Acurácia dos testes diagnósticos registrados na ANVISA para a COVID-19 / Acurácia dos testes diagnósticos registrados na ANVISA para a COVID-19

INTRODUÇÃO: O coronavírus da Síndrome Respiratória Aguda Grave 2 (abreviado para SARSCoV-2, do inglês Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus 2), anteriormente conhecido como novo coronavírus (2019-nCoV), é um agente zoonótico recémemergente que surgiu em dezembro de 2019, em Wuhan, China, causando manifestações respiratórias, digestivas e sistêmicas, que se articulam no quadro clínico da doença denominada COVID-19 (do inglês Coronavirus Disease 2019). Ainda não há informações robustas sobre a história natural da doença, tampouco sobre as medidas de efetividade para o manejo clínico dos casos de infecção pelo COVID19, restando ainda muitos detalhes a serem esclarecidos. No entanto, sabe-se que o vírus tem alta transmissibilidade e provoca uma síndrome respiratória aguda que varia de casos leves ­ cerca de 80% ­ a casos muito graves com insuficiência respiratória - entre 5% e 10% dos casos ­, os quais requerem tratamento especializado em unidades de terapia intensiva (UTI). Sua letalidade varia, principalmente, conforme a faixa etária. TECNOLOGIA: Os testes de diagnóstico para a COVID-19 se destacaram na pandemia de coronavírus em andamento como uma ferramenta essencial para rastrear a propagação da doença. Uma ampla gama de testes diagnósticos para o SARS-CoV-2 está disponível comercialmente, alguns dos quais receberam autorizações para uso por várias agências reguladoras nacionais. Com as informações da sequência genética devidamente identificadas, os testes de diagnóstico baseados na detecção da sequência viral por reação em cadeia da polimerase com transcriptase reversa (RT-PCR) ou plataformas de sequenciamento logo se tornaram disponíveis. Isso permitiu a confirmação do diagnóstico e melhores estimativas da atividade da infecção, que vêm aumentando em velocidades alarmantes. Para a detecção mais sensível de SARS-CoV, MERS-CoV e SARS-CoV-2, recomendavam-se a coleta e o teste de amostras respiratórias superiores e inferiores. O diagnóstico de casos suspeitos era confirmado por testes de RNA com RT-PCR em tempo real ou sequenciamento de próxima geração. Foi demonstrado que o RNA viral poderia ser detectado a partir do swab nasal e faríngeo, lavagem broncoalveolar e plasma sanguíneo usando RT-PCR direcionado ao gene do vírus (5). O padrão-ouro para diagnóstico laboratorial da COVID-19 é a reação da transcriptase reversa, seguida de reação em cadeia da polimerase (RT-PCR) para amostras coletadas no trato respiratório superior ou inferior. OBJETIVO: O objetivo deste relatório é analisar a acurácia dos testes diagnósticos registrados na Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA) até a presente data. METODOLOGIA: foi realizada uma busca por diagnósticos para COVID-19 com registros vigentes na ANVISA. Para tal, foram utilizados os termos "COVID 19", SARS e coronavírus no campo de consulta de registro de produtos para saúde no site da Agência (https://consultas.anvisa.gov.br/#/saude/). Os passos para acesso ao banco de dados de produtos diagnósticos na ANVISA são: 1) consulta produtos; 2) consulta a banco de dados; 3) produtos para a saúde e 4) pesquisa de produtos para a saúde registrados. CONCLUSÕES: A ANVISA já avaliou mais de 120 pedidos de registro de produtos para testagens relacionadas à COVID-19 desde o dia 18 de março. A maior parte das petições aguarda complementação de informações por parte das empresas e outras estão sendo analisadas com prioridade. O tempo médio para avaliação dos registros na ANVISA gira em torno de 15 dias. Atualmente, mais da metade dos registros concedidos diz respeito a testes rápidos para anticorpos. Até a presente data, foram registrados 64 testes para diagnóstico da COVID-19, sendo 15 deles moleculares. O teste de polymerase chain reaction em tempo real (RT-PCR) para identificação de SARS-CoV-2 é um teste de elevada sensibilidade e especificidade, ainda que os doentes com maior carga viral possam ter maior probabilidade de um teste positivo. Os testes moleculares baseados em RNA exigem instalações laboratoriais específicas com níveis restritos de biossegurança e técnica. A sensibilidade e especificidade dos testes sorológicos variaram entre os fabricantes. É importante destacar que uma baixa sensibilidade do teste diagnóstico pode resultar em uma maior probabilidade de detectar falsos-negativos, o que poderia interferir principalmente em casos de indivíduos assintomáticos. Em geral, a sensibilidade dos testes foi superior a 85% e a especificidade, superior a 94%. Os testes sorológicos medem a quantidade de dois anticorpos (IgG e IgM) que o organismo produz quando entra em contato com um invasor. Contudo, o desenvolvimento da resposta de um anticorpo à infecção pode ser dependente do hospedeiro e levar tempo. No caso de SARS-CoV-2, estudos iniciais sugerem que a maioria dos pacientes se converte entre 7 e 11 dias após a exposição ao vírus, embora alguns pacientes possam desenvolver anticorpos mais cedo. Devido a esse atraso natural, o teste de anticorpos pode não ser útil no cenário de uma doença aguda (11). Os testes de anticorpos para SARS-CoV-2 podem facilitar (i) o rastreamento de contatos (os testes baseados em RNA também podem ajudar); (ii) a vigilância sorológica nos níveis local, regional, estadual e nacional; e (iii) a identificação de quem já teve contato com o vírus e, portanto, pode (se houver imunidade protetora) ser imune (11,12). Alguns conjuntos de reagentes para testes sorológicos foram autorizados pela ANVISA em caráter emergencial devido à gravidade da situação e à necessidade de ampliar a testagem da população, mas a validação desses reagentes pelos laboratórios é fundamental, uma vez que poucos trabalhos conseguiram ser publicados até o momento. As aprovações estão de acordo com a Resolução da Diretoria Colegiada (RDC) 348/2020, que define os critérios e os procedimentos extraordinários e temporários para tratamento de petições de registro de medicamentos, produtos biológicos e produtos para diagnóstico in vitro, e mudança pós-registro de medicamentos e produtos biológicos em virtude da emergência de saúde pública internacional decorrente do novo coronavírus. Na RDC, para registro de testes diagnósticos, a ausência de qualquer estudo de desempenho ou restrição de dados deve ser justificada por motivações técnicas que permitam a avalição da confiabilidade dos resultados e da efetividade diagnóstica do produto. Os registros concedidos nas condições dessa Resolução terão a validade de um ano, exceto para situações em que a avaliação da estabilidade seja apresentada por comparação com produtos similares e os demais critérios descritos no Regulamento sejam atendidos. Nesse caso, poderão ter a concessão regular de validade de registro de produtos para saúde por um período de 10 anos. Em resumo, as duas categorias de testes para SARS-CoV-2 podem ser úteis nesse surto, pois, eventualmente, a coleta de múltiplas amostras, regiões e em tempos diferentes durante a evolução da doença pode ser necessária para o diagnóstico da COVID-19.

