Assesment of viability of yeast by flow cytometry using light green as vital dye exclusion

Se compararon dos técnicas para valorar la viabilidad de levaduras por medio de citometría de flujo aplicada a microbiología. En una se usó el colorante yoduro de propidio (YP), el cual al haber un daño de membrana pasa al citoplasma para unirse al DNA o RNA, lo que permite excluir microorganismos dañados de los íntegros, y en la otra se usó el colorante verde claro (VC), ampliamente utilizado en tinciones histológicas, histoquímicas e inmunoquímicas. El modelo de levadura utilizado fue el de muerte por calor en Candida guilliermondii. El análisis de citometría de flujo por diagramas de puntos, en ambos colorantes mostró una separación muy clara de las poblaciónes muertas hacia verde-naranja (350-600 nm) para el VC y rojo (550-725 nm) para el YP, en los canales de fluorescencia correspondientes. Todos los experimentos mostraron entre las poblaciones de levadura vivas y muertas por calor, una prueba de Kolmogorov-Smirnov (K-S) mayor de 99 por ciento de probabilidad de diferencia entre los histogramas de los organismos vivos de los muertos, con una D= con valores de 0.50-0.64 para VC y de 0.91-0.98 para YP. Dado el costo y riesgo de carcinogénesis por el YP, el VC puede ser utilizado en el análisis de viabilidad en levaduras por citofluorometría

Detection of immunoglobulins on bacterial surface by laser flow cytometry: analysis between Haemoplhilus influenzae type b and Vibrio cholerae 01 of healthy mother-full term newborn sera

The identification of human IgG immunoglobulins on the surface of Vibrio cholerae O1, and Haemophilus influenzae type b microorganisms was assessed via a flow cytometric technique. A group of 31 healthy mother-full term nerwborn duo sera from a non-endemic cholera area was assayed. The sera of mothers and full-term newborns against both microorganisms were compared. The mean fluorescent intensity of the samples was not different at the 0.05 significance level by paired t-test. On the other hand, the immunoglobulins of newborn and mothers for V. cholerae O1 was notably lower when compared with H. influenzae type b microorganisms (p<0.05 by paried t-test, t=-5.570 for mother' sera, and t=-7.496 for the sera of the newborns). These data provide circumstantial evidence that LFC techique would be useful on bacteria-related serology

Flow cytometry evaluation of complement mediated bacterial membrane damage

The study of the complement-outer bacterial membrane interactions is gaining enthusiasm for applying a continous development of more specialized techniques. In this paper a novel flow cytometry technique shows that highly fluorescent lucifer yellow-stained Neisseriae gonorrhoeae when exposed to the redox reaction of p-nitro blue chloride tetrazolium (NBT), as formazan precipitation takes place, a shift to lesser fluorescent channels of the histogram population occurs. That effect is labeled NBT-laser beam quenching (NBT-LBQ). A significant difference by Kolmogorov-Smirnov summation curve analysis is found between complement heat-inactivated and its counterpart assessed with normal complement microorganisms. The operation of this NBT-LBQ effect by microbial flow cytometry casts an interesting potential for the evaluation of the outer membrane-complement-interaction of serum sensitive microorganisms

Fenotipificación inmunológica de linfocitos en pacientes VIH+ / Immunologic phenotyping of lymphocytes in HIV-positive patients

Se estudiaron los linfocitos CD3+ , CD4+ y CD8+ de 187 pacientes que viven con el VIH-1, con edades comprendidas entre 19 y 56 años, en estadios clínicos A 1, 2, 3 (67 asintomáticos) y con SIDA en estadios B 1, 2, 3 y C 1, 2, 3 (83 pacientes). Se usó un equipo compacto que utiliza sangre total y obvia la biometría hemática, ahorrando tiempo y costo. Al compararlos con 37 sujetos normales de las mismas edades, se encontró una marcada diferencia con los testigos de 1.78 ñ 0.65 y con el grupo asintomático A 1, 2, 3 de 0.37 ñ 0.23, al analizar las proporciones CD4+/CD8+ (ANOVA, F=<5 por ciento, >1 por ciento). Extendimos nuestra observación al análisis de los ángulos formados por la unión de los puntos de las proporciones CD4+/CD8+-CD4+/CD3+ y CD4+/CD3+-CD8+/CD3+ en papel milimétrico, a una distancia de 4 cm, graficando con el 0º a la izquierda y los 90º hacia arriba. El ángulo de las proporciones CD4+/CD3+-CD8+/CD3+ para los testigos fue de 199.59º ñ 10.87º, comparado con el grupo de asintomáticos que fue de 140.59º (ANOVA, F=<5 por ciento, >1 por ciento). El sobreponer en forma de diagrama los valores de los ángulos de las proporciones, tanto de los testigos como de los grupos problema en un círculo, facilita la interpretación al clínico

We propose that the ratios of lymphocyte subsets: CD4+/CD8+, CD4+/CD3+, and CD8+/CD3+, graphically displayed in this order, could be an easy way of immunophenotyping and a simple form of interpretation both for clinicians and patients. A total of 187 asymptomatic HIV-positive patients, -including 83 symptomatic patients with AIDS- and a normal comparative age group of 36 patients, were studied by flow cytometry. Ratios were graphically displayed on millimetric-grid paper, and a specific point was given to each obtained ratio. The points were connected by a line. The angles formed by the lines were measured and graphically displayed over a circle. The point of reference 0 was located on the left side of the circle, giving the corresponding 90 , 180 , and 240 angles. The graph of the control group shows a "beach chair" image. As soon as the CD4+ lymphocytes diminish and the CD8+ lymphocytes increase in HIV+ patients, "the chair's headrest" descends and the "chair's footpiece " swivels back. Given the ranks and fluctuations of the lymphocyte subsets, their graphic display provides a better representation of the immunological status.

Microcultivo de dermatofitos en laminillas siliconadas / Silicone coated slide culture method for dermatophytes

Los dermatofitos son muy comunes en la edad pediátrica en una variedad de manifestaciones clínicas denominadas tiñas o empeines. Las especies causantes más frecuentes en México son: Trychophyton rubrum, T. mentagrophytes, T. tonsurans, Microsporum canis y Epidemophyton floccosum. Estos hongos fueron valorados por un método en cultivo líquido con una laminilla siliconada dentro y comparado con la clásica técnica de Ridell. La principal ventaja del método presentado en este trabajo es que el hongo se adhiere a la superficie hidrofóbica de la laminilla con silicona, permitiendo que los microcultivos así obtenidos se manejen con una mayor seguridad. Consideramos que esta técnica sería de gran utilidad en la identificación de hongos de alto riesgo