Saliva screening of health care workers for SARS-CoV-2 detection / Análisis del personal de salud a partir de saliva para detección de SARS-CoV-2

Abstract Health care workers (HCWs) are at high risk for SARS-CoV-2. In addition, pre-symptomatic or asymptomatic transmission accounts for around half of the cases. Saliva testingis an option to detect SARS-CoV-2 infection. To determine the performance of saliva samplesfor screening, HCWs were tested for SARS-CoV-2 by RT-PCR. Those with a positive result insaliva were tested by nasopharyngeal swabbing for viral RNA detection and blood collectionto search for the presence of specific antibodies. In September---October 2020, 100 HCWs wereenrolled and followed up. Six subjects (6%) tested positive in saliva. Of them, 5/6 were positivein a subsequent nasopharyngeal swab and 4/6 developed signs and symptoms compatible withCOVID-19. Among the latter, 3 seroconverted while asymptomatic HCWs remained seronega-tive. Saliva screening was helpful for identifying SARS-CoV-2 infection in HCWs. This screeningpermitted rapid personnel isolation avoiding further transmission of the virus in the hospitalsetting.

Resumen El personal de salud (PS) tiene un alto riesgo de contraer SARS-CoV-2. La transmisión presintomática/asintomática representa alrededor de la mitad de los casos y el análisis a partir de muestras de saliva puede ser una opción para detectar la infección. Para determinar el rendimiento de estas muestras, 100 voluntarios del PS se sometieron a la detección de SARS-CoV-2 por RT-PCR en muestras de saliva en el período septiembre-octubre de 2020. De aquellos con resultado positivo en saliva, se tomaron hisopados nasofaríngeos para detectar ARN viral y muestras de suero para evaluar anticuerpos específicos. Se detectó ARN viral en la saliva de seis individuos (6%). De ellos, 5/6 fueron SARS-CoV-2 positivos en hisopado nasofaríngeo y 4/6 desarrollaron signos y síntomas compatibles con COVID-19. Entre estos últimos, tres serocon-virtieron, en tanto que los voluntarios asintomáticos permanecieron seronegativos. La muestra de saliva fue útil para identificar la infección por SARS-CoV-2 en esta cohorte del personal de salud y así proceder al rápido aislamiento de los individuos infectados, lo que evitó una mayor transmisión del virus en el ámbito hospitalario.

Diagnóstico de virus respiratorios utilizando un sistema automatizado de PCR múltiples (FilmArray) y su comparación con métodos convencionales / Respiratory viral diagnosis by using an automated system of multiplex PCR (FilmArray) compared to conventional methods

Las infecciones respiratorias agudas producen una importante morbimortalidad y comúnmente son causadas por virus. En Argentina, los programas de vigilancia epidemiológica se basan en la detección de antígenos virales por inmunofluorescencia (IF), aunque es bien conocido que los métodos moleculares son más sensibles. El panel respiratorio (PR) FilmArray (PR-FilmArray) es un equipo comercial automatizado de PCR múltiples que detecta 17 virus respiratorios y 3 bacterias, en un sistema cerrado que requiere 5 min de procesamiento y una 1 h de instrumentación. Se evaluó un total de 315 muestras respiratorias de niños menores de 6 años con infecciones respiratorias agudas por IF para 8 virus respiratorios y por RT-PCR para rinovirus. Posteriormente, estas muestras se estudiaron con el PR-FilmArray. La frecuencia de positividad al considerar los 9 virus estudiados por IF y RT-PCR fue del 75 %; por PR-FilmArray fue del 92 %. El porcentaje de acuerdo positivo entre ambas metodologías fue del 70,5 % y el de acuerdo negativo fue del 99,6 % (intervalo de confianza 95 %: 65,5-75,1 y 99,2-99,8, respectivamente). El PR-FilmArray permitió obtener un mayor diagnóstico positivo (97 %) y detectó otros virus, como los coronavirus NL63, 229E, OC43 y HKU1 (10 %) y los bocavirus (18 %). Además, permitió identificar coinfecciones múltiples (39 %) con 2, 3, 4 y hasta 5 virus. Actualmente, la IF continúa siendo el método más utilizado en los países latinoamericanos para el diagnóstico de virus respiratorios por su bajo costo, por su capacidad para procesar un alto número de muestras simultáneamente y porque los resultados de los virus más frecuentes están disponibles en 5 h. Sin embargo, la futura incorporación de métodos moleculares aumentaría notablemente la capacidad diagnóstica.

