Análisis proteómico de los productos de excreción-secreción de cuatro aislados de Trichinella spiralis obtenidos de hospederos accidentales / Proteomic analysis of the excretion-secretion products of four Trichinella spiralis isolates obtained from accidental hosts

Resumen: Introducción: Trichinella spiralis es un nemátodo tisular que se aloja en el músculo esquelético de humanos y otros mamíferos y causa una serie de alteraciones fisiológicas. Las proteínas de los productos de excreción-secreción de T. spiralis juegan un papel importante en la aparición y regulación de estas alteraciones. Sin embargo, aún no se conoce el efecto de estos productos en la infección e invasión del parásito al hospedero. Métodos: Mediante un análisis electroforético en una dimensión, Western blot y espectrometría de masas, se evaluaron las diferencias y similitudes entre proteínas antigénicas y de superficie de cuatro aislados de T. spiralis obtenidos de hospederos accidentales (perros) y la cepa de referencia aislada de cerdos (MSUS/MEX/91/CM). Resultados: Utilizando ontología de genes, se encontraron cinco proteínas exclusivas de los hospederos accidentales. Después del análisis, se encontró que estas proteínas forman parte de la matriz extracelular del parásito, cuentan con actividad catalítica y están implicadas en la adhesión a las células del hospedero. La actividad antigénica de las cuatro cepas aisladas de hospederos accidentales es idéntica a la reportada para T. spiralis, visualizándose el triplete antigénico característico de 43, 45 y 47 kDa. Conclusiones: Las proteínas exclusivas de los hospederos accidentales proveen información para entender el mecanismo de acción de este parásito para penetrar el músculo y evadir la respuesta inmune en el hospedero.

Abstract: Background: Trichinella spiralis is an intestinal and tissue nematode specific for mammalian skeletal muscle, causing a series of physiological alterations. T. spiralis excretory-secretion products play an important role in the appearance and regulation of these alterations. However, the effect of these products on the infection and invasion of the parasite to the host is unknown. Methods: Differences and similarities between antigenic proteins and surface proteins of four accidental hosts isolates (dogs) of T. spiralis and the reference strain isolated from pigs (MSUS/MEX/91/CM) were assessed by electrophoresis, western blot and mass spectrometry. Results: Using gene ontology, five proteins exclusive to the accidental hosts were analyzed. The results showed that these proteins are part of the extracellular matrix of the parasite, present catalytic activity, and bind to host cells. The antigenic activity the four strains showed the antigenic triplet characteristic of T. spiralis of 43, 45 and 47 kDa. Conclusions: Five proteins exclusive to dog isolates provided information to understand the mechanism of action of this parasite to penetrate the muscle and evade the immune response in the host.

Determinantes de infestación durante un brote de trichinellosis en el sudoeste de la provincia de Buenos Aires / Determinants of infestation during an outbreak of trichinellosis in southwest Buenos Aires province / Determinantes da infecçâo durante um surto de triquinose no sudoeste da provincia de Buenos Aires

Se estudió la asociación entre infestación, parámetros de laboratorio y signos clínicos en personas expuestas a infestación por Trichinella spiralis durante un brote de trichinellosis en el sudoeste de la provincia de Buenos Aires, Argentina. Asimismo, se investigó el grado de concordancia entre las pruebas inmunoserológicas más comúnmente utilizadas en el diagnóstico de trichinellosis humana. En las personas expuestas, la presencia de síntomas clínicos y los niveles elevados de la enzima creatina fosfoquinasa al día 7 post-exposición se asociaron significativamente con la infestación al día 30 post-exposición. Por el contrario, la eosinofilia (>7%) a los siete días postexposición no se asoció al estado de infestación a los 30 días post-exposición. El mayor grado de concordancia entre pruebas inmunoserológicas se dio entre el par ELISA-Western Blot tanto al día 7 como 30 post-exposición.

The association between infestation, laboratory parameters and clinical signs was investigated in human patients exposed to Trichinella spiralis during an outbreak of human trichinellosis in southwest Buenos Aires province, Argentina. The degree of agreement between immunoserological tests commonly used for diagnosis of human trichinellosis was determined. Among exposed individuals, the presence of clinical symptoms and high concentration of the creatine phosphoquinase enzyme 7 days post-exposure was significantly associated with infestation by day 30 post-exposure. Contrarily, Randazzo V et al. a high level of eosinophils (>7%) 7 days post-exposure was not associated with infestation by day 30 post-exposure. Test agreement was highest between ELISA and Western Blot both by days 7 and 30 post-exposure.

