Mycosis fungoides: reflectance confocal microscopy and its role in the diagnosis

Background: Mycosis fungoides (MF), a T-cell lymphoma, is the most common variant of primary cutaneous lymphomas. The discrete clinical aspect of the early patch-stage and an overlapping clinical presentation with other erythematosquamous skin diseases make the diagnosis of MF challenging. Histopathology is the gold standard for the diagnosis of MF. However, in early stages, MF can simulate inflammatory diseases, presenting reactive lymphocytes and absence of lymphocytic cytologic atypia. Consecutive biopsies are often necessary from several clinically suspect sites. Previous studies evaluated Reflectance Confocal Microscopy (RCM) as a promising tool for MF diagnosis because it offers the opportunity to analyze skin structures non-invasively at a 'quasi-histopathologic' resolution and to guide the most representative site for biopsy. Case presentation: We present a 76 years-old woman with a 5-year history of erythematous plaques and patches. She had had 5 previous skin biopsies with a pattern suggestive of nummular eczema. The history and the clinical presentation led to the suspicion of MF. RCM examination was performed and two lesions were marked for biopsy. The histopathology exam confirmed the diagnosis of MF. The patient was submitted to topical treatment with total remission of the lesions. Conclusions: The mean time from onset of symptoms to diagnosis is 6 years and the delay in diagnosis results in delay for adequate therapy. Therefore, the selection of the biopsy site is crucial to avoid unrepresentative samples. Mancebo et al. recently published the largest cohort of cutaneous T.cell lymphoma examined with RCM. 83 lesions were evaluated, and the authors confirmed that this image technique was effective in to guide the most representative site for the biopsy. We believe that further and larger studies will clarify it and defining a diagnostic algorithm for the RCM diagnosis of MF.

Desenvolvimento e avaliação de eficácia de nanoemulsão catiônica bioativa na proteção capilar aos danos foto-oxidativos / Development and evaluation of the effectiveness of bioactive cationic nanoemulsion in protecting hair photo-oxidative damage