Acute respiratory infections, which are commonly caused by viruses, are an important cause of morbidity and mortality in children. In Argentina, national surveillance programs for the detection of respiratory viruses are usually performed by using immunofluorescence (IF) assays, although it is well known that molecular methods are more sensitive. An automated multiplex PCR device, the FilmArray-Respiratory Panel (FilmArray-RP), can detect 17 viral and 3 bacterial pathogens in a closed system that requires only 5 min of hands-on time and 1 h of instrumentation time. A total of 315 respiratory samples from children under 6 years of age suffering from acute respiratory infections, were studied by IF for 8 respiratory viruses and by RT-PCR for rhinoviruses. Later, these samples were tested by the FilmArray-RP. The positivity frequency obtained for the 9 viruses tested was 75 % by IF/RT-PCR and 92 % by the FilmArray-RP. The positive and negative percent agreement between both methods was 70.5 % whereas the negative percent agreement was 99.6 % (95 % confidence interval:65.5-75.1 and 99.2-99.8 respectively). The FilmArray-RP allowed a higher positive diagnosis (97 %) and detected other viruses such as coronavirus NL63, 229E, OC43, HKU1 (10 %) and bocavirus (18 %). In addition, this method identified multiple coinfections (39 %) with 2, 3, 4 and up to 5 different viruses. At present, IF is still the most frequently used method in most Latin American countries for respiratory viruses diagnosis due to its low cost, its capability to process a high number of samples simultaneously and the fast determination of results for the most frequent viruses, which are available within 5 h. However, the coming incorporation of molecular methods in routine procedures will significantly increase the diagnostic yield of these infections.

Rhinovirus detection by real-time RT-PCR in children with acute respiratory infection in Buenos Aires, Argentina / Detección de rinovirus por RT-PCR en tiempo real en muestras respiratorias de niños de Buenos Aires, Argentina

Human rhinoviruses (HRV), the major cause of common colds, have a significant genetic diversity and are classified into 3 species (A, B, C) with more than 100 serotypes. HRV species C, described in 2006, can only be detected using molecular methods. The objectives of this paper were to adapt a real-time reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) assay for HRV detection and to further determine the frequency of HRV in respiratory samples from children under 2 years of age, with acute respiratory infection (ARI), from Buenos Aires, Argentina. Two real-time RT-PCR assays amplifying the 207 base pair of the 5' non-coding region were compared. The original protocol includes locked nucleic acid analogues and a pyrimidine derivative in the forward primer, while the adapted protocol avoided those molecules. Of 67 respiratory samples, 17 (25.4 %) were positive with the original protocol, and 20 (29.9 %) with the adapted one. Discrepant results were confirmed by sequencing analysis. An expanded gold standard was defined to determine the performance of both assays, and was used to describe the clinical characteristics of positive patients. Better sensitivity and specificity were obtained with the adapted protocol. Considering the expanded gold standard, HRV were detected in 23/67 (34.3 %) patients with ARI: 8/18 (44.4%) outpatients and 15/49 (30.6 %) hospitalized. Wheezing episodes were more frequent in HRV positive patients (43.5 %) than in HRV negative patients (18.2 %) (p = 0.041). This study describes the utility and clinical sensitivity of an adapted real-time RT-PCR assay for HRV detection.

