Relationship of short tandem repeats flanking leptin-melanocortin pathway genes with anthropometric profile and leptinemia in Brazilian individuals / Relação de short tandem repeats (STR) em genes envolvidos na via da leptina-melanocortina com o perfil antropométrico e a leptinemia em brasileiros

OBJECTIVE: To investigate the relationship of short tandem repeats (STR) near genes involved in the leptin-melanocortin pathway with body mass index (BMI) and leptinemia. SUBJECTS AND METHODS: Anthropometric variables and leptinemia were measured in 100 obese and 110 nonobese individuals. D1S200, D2S1788, DS11912, and D18S858 loci were analyzed by PCR and high-resolution electrophoresis. RESULTS: Overall STR allele frequencies were similar between the obese and non-obese group (p > 0.05). Individual alleles D1S200 (17), D11S912 (43), D18S858 (11/12) were associated with obesity (p < 0.05). Individuals carrying these alleles showed higher BMI than non-carriers (p < 0.05). Moreover, a relationship between D18S858 11/12 alleles and increased waist circumference was found (p = 0.040). On the other hand, leptinemia was not influenced by the studied STRs (p > 0.05). CONCLUSIONS: D1S200, D11S912, and D18S858 loci are associated with increased BMI and risk for obesity in this sample.

OBJETIVO: Investigar a relação de short tandem repeats (STR) em genes envolvidos na via da leptina-melanocortina com índice de massa corporal (IMC) e leptinemia. SUJEITOS E MÉTODOS: Variáveis antropométricas e leptinemia foram medidas em 100 indivíduos obesos e 110 não obesos. Os loci D1S200, D2S1788, DS11912 e D18S858 foram analisados por PCR e eletroforese de alta resolução. RESULTADOS: As frequências globais dos alelos da STR foram similares entre os grupos obeso e não obeso (p > 0,05). Alelos individuais de D1S200 (17), D11S912 (43), D18S858 (11/12) foram associados com obesidade (p < 0,05). Indivíduos portadores desses alelos apresentaram valores de IMC maiores que os dos não portadores (p < 0,05). Além disso, a presença dos alelos D18S858 11/12 foi relacionada com circunferência abdominal elevada (p = 0,040). Por outro lado, a leptinemia não foi influenciada pelos STRs estudados (p > 0,05). CONCLUSÕES: Os loci D1S200, D11S912 e D18S858 são associados com IMC aumentado e risco de obesidade nesta amostra populacional.

Micrométodo para extraçäo de DNA genômico útil no diagnóstico molecular da Hipercolesterolemia Familial / A micromethod for DNA extraction useful in the molecular diagnostic of Familial Hypercholesterolemia

Os métodos para para extraçäo de DNA empregados hoje em dia na rotina laboratorial, utilizam grandes volumes de sangue, o que constitui um problema quando se usam amostras pediátricas. Outros métodos envolvem várias etapas, näo sendo adequadas para rotina laboratorial. No presente trabalho, foi desenvolvido um mátodo rápido de extraçäo de DNA de sangue total para pequenos volumes de amostra. Brevemente, volumes iguais de sangue total e NaI a 6M foram misturados. A seguir, as proteínas e debris celulares foram removidas por adiçäo de uma mistura de clorofórmio/álcool isoamílico (24:1). O DNA foi isolado da fase aquosa e purificado com isopropanol. Amostras de DNA foram também extraídas pelo método de precipitaçäo salina, previamente desenvolvido em nosso laboratório. A quantificaçäo e a pureza do DNA foram realizadas por espectrofotometria em 260 e 280 nm, sendo a sua integridade verificada por eletroforese em gel de agarose a 1 porcento. A quantidade de DNA de sangue total obtida pelo método proposto foi 1,5 vezes superior à obtida pela técnica de precipitaçäo salina (28,6 ñ 7,8 vs. 19,1 ñ 3,5µg/ml de sangue, respectivamente; p=0,0003). A pureza do DNA foi também superior (A subscrito 260/280=1,73ñ0,18 vs. 1,61ñ0,06, respectivamente; p=0,0164). Utilizando o DNA extraído pelo micrométodo, obtivemos sucesso na triagem de alteraçöes genéticas no receptor da LDL e na apolipoproteína B em pacientes com Hipercolesterolemia Familial (HF). Em resumo, o procedimento de extraçäo de DNA é simples, rápido e aplicável para obtençäo de DNA genômico de alta qualidade em 30 minutos, sendo portanto, útil no diagnóstico molecular da HF

Avaliaçäo do desempenho analítico da determinaçäo de uréia sérica por método enzimático / Evaluation of the analytical performance of the urea assay in serum by enzymatic method

A uréia é um produto do metabolismo dos aminoácidos no organismo humano e sua análise é relevante na avaliação das funções renal e hepática. A determinação da uréia é usualmente realizada por métodos colorimétricos e enzimáticos, que devem ser avaliados para implantação na rotina laboratorial. Com a finalidade de avaliar o desempenho analítico de método enzimático no UV para a determinação da concentração de uréia sérica, por procedimentos manual e automatizado, foram analisados materiais de referência, de controle e 30 amostras de soro provenientes do Hospital Universitário da USP. Embora os dados de desempenho analítico tenham mostrado que o procedimento automatizado apresenta maior grau de precisão e exatidão (C.V.-1,9 por cento, C.D.-3,3 por cento) que o manual (C.V.-5,0 por cento, C.D.-5,0 por cento) não se observou diferença significativa entre os resultados obtidos pelos dois procedimentos, utilizando materiais de referência certificado ou materiais de controle...

Extração de DNA de coágulo sanguíneo humano como método alternativo para estudos de genotipagem / DNA extraction from clotted human blood as a alternative method for genotyping studies

Foi otimizado um método de extração de DNA de coágulo sangüíneo. Amostras de sangue total colhidas em EDTA e de coágulo foram obtidas de 10 indivíduos não aparentados. Os coágulos foram homogeneizados (sistema Potter-Elvelyn NSE-11R). O DNA foi extraído pelo método de precipitação salina modificado (Clin.Chem.42-S298,1996). A quantificação e a pureza do DNA foram realizadas por espectrofotometria em 260 e 280 nm, sendo a sua integridade verificada por eletroforese em gel de agarose. A qualidade do DNA foi avaliada por amplificação da região polimórfica Ava II do gene do receptor da LDL, por PCR. A quantidade de DNA de coágulo foi semelhante a de sangue total (61,5 ± 11,9 e 60,6 ± 12,6 mg/ml de sangue, respectivamente). A pureza do DNA de coágulo foi semelhante a de sangue total (A260/280=1,87 ± 0,19 e 1,96 ± 0,17, respectivamente). As amostras de DNA apresentaram-se intactas no gel de agarose e sem contaminação com RNA. O rendimento do DNA obtido por este método dói maior que o dos descritos em outros estudos e mostrou-se adequado para análise do polimorfismo genético do receptor da LDL. Portanto, o procedimento de extração de DNA, otimizado em nosso laboratório, é simples, rápido e aplicável para obtenção de DNA de alta qualidade de amostras de coágulo sangüíneo, sendo útil em estudos de genotipagem.