Evaluation of reticulocyte counting using the Pentra 120 Retic automated haematology analyzer: clinical appplication of mean fluorescence index (MFI) in bone marrow transplantation

Objetivo: avaliar o desempeho do analisador hematológico Pentra 120 Retic na rotina laboratorial e a utilidade do índice médio de fluorescência (MFI) como indicador da recuperaçäo medular após o transplante de medula óssea (TMO). Material e métodos: o Pentra 120 Retic analisa os reticulócitos por meio de citometria de fluxo, usando o Thiazole Orange como marcador do RNA. 1) protocolo de avaliaçäo do instrumento: NCCLS (1993); 2) MFI e TMO: contagem dos reticulócitos e as fraçöes de imaturidade foram monitorizadas em 15 pacientes submetidos à TMO. Resultado: 1) avaliaçäo do equipamento: teste de reprodutividade mostrou coeficiente de variaçäo (CV)=5,5 e 11, 6 por cento nas contagens de reticulócitos provenientes de amostras com valores normais de reticulócitos e CV = 4,47 e 11,6 por cento nas reticulocitoses. Nas amostras com reticulócitos < 0,5 por cento, o CV foi maior (CV=18,5 e 22,4 por cento), mas sem compromentimento clínico. Entre as fraçöes de maturidade, o MFI mostrou ser o mais preciso, com CV = 6,9 e 11,9 por cento nas amostras normais, CV = 3 e 3,55 por cento nas reticulocitoses e CV= 28,3 e 38,5 por cento nas reticulocitopenias. Testes de linearidade e carry-over resultaram, respectivamente, em r=0,99 e < 5 por cento de contaminaçäo. Comparaçäo com Cell Dyn 3500 revelou concordância entre os analisadores no que se refere às contagens de reticulócitos em valores percentuais e absolutos. Análise de amostras apresentando corpúsculos de Hoewll-Jolly, eritroblastos e granulaçöes basófilas sugere näo haver interferência dessas alteraçöes na identificaçäo dos reticulócitos; 2) MFI e TMO: houve um aumento significativo nos valores de MFI em 11 pacientes pós-TMO, e essa resposta precedeu a recuperaçäo dos neutrófilos e das plaquetas. Quatro dos 15 pacientes estudados näo tiveram sucesso no procedimento de TMO e näo apresentaram recuperaçäo dos neutrófilos/plaquetas, assim como dos reticulócitos. Conclusäo: o Pentra 120 Retic fornece resultados precisos e de qualidade, e mostrou-se adequado para uso em rotina. Os parâmetros de imaturidade dos reticulócitos mostraram ser úteis no acompanhamento de pacientes submetidos a TMO, além de serem indicadores precoces da recuperaçäo medular