Foi estudada a associagáo entre a infestagáo, parámetros laboratoriais e sinais clínicos em pessoas expostas à infestagáo por Trichinella spiralis durante um surto de triquinose, no sudoeste da provincia de Buenos Aires, Argentina. Também se pesquisou o grau de concordáncia entre os testes imunosorológicos mais comumente utilizados no diagnóstico de triquinose humana. Em pessoas expostas, a presenga de sintomas clínicos e os níveis elevados da enzima creatina fosfoquinase no dia 7 pós-exposigáo foram associados significativamente à infestagáo no dia 30 pós-exposigáo. Em contraste, a eosinofilia (> 7%) aos sete dias pós-exposigáo náo foi associada ao estado de infestagáo aos 30 dias pós-exposigáo. O maior grau de concordáncia entre testes imunoserológicos ocorreu entre o par de ELISA-Western Blot tanto no dia 7 quanto no dia 30 pós-exposigáo.

Susceptibility of Laboratory Rodents to Trichinella papuae

Members of the genus Trichinella are small nematodes that can infect a wide range of animal hosts. However, their infectivity varies depending on the parasite and host species combination. In this study, we examined the susceptibility of 4 species of laboratory rodents, i.e., mice, rats, hamsters, and gerbils to Trichinella papuae, an emerging non-encapsulated Trichinella species. Trichinella spiralis and Trichinella pseudospiralis were also included in this study for comparison. Fifteen animals of each rodent species were infected orally with 100 muscle larvae of each Trichinella species. Intestinal worm burden was determined at day 6 and 10 post-inoculation (PI). The numbers of muscle larvae were examined at day 45 PI. The reproductive capacity index (RCI) of the 3 Trichinella species in different rodent hosts was determined. By day 6 PI, 33.2-69.6% of the inoculated larvae of the 3 Trichinella species became adult worms in the small intestines of the host animals. However, in rats, more than 96% of adult worms of all 3 Trichinella species were expelled from the gut by day 10 PI. In gerbils, only 4.8-18.1% of adult worms were expelled by day 10 PI. In accordance with the intestinal worm burden and the persistence of adults, the RCI was the highest in gerbils with values of 241.5+/-41.0 for T. papuae, 432.6+/-48 for T. pseudospiralis, and 528.6+/-20.6 for T. spiralis. Hamsters ranked second and mice ranked third in susceptibility in terms of the RCI, Rats yielded the lowest parasite RCI for all 3 Trichinella species. Gerbils may be an alternative laboratory animal for isolation and maintenance of Trichinella spp.

Efecto de la temperatura sobre la viabilidad de larvas de Trichinella spiralis / Effect of temperature on the viability of Trichinella spiralis larvae

El objetivo de este estudio fue determinar el efecto de diferentes temperaturas sobre la viabilidad de larvas libres y enquistadas de Trichinella spiralis aisladas en el sudoeste de la provincia de Buenos Aires, Argentina. Se trataron larvas libres y enquistadas a diferentes temperaturas (-30 °C, -20 °C, 4 °C, 20 °C, calentamiento gradual entre 0-100 °C). Se determinó el tiempo necesario para matar el 100 % de las larvas. Durante los primeros días, la mortalidad larvaria en todos los tratamientos con frío aumentó signifcativamente en función del tiempo. En todos los casos, las larvas libres sobrevivieron menor cantidad de días que las enquistadas. A -30 °C, -20 °C y 20 °C no se observaron diferencias signifcativas entre las curvas de mortalidad de cada estadio larvario, pero a 4 °C la mortalidad fue menos intensa entre las larvas enquistadas. El calentamiento disminuyó la viabilidad, sin observarse diferencias entre estadios larvarios. La totalidad de las larvas libres y enquistadas había muerto a los 61 y 95 días (-30 °C), a los 160 y 180 días (-20 °C), a los 280 y 330 días (4° C), y a los 460 y 590 días (20 °C), respectivamente. Fue necesaria una cocción durante 15 minutos a 90 °C para matar al 100 % de las larvas libres y a 100 °C para lograr igual mortalidad de las enquistadas. Nuestros resultados indican que la temperatura y los tiempos tradicionalmente utilizados para tratar productos cárnicos con potencial de transmisión de T. spiralis no serían los más efectivos para lograr la inactivación de la totalidad de larvas vivas de este parásito.