Los rinovirus humanos (RVH) constituyen la principal causa de resfrío común y poseen una gran diversidad genética, con más de 100 serotipos clasificados en tres especies (A, B, C). Los RVH C fueron descritos en 2006 y solo pueden detectarse utilizando métodos moleculares. El objetivo del presente trabajo fue adaptar un protocolo de transcripción reversa seguida de reacción en cadena de polimerasa (RT-PCR) en tiempo real para detectar RVH y posteriormente determinar su frecuencia en muestras de niños menores de 2 años con infección respiratoria aguda (IRA). Se compararon dos protocolos de RT-PCR en tiempo real, que amplifican 207 pares de bases de la región 5' no codificante. El protocolo original incluyó un cebador directo con análogos de nucleótidos bloqueados (LNA) y un derivado pirimidínico en su secuencia, mientras que el protocolo adaptado no los incluyó. De 67 muestras, 17 (25,4 %) fueron positivas con el protocolo original y 20 (29,9 %) con el protocolo adaptado; los resultados discrepantes se confirmaron por secuenciación. Se definió un gold standard expandido para determinar el desempeño de ambos ensayos y describir las características clínicas de los pacientes RVH positivos. La mejor sensibilidad y especificidad se obtuvo con el protocolo adaptado. Considerando el gold standard expandido, se detectó RVH en 23/67 (34,3 %) pacientes con IRA: 44,4 % (8/18) ambulatorios y 30,6 % (15/49) internados. Los episodios de sibilancias fueron más frecuentes en pacientes RVH positivos (43,5 %) que en RVH negativos (18,2 %) (p = 0,041). El presente estudio describe la utilidad y la sensibilidad clínica de esta RT-PCR en tiempo real adaptada para detectar RVH.

Rinovirus: Frecuencia en niños con infección respiratoria aguda, no internados / Rhinoviruses: Frequency in nonhospitalized children with acute respiratory infection

Los métodos moleculares para diagnosticar rinovirus humanos (RVH) han aumentado la sensibilidad de detección. Esto ha permitido documentar la asociación entre los RVH y las infecciones respiratorias agudas (IRA) altas y bajas. La infección por RVH durante la infancia se asoció con posterior desarrollo de asma. Se estudió la frecuencia de RVH en 186 niños menores de 6 años ambulatorios con IRA (alta o baja), durante 2 años consecutivos (1/6/2008 - 31/5/2010). Se correlacionó la presencia de RVH con los antecedentes y características clínico-epidemiológicas. La detección de RVH se realizó con una RT-PCR en tiempo real que amplifica parte de la región 5' no codificante del genoma. Los virus respiratorios clásicos se estudiaron por inmunofluorescencia. En el 61% de los niños se detectó etiología viral. Las frecuencias fueron: RVH 27%, virus sincicial respiratorio (VSR) 16%, influenza A y B 9%, parainfluenza 8%, metapneumovirus 7% y adenovirus 0.5%. Se observaron coinfecciones duales en 8 casos, siendo RVH el más frecuente (en 4 de ellos). Los RVH circularon durante todo el período estudiado, con picos en invierno y primavera. No se observaron diferencias clínico-epidemiológicas significativas entre pacientes con o sin RVH, excepto un mayor porcentaje de niños afebriles con RVH. Los RVH fueron los virus más detectados en niños ambulatorios, principalmente en menores de 2 años, los segundos virus asociados a bronquiolitis, luego del VSR, y detectados tres veces más en los niños expuestos a tabaquismo pasivo (OR: 2,91; p = 0.012) que en el resto. Fueron identificados como único agente en el 28% de las bronquiolitis.

Molecular methods for human rhinoviruses (HRV) have increased the sensitivity in their diagnosis. HRV may cause acute respiratory infections (ARI) of the upper and lower respiratory tract. HRV infection during childhood is a predictor of asthma development. In this study, the HRV frequency in outpatient children with ARI was determined, and their clinical features and previous conditions were evaluated. A total of 186 respiratory samples of children under 6 year old attending the CEMIC pediatric emergency room from June 1, 2008 to May 31, 2010, were studied. Classical respiratory viruses were detected by immunofluorescence. A real time RT-PCR that amplifies part of the 5' non coding genomic region was used for HRV detection. Viral detection was obtained in 61% of children. The frequency was: 27% for HRV, 16% for respiratory syncytial virus (RSV), 9% for influenza, 8% for parainfluenza, 7% for metapneumovirus and 0.5% for adenovirus. Dual coinfection was detected in 8 children and HRV were the most frequent, detected in 4 of them. HRV circulated during the two year period of the study, with peaks during winter and spring. No clinical difference was observed between patients with or without HRV, except an increase percent of children with HRV without fever. HRV were the most frequent viruses detected in this population, mainly in children under 2 year old, the second cause of bronchiolitis after RSV and more frequently detected in children exposed to passive smoking (OR = 2.91; p = 0.012), and were detected as the sole etiologic agent in 28% of bronchiolitis.