Toxoplasmosis en un grupo de estudiantes de Santa Cruz de la Sierra / Toxoplasmosis in a group of students of Santa Cruz de la Sierra

Por una encuesta serlogica para toxoplasmosis realizada entre los estudiantes que ingresaron, duarnte el año 1996, a la Escuela normal "Enrique Finot" de la ciudad de Santa Cruz se encontro una prevalencia de infeccion por toxoplasma gondii del 57.6 por ciento (227/394; I.C.95 por ciento - 52.6 a 62.5). No se observo diferencia en la prevalencia en realcion al lugar de procedencia. el unico factor de riesgo asociado con esta infeccion fue la presencia de gato en el domicilio (OR=1.7; I.C.95 por ciento=1.1-2.7;p=0.01)

Inmunodiagnóstico de la malaria en los niños / Malaria immunodiagnosis in children

Se estudiaron 55 niños con diagnóstico clínico y parasitoscópico de malaria, atendidos en los servicios de Parasitología, Infectología, Medicina Interna, Oncología, Nefrología, Hematología y Urgencias, del Instituto Nacional de Pediátria. A cada uno se le realizó detección de anticuerpos por el método de Inmunofluorescencia indirecta (IFI) usando antígeno de Plasmodium falciparum. El objeto del trabajo fue investigar la sensibilidad que tiene esta metodología para detectar y cuantificar anticuerpos específicos contra Plasmodium vivax y Plasmodium malariae. Se estudiaron dos grupos de pacientes: Grupo A constituído por 44 niños infectados con P. vivax, adquirido por picadura de Anopheles, en los que se demostraron títulos anticuerpos entre 1:20 y 1:1280; el mayor número de pacientes presentó títulos de 1:60 a 1:640. La sensibilidad fue del 100 por ciento. Grupo B conformado por 11 niños infectados por P.malariae, en los cuales el mecanismo de transmisión fue por transfusión de sangre. Se encontraron títulos de 1:20 ó más; la mayoría de pacientes presentaron títulos de 1:160 a 1:640. El porcentaje de positividad fue de 100. Se efectuaron retitulaciones posteriores al tratamiento, con objeto de evaluar su efectividad, observándose disminución o negativización de los títulos aproximadamente seis meses después. Se concluye que la inmunofluorescencia indirecta es un recurso de laboratorio útil para el inmunodiagnóstico de la malaria en los niños

Técnica de inmunofluorescencia para HIV-1 en un Centro de Referencia de la provincia de Buenos Aires / Immunofluorencence technique for HIV-1 at a Reference Center of Buenos Aires province (Argentina)

Se comprobó que la técnica de inmunofluorescencia indirecta (IFI) con células H9, puede usarse como método confirmatorio para muestras repetidamente reactivas por pruebas de screening (enzimoinmunoensayo). Se evaluaron 99 sueros por IFI según la técnica del Centro Nacional de Referencia para Diagnóstico e Investigación del SIDA, que previamente habían sido seleccionados contra el virus de la inmunodeficiencia humana (HIV) y confirmados por la técnica de Western Blot (WB). Se incluyeron 4 sueros con screening discordante, 2 con valor de corte bajo respecto del cutoff y 1 con screening negativo. Los sueros eran de pacientes de alto riesgo: drogadictos endovenosos 60; homosexuales 5; bisexuales 5; promiscuos 1; heterosexuales en contacto con HIV positivos 7; niños hijos de HIV positivos 6; transfundidos 2 y no refieren datos 13. Por técnica de WB resultaron positivos 89 sueros (89.9%), indeterminados 7 (7.1%) y negativos 3 (3.0%). Por IFI resultaron positivos 79 sueros (79.8%),inespecíficos 2 (2.9%), indeterminados 4 (4.0%) y negativos 14 (14.1%). Un suero positivo por IFI resultó indeterminado por WB. Se hicieron controles positivos y negativos no presentando falsa reactividad. La coincidencia entre ambos métodos fue del 86%. El objetivo fue dar una medida del poder predictivo de IFI como predictor de WB. Se utilizó el criterio Lambda de Goodman-Kruskal, que mide cuánto disminuye el porcentaje de error cuando se usa IFI como predictor de WB, comparado con el predictor consistente en asignar a todos los casos el resultado positivo. Para los datos disponibles se obtiene Lambda = 0.69

