Avaliação do método de disco-difusão para determinação da eficácia da terbinafina in vitro em agentes de micoses superficiais e subcutâneas / Evaluation of the disk-diffusion method to determine the in vitro efficacy of terbinafine against subcutaneous and superficial mycoses agents

FUNDAMENTOS: As micoses superficiais e subcutâneas têm alta prevalência e, muitas vezes, caráter crônico, necessitando tratamentos tópicos e/ou sistêmicos com antifúngicos. As drogas de escolha são azóis e alilaminas (terbinafina). É necessário avaliar a eficácia das drogas para tratamento em humanos e em animais. Estudos para avaliar in vitro a ação dos antimicóticos são raros, especialmente, contra fungos filamentosos. OBJETIVO: Avaliar a eficácia in vitro da terbinafina pelo método de disco-difusão contra fungos filamentosos e leveduras agentes de micoses. MÉTODOS: Avaliou-se a ação da terbinafina (0,125µg-100µg) contra dez espécies fúngicas pelos métodos discodifusão e microdiluição/referência, para determinar a concentração inibitória mínima (MIC). RESULTADOS: Observou-se alta sensibilidade à terbinafina em: T. rubrum, M. gypseum, T. mentagrophytes, T. tonsurans, M. canis, C. carrionii e E. floccosum (halo ≥ 40mm com disco de 0,125µg). S. hyalinum e C. parapsilosis foram considerados sensíveis, mas com halos menores. Fusarium spp. apresentou menor sensibilidade (halo=12mm com disco de 2µg; MIC 8µg/mL). CONCLUSÕES: Os resultados reiteram estudos anteriores quanto à alta eficácia da terbinafina em relação a dermatófitos. A técnica de disco-difusão foi de fácil aplicação e adequada na rotina de laboratórios clínicos.

BACKGROUND: Superficial and subcutaneous mycoses have a high prevalence and, often, chronic evolution. Therefore, they need extensive treatment with topic and/or systemic antifungal agents. Azoles and alilamines (terbinafine) are first-choice drugs to treat human and animal infections. Thus, evaluation of the efficacy of these drugs is important for a successful treatment. However, there are few studies that evaluate the in vitro activity of antifungal agents. OBJECTIVE: To evaluate the in vitro efficacy of terbinafine activity against filamentous fungi and yeasts that cause mycoses. METHOD: The in vitro activity of terbinafine (0.125-100µg) against 10 fungi species was evaluated by the diskdiffusion and microdilution/reference methods to determine the Minimum Inhibitory Concentration (MIC). RESULTS: We found a high susceptibility to terbinafine in: T. rubrum, M. gypseum, T. mentagrophytes, T. tonsurans, M. canis, C. carrionii and E. floccosum (halo ≥ 40mm with 0.125µg disk). S. hyalinum and C. parapsilosis were considered susceptible, but less than the others. Fusarium spp. showed the lowest susceptibility (halo=12mm with 2µg disk; MIC 8µg/mL). CONCLUSIONS: The results of this research confirm previous findings about the efficacy of terbinafine. The drug was shown to be highly effective to treat dermatophyte infections. The disk-diffusion method was easy to use and is a suitable technique for routine use in clinical laboratories.

Avaliação da eficácia in vitro de butenafina ante os agentes de micoses cutâneas prevalentes no Brasil / Evaluation of in vitro efficacy of butenafine on the more prevalent cutaneous mycosis in Brazil