Infección respiratoria aguda viral en niños menores de 5 años: Estudio epidemiológico en dos centros de Buenos Aires, Argentina / Acute viral respiratory infection in children under 5 years: Epidemiological study in two centers in Buenos Aires, Argentina

Introducción. Las infecciones respiratorias agudas (IRA) son la mayor causa de hospitalización en edades extremas de la vida. Objetivos. Identifcar los agentes etiológicos de IRA viral en niños < 5 años hospitalizados y ambulatorios; describir estacionalidad y características clínico-epidemiológicas de la enfermedad. Población y métodos. Estudio descriptivo, transversal y multicéntrico en dos centros privados de Buenos Aires, en niños con IRA alta y baja. Se registraron antecedentes, cuadros clínicos y estudios virológicos. Resultados. Se estudiaron 347 pacientes: 235 hospitalizados; 112 ambulatorios. Los hospitalizados fueron menores que los ambulatorios (8 vs. 19 meses, p <0,001), presentaron más frecuentemente bronquiolitis (74% hospitalizados vs. 24% ambulatorios) y neumonía (14% hospitalizados vs. 5% ambulatorios). Solo la edad se asoció signifcativamente a hospitalización (p= 0,01). Se identifcó etiología viral en 81% de los hospitalizados y 57% de los ambulatorios. El virus más frecuente fue rinovirus seguido por virus respiratorio sincicial. Se observó circulación viral durante todo el año, especialmente en otoño e invierno. En pacientes hospitalizados, la mediana de hospitalización fue 3,5 días. Requirieron cuidados intensivos 25 (11%) pacientes, y 7 (3%) recibieron asistencia ventilatoria mecánica. No hubo letalidad. Conclusiones. Las técnicas de diagnóstico virológico permitieron identifcar agentes etiológicos en la mayoría de los pacientes hospitalizados y en más de la mitad de los ambulatorios con IRA. La incorporación de RT-PCR para rinovirus, permitió la identifcación de este agente etiológico. La circulación viral se observó a lo largo de todo el año. La bronquiolitis fue causa de internación en 174/201 (86,5%) niños con IRA y la neumonía en 33/39 (84,6%) niños.

Introduction. Acute respiratory infections (ARI) are a major cause of hospitalization particularly at the extreme ages of life. Objectives. To determine the viral diagnosis in children < 5 years old with ARI, seasonality, clinical and epidemiological characteristics. Population and methods. A cross-sectional, descriptive and multicenter study was performed. Respiratory samples from patients with ARI hospitalized or outpatients with < 5 days of respiratory symptoms from June 2008 to May 2009 were studied for respiratory viruses. Clinical and demographic data were recorded. Results. A total of 347 patients were enrolled: 234 hospitalized and 112 outpatients. Hospitalized patients were younger compared with outpatients (8 vs. 19 months, p <0.001) and presented more frequently bronchiolitis (74% hospitalized vs. 24% outpatients) and pneumonia (14% hospitalized vs. 5% outpatients). Age was statistically associated with hospitalization (p= 0.01). Viral diagnosis was achieved in 81% hospitalized and 57% of outpatients. Rhinovirus was the most frequent followed by respiratory syncytial virus. The rest of respiratory viruses were observed with lower frequency. Viral circulation was observed throughout the whole year. The median length of stay was 3.5 days. Intensive care was required in 11% of hospitalized patients and 3% required mechanical ventilation. No deaths were recorded. Conclusions. The use of viral diagnostic techniques allowed the identifcation of an etiologic agent in most of the hospitalized patients and more than half of outpatients. The addition of RT-PCR for rhinovirus, allowed the identifcation of this etiologic agent. Viral circulation was observed throughout the whole year. Hospitalized patients presented bronchiolitis and pneumonia more frequently than outpatients.