A radiação solar, composta por radiação ultravioleta (UV), visível (Vis) e infravermelho, é responsável por acelerar os processos de alteração de cor e do conteúdo proteico da fibra capilar. Visando contornar este problema, este trabalho propõe a incorporação do flavonoide quercetina, de reconhecida atividade antioxidante, em uma nanoemulsão catiônica de aplicação capilar. Para tanto, foram desenvolvidas formulações contendo quercetina a 0,5% (p/p) pelo método de baixa energia sub-PIT. A formulação de menor índice de polidispersão (IPD) foi selecionada e submetida à Avaliação de Estabilidade Normal. Neste ensaio, a nanoemulsão foi armazenada em diferentes condições de temperatura por 90 dias, sendo analisados: características organolépticas, valor de pH, atividade antioxidante, conteúdo de quercetina, diâmetro médio de gotícula e potencial zeta. A fotoestabilidade da nanoemulsão envolveu a determinação do perfil de absorção e da sua atividade antioxidante após períodos de exposição à radiação UV/Vis. Posteriormente, a nanoemulsão foi caracterizada quanto aos seguintes parâmetros: eficiência de encapsulamento, perfil reológico, morfologia das gotículas por Microscopia Eletrônica de Transmissão Criogênica e Microscopia de Força Atômica (AFM). A possível interação entre a quercetina e os demais tensoativos presentes na nanoemulsão foi avaliada por Microscopia Confocal de Fluorescência e Análise térmica. A segurança da nanoemulsão foi determinada pelo método in vitro HET-CAM e por biocompatibilidade cutânea, em voluntários. A eficácia da nanoemulsão catiônica na fotoproteção das características da fibra capilar descolorida tratada com tintura cores loiro (12.0) ou ruivo (6.66) foi determinada avaliando-se os parâmetros cor, tração à ruptura, penteabilidade, fricção, perda proteica, morfologia das cutículas e nível de melanina radical por Espectroscopia de Ressonância Paramagnética Eletrônica (EPR), sendo calculado o Fator de Proteção Radicalar (FPR). As mechas de cabelo tingidas foram expostas à radiação UV/Vis artificial (500 W/m2) por até 180 h, sendo os parâmetros analisados antes e após o período de exposição. A nanoemulsão selecionada pelo reduzido IPD apresentava diâmetro médio de gotícula e potencial zeta iguais a 24,97±0,30 nm e 19,6±2,19 mV, respectivamente. Na Avaliação de Estabilidade Normal, a nanoemulsão armazenada a 45,0±2,0° C apresentou alterações significativas de todos os parâmetros avaliados, exceto potencial zeta, sendo que a elevação do diâmetro médio de gotícula acarretou em perda da transparência. A oxidação da quercetina e a instabilidade do tipo Ostwald ripening (ω3) foram as responsáveis pelas modificações observadas. No armazenamento a 5,0±2,0° C, a nanoemulsão manteve todos os parâmetros inalterados, mas a 25±2,0° C houve elevação discreta do diâmetro médio de gotícula, sem perda da funcionalidade. A nanoemulsão apresentou elevada fotoestabilidade, sem alteração da atividade antioxidante após exposição ao UV/Vis. A caracterização da nanoemulsão mostrou que a eficiência de encapsulamento foi de 99,8%, no mínimo, a formulação apresentou típico comportamento newtoniano e as gotículas apresentavam formato esférico. As imagens obtidas por Microscopia Confocal de Fluorescência e o ensaio de Análise térmica mostraram que a quercetina se encontra dentro das gotícula atuando, também, como co-tensoativo, por interagir com os tensoativos, além de exercer sua função antioxidante. A nanoemulsão foi classificada como levemente irritante (método HET-CAM), sendo esse baixo potencial de irritação corroborado pelo teste de biocompatibilidade cutânea. Na avaliação de eficácia, observou-se que a nanoemulsão protegeu a cor total (dE*) do cabelo tingido de loiro em 54%, e elevou a alteração da cor do cabelo tingido de ruivo em 47% (t = 180 h) em comparação à mecha controle. Além disso, a nanoemulsão melhorou a penteabilidade e reduziu os coeficientes de fricção. A radiação UV/Vis provocou elevada perda proteica e redução da espessura das cutículas em aproximadamente 50%. Concluiu-se, pelos resultados obtidos, que as moléculas que compoem a tintura capilar, principalmente os pigmentos mais escuros, atuaram como filtros solares, pois elas protegeram as estruturas proteicas da fibra. A nanoemulsão apresentou FPR igual a 3,31 e 4,14, para as mechas tingidas de loiro e ruivo, respectivamente. O FPR indica a capacidade de uma formulação em reduzir o nível de radicais livres formados por indução da radiação UV/Vis, um dos fatores que induzem alterações na fibra capilar tingida. Assim, considerando que a radiação UV/Vis atua tanto por mecanismos diretos quanto indiretos, e que alterações significativas de cor foram observadas mesmo quando o nível de radicais livres foi reduzido pela ação da quercetina, deve ser incorporada à formulação fotoprotetora capilar filtros solares associados a antioxidantes nanoestruturados. Tais filtros devem ficar aderidos à cutícula, de modo a protegê-la da degradação proteica e reduzir a entrada de radiação para o interior da fibra capilar, local onde os antioxidantes nanoestruturados devem atuar como uma segunda linha de defesa