O tratamento de micoses cutâneas é realizado com antifúngicos orais ou tópicos. A butenafina, da classe das benzilaminas, é um novo medicamento de uso tópico com eficácia clínica comprovada em casos de dermatomicoses. O objetivo desse estudo foi investigar a atividade ?in vitro? da butenafina em dermatófitos, outros filamentosos ou leveduras, agentes de micoses de pele e unha e compará-la a outros três antifúngicos isoconazol, ciclopirox olamina e oxiconazol. A suscetibilidade aos antifúngicos foi avaliada por métodos de referência de microdiluição M38-A2 (NCCLS, 2002) e M27-A3 (CLSI-2008) para determinação da concentração inibitória mínima (MIC). Um método de triagem por disco-difusão (M44-A, CLSI, 2002) foi avaliado diante dos padrões, com vistas a sua utilização em laboratórios de rotina. Discos contendo as drogas antifúngicas foram preparados em concentrações de 0,125 a 100 µg e ensaiados, em duplicata contra todas as amostras de fungos, e os resultados foram comparados com o valor de MIC correspondente à dupla antifúngico-espécie. O disco na concentração de 2 mg permitiu identificação de perfis distintos de sensibilidade à butenafina, sendo indicado para uso em rotina. A maioria (64%) das espécies, incluindo dermatófitos (Trichophyton mentagrophytes, T. rubrum, T. violaceum, Microsporum canis), fungos não dermatófitos (Scytalidium lignicola, Fusarium) e leveduras (Candida glabrata, C.guilliermondii, C.parapsilosis), foi inibida em baixas concentrações (MIC 0,25 mg/mL), correspondendo a halos de inibição de até 60mm de diâmetro frente a butenafina. Para ciclopirox, a maioria (72%) das espécies não formou halo de inibição, com MICs acima de 0,25 µg/mL melhor resultado foi obtido com T. violaceum (MIC 0,06 mg/mL, halo 20 mm). A maior eficácia (100% de inibição) contra dermatófitos foi observada em butenafina e isoconazol oxiconazol inibiu 88,9% das amostras de dermatófitos com menor desempenho ante a T. mentagrophytes. Butenafina, isoconazol e oxiconazol foram mais ativas do que ciclopirox frente aos dermatófitos, quando verificadas as concentrações necessárias para inibir 50% e 90% (MIC50 e MIC90) das amostras. Agentes oportunistas, S. lignicola e Aureobasidium pullulans, foram sensíveis à butenafina, isoconazol e oxiconazol, não sendo inibidos por ciclopirox. Butenafina foi a única droga capaz de inibir, em baixas concentrações (MIC 0,25 mg/mL halo 14 mm), as duas amostras de Fusarium spp., fungo filamentoso não dermatófito de difícil controle terapêutico, principalmente, nos casos de onicomicose persistente os outros antifúngicos ensaiados apresentaram MIC acima de 16 mg/mL para esse gênero. Para Candida albicans, observou-se que butenafina, em altas concentrações, apresentou atividade inibitória maior se comparada a ciclopirox. Conclui-se que discos com 2 mg de butenafina permitem a classificação de fungos, filamentosos e leveduras, em categorias distintas de suscetibilidade, sendo útil para testes de triagem de cepas menos sensíveis, desde que mostrou boa correlação com os métodos de referência. Os testes de sensibilidade in vitro comprovaram a alta eficiência de butenafina contra agentes de micoses cutâneas, em particular, contra os principais agentes: dermatófitos. Estudos de correlação clínico-laboratorial poderão contribuir para um futuro consenso de critério interpretativo para valores de MIC de butenafina, definindo pontos de corte de sensibilidade.

Avaliação do método de disco difusão para determinação da eficácia da terbinafina em agentes de micoses cutâneas e subcutâneas

As infecções fúngicas, cutâneas e subcutâneas, têm alta prevalência e caráter crônico, especialmente, em pacientes com alterações imunológicas, fazendo-se necessário o emprego de antifúngico em doses elevadas e por longos períodos. Recidivas e persistência dessas infecções podem ter como causa cepas resistentes a antifúngicos e a avaliação da eficácia das drogas empregadas na terapia, pode contribuir para o controle da infecção. A eficácia de um antifúngico pode ser avaliada por testes in vitro. O comitê norte-americano CLSI publicou em 2002 o método M38-A, diluição em meio líquido para alguns antifúngicos, considerado de referência para fungos filamentosos, porém há críticas quanto à preparação de inóculo e adequação do meio de cultura. Modificações na preparação do inóculo, para melhoria do método foram propostas pelo grupo europeu EUCAST. Entretanto, o método de referência emprega procedimentos complexos e sua aplicação em laboratórios clínicos é inviável. Outro método, de execução mais simples, recomendado pelo CLSI-M44-A (Method for Antifungal Disk Diffusion Susceptibility Testing of Yeast) tem como base o método de Kirby-Bauer, é indicado para rotina laboratorial, porém, restringe-se a avaliar a sensibilidade de leveduras ao fluconazol. Em micoses cutâneas e subcutâneas são empregadas drogas azólicas e alilaminas. Dentre estas, a terbinafina tem uso amplo sob distintas formulações, em medicina humana e veterinária. O objetivo deste trabalho foi investigar método de disco-difusão em dois meios de cultura ágar Mueller-Hinton (2% glicose + 0,5 µg azul de metileno) e ágar Yeast Morphological Agar)] para emprego em laboratórios clínicos, em testes de sensibilidade à terbinafina com isolados de fungos causadores de micoses cutâneas e subcutâneas. No mercado nacional, há discos contendo diversos antifúngicos, porém, não há para terbinafina. Neste estudo, foram avaliadas concentrações distintas de terbinafina (0,125-100µg) contra 10 isolados e mensurados...