Neuropatía por virus BK post trasplante renal diagnostico y seguimiento por PCR en tiempo real / BK virus nephropathy after renal transplantation: Diagnosis and prognosis by real time PCR

La nefropatía producida por el virus BK puede llevar a la pérdida del trasplante renal. El diagnóstico etiológico es importante debido a que la clínica no permite diferenciar entre nefropatía por virus BK y rechazo agudo, en donde los tratamientos de estas dos entidades son diametralmente opuestos. El desarrollo reciente de métodos moleculares muy sensibles y específicos como PCR y PCR en tiempo real para virus BK permiten un diagnóstico de certeza en forma rápida y cuantificar la carga viral presente. El diagnóstico de nefropatía por virus BK se realiza por inmunohistoquímica en una biopsia renal, pero dada la naturaleza multifocal de las lesiones, la sensibilidad no siempre es del 100%. Los nuevos métodos de PCR para detectar virus BK en sangre y orina contribuyen al diagnóstico de nefropatía de una manera más normatizada y menos invasiva. Más aún, la cuantificación del virus BK en sangre por PCR en tiempo real, ha demostrado ser útil en el diagnóstico y monitoreo de esta enfermedad. En este trabajo se presenta el caso de una paciente transplantada renal con nefropatía por virus BK y el desarrollo de un método de PCR en tiempo real para la detección de virus BK en sangre y orina. Esta nueva metodología confirmó el diagnóstico de nefropatía por virus BK lo que permitió un cambio en el esquema de inmunosupresión y la instauración de un tratamiento que pudo ser monitorizado utilizando la carga viral.

BK virus nephropathy may lead to kidney transplant failure. BK infection and acute rejection are clinically undistinguishable, therefore diagnosis of these entities is critical to establish the correct treatment. The new molecular methods using PCR and real time PCR have significantly contributed to the rapid and sensitive diagnosis of BK virus. Furthermore, viral load determination in plasma has significantly been associated with BK virus nephropathy. Definite diagnosis of nephropathy requires renal biopsy, although due to the multifocal nature of the disease sensitivity may be less than 100%. BK detection in blood and urine by PCR has contributed to the diagnosis of nephropathy in a more standardized and less invasive way. Recently, quantification of BK virus in plasma has been used for the diagnosis and monitoring of this disease. In the present study, we describe the validation of a real time PCR method for BK virus detection in plasma and urine and its application for diagnosis and monitoring in a renal transplant patient with nephropathy.

Aislamiento de citomegalovirus por cultivo convencional y cultivo rápido / Cytomegalovirus isolation by conventional cell culture and shell vial assay

In immunocompromised patients, diagnosis of Cytomegalovirus (CMV) active infection is of utmost importance for the initiation, monitoring and ending of antiviral therapy. Therefore, the presence of viral replication should be demonstrated. Isolation in tissue culture is one of the standard methods. The objective of the present paper was to compare two isolation procedures for CMV: conventional cell culture (CC) and rapid shell vial (SV) assay in human fibroblasts. A total of 584 clinical samples were studied between 1991 and 1998. CMV was isolated in 14.4 per cent of the samples, 11.8 per cent of which were positive by SV and 7.7 per cent by CC. Out of 84 positive samples, concordance between both methods was observed in 36 per cent of the cases. We found that 46 per cent of the samples were positive only by SV, while 18 per cent were positive only by CC. The average time required for obtaining the results by CC was 22.6 +/- 2.3 days. Out of the 69 samples positive by SV, 43 per cent were already positive after 24 hours and the rest after 48 hours. These results indicate that SV was more sensitive and rapid than CC. The main advantage of CC, despite its time-consuming process, is the ability to recover the viral strain for both antiviral susceptibility phenotypical tests and strain characterization. Furthermore, in this study, absence of CC would have resulted in the loss of 18 per cent of the positive diagnoses. In conclusion, simultaneous use of both methods is suggested in order to obtain a rapid result and the highest sensitivity.