The solar radiation, comprising ultraviolet (UV), visible (VIS) and infrared, is responsible for accelerating color and protein content changes in the hair fiber. In order to avoid this problem, this work proposes the incorporation of the flavonoid quercetin, a recognized antioxidant molecule, in a cationic nanoemulsion for hair application. For this, formulations containing quercetin 0.5% (w/w) were developed by the low-energy sub-PIT method. The formulation with a lower polydispersity index (PDI), which had HLB value (Hydrophilic-Lipophilic Balance) equal to 12.5 was selected and subjected to the Normal Stability Test. In this assay, the nanoemulsion was stored under different temperature conditions for 90 days, and the following parameters were analyzed: organoleptic properties, pH, antioxidant activity, quercetin content, average droplet diameter and zeta potential. The photostability of the nanoemulsion involved the determination of the absorption profile and its antioxidant activity after periods of exposure to UV/Vis radiation. Subsequently, the nanoemulsion was characterized according to the following parameters: encapsulation efficiency, rheological profile, morphology of the droplets by Cryogenic Transmission Electron Microscopy and Atomic Force Microscopy (AFM). The possible interaction between quercetin and other surfactants present in the nanoemulsion was evaluated by Confocal Fluorescence Microscopy and thermal analysis. The safety of the nanoemulsion was assessed by the in vitro HET-CAM method and by cutaneous biocompatibility in volunteers. The photoprotection effectiveness of the bioactive cationic nanoemulsion was evaluated in blond (color 12.0) and auburn (color 6.66) dyed hair fibers by assessing the parameters: color, tensile break, combing, friction, protein loss, morphology of cuticles and level of melanin radical by Electron Paramagnetic Resonance Spectroscopy (EPR). The Radical Hair Protection Factor (RHF) was calculated. Dyed hair tresses were exposed to UV/Vis artificial radiation (500 W/m2) for 180 h. The parameters were analyzed before and after the exposure period. The nanoemulsion selected due to its reduced PDI had an average droplet diameter and zeta potential equal to 24.97±0.30 nm and 19.6±2.19 mV, respectively. In the Normal Stability Test, the nanoemulsion stored at 45.0 ± 2.0º C showed significant changes in all parameters except zeta potential, and the increase in the average droplet diameter resulted in the loss of transparency. Oxidation of quercetin and Ostwald ripening instability (ω3) were responsible for the changes. At 5.0 ± 2.0º C, the nanoemulsion kept all parameters unchanged, but at 25.0±2.0º C there was a slight increase in the average droplet diameter without loss of functionality. The nanoemulsion showed high photostability since antioxidant activity was not altered after UV/Vis exposure. The characterization of the nanoemulsion showed that the encapsulation efficiency was 99.8% at least, the formulation showed typical Newtonian behavior and droplets were spherical. The images obtained by Confocal Fluorescence Microscopy and thermal analysis showed that quercetin was within the droplet acting, also, as a cosurfactant, due to the interaction with the surfactants. The nanoemulsion was classified as slightly irritating (HET-CAM method), and this low irritation potential was supported by the cutaneous biocompatibility assay. The photoprotective effectiveness evaluation showed that the nanoemulsion protected the total color (dE*) of blond dyed hair in 54%, but raised the color change of auburn dyed hair in 47% (t = 180 h). In addition, the nanoemulsion improved combability and reduced coefficients of friction. UV/Vis radiation caused high protein loss and reduced cuticle thickness by approximately 50%. It was concluded that the molecules that compose hair dye, especially the darker pigments, acted as sun filters because they protected the protein structures of the hair fiber. The nanoemulsion showed RHF equal to 3.31 and 4.14 for blond and auburn dyed hair, respectively. The RHF indicates the ability of a formulation to reduce the level of free radicals formed by UV/Vis induction, one of the factors that induce changes in the dyed hair fibers. Thus, considering that the UV/Vis radiation acts by direct and indirect mechanisms and that significant changes in color were observed even when the level of free radicals has been reduced by the quercetin, chemical filters should be incorporated into hair formulations associated with nanostructured antioxidants in order to fully protect hair fiber. Such filters must be attached to the cuticle, protecting it from protein degradation and reducing the radiation input into the hair fiber, where the nanostructured antioxidants must act as a second line of defense

Efeitos do fragmento variável de cadeia única anti-LDL eletronegativa vetorizado em nanocápsulas na aterosclerose experimental / Effects of an anti-LDL(-) single chain fragment variable vectorized in nanocapsules in experimental atherosclerosis