The aim of this work was to study the effect of temperature on the viability of free and encysted larvae of Trichinella spiralis from southwest Buenos Aires province, Argentina. Larvae were treated at variable temperatures (-30 °C, -20 °C, 4 °C, 20 °C, gradual heating between 0-100 °C). The time necessary to kill 100 % of larvae was calculated. During the frst days of freezing, larval mortality signifcantly increased as a function of time. Regardless of temperature, encysted larvae survived longer than the free ones. At -30 °C, -20 °C, and 20 °C there were no signifcant differences between the survival curves for each larval stage. At 4 °C, mortality was less severe for encysted larvae. All free and encysted larvae died at 61 days and 95 days (-30 °C), 160 days and 180 days (-20 °C), 280 days and 330 days (4 °C) and 460 days and 590 days (20 °C), respectively. Cooking at 90 °C and 100 °C during 15 minutes killed 100 % of free and encysted larvae, respectively. Our results suggest that temperatures and exposure times traditionally used to treat meat products with a potential to transmit T. spiralis are not entirely effcient.

Molecular Identification of a Trichinella Isolate from a Naturally Infected Pig in Tibet, China

The first human case with trichinellosis was reported in 1964 in Tibet, China. However, up to the present, the etiological agent of trichinellosis has been unclear. The aim of this study was to identify a Tibet Trichinella isolate at a species level by PCR-based methods. Multiplex PCR revealed amplicon of the expected size (173 bp) for Trichinella spiralis in assays containing larval DNA from Tibet Trichinella isolate from a naturally infected pig. The Tibet Trichinella isolate was also identified by PCR amplification of the 5S ribosomal DNA intergenic spacer region (5S ISR) and mitochondrial large-subunit ribosomal RNA (mt-lsrDNA) gene sequences. The results showed that 2 DNA fragments (749 bp and 445 bp) of the Tibet Trichinella isolate were identical to that of the reference isolates of T. spiralis. The Tibet Trichinella isolate might be classifiable to T. spiralis. This is the first report on T. spiralis in southwestern China.

Cross-sectional study of Trichinella spp in pigs in CDR, Nepal using pepsin digestion and ELISA serology.

This epidemiological cross-sectional study was conducted in five major pig-producing districts of CDR, Nepal from November 2006 to April 2007. A total of 576 slaughtered pigs were randomly selected and diaphragmatic crus muscles (n = 551), corresponding sera (n = 487) and sera only (n = 25) were collected from them. Meat samples were examined by pepsin digestion to evaluate for larvae of Trichinella spp. The sera were investigated using ELISA to evaluate for antibodies against T. spiralis. The doubtful and positive sera from the ELISA test were investigated by end-point ELISA, and the Western blot was used for confirmatory diagnosis. Pepsin digestion did not detect the larvae of Trichinella spp. AB-ELISA showed 2 positive and 14 doubtful results, out of 344 sera analyzed. End-point ELISA and the Western blot had revealed that all 16 samples were truly negative. A questionnaire revealed no rodent control (70%), left over feeding practices (65%), dumping of farm waste (82.5%) and uncooked meat was being used as feed (100%). This study reveals that Trichinella spp has a low prevalence.

Expressed Sequence Tags of Trichinella spiralis Muscle Stage Larvae

In order to obtain greater insight into the relevant genomic expression patterns of Trichinella spiralis, 992 expressed sequence tags (ESTs) were collected from a cDNA library of T. spiralis muscle stage larvae and assembled into 60 clusters and 385 singletons. Of them, 445 (44.7%) ESTs were annotated to their homologous genes, and small fractions were matched to known genes of nematodes. The annotated ESTs were classified into 25 eukaryotic orthologous groups (KOG). Cytochrome C oxidase (34 clones) was found to be most frequent species.

