Comparison of three decontamination methods for Mycobacterium bovis isolation / Comparação de três métodos de descontaminação para isolamento de Mycobacterium bovis

Sixty samples of tissue fragments with lesions suggestive of tuberculosis from bovine abattoirs, kept in saturated solution of sodium borate, were subjected to four treatments: 4 percent NaOH (Petroff Method), 12 percent H2SO4 and 1.5 percent HPC (1-Hexadecylpyridinium Chloride) decontamination, and physiological saline solution (control). The HPC method showed the lowest contamination rate (3 percent) when compared to control (88 percent, p<0.001), NaOH (33 percent, p<0.001) and H2SO4 (21.7 percent, p<0.002). Regarding the isolation success, the HPC method was better (40 percent) than the control (3 percent, p<0.001), NaOH (13 percent, p=0.001) and H2SO4 (1.7 percent, p<0.001) methods. These results indicate that HPC is an alternative to the Petroff method.

Sessenta amostras de fragmentos de tecidos com lesões sugestivas de tuberculose provenientes de abatedouros bovinos, conservadas em solução saturada de borato de sódio, foram submetidas a quatro tratamentos: descontaminação através dos métodos NaOH 4 por cento (Método Petroff), H2SO4 12 por cento e HPC (Cloreto de hexadecilpiridínio) 1,5 por cento, e solução salina (controle). O método HPC apresentou a menor proporção de contaminação (3 por cento), em relação ao controle (88 por cento, p<0,001), NaOH (33 por cento, p<0,001) e H2SO4 (21,7 por cento, p=0,002). Em relação ao sucesso no isolamento, o método HPC apresentou o melhor resultado (40 por cento), em relação ao controle (3 por cento, p<0,001), NaOH (13 por cento, p=0,001) e H2SO4 (1,7 por cento, p<0,001). Os resultados indicam que o HPC é uma alternativa à utilização do método Petroff.

Comparison of methods for mycobacteria isolation from swine feces

Swine mycobacteriosis is an important cause of carcass condemnation at abattoirs. One of the best ways to recognize the etiologic agent involved, in live animals, is the fecal isolation, as 94 percent of the lesions are located in the digestive tract. Therefore, the goal of the present study was to compare the performance of four decontamination methods followed by inoculation in three different culture media, totalizing twelve procedures of mycobacteria search from swine fecal samples experimentally contaminated. The swine feces were artificially contaminated with 0.02 g of Mycobacterium avium, PIG-B strain, and subjected to mycobacteria isolation trial. The protocols used were: 1) modified Petroff or basic method; 2) modified Lowenstein-Jensen or acidic method; 3) modified Petroff or basic method with re-suspension in Amphotericin B; 4) modified Lowenstein-Jensen or acid method with re-suspension in Amphotericin B, followed by inoculation in Petragnani, Lowenstein-Jensen and Lowenstein-Jensen medium with antibiotics (Penicillin G and Nalidixic acid). There was a difference (p<0.05) between the mycobacterial recovery percentages from swine feces. The acid method with re-suspension in Amphotericin B solution and inoculation in Lowenstein-Jensen medium with antibiotics showed the best results (87 percent of mycobacteria recovery).

As micobacterioses suínas são responsáveis por condenações de carcaças em abatedouro e uma das melhores formas de se conhecer os agentes envolvidos nos animais vivos é o isolamento a partir das fezes, pois em 94 por cento das vezes, as lesões localizam-se no trato digestivo. Assim sendo, o presente estudo teve por objetivo comparar o desempenho de quatro métodos de descontaminação com semeadura em três diferentes meios de cultura, totalizando doze procedimentos na pesquisa de micobactérias a partir de amostras de fezes de suínos contaminadas experimentalmente. Amostras de fezes de suínos foram contaminadas artificialmente com 0,02g de Mycobacterium avium, estirpe de PIG-B, e submetidas à tentativa de isolamento de micobactérias, utilizando-se os seguintes protocolos de descontaminação: 1) Petroff modificado ou método básico; 2) Lowenstein-Jensen modificado ou método ácido; 3) Petroff modificado ou método básico e ressuspensão com anfotericina B; 4) Lowenstein-Jensen modificado ou método ácido e ressuspensão com anfotericina B; com subseqüente semeadura em meios de Petragnani, Lowenstein-Jensen e Lowenstein-Jensen com antibióticos (Penicilina G e Ácido nalidíxico). Houve diferença entre os percentuais de recuperação de micobactérias a partir das fezes de suínos (p<0,05) e o método ácido com ressuspensão em solução de anfotericina B e semeadura em meio de Lowenstein-Jensen com antibióticos apresentou os melhores resultados (87 por cento de recuperação de micobactérias).