As doenças cardiovasculares são a principal causa de mortalidade no mundo. A aterosclerose é a base fisiopatológica dessas doenças, sendo definida como um processo crônico-inflamatório multifatorial, resultando da interação de diferentes células como linfócitos, macrófagos, células endoteliais e células musculares lisas na parede arterial. A lipoproteína de baixa densidade eletronegativa [LDL(-)], uma subfração modificada da LDL nativa, desempenha um papel-chave na aterosclerose, uma vez que as modificações sofridas por esta partícula são capazes de induzir o acúmulo de ésteres de colesterol em macrófagos e a subsequente formação de células espumosas. O sistema imunológico é crucial no processo aterogênico e estratégias terapêuticas direcionadas à imunoregulação deste processo têm sido utilizadas como novas alternativas tanto na prevenção do desenvolvimento quanto da progressão desta doença. Dentre essas estratégias, destaca-se o uso de fragmentos de anticorpos como o scFv (do inglês, single chain fragment variable), que podem ainda estar conjugados a nanopartículas com o intuito de aumentar sua eficiência de ação no organismo. Diante do papel da LDL(-) na aterosclerose, este projeto objetivou avaliar os efeitos in vitro e in vivo de um sistema nanoestruturado contendo fragmentos scFv anti-LDL(-) derivatizados na superfície de nanocápsulas sobre macrófagos murinos e humanos primários e em camundongos knockout para o gene do receptor da LDL (Ldlr-/-) no desenvolvimento e na progressão dessa doença. Demonstrou-se que o tratamento de macrófagos com a formulação scFv anti-LDL(-)-MCMN-Zn diminuiu de forma significativa a captação de LDL(-), assim como a expressão de IL-1ß (mRNA e proteína) e MCP-1 (mRNA). Foi demonstrada a internalização da nanoformulação pelos macrófagos via diferentes mecanismos de endocitose, demonstrando seu potencial uso como carreador de fármacos. In vivo, a nanoformulação diminuiu de forma significativa a área da lesão aterosclerótica em camundongos Ldlr-/- submetidos à avaliação pela técnica de tomografia por emissão de pósitrons (do inglês, PET), utilizando o radiotraçador 18F-FDG (18F-desoxiglicose), associada à tomografia computadorizada (CT) com agente de contraste iodado, além da análise morfométrica das lesões no arco aórtico. O conjunto dos resultados obtidos evidenciou a ação ateroprotetora da formulação scFv anti-LDL(-)-MCMN-Zn, reforçando seu potencial como estratégia terapêutica na aterosclerose

Cardiovascular diseases are the leading cause of mortality worldwide. Atherosclerosis is the pathophysiological basis of these diseases, defined as a chronic inflammatory multifactorial process, resulting from the interaction of several cells such as lymphocytes macrophages, endothelial cells and smooth muscle cells within the arterial wall. The electronegative low-density lipoprotein [LDL(-)], a modified subfraction of native LDL, plays a key role in atherosclerosis, since its modifications are capable of inducing the accumulation of cholesteryl esters in macrophages and the subsequent foam cells formation. The immune system is crucial in atherogenic process and therapeutic strategies directed to the immunoregulation of this process have been used as a new alternative in the prevention of the development as well as the progression of this disease. Among these strategies, it is the use of antibody fragments such as scFv (single chain fragment variable), which may be also conjugated to nanoparticles in order to increase their efficiency in the body. Given the role of LDL(-) in atherosclerosis, the aim of this project was to evaluate the in vitro and in vivo effects of a nanostructured system containing scFv anti-LDL(-) fragments derivatized on the surface of nanocapsules on murine and human primary macrophages and in the development and progression of the disease in LDL receptor knockout mice (Ldlr-/-). It was demonstrated that the treatment of macrophages with scFv anti-LDL(-)-MCMN-Zn formulation significantly decreases the uptake of LDL(-) and the expression IL-1ß (mRNA and protein) and MCP-1 (mRNA). Moreover, the internalization of the nanoformulation by macrophages through different endocytosis mechanisms was shown, demonstrating its potential use as a nanocarrier. In vivo, the nanoformulation decreased the area of atherosclerotic lesions in Ldlr-/- mice evaluated by positron emission tomography with 18F-FDG associated with computed tomography with iodinated contrast agent (PET/CT), besides the lesion morphometric analysis at the aortic arch Thus, these data provide evidence of the atheroprotection action of the ateroprotection action of the scFv anti-LDL(-)-MCMN-Zn formulation, suggesting its promising use as a therapeutic strategy for atherosclerosis

Distrofia corneal de Schnyder / Schnyder crystalline dystrophy

La principal entidad hereditaria con depósitos de lípidos en el estroma corneal es la distrofia cristalina central, conocida como distrofia de Schnyder, quien la describió en Suiza en 1927. Se caracteriza por depósitos blanco-amarillentos en el estroma corneal central y superficial. Se presenta un paciente de 28 años, del sexo masculino y piel negra, con antecedente de salud anterior. Acudió a consulta y refirió una disminución de la visión y cambio de coloración progresiva de ambos ojos, de años de evolución. En la exploración oftalmológica de ambos ojos se apreciaron lesiones blanquecinas anulares a nivel del estroma corneal, con ligera turbidez corneal central. Los estudios refractivos realizados constataron un astigmatismo hipermetrópico simple. El resto del examen oftalmológico fue negativo. Para el diagnóstico de certeza se empleó el microscopio confocal. Se concluye que el caso presenta una distrofia corneal estromal de tipo cristalina, de Schnyder.