Empleo de la inmunofluorescencia indirecta para el reconocimiento de anticuerpos contra el coccidioides immitis / Indirect in inmunofluorescence for the diagnostic of coccidioidomycosis

San Luis es considerada zona endémica de coccidioidomicosis. En trabajos anteriores, empleando pruebas cutáneas, hemos encontrado porcentajes de reactores positivos que van del 10%al 36%en distintos departamentos y poblaciones encuestadas. En este trabajo empleamos la inmunofluorescencia indirecta, utilizando como antígeno esférulas del hongo provenientes de ratones infectados en la almohadilla plantar. El material purulento obtenido se empleó en la preparación de improntas. Para la búsqueda de anticuerpos se usaron dos controles positivos enviados por la División of Mycotic Diseases-Center for Infectious diseases y un control negativo. No encontramos buena diferenciación entre los controles positivos y negativos; se observó en todos fluorescencia difusa en la pared de los endosporos y en el contenido de las esférulas. En las condiciones empleadas por nosotros no resulta útil esta técnica, tal vez pueda serlo si se realizana algunas modificaciones como la forma antigénica utilizada, la fijación de los preparados o en los filtros empleados para evitar la fluorescencia difusa o autofluorescencia que observamos

Malaria seroepidemiology: comparison between indirect fluorescent antibody test and enzyme immunoassay using bloodspot eluates

Blood sampling on filter paper is a current practice seroepidemiological studies by indirect fluorescent antibody test (IFAT). There is, however, scant comparative information about the use of bloodspot eluates for detection of malarial IgG antibodies simultaneously by IFAT and enzyme immunoassay (ELISA). Here we report data obtained by both serological methods done on 219 bloodspot eluate samples collected in a rural community in Brazilian Amazon Basin (Alto Paraíso, Ariquemes municipality) where malaria is endemic. Plasmodium falciparum and P. vivax thick smear antigens were used in the IFAT; a detergent-soluble P. falciparum antigen was prepared for ELISA. Substantial agreement of results (Kappa coefficient k = 0.686) was observed when P. falciparum antigen was used in both tests, and IFAT titers were found to be strongly correlated ELISA antibody units (Spearman correlation coeficient rs = 0.818, p < 0.0001).

Brazilian dengue virus type 1 replication in mosquito cell cultures

The development of dengue viruses type 1 obtained from accute human sera and inoculated into mosquito cell cultures, was observed by standard transmission electron microscopy and cytochemical staining. It follows the trans-type mechanism already estabilished of other dengue types. Directed passage of single virus particles across the cell membrane seems to be a pathway of entry and exit in dengue-1 infected cells. The nature of numerous electron translucent vesicles and tubules, produced simmultaneously during virus replication inside the rough endoplasmic reticulum, was analyzed by cytochemical tests. The largest amount of virus particles was produced inside cell syncytia

Detection of cytomegalovirus in urine of HIV-infected patients by DNA-DNA hybridization comparison with virus isolation, immunofluorescence and immunoperoxidase

Immunofluorescence and immunoperoxidase test directed against early viral antigens, and DNA-DNA hybridization were compared with viral isolation for their abilities to detect Cytomegalovirus (CVM) in the urine of 89 HIV infected patients. From the 100 urine samples collected, 70 were found positive by at least one method. Considering viral isolation as the "gold standard" technique, immunofluorescence and immunoperoxidase had a sensitivity of 92.3% and88% respectively, with a specificity in both cases of 95%. DNA-DNA hybridization showed a sensitivity of 90% but with lower (60%) specificity. All of the three assays were effective in detecting CVM from urine and the technical advantage of each is discussed.

prevalence of Epstein-Barr virus among patients with generalized lymphadenopathy

Lymphadenopathy is a common problem that usually necessitates thorough investigations. Enlarged lymphnodes occurs in response to a wide variety of inflammatory and neoplastic process. This study included 20 children with generalized lymphadenopathy, 13 males and 7 females, with a mean age of 7.6 years and 10 healthy children of matched age and sex served as a control group. A complete diagnostic work up was done including detailed history; clinical examination, complete blood picture, erythrocyte sedimentation rate and serologic tests including Monospot test for detection of heterophil antibodies and indirect fluorescent antibody [IFA] test for detection of IgG- VCA. Two cases [10 percent] were positive by Monospot test whereas 40 percent were definitely positive by IFA test compared to non of the control group. A high incidence of immune cases was found in both patient and control [15 percent and 40 percent] reflecting the high prevalence of Epstein - Barr virus [EBV]. A male predominance was evident in cases with infectious mononucleosis [IM]. However, no characteristic clinical or hematological data for EBV-IM were found