Cross neutralizing antibodies in hamsters vaccinated with leptospiral bacterins produced with three serovars of serogroup Sejroe

Three leptospiral bacterins, produced with different serovars of Serogroup Sejroe, namely the hardjo (bacterin A), wolffi (bacterin B) and guaricura (bacterin C), were evaluated in male hamsters (Mesocricetus auratus) by comparing the agglutinating and neutralizing antibodies titers using microscopic agglutination (MAT) and in vitro growth inhibition (GIT) tests. The immunization schedule was based on two 1.0 mL doses of non-diluted formalininactivated whole culture bacterin given through subcutaneous route with 10-day interval. The challenge was performed ten days after the second vaccine dose, when the animals were inoculated with 0.2 mL of non-inactivated cultures of each serovar through intraperitoneal route. On the 21st post-challenge day (PCD), all animals were bled and their sera were joined in pools (n=8) and tested by MAT and GIT. All vaccinated and control animals presented no clinical signs of leptospirosis after the challenge, but the serovar guaricura was isolated from the kidneys of control animals on the 21st PCD. The MAT results showed cross agglutinins between serovars hardjo and wolffi, and between wolffi and guaricura. The GIT results revealed the presence of cross neutralizing antibodies between serovars wolffi or guaricura against hardjo, wolffi and guaricura. It was found that the tested strain of serovar hardjo did not produce detectable levels of neutralizing antibodies, indicating its poor immunogenicity

Avaliaçäo da virulência em hamsters (Mesocricetus auratus) de estirpes de Mycobacterium avium presentes na populaçäo de suínos do sul do Brasil / Evaluation of the virulence in hamsters (Mesocricetus auratus) of Mycobacterium avium strains from the swine population of the south of Brazil

Tendo sido comprovada a existência de quatro famílias molecularmente distintas de M. avium (PIG-A, B, C e D) circulando em suínos da regiäo sul do Brasil, e havendo dúvidas a respeito da importância da transmissäo horizontal como mecanismo de manutençäo da doença, o presente teve por objetivo estudar a virulência dessas estirpes, informaçäo importante para o aperfeiçoamento dos métodos de controle. Uma estirpe representante de cada família foi inoculada pela via intra-peritoneal em 48 hamsters com uma dose de 30.000 U.F.C. por animal. Após 2, 13, 26 e 40 dias da inoculaçäo (T1 a T4), 12 hamsters inoculados de cada família foram anestesiados, sacrificados e os agentes foram quantificados no fígado, baço e pulmäo. Os resultados foram expressos em número de U.F.C./g de órgäo. A presença das estirpes foi pesquisada no sangue e também foram realizados exames histológicos. As estirpes PIG-A, B, C e D induziram a formaçäo de lesöes granulomatosas no fígado e baço a partir do segundo dia pós-inoculaçäo e disseminaram-se pela via hemática, alcançando os pulmöes. O baço sempre apresentou maiores contagens de U.F.C., seguido pelo figado e pulmöes. Diferenças entre as estirpes foram constatadas através de análises das contagens de U.F.C de baço (T1: p<0,001; T2: p<0,001; T3: p<0,001 e T4: p<0,001), permitindo a construçäo da seguinte escala de virulência: PIG-B> PIG-A> PIG-D> PIG-C