Integridad Del ADN Espermático Y La Toxicidad Reproductiva Del Nitrato De Plomo En Ratones Machos Adultos

Introducción: La toxicidad del plomo se ha relacionado a diferentes patologías en humanos y varias evidencias sugieren una fuerte relación con el daño observado sobre la función reproductiva en humanos y roedores. Método: Se proporcionó a ratones una dosis única de nitrato de plomo (NP) (50mg/kg/pc), los cuales fueron eutanizados siete días postinyección con el objetivo de evaluar los espermatozoides que han salido de los túbulos seminíferos y están en tránsito por el epidídimo; además, se evaluó la fragmentación del ADN espermático mediante el ensayo tunel. Resultados: La disminución del peso corporal en ratones, tratados con NP (p 0,05); de igual manera, los valores fisiológicos como conteo y movilidad espermática no disminuyeron con el tratamiento (p > 0.05). El tránsito y maduración de los espermatozoides en el epidídimo no sería afectado por el NP, y al no observar aumento en la fragmentación del ADN espermático en el grupo tratado (p > 0,05), la protaminación espermática estaría cumpliendo su rol protector sobre el material genético murino, por lo que no hubo daños genotóxicos por el NP. Conclusión: La administración intraperitoneal de 50mg/kg/pc de NP, por siete días, no causa toxicidad sistémica ni efecto en la espermatogénesis en ratón.

Introduction: Lead toxicity has been linked to different diseases in humans and several evidences suggest a strong relationship with the observed damage on reproductive function in humans and rodents. Methods: Mice were given a single dose of lead nitrate (NP) (50mg/kg/bw), which were euthanized seven days post-injection with the aim of evaluating sperm to come out from the seminiferous tubules and are in transit through the epididymis. Also, the Tunel test was done to evaluate the sperm DNA fragmentation. Results: The decrease in body weight in mice treated with ln (p 0.05), in the same way physiological values such as sperm concentration and motility didn´t decrease with the treatment (p > 0.05). Transit and sperm maturation in the epididymis would not be affected by the ln, and because we did not observe increased sperm DNA fragmentation in the treated group (p > 0.05), sperm protamination would be fulfilling its protective role on murine genetic material avoiding genotoxic damage by ln. Conclusion: The intraperitoneal administration of 50mg/kg/pc of ln for seven days does not cause systemic toxicity or effect on spermatogenesis in mice.

Evaluación de la integridad del ADN espermático y su repercusión en los parámetros seminales de varones infértiles / Evaluation of the integrity of sperm DNA and its impact on the seminal parameters of infertile males

Resumen OBJETIVO: Determinar las repercusiones del daño al ADN espermático en los parámetros seminales más estudiados en diagnóstico clínico de varones infértiles. MATERIALES Y MÉTODOS: Estudio de casos y controles, prospectivo y comparativo efectuado en pacientes masculinos atendidos en el Centro Integral de la Mujer y Reproducción Asistida de Puebla, México. Parámetros de estudio: edad, movilidad, morfología, diagnóstico seminal, leucocitos y factor de infertilidad. Los resultados se analizaron con Graphpad Prisma 5.0 y se consideraron estadísticamente significativos con p < 0.005. RESULTADOS: Se estudiaron 110 pacientes: 33 con mala integridad del ADN espermático (grupo 1) y 77 con buena integridad (grupo 2). La concentración espermática y la movilidad tipo A+B en el grupo 2 fue significativamente más alta que en el grupo 1 (p < 0.0001) en donde se registró mayor número de móviles no progresivos e inmóviles. La morfología normal fue más alta en el grupo 2 (p = 0.0063). En los varones menores de 40 años se observó un número significativamente mayor de casos de buena integridad espermática (p = 0.013). El diagnóstico seminal demostró que los varones con mala integridad tuvieron alteraciones espermáticas más severas. Los factores de infertilidad más frecuentes implicados en ambos grupos fueron: aborto de repetición, edad de la pareja, falla previa en la técnica de reproducción asistida, factor masculino severo y factor tubárico. CONCLUSIONES: La mala integridad del ADN espermático tiene repercusiones en la concentración espermática, movilidad y morfología, además de alterar el diagnóstico seminal, pues los varones tuvieron trastornos más severos cuando no hubo algún factor de infertilidad que describiera un comportamiento específico relacionado con la mala integridad espermática.