Chlamydia trachomatis y esterilidad por obstrucción tubaria / Chlamydia trachomatis and sterility by tubal obstruction

Se estudió la presencia de IgG e IGM específicas contra C. Trachomatis en dos poblaciones de mujeres, una de embarazadas y otra de estériles con obstrucción tubaria comprobada por histerosalpingografia y/o laparoscopía. Se empleó un método de inmunofluorescencia indirecta sobre células MacCoy infectadas con el serotipo L2 BU434 de C. Trachomatis. El 15,6 por ciento (5/32) de las mujeres estériles presentó IgM específica anti-C. trachomatis y el 75 por ciento (24/32) IgG. El 4,8 por ciento (4/83) de las embarazadas presentó IgM y el 20,5 por ciento (17/83) IgG. La frecuencia de detección de IgG anti-C. trachomatis fue significativamente mayor (p < 0,000) en la población de mujeres estériles que en la de embarazadas. Además, las medias geométricas del título de anticuerpos en mujeres estériles fue mayor (90) que en las fértiles (70). En 12 de 14 (85 por ciento) mujeres estériles con serología positiva se observaron imágines laparoscópicas compatibles con infección por C. trachomatis. Se detectó antígeno de clamidia en 2 de 10 biopsias de trompas por inmunofluorescencia con anticuerpos monoclonales, siendo todos los aislamientos negativos. Nuestros resultados señalan la importancia de C. trachomatis en la esterilidad por obstrucción tubaria y la necesidad de incorporar a los análisis ginecológicos del diagnóstico de este agente a fin de prevenir la infección neonatal y los riesgos de esterilidad

Prevalence of anti-cytomegalovirus antibodies in a children population of Buenos Aires

El objetivo de este trabajo fue determinar la prevalencia de anticuerpos anti-Cytomegalovirus en una población de niños de nivel socio-económico medio. Se estudiaron 207 niños atendidos en CEMIC, que se dividieron en los siguientes grupos: Grupo 1, recién nacidos (sangre de cordón), n = 87; Grupo 2, niños de 13 meses a 6 años, n = 54; Grupo 3, niños de 6 a 15 años, n = 66. Se investigó la presencia de anticuerpos anti-Citomegalovirus mediante un método de enzimo-inmunoensayo (ELISA) preparado en nuestro laboratorio empeando la cepa prototipo AD 169. Este método fue comparado con reactivos comerciales obteniéndose idénticos resultados. Se detectó una prevalencia de anticuerpos anti-Citomegalovirus del 46,3% en el total de la población estudiada. La seroprevalencia y las medidas de títulos de anticuerpos fueron: Grupo 1, 55%, X = 2,16; Grupo 2,90,7%, X = 5,15; Grupo 3,59%, X = 2,49. El grupo 2 presentó un mayor porcentaje de seropositividad (90,7%) que los otros dos grupos (Test de X* p < 0.0001). Asimismo, la media de índice fue también significativamente más elevada (Test t de Student p < 0,0001). Estos resultados sugieren que la primoinfección con Citomegalovirus en esta población ocurre en el grupo de 13 meses a 6 años (Grupo 2) y que existe un alto porcentaje de primoinfección antes de la sangre de cordón estudiada (Grupo 1) carecía de anticuerpos anti-Citomegalovirus, existe un alto riesgo para esos recién nacidos de adquirir la infección en forma congénita o bien en caso de tansfusiones de sangre o alimentación con leche de banco. Son necesarios posteriores estudios para determinar la prevalencia de anticuerpos anti-Citomegalovirus en otras poblaciones pertenecientes a medios socio-económicos diferentes y en bancos de sangre, así como la frecuencia de enfermedad severa por este virus en pacientes inmunocomprometidos

Respuesta serológica medida por fijación de complemento en niños con infección respiratoria aguda / Serological response by complement fixation in children with acute respiratory infections

El objetivo de este trabajo fue evaluar la sensibilidad de la prueba de fijación de complemento en el diagnóstico serológico de las infecciones respiratorias agudas (IRA) bajas en niños en comparación con los métodos directos: inmunofluorescencia indirecta (IFI) sobre aspirado nasofaríngeo y aislamiento en cultivo de tejidos. Se estudiaron sueros de niños menores de 5 años con IRA por fijación de complemento para 6 virus respiratorios (virus respiratorio sincicial (VRS), adenovirus, influenza A y B y parainfluenza 1 y 3). En total se estudiaron 264 pares de sueros, de los cuales 135 correspondían a niños con etiología viral confirmada y a 90 con etiología viral dudosa. Treinta y nueve sueros resultaron anticomplementarios. En los niños con IRA viral demostrada se detectó seroconversión en el 38%, mientras que en aquellos con diagnóstico dudoso se detectó seroconversión sólo en el 14%. Para VRS, se observó seroconversión en el 39% de los casos mientras que para adenovirus se detectó en el 50%. Cuando se analizó la seroconversión para los 6 virus por grupos etarios, se observó un 20% de positividad para el grupo de 0-5 meses y de 35% y 30% para los grupos de 6-10 y mayores de 11 meses respectivamente. Para VRS exclusivamente, los pacientes de 0-5 meses presentaron un 25% de seroconversión y los mayores de 6 meses más del 60% (p < 0.001). La sensibilidad de la prueba de fijación de complemento en relación a los métodos directos (IFI y/o cultivo) fue de 38,5%. Este trabajo corrobora la...

