Tratamientos y bioterapias para COVID-19 / Therapeutics and biotherapies for covid-19

INTRODUCCIÓN: Un nuevo brote de coronavirus surgió en 2019 en Wuhan, China, causando conmoción en el sistema sanitario de todo el mundo; el Comité Internacional de Taxonomía de Virus lo denominó SARS-CoV-2, agente causante de la enfermedad COVID-19.El espectro de gravedad de la enfermedad es muy amplio: la mayoría de los pacientes no presentan gravedad, pero otros pueden desarrollar neumonías, y la insuficiencia respiratoria aguda es la causa más frecuente de mortalidad. Objetivo: analizar y desarrollar las distintas alternativas terapéuticas aportadas por la Biotecnología para tratar los síntomas de aquellos pacientes con COVID-19. Metodología: se realizó una revisión de la bibliografía disponible, a partir de enero de 2020 en PubMed, acerca de los tratamientos que se encuentran aún en ensayos clínicos y aquellos que cuentan con aprobación bajo uso de emergencia para la enfermedad COVID-19. También se realizaron búsquedas a través de Google y Google Académico para publicaciones de organismos de Salud en referencia a políticas de salud establecidas para la terapéutica durante dicha pandemia. Resultados: este trabajo aborda las nuevas alternativas terapéuticas para COVID-19 derivadas de la Biotecnología, que se encuentran tanto en uso como en etapas de ensayos clínicos comprendidos dentro del segmento de los biofármacos y las bioterapias. Se incluye un breve resumen del estatus regulatorio de entidades de salud, el mecanismo de acción de dichas terapias y características generales de cada uno. Se incluyen novedosas bioterapias que se empezaron a implementar para afrontar la pandemia. Conclusiones: la pandemia de coronavirus está poniendo a prueba el sistema sanitario internacional, para brindar soluciones tanto desde el diagnóstico y prevención como para el tratamiento de la población a fin de disminuir la mortalidad. Esto incluyó, obviamente también, al área de la Biotecnología aplicada a la salud, que ha aportado en los tres aspectos mencionados; el presente trabajo se centra en las respuestas de tipo terapéutico que ha brindado y que están comercializadas o en fases clínicas. (AU)

INTRODUCTION: A new coronavirus outbreak emerged in 2019 in Wuhan, China, causing a shock to the healthcare system around the world; the International Committee on Taxonomy of Viruses named it SARS-CoV- 2, the infectious agent of the COVID-19 disease. The spectrum of severity of the disease is very wide, most patients are not serious, but others can develop pneumonia, with acute respiratory failure being the most frequent cause of mortality. Objective: to analyze and develop the different therapeutic alternatives provided by Biotechnology dedicated to Health, to treat the symptoms of those COVID-19 patients who require it, and thus reduce mortality.Methodology: a review of the available literature from January 2020 in PubMed of the treatments that are still in clinical trials and those that have been approved under emergency use for the disease COVID-19 was performed. Searches were also carried out through Google and Google Scholar for publications of Health organizations in reference to health policies established for therapeutics during the mentioned pandemic. Results: this work addresses the new therapeutic alternatives derived from Biotechnology, which are both in use and in stages of clinical trials, to treat patients who developed COVID-19 included within the segment of biopharmaceuticals and biotherapies. A brief summary of the regulatory status of health entities, the mechanism of action of said therapies and general characteristics of each one is included. Innovative biotherapies that began to be implemented to face the pandemic are included. Conclusions: The coronavirus pandemic has driven the international health system to the test, to provide solutions both from the diagnosis, prevention and treatment of the population to reduce the mortality of patients. This obviously also included the area of Biotechnology applied to health, which has contributed in the three aspects mentioned. The present work focuses on the therapeutic responses that it has provided and that are commercialized or in clinical phases. (AU)

Producción de antisueros fúngicos específicos en conejo / Specific fungi antisera production in rabbits

Se probó un método de inoculación en conejos, por vía intradérmica para la producción de antisueros fúngicos contra Aspergillus fumigatus (AF), Histoplasma capsulatum (HC), Paracoccidioides brasiliensis (PB) y Coccidioides immitis (CI), con el fin de ser utilizados como sueros control positivos para pruebas de inmunodifusión en gel de agar (ID). En este trabajo se utilizó como inmunógeno el antígeno en la dilución de uso (DU) para las pruebas de rutina de ID, lo que facilitó su estandarización. Los antígenos de AF, HC, CI se prepararon por los métodos descriptos por el Center for Disease Control (CDC), y el de PB según la técnica descripta por Camargo y col. Todos los conejos produjeron anticuerpos contra los diferentes antígenos específicos (bandas por ID) en el momento en que se alcanzaron los picos de respuesta primaria y luego de cada refuerzo. La respuesta secundaria fue igual o menor que la primaria, aunque se mantuvo la calidad y cantidad de bandas de precipitación específicas detectadas por ID. La inmunización primaria con concentraciones de antígeno mayores o menores a la DU, sólo analizadas en el caso de A. fumigatus, produjo bandas de precipitación menos definidas o en menor número respectivamente, aunque los títulos de anticuerpos fueron similares

