utilizou diferentes solventes para reidratar o tecido e solução de fenol-clorofórmio-álcool isoamílico para purificação. Todos os métodos utilizaram em comum o conjunto de reagentes QIAamp DNA mini kit. Na comparação entre as concentrações obtidas de DNA, o método B spresentou maior média (3,7 ng/iL) já o método A obteve valor médio que 1,2 ng/uL e o método C, de 0,7 ng/uL. Todos os protocolos obtiveram valores da relação 260/280 e 260/230 fora dos valores de refer~encia esperado, evidenciando uma perda na qualidade do DNA extraído. O resultado da integridade do DNA, por meio de eletroforese em gel agarose também demonstrou o alto grau de degradação de todos os métodos analisados. Entretanto, foi possível realizar a genotipagem do polimorfismo 174G>C do gene da interleucina 6 em 100% das amostras testadas para o método C, e 66% par a o método A e B. O método C foi o mais reprodutivo para genotipagem , apesar do maior custo e tempo de processamento, sendo este método mais indicado para a implementação na rotina laboratorial de biologia molecular para amostras preservadas em parafina.