Infeccíon intracerebral de ratones atímicos con una cepa atenuada de virus Junín / Intracerebral infection of athymic mice with an attenuated strain of junín virus

La infección del ratón lactante inmunocompetente eutímico (nu/+) con la cepa XJ del viru Junín provoca una encefalitis mortal debida a la respuesta inmune celular del huésped. Por el contrario, esa cepa inoculada en ratones atímicos (nu/nu) induce una infección persistente asintompatica. El objetivo del presente trabajo fue determinar el comportamiento de la cepa atenuada XJCl3 en el ratón nu/nu. Se inocularon por vía intracerebral (ic) 55 ratones lactantes nu/nu y 45 nu/+ con 10**3 UFP de la cepa XJCl3. Como controles se utilizaron 20 ratones nu/nu y 20 nu/+ infectar. Se observó en los ratones nu/nu y nu/+ una mortalidad similar (86%, respectivamente), mientras que no se observó mortalidad en los controles, que se mantuvieron en el mismo bioterio. Se detectaron altos títulos virales en cerebro y pulmón de los nu/nu infectados a los 7, 14, 21 y 70 días pi. Los títulos de virus en sangre fueron de 1 a 2 log más que en esos órganos. Estudios inmunohistoquímicos de cerebro mostraron antígeno viral intracitoplasmático en neuronas corticales a los 21 y 70 días pi. En el estudio histopatológico de pulmón de los nu/nu infectados se observó una neurmonbitis intersticial con focos de hemorragia a los 7 y 21 días pi. En cerebro y bazo no se detectó patología. Se muestra así que la cepa XJCl3 se comporta en el ratón lactante nu/nu en forma muy diferente a la cepa patógena XJ, siendo necesarios otros estudios para determinar cuáles son los mecanismos patogénicos involucrados

Diagnóstico serológico rápido de fiebre hemorrágica argentina en sangre entera / Rapid serologic diagnosis of Argentinian hemorrhagic fever in whole blood

Se estudió la utilidad de un nuevo método que permite conservar la actividad de anticuerpos en sangre entera, para el diagnóstico serológico de Fiebre Hemorrágica Argentina. Ratones N: NIH adultos fueron inoculados por vía intraperitoneal con 10**3 UFP de la cepa XJ-Clon 3 de virus Junín y fueron sangrados por unción retroorbital a los 21 días post-infección. Una aliquota de sangre (50 micronl) se colocó en tubos conteniendo una solución conservadora para sangre entera (equipo comercial) y el resto se procesó para la obtención de suero. Se investigó la presencia de anticuerpos por inmunofluorescencia indirecta sobre células BHK/21 persistentemente infectadas con virus Junín. Se detectaron altos títulos de anticuerpos (1/64 a 1/256) tanto al emplear sangre entera como suero, registrándose un 66% de coincidencia entre los títulos de anticuerpos con ambos procedimientos. Estos resultados señalan que el método de detección de anticuerpos en sangre entera podría ser de utilidad para la búsqueda de anticuerpos anti-virus Junín en forma rápida, lo que facilitaría la realización de estudios seroepidemiológicos en forma masiva en áreas endémicas

Psittacosis in humans in Argentina (1977-1981)