Evaluación del efecto protector de 2 inmunógenos de Trchinella spiralis en ratas Long Evans con modificación nutricional e infectado con Trichinella spiralis / Evaluation of the protective effect of 2 inmunogenos of Trchinella spiralis in rats Long Evans with nutritional modification and infected with Trichinella spiralis

La Trichinellosis es una zoonosis endémica, cosmopolita, sus huéspedes son, ratas, cerdo y otros mamíferos entre ellos el hombre, la presencia de Trichinellosis se debe a la ingestión de carne de cerdo insuficientemente cocinada, afecta a países con bajos recursos económicos. Se han caracterizado Inmunógenos, siendo el inmunodominante el de 45 kDa, efectivo contra T. spiralis, desafortunadamente no ha cristalizado en una vacuna. Se han descrito efectos de desnutrición (DN) sobre órganos linfáticos. Los mecanismos de defensa del huésped son alterados con DN proteico-calórico (DPC). Evaluar el efecto protector de 2 inmunógenos de T. spiralis en ratas Long Evans con modificación Nutricional e infectado con T. spiralis. 80 ratas Long Evans de 30 días de edad, divididas en 2 grupos: 40 Nut con 24 de proteína y 40 DN con 12 de proteína de los cuales se subdividieron en 8 sub grupos con tratamiento: a) 10 animales control b)10 animales infectados con T. spiralis, c) 10 animales inmunizados con antígeno soluble total (AST), d) 10 animales inmunizados con inmunógeno de 45 kDa de T. spiralis (esquema de inmunización una aplicación cada semana por 4 ocasiones), retados a la 1era semana de la culminación de inmunización, sacrificadas a la 6 sexta semana post-infección. Parámetros a evaluar: Determinación de la carga parasitaria mediante la Digestión Artificial (D/A), Determinación de las características morfológicas de la célula nodriza por la técnica de compresión de tejidos, detección de la respuesta inmune por WB. Con la técnica de D/A, se obtuvieron en los diferentes tratamientos, de las ratas Nut, DN, Inmunizadas e Infectadas. Mostró diferencia significativa en la cantidad de Ll que se presentaron en 30gr de músculos estriado, los grupos controles de ratas Nut y DN sin infección, ausencia de Ll, y en los grupos de ratas Nut infectadas, se recolectaron 200 µl de Ll, para el grupo de DN infectado se recolecto 400 µl de Ll, en el grupo de Nut inmunizadas con AST.

Efecto de la temperatura en la viabilidad e infectividad de Trichinella spiralis / Effect of the temperature in the viability and infectividad of Trichinella spiralis

Trichinella spiralis es el parásito causante de la Trichinellosis una zoonosis endémica en nuestro estado la cual afecta a mamíferos entre ellos el humano. La principal causa de infección para este es el consumo de carne mal cocida de cerdo infectada con la larva infectante (LI) de T. spiralis. El propósito de este trabajo es determinar el efecto que tiene la temperatura sobre este parásito para poder proporcionar a la población medidas profilácticas las cuales se puedan poner en práctica de manera sencilla y económica contra esta enfermedad. Material y Métodos: En este estudio se utilizaron 2 modelos experimentales: A) 2 cerdos raza York de 6 meses de edad (control y problema) el control sin infección y un problema infectado con T. spiralis para evaluar el efecto de la temperatura (cocción, frita, horno de microondas, olla de presión, refrigeración y congelación) en la viabilidad e Infectividad por medio de digestión artificial para obtener paquete larvario y observación directa al microscopio por compresión para observar sus características físicas y B) 3 ratas Long Evans se inocularon con muestras de carne (de cada procesamiento de temperatura) infectada obtenida del modelo de cerdo en cuánto a los resultados de los procedimientos empleados a temperaturas altas (cocción y frita) por compresión en la cocción a 96ºC la viabilidad dió positiva hasta los 30 min. Después de este tiempo sus características no fueron viables (sus características físicas se observaron alteradas), en cuánto a la Infectividad (capacidad de completar su ciclo vital), se observó positiva hasta el minuto 30, después de este tiempo la Infectividad fue negativa. Al observar los resultados obtenidos podemos concluir que T. spiralis es un parásito con gran capacidad de resistencia a condiciones extremas de temperatura, siendo efectivo el cocimiento de la carne en la olla de presión a los 30 minutos la infectividad y viabilidad fue negativa, en caso de no contar con la olla de presión.