Doença de Goodpasture: hemorragia pulmonar e glomerulonefrite mediadas por anticorpos antimembrana basal / Goodpasture's disease: antibasement membrane antibody mediated hemorrhagic pneumonitis and glomerulonephritis

Doença de Goodpasture tem sido o nome proposto como o mais adequado para denominar a doença induzida por auto-anticorpos antimembrana basal que se manifesta clinicamente com hemorragia pulmonar e glomerulonefrite. Nesta revisäo säo apresentados conceitos atuais sobre aspectos clínicos, laboratoriais, etiopatogênicos e terapêuticos dessa doença

Diagnóstico virológico del herpes genital / Virologic diagnosis of herpes genitalis

El herpes simple genital constituye una de las principales enfermedades de trasmisión sexual en la actualidad. Nos propusimos realizar el aislamiento viral en casos clínicos de herpes genital con el objetivo de compararlo con el diagnóstico clínico, el histológico y la inmunofluorescencia. Obtuvimos una alta coincidencia entre el diagnóstico clínico y el aislamiento viral. El estudio histológico y la inmunofluorescencia presentaron menor sensibilidad

Pruebas de inmunofluorescencia en enfermedades ampollosas / Immunofluorescence tests in skin bullous diseases

Los estudios serologicos para inmunofluorescencia indirecta (IFD) como las bipsias de la piel para inmunofluorescencia directa (IFD) en las enfermedades vesicampollosas nos pueden dar una informacion diagnostica. Se describen las principales enfermedades ampollosas, como dermatitis herperiforme, penfigos, penfigoide, herpes gestationis, dermatits ampollosa de IgA lineal, etc., haciendo enfasis en la clase, caracteristicas y localizacion de los diferentes anticuerpos a nivel de la piel de estas entidades, como tambien la presencia de antigenos de histocompatibilidad. Se menciona como la toma de la biopsia de piel y mucosas difere para cada entidad para lograr una mayor positividad

Toxoplasmose suína: 3. Avaliaçäo da prevalência de infecçäo toxoplásmica em rebanhos suínos pela prova de imunofluorescência indireta e hemaglutinaçäo / Swine toxoplasmosis: 3. Evaluation of the prevalence of Toxoplasma infections in swine by indirect immunofluorescence and hemagglutination tests

Tem-se como estimar a prevalência da infecçäo toxoplásmica em rebanhos suínos de exploraçäo zootécnica intensiva e semi-intensiva, pelas provas de imunofluorescência indireta (IFI) e de hemaglutinaçäo (HA). A prevalência da infecçäo, considerando todas as idades, segundo a prova de IFI, foi de 54,0% para o sistema de criaçäo intensiva e 49,2% para a criaçäo semi-intensiva, enquanto que, para a prova de HA, foi de 46,6% e 42,7%, respectivamente. Os valores das prevalências observadas, segundo o tipo de criaçäo näo diferiram estatisticamente de forma significativa. No que se refere às taxas de infecçäo toxoplásmica, segundo as diferentes idades estudadas, observou-se uma queda dos valores no grupo de 2 a 4 meses para, daí, haver um incremento com o progredir da idade

Evaluación de un conjugado antirrábico por titulación en diferentes microscopios fluorescentes / Evaluation of an antirabies conjugate by titration in different fluorescent microscopes

En cinco laboratorios se tituló una partida de conjugado antirrábico para inmunofluorescencia con microscopios de tres marcas distintas, equipados con diferentes accesorios. Los títulos obtenidos variaron entre < 1:4 y 1:64, dependiendo de los accesorios utilizados. Estos resultados ponen de relieve la necesidad de titular los conjugados en cada laboratorio. Se mencionan los inconvenientes que pueden ocasionar la distribución del reactivo diluido de acuerdo con el título obtenido por el productor, o mezclado con suspensiones de cerebro de ratones normales e infectados con virus rábico

Sero-epidemiological survey of malaria by immunofluorescence

The role of immunofluorescence technique as an epidemiological investigation in malaria born evaluated. The use of this technique brings out a much clear picture of distribution and role of parasite species in the epidemiology of the disease