Ha sido estudiada en Argentina la incidencia de Chlamydia psittaci durante el período 1977-1981 empleando la técnica de fijación de complemento en 949 muestras de sueros obtenidas de pacientes con datos epidemiológicos y/o clínicos compatibles con ornitosis. Del total, 387 (41%) presentaron anticuerpos contra antígeno de Chlamydia psittaci. La incidencia fue mayor en adultos que en niños y en hombres que en mujeres. Hubo mayor incidencia en primavera que en las restantes estaciones. En el 25% de los casos positivos no se pudo establecer el antecedentes de contacto con aves. Hubo 2 casos de contagio inter-humano. Con posterioridad al brote epidémico de 1977 se observa entre 1978 y 1981 un incremento anual del número de casos diagnosticados. Resta dilucidar si esto es debido a un aumento real de la enfermedad o a un mejor conocimiento de la misma

Antígenos inactivados de virus Junín / Inactivated Junín virus antigens

El objetivo de este trabajo fue obtener un antígeno inactivado de virus Junín capaz de inducir protección en cobayos contra el desafío con la cepa XJ prototipo. Se utilizó como antígeno, la cepa XJ-Clon 3 replicada en cerebro de ratón y se ensayaron tres métodos de inactivación: formaldehido, acetona y calor. Con formaldehido se emplearon 3 dosis: concentración final de 0,05% durante 24 h, 0,2% durante 2 n y 0,05% durante 3 h. Las curvas de inactivación demostraron que en el primer caso, el virus se inactiva a la h de exposición mientras que en el segundo se logra ya a los 30 min. Aunque el formaldehido demostró ser un inactivante eficaz, ninguno de los antígenos preparados protegió a los cobayos contra el desafío XJ. No se observó retraso significativo en la fecha de muerte ni modificación en las curvas de peso con respecto a los controles desafiados y sin inmunizar. Todos los animales murieron con el cuadro hemorrágico típico de FHA, excepto el grupo que recibió la dosis máxima de antígeno inactivado con formaldehido en el que se observó mortalidad en ausencia de cuadro hemorrágico. Los antígenos inactivados con calor (37-C 48 h) o con acetona tampoco resultaron eficaces en la protección de cobayos. Solamente los antígenos inactivados con formaldehido desencadenaron una respuesta inmune no protectora, evidenciada por los bajos títulos de anticuerpos inmunofluorescentes y fijadores de complemento; por el contrario, no se detectaron anticuerpos neutralizantes. Se discuten las posibles causas de la no protección así como los riesgos de vacunas a virus vivos y atenuados versus vacunas a virus inactivados para Fiebre Hemorrágica Argentina

Falta de persistencia del virus en dos Cebus sp / Lack of viral persistence in 2 Cebus sp

Dos Cebus sp sobrevivientes a la infección por vía intramuscular e intracerebral con las cepas XJ y XJ Clon 3 virus Junín, respectivamente, no exhibieron persistencia viral. Aunque ambos primates fueron sometidos a tratamiento con drogas inmunosupresoras, so se aisló virus Junín de sangre ni de órganos, aún luego de realizarse pasajes ciegos en ráton para aquélla y cocultivos con células Vero para los últimos. Luego del tratamiento tampoco se detectaron antígenos de virus Junín por inmunofluorescencia en células BHK/21 inoculadas con sangre. Estos hallazgos coinciden con lo observado en el ser humano en quien no se ha descripto viremia más allá del período agudo de la Fiebre Hemorrágica Argentina

Infeccion experimental de un primate sudamericano, el Cebus sp, con la cepa XJ de virus Junin. / Experimental infection of a South American primate the Cebus sp, with XJ strain of Junin virus

La inoculacion por via im del Cebus sp con la cepa XJ de virus Junin ha demostrado que este primate sudamericano es sensible a la infeccion. Los animales infectados presentaron poliadenopatias generalizadas, disminucion de peso, viremia, virus en fauces y leuco-plaquetopenia. Todos desarrollaron una rapida respuesta inmune humoral y se recuperaron a partir de la 2a.semana pi. Sin embargo, uno de cuatro animales evidencio un cuadro neurologico tardio en presencia de anticuerpos circulantes. En su cerebro se pudieron observar depositos de gamma globulinas y complemento en estructuras capilares por inmunofluorescencia, asi como leves infiltrados linfocitarios meningeos focales. Este trabajo sugiere que el Cebus sp podria ser un modelo experimental util para dilucidar mecanismos inmunopatogenicos a nivel del sistema nervioso central inducidos por el virus Junin