Central crystalline dystrophy known as Schnyder´s dystrophy, called like this because he was the first one to describe it in 1927 in Switzerland, is the main inherited entity with liquid deposits in the corneal stroma. This disease is characterized by white-yellow deposits into the central and superficial corneal stroma. A 28 years old black male patient, with previous history of health problems, went to the doctor´s office and mentioned visual reduction and progressive coloring changes in both eyes that had lasted some years. Ophthalmologic examination of both eyes showed annular white lesions at the corneal stroma, with light central corneal haze. Simple hypermetropic astigmatism was detected in the refractive exams. The rest of ophthalmologic exams was negative. For more secure diagnosis, confocal microscope was used. It was concluded that the patient had stromal corneal dystrophy, or Schnyder´s crystalline dystrophy.

Analise da arquitetura da aorta de pacientes hipertensos e normotensos / Texture analysis of the elastic fibers in aortas of normotensive and hypertensive patients

Fibras elásticas são componentes essenciais da aorta e remodelamento é acompanhado em muitas doenças e eventos que ameaçam a vida, como dissecção e rupturas. Fibras elásticas podem ser facilmente visualizadas quando coradas com H&E e examinadas por microscopia de fluorescência. Nosso objetivo foi criar um sistema de análise automática da textura das fibras elásticas comparando aorta de pacientes normotensos e hipertensos. O sistema de análise foi composto por Microscópio invertido Olympus IX-81 equipado com scanner FV 300 que utiliza laser FV-5 COMB2, utilizando laser de argônio a 488 nm, objetiva 40x usando óleo de imersão. A espessura da aorta varia de 2 a 3 mm, e a imagem completa foi composta por justaposição de imagens de 220x220 µm utilizando software Fluoview. Para análise foi utilizado o programa gliding box , que é uma caixa deslizadora de 128x128 pixels, que percorre a imagem da aorta pixel a pixel em toda sua extensão. Para análise computadorizada da textura foram utilizados programas computacionais (entropia, homogeneidade local e segundo momento angular derivado da matriz de co-ocorrência de Haralick). Foram calculados e plotados em diagramas resultados equivalentes à topografia histológica da imagem. Em cada caminho o gliding box percorreu entre 2000 e 3000 pixels da textura, revelando a topografia local e sua variação. Foi comparada a textura de fibras elásticas de cortes histológicos corados com HE de 24 pacientes normotensos e 30 hipertensos, adultos de ambos os sexos oriundos de autópsias realizadas no Depto de Anatomia Patológica. Para comparação entre textura e idade utilizou-se Correlação de Pearson, e a textura foi comparada entre os grupos com o auxílio do teste t. Resultados: Tanto nos pacientes normotensos como nos hipertensos não houve correlação entre: número de fibras elásticas ou distâncias entre elas, para as análises de Haralick e idade dos pacientes. No entanto, a entropia em...

The elastic fiber network is an essential component of the aorta. Its remodeling accompanies many diseases and may provoke life-threatening events, such as dissection or rupture. Elastic fibers can be easily demonstrated in eosin-stained histologic sections examined by fluorescence microscopy. The aim of our study was to create an automatic texture analysis system of the elastic fibers and to apply it in human aortas comparing normotensive and hypertensive patients. The analysis sytem was composed of an Olympus IX-81 inverted microscope, a FV300 scan head and a FV-5 COMB2 laser combiner. The fluorescence of the hematoxylin and eosin-stained slides was excited with the 488 nm line of an Argon laser using a 40x oil immersion objective. The Fluoview software was used to reconstruct the images. The full image of the whole sample (2 or 3mm long) was composed by several 220x220. Then a gliding box of 128x128 pixels was running in 1-pixel steps along a predefined axis parallel to the bottom line of the image. For every new box, computerized analysis of texture features (entropy, local homogeneity and the second angular moment derived from the gray-level co-occurrence matrix) were calculated and plotted in diagrams, where the position on the x-axis was equivalent to the topography in the histologic picture. In that way for each "run" of the gliding box about 2000 to 3000 values of a texture feature were obtained, thus revealing precisely its topographic postion and its variabilty. We compared the elastic fiber texture in routinely HE-stained histologic slides of the aorta ascendens in 24 normotensive and 30 hypertensive adult patients of both sexes and of similar age from our autopsy files. Pearson correlations were calculated between the texture...

Laser capture microscope: an innovative tool for single cell dissection.