Obtención de anticuerpos y desarrollo de un inmunoensayo para la detección de proteínas de Escherichia coli en preparaciones de interferón Y humano recombinante / Obtainment of polyspecific antibodies against proteins of an Escherichia coli strain expressing human Y interferon and development of an immunoassay

Se describe la obtención de antisueros poliespecíficos dirigidos contra las proteínas de la cepa de Escherichia coli (W3110) empleada en la producción del interferón gamma humano recombinante (IFN gamma hum.rec.), por el método de inmunización en cascada. Para esto, 3 conejos fueron inmunizados inicialmente con una preparación de proteínas de E. coli (pPEc) obtenida a través de un proceso "en blanco" (proceso similar al realizado en la producción de la proteína recombinante, pero en ausencia de esta). Posteriormente se realizaron inmunizaciones sucesivas con las proteínas menos inmunogénicas, las cuales fueron obtenidas pasando la pPEc por una columna en la cual se encontraban acoplados anticuerpos purificados del suero de animales previamente inmunizados con la misma. Se demostró por "Western Blotting" que con este método se logró obtener antisueros de amplio espectro los cuales reconocen a la mayoría de las proteínas de la cepa huésped. Estos antisueros fueron empleados en el control de calidad de la proteína recombinante por medio de un ELISA de captura para la valoración de antígenos. El límite de detección fue de 3,125 ng/ml y el de cuantificación 6,25 ng/ml

Investigación de péptidos plasmáticos en la insuficiencia renal crónica / Investigation of plasma peptides in chronic renal failure

Se describe una metodología para el fraccionamiento de péptidos y se aplica, en el presente trabajo, al análisis de compuestos péptidos presentes en el plasma de pacientes con insuficiencia renal crónica (IRC). Las muestras de plasma de sujetos controles (C;n=5) y de pacientes con IRC (n-10) fueron ultrafiltradas a través de membranas Diaflo PM 30 e YM 02, obteniéndose 2 fracciones, fracción A con sustancias de masa molecular relativa (M) menor de 1.000 y fracción B con M, aproximada entre 1.000 y 30.000, aunque los ensayos de estandarización mostraron que esta última fracción incluía proteínas de M, semejante a la albúmina. Las fracciones A, estudiadas mediante cromatografía en capa fina, mostraron la presencia de una banda fluorescamina positiva en las muestras de IRC, ausente en las C. Las fracciones B fueron analizadas por electroforesis en gel de poliacrilamida con SDS (SDS-PAGE) y tranferencia con detección inmunológica. Para desarrollar esta última técnica, se obtuvo un antisuero en conejo contra la fracción plasmática B, obtenida a partir de un pool de plasmas de pacientes con IRC. Después de la separación en SDS-PAGE, los compuestos fueron transferidos a papel de nitrocelulosa y detectados mediante una técnica de doble antisuero, empleando como primer antisuero, el anti-fracción IRC obtenido en conejo y luego, un antisuero inti-IgG de conejo, marcado con peroxidasa. Para el revelado final se utilizó una reacción colorimétrica, mediada por peroxidasa. El análisis de SDS-PAGE mostró que las fracciones plasmáticas B de pacientes con IRC contenían mayor número de bandas en el rango de M, 15.000-70.000 que las C, aumentando las diferencias cuali y/o cuantitativas entre los dos grupos, al emplear la técnica de separación electroforética, tranferencia de detección inmunológica. El procedimiento descrito constituye una metodología apropiada para el estudio de péptidos en líquidos biológicos

Obtención de anticuerpos especifícos para la IgG de ratón / Production of specific antibodies to mouse IgG

Se llevó a cabo la purificación de IgG de ratón, con la que se preparó un antisuero en cabra. A partir de este antísuero se aislaron los anticuerpos específicos por cromatrografía de afinidad, con el empleo de la IgG de ratón purificada acoplada a la Sepharosa C1-4B. Se obtuvo una concentración de los ancuerpos aislados de 1,5 mg/mL, con una cantidad que representó aproximadamente el 3 por ciento del total de anticuerpos. Se evaluó la pureza, la reactividad y la especificidad de estos anticuerpos

Desarrollo de un ensayo de dot-blot para la detección de adhesinas en Escherichia coli enterotoxigéna / Dot-blot immunoenzymatic reaction to detec adhesins from enteropathogenic Escherichia coli

Un método de detección de adhesinas K99, K88 y F41 de Escherichia coli enterotoxigénica ha sido desarrollado sobre membranas de nitrocelulosa, basado en la reacción inmunoenzimática de dot-blot. Suspensiones estandarizadas de este microorganismo, portando distintos tipos de adhesinas fueron sembrados en el papel y enfrentados a anticuerpos-sonda de especificidad probada y posteriormente a un conjugado peoxidasa-antianticuerpo. La prueba mostró ser de alta sensibilidad y específica del tipo de adhesina, pudiendo emplearse como ensayo diagnóstico en la detección de esos factores de virulencia