Avaliação do método de disco difusão para determinação da eficácia da terbinafina em agentes de micoses cutâneas e subcutâneas / Evaluation of disc-difusion test for determining terbinafine efficacy against cutaneous and subcutaneous mycoses agents

As infecções fúngicas, cutâneas e subcutâneas, têm alta prevalência e caráter crônico, especialmente, em pacientes com alterações imunológicas, fazendo-se necessário o emprego de antifúngico em doses elevadas e por longos períodos. Recidivas e persistência dessas infecções podem ter como causa cepas resistentes a antifúngicos e a avaliação da eficácia das drogas empregadas na terapia, pode contribuir para o controle da infecção. A eficácia de um antifúngico pode ser avaliada por testes in vitro. O comitê norte-americano CLSI publicou em 2002 o método M38-A, diluição em meio líquido para alguns antifúngicos, considerado de referência para fungos filamentosos, porém há críticas quanto à preparação de inóculo e adequação do meio de cultura. Modificações na preparação do inóculo, para melhoria do método foram propostas pelo grupo europeu EUCAST. Entretanto, o método de referência emprega procedimentos complexos e sua aplicação em laboratórios clínicos é inviável. Outro método, de execução mais simples, recomendado pelo CLSI-M44-A (Method for Antifungal Disk Diffusion Susceptibility Testing of Yeast) tem como base o método de Kirby-Bauer, é indicado para rotina laboratorial, porém, restringe-se a avaliar a sensibilidade de leveduras ao fluconazol. Em micoses cutâneas e subcutâneas são empregadas drogas azólicas e alilaminas. Dentre estas, a terbinafina tem uso amplo sob distintas formulações, em medicina humana e veterinária. O objetivo deste trabalho foi investigar método de disco-difusão em dois meios de cultura ágar Mueller-Hinton (2% glicose + 0,5 µg azul de metileno) e ágar Yeast Morphological Agar)] para emprego em laboratórios clínicos, em testes de sensibilidade à terbinafina com isolados de fungos causadores de micoses cutâneas e subcutâneas. No mercado nacional, há discos contendo diversos antifúngicos, porém, não há para terbinafina. Neste estudo, foram avaliadas concentrações distintas de terbinafina (0,125-100µg) contra 10 isolados e mensurados os hal...

Preservação de fungos em água destilada / Fungi presevation in distilled water

FUNDAMENTOS - As micotexas são coleções de fungos conservadas para futuro estudo ou para a obtenção de extratos, drogas e outros fins. A conservação em meios de cultura por reqiques sucessivos exige cuidados e nem sempre é fácil. Há necessidade de novas técnicas para a manutenção de fungos viáveis por longos períodos. OBJETIVO - Avaliar a eficácia da preservação de fungos em água destilada num período de 12 meses. MÉTODOS - 43 espécieis de fungos foram manidas em frascos de vidro de água destilada estéril. Mensalmente eram colhidos de 200 a 250ml do liquido e inoculado em ágar batata dextrose para avaliar o crescimento e a viabilidade dos fungos. RESULTADOS - Houve crescimento dos fungos em todos os meses pelo período de um ano. CONCLUSÕES - A preservação de cepas pelo método de água destilada possibilitou, nesse curto espaço de tempo, provar a viabilidade e a capacidade de esporulação das cepas submetidas ao estudo. A conservação de fungos em água destilada é método barato e prático para manutenção de micoteca