Increasing strides have recently been made in the understanding of the biologic basis of health and disease, largely because of the current emphasis on investigations directed at a cellular level. This has necessitated the development and use of convenient, accurate and reliable research equipment. While it is not necessitated the need for every researcher or clinician to be fully knowledgeable of all the intricacies of the recent developments in the field of research equipment, basic awareness of new research tools is the critical to the understanding and analysis of results obtained from current studies. The laser capture microscope is one of the most recent research equipment that permits easy dissection and examination of single cells from tissues. This has enabled researchers to carry out specific studies on the behaviour of different cell populations in a tissue sample. This article aims to explain the basic principles of the usage of laser capture microscope for single cell dissection.

Estudo em microscopia confocal do epitélio corneano do coelho e do homem utilizando objetivas com diferentes aberturas numéricas / Confocal microscopic study of rabbit and human corneal epithelia using two objetives with different numerical aperture

Objetivo: Este estudo prospectivo compara as imagens de microscopia confocal do epitélio corneano do coelho e do homem, obtidas através de 2 objetivas com aberturas numéricas (AN) diferentes. Métodos: Dez olhos de coelhos foram enucleados e fixados através de um suporte pneumático para garantir o melhor desempenho de cada objetiva. Cinco pacientes normais foram selecionados após consentimento. Os olhos de coelhos e dos pacientes foram previamente examinados na lâmpada de fenda. O exame de microscopia confocal (Tomey, Erlangen-Tennenlohe, Alemanha) foi realizado com as objetivas achroplan 40x/AN = 63x/AN = 0,9 (Zeiss Oberkochen, Alemanha). Imagens selecionadas do epitélio corneano foram avaliadas qualitativamente com relaçäo ao tamanho, forma e refl tividade das células. Resultados: As células no epitélio superficial dos coelhos e dos pacientes, previamente à descamaçäo, tiveram uma refletividade maior que as células adjacentes. Este aspecto foi claramente observado somente com a objetiva 63x/AN = 0,9. As camadas basal e intermediária do epitélio em coelhos foram visualizadas somente através desta objetiva. Estas camadas nos pacientes tornaram-se mais nítidas com a objetiva de abertura numérica maior (63x/AN = 0,9). Conclusäo: Uma objetiva de abertura numérica elevada p oduz melhor resoluçäo dos cortes ópticos, facilitando a análise as camadas do epitélio no coelho e no homem

Detecçäo de defeitos localizados na camada de fibras nervosas retinianas pelo Heidelberg Retina Tomograph / Localized retinal fiber layer defects detection by the Heidelberg retina tomograph

Defeitos localizados na camada de fibras nervosas retinianas (CFNR) säo achados característicos de dano glaucomatoso. Sua detecçäo pode preceder a perda de campo visual detectável em cerca de 5 anos. Neste estudo comparamos os métodos de fotografia estereoscópica e tomografia por scanning laser confocal (Heidelberg Retina Tomograph) para a detecçäo destes defeitos. Em 68 pacientes glaucomatosos, suspeitos de glaucoma e controles, detectamos defeitos localizados na CFNR em 36,76 por cento dos olhos com o Heidelberg Retina Tomograph e em 22,06 por cento pela fotografia estereoscópica. Defeitos localizados na CFNR foram observados em 22 olhos glaucomatosos e em 3 olhos suspeitos de glaucoma. Sua localizaçäo mais frequente foi o setor temporal inferior

Light and scanning electron microscopic study of the vallate papillae of the opossum (didelphis albiventris)

Las características morfológicas del epitelio y tejido conjuntivo de las papilas valadas del oposum fueron observadas a través de los microscopios de luz y electrónico de barrido. Fue utilizado el método de maceración de las células con NaOH para visualizar la arquitectura del tejido conjuntivo. El dorso posterior de la lengua del oposum posee dos papilas valadas. Las secciones histológicas mostraron que la cubierta epitelial de estas papilas es del tipo escamoso, estratificado, queratinizado y asociadas con yemas gustativas y papilas pequeñas. Estas estructuras gustativas mostraron formas circulares u ovales. Imágenes al SEM mostraron la superficie de las células epiteliales con microcrestas, diferentes de los márgenes intercelulares y poros gustativos. El tejido conjuntivo denso está compuesto por unas redes de fibras colágenas y mostró papilas de diferentes formas. La arquitectura de lámina propia de las papilas valadas es de forma de un cono