Aspectos clinicos, serologicos y parasitologicos de un brote de triquinelosis humana en villa mercedes, san luis, argentina las fases aguda y cronica de la infeccion / Clinical, serological and parasitological aspects of an outbreak of human trichinellosis in Villa Mercedes, San Luis, Argentina: the acute and chronic phases of the infection

Se describen las características clínicas y serológicas de individuos cursando las fases aguda (n: 54) y crónica (n: 32) de triquinelosis, de un brote epidémico ocurrido en una zona endémica de Argentina, originado por el consumo de productos de cerdo de origen comercial. Se evaluaron los datos epidemiológicos, signos y síntomas de la parasitosis y estudios de laboratorio. Se realizaron estudios parasitológicos en pacientes y en chacinados. Los resultados mostraron que: a) la carga parasitaria de los productos de cerdo fue de 200.0±18.3 larvas/g; b) se demostró la presencia de larvas musculares en 10 de 11 pacientes estudiados; c) durante la fase aguda se observó fiebre (94%), eosinofilia (90%), mialgias (85%), cefalea (81%), edema facial (54%), diarrea (52%) y anticuerpos anti-Trichinella (64%); d) el 15% de los pacientes debió ser hospitalizado presentando el 7% de ellos complicaciones; e) durante la fase crónica se observó mialgia (72%), alteraciones visuales (22%), desórdenes gastrointestinales (31%) y la persistencia de anticuerpos (77%). Este estudio evidencia el impacto socioeconómico de la triquinelosis debido a las características clínicas de la fase aguda y a la presencia de síntomas en la fase crónica. .

The effects of Trichinella spiralis infection on renal function in rats.

Trichinella spiralis infection was induced in rats by oral feeding of infective larvae. Four weeks later, renal function, including renal plasma flow (RPF), glomerular filtration rate (GFR), excretion rate of protein, sodium and potassium were determined using clearance technics. There were no significant changes in these parameters. However, plasma urea nitrogen was significantly higher in the infected group, suggesting that either an impaired regulation of renal tubular urea transport or an increased skeletal muscle breakdown is likely.

Frecuencia de triquinosis humana en Concepción y Arauco, Chile: estudios en personas autopsiadas en el Servicio Médico Legal de Concepción: junio 1996 a marzo 1997 / Frequency of human trichinosis in Concepción and Arauco, Chile: study in autopsied persons at the Servicio Médico Legal, Concepción: june 1996 to march 1997

The frequency of trichinosis was determined in 300 dead persons, residents in the provinces of Concepción and Arauco, and requiring necropsy at the Servicio Medico Legal of Concepción. Diaphragm muscle samples were taken from june 1996 to march 1997. The diagnosis was made by trichinoscopy and artificial digestion techniques. Five samples (1.67 percent) were positive. There was not differences between sexes. Positive cases were found mainly among 30 to 49 years old people belonging to middle-lower class. Both diagnostic techniques showed diferent sensitivity as a consequence of the parasitic load and on the contrary, the artificial digestion was less sensitiva when the cyts were fully calcified

Aspectos serológicos, clínicos y epidemiológicos de un brote de triquinosis en Azul, Provincia de Buenos Aires / Serological, clinical and epidemiological aspects of an outbreak of trichinosis in Azul, province of Buenos Aires

Se estudió un brote de triquinosis ocurrido en el sur de la provincia de Buenos Aires, zona endémica para esta zoonosis. Dieciocho personas fueron afectadas por la ingesta de productos elaborados con carne de cerdo (chacinados sin el correspondiente control veterinario. Se describen síntomas y signos de los apcientes, como así también estudios serológicos relacionados con la formación de anticuerpos y la capacidad citotóxica de los sueros. Se analizaron los producto elaborados (chacinados), así como ocho cerdos interdictos de la granja donde se originó el brote. Con el fin de estudiar la cadena de transmisión se capturaron y analizaron ratas de los alrededores del hábitar de los porcinos. Este trabajo demuestra que los principales síntomas y signos fueron: mialgia, edema palpebral, fiebre y cefalea, que el 61// de los pacientes presentó anticuerpos contra el estadio de larva muscular entre los 15-30 días posteriores a la ingesta, que sólo presentaron anticuerpos contra la larva recien nacida a los 40-60 días postinfección cinco de los dieciocho pacientes, que la carga parasitaria en los chacinados fue de 5,3 larvas/g, que dos de los ocho cerdos se diagnosticaron por técnicas serológicas, mientras que por técnicas parasitológicas se detectó sólo uno y que la rata es uno de los principales reservorios en la cadena epidemiológica