Empleo de la técnica de inmunoperoxidasa en la detección de gp41 en cultivos celulares infectados con VIH-1 / Use of the immunoperoxidase technique for detecting gp41 in cellular cultures infected with HIV-1

Las glicoproteínas de envoltura gp120 y gp41 del VIH-1 son responsables de la interacción con las células CD-4+ y permiten la penetración del virus en éstas, además de otras funciones. El monitoreo del estado infectivo de los cultivos celulares mediante la determinación de gp41 en las células por la técnica de inmunoperoxidasa, es el objetivo final de la normalización de la técnica reportada en nuestro trabajo. Se utilizaron cultivos de celúlas CEM-VIH-1 y células CEM sin infectar como control negativo. La reacción se llevó a cabo mediante el uso de un anticuerpo monoclonal anti-gp41 y se utilizó un conjungado anti IgG de ratón marcado con peroxidasa para revelar la reacción. Los resultados mostraron la posibilidad del uso de esta técnica para el monitoreo de los cultivos celulares utilizados en la producción viral

Normalización de una técnica de inmunoensayo(Elisa indirecto) para el pesquisaje de anticuerpos monoclonales / Standardization of an immunoassay techinique(indirect Elisa) for screening mouse monoclonal antibodies against HIV-1

Se desarrolló un método de Elisa indirecto para el pesquisaje masivo de anticuerpos de ratón contra el virus de la inmunodeficiencia humanos (VIH-1) en sobrenadantes de hibridomas y sueros de animales hiperinmunes. Para la normalización del sistema se evaluaron la concentración de antígeno adsorbida a la fase sólida, la solución tampón diluyente de las muestras, las disoluciones óptimas para cada tipo de muestras y el período de incubación de éstos. Se determinó que una concentración de 5 *g/mL de proteinas virales semipurificadas, una solución tampón de fosfato pH 7,4; 0,1 con tween-20 al 0,05% y albúmina bovina sérica al 1,5%, disoluciones del suero hiperinmune(controles +) y no inmunes (controles -) de 1:2500 y un tiempo de incubación de 18 h a 4-C, ofrecián los mejores resultados. Se obtienen coeficientes de variación interplacas intraplaca por debajo del 5% para los controles positivo/negativo es mayor de 10 en todos los casos

Normalización de un western-blot para el estudio de sobrenadantes y liquidos asciticos de hibridomas de ratón anti-VIH / Standarization of western blot for studying supernatants and ascitic fluids of anti-HIV murine hybridomas

Se utilizó el sistema conservatorio de detección de anticuerpos al VIH-1 "DAVIH-blot", basado en la inmunoelectrotransferencia y desarrollado en nuestros laboratorios como sistema de confirmación para sueros humanos, como sistema de referencia para normalizar una variante adecuada para el estudio de sueros de ratones hiperinmunes, líquidos ascíticos y sobrenadante de cultivo de hibridomas de ratón. Se compararon las siguientes variaciones de la etapa inmunológica: soluciones amortiguadoras para la dilución de las muestras y conjugados, soluciones bloqueadoras, temperatura y tiempo de incubación, y se determinaron las condiciones experimentales óptimas: usar como solución amortiguadora para la dilución de las muestras y conjugados, una solución de Tris-0,02M-NaCl0,5 con Tween-20 al 0,05 %(TNT), no usar solucion bloqueadora antes de la adición del conjugado e incubar el antisuero conjugado 1 hora a 37 -C