Reconstitution "in vitro" of a formate or NADH dependent nitrite reductase activity starting from cytochrome C552 and membrane vesicles from Escherichia coli K-12.

El aislamiento en Escherichia coli K-12 de un cytocromo C552, libre de contaminantes particulados, permitio la reconstitucion "in vitro" de una actividad nitrito reductasa que requiere vesiculas de membrana, cytocromo C552 y formiato (o NADH) como donadores de electrones. La via de transferencia de electrones desde el formiato o el NADH incluye un segmento de las cadenas respiratorias membranales del nitrato y el oxigeno que carece de cytocromos de tipo b. Este segmento contiene NADH y formiato deshidrogenasas, y un transportador redox sensible al 2-heptil-4hidroxiquinolina-N-oxido (HQNO). Evidencias indirectas sugieren que este transportador es probablemente una quinona que reaccionaria directamente, o indirectamente por medio de un transportador desconocido, con el cytocromo C552 periplasmico soluble. En este sistema el citocromo C552 parece actuar directamente sobre el nitrito como una nitrito reductasa terminal

Aislamiento y caracterizacion del segmento de cadena respiratoria especifico del sistema nitrato reductasa de Escherichia coli K-12. / Isolation and characterization of a respiratory chain segment specific of nitrate reductase system of Escherichia coli K-12

Vesiculas de membrana provenientes de celulas de Escherichia coli K-12, crecidas en anaerobiosis con nitrato, fueron solubilizadas mediante una metodologia que combina tratamiento con calor a pH neutro y deoxicolato y disociacion con Triton X100. Se separaron tres fracciones diferentes mediante filtracion de los extractos por columnas de Sephadex G-200 y Biogel-A 1.5. Todas las fracciones mostraron actividad benzil viologeno-nitrato reductasa (BV-NR) no obstante su diferente volumen de elucion. Dos fracciones carecieron de citrocromo de tipo b y de actividad nitrato-reductasa dependiente del complejo donador de electrones ascorbato-fenacina metasulfato (AFM-NR). La actividad BV-NR de estas dos fracciones no fue afectada por luz ultravioleta de 360 mm. La tercera fraccion, de mayor tamano que las anteriores, contenia citocromo de tipo b y actividades AFM-NR y BV-NR. Ambas fueron inhibidas por irradiacion con luz ultravioleta de 360 nm. A partir de esta ultima fraccion se logro aislar un compuesto soluble en n-pentano. Sus propiedades espectrofotometricas fueron similares a las de las ubiquinonas. Se discute el posible papel de este compuesto en el segmento de cadena respiratoria especifico del sistema nitrato reductasa del E. coli K-12

Chlorate metabolism by whole cells and membrane vesicles of Escherichia coli K-2.

Se siguio la reduccion del clorato por Escherichia coli K-12 mediante la utilizacion de clorato marcado 36 C1-, preparado por oxidacion anodica del ion cloruro. Las celulas redujeron el nitrato y el clorato a velocidades similares. Las vesiculas de membrana y las celulas no acumularon clorato ni sus productos de reduccion (C102-, C10-, C1). El bajo nivel de radioactividad enlazado a celulas o vesiculas puede ser atribuido principalmente a absorcion inespecifica. Estos resultados son discutidos en relacion con la localizacion del sitio enlazante del clorato (y el nitrato) sobre la nitrato reductasa membranal de E. coli