Abstract OBJECTIVE: To determine the impact of sperm DNA damage on the most studied seminal parameters in clinical diagnosis of infertile males. MATERIALS AND METHODS: Prospective and comparative case-control study that included male patients seen at Centro Integral de la Mujer y Reproducción Asistida de Puebla, Mexico. Study parameters: age, mobility, morphology, seminal diagnosis, leukocytes and infertility factor. The results were analyzed with Graphpad Prism 5.0 and were considered statistically significant with p < 0.005. RESULTS: 110 male patients were studied: 33 patients with poor sperm DNA integrity (group 1) and 77 patients with good integrity (group 2). Sperm concentration and type A + B mobility in group 2 was significantly higher than in group 1 (p <0.0001), where a greater number of non-progressive and immobile mobiles was recorded. The normal morphology was higher in group 2 (p = 0.0063). In men under 40 years of age, a significantly higher number of cases of good sperm integrity was observed (p = 0.013). The seminal diagnosis showed that males with poor integrity had more severe sperm alterations. The most frequent infertility factors involved in both groups were: repeat abortion, age of the couple, previous failure in the technique of assisted reproduction, severe male factor and tubal factor. CONCLUSIONS: The poor integrity of the sperm DNA has repercussions on sperm concentration, mobility and morphology, alters the seminal diagnosis, since males had more severe alterations when there was no infertility factor that described a specific behavior related to poor sperm integrity.

Crioconservación de semen de dorada Brycon moorei con dimetilsulfóxido / Cryopreservation of dorada Brycon moorei sperm with dimethyl sulfoxide

RESUMEN El objetivo fue evaluar la calidad del semen descongelado de dorada Brycon moorei crioconservado con dimetilsulfóxido (DMSO) a tres porcentajes de inclusión. El semen se obtuvo de nueve machos mantenidos en cautiverio en la Estación Piscícola Repelón (Atlántico, Col), inducidos con extracto pituitario de carpa (4,5 mg/kg). El semen fue diluido en proporción 1:3 con un diluyente compuesto de DMSO a tres porcentajes 5%, 10% y 15%; glucosa al 6% y yema de huevo al 12%; empacado en macrotubos de 2,5 ml, congelados en vapores de nitrógeno y después de tres meses descongelados a 35°C durante 90 s. Semen fresco fue considerando como tratamiento control. En semen descongelado se evaluó movilidad total, tipos de movilidades, progresividad, velocidades y concentración espermática con el programa Sperm Class Analyzer SCA®; adicionalmente en semen fresco se determinó volumen, color y tiempo de activación. El semen fresco presentó movilidad mayor a 80% y tiempo de activación entre 28,5 y 41 s; mientras que, la concentración espermática osciló entre 10188,1 y 14590,2 millones/ml. La movilidad total del semen descongelado fue mayor cuando DMSO se incluyó a 5% (40,1±5,0%) o 10% (43,3±8,7%) (p>0,05); pero a 15% registró la menor movilidad (30,6±7,9%) y el mayor porcentaje de espermatozoides inmóviles (69.4±7.9%) (p<0,05); lo cual sugiere que inclusiones de DMSO por encima de 10% ocasionan mayores daños al espermatozoide de dorada. Los resultados permiten concluir que DMSO debe ser incluido entre 5 y 10%, junto con glucosa al 6% y yema de huevo al 12% para crioconservar semen de dorada.

ABSTRACT The aim was assess thawed sperm quality of dorada Brycon moorei, cryopreserved with dimethylsulfoxide (DMSO) to three inclusion rate. The sperm was obtained from nine males, kept in captivity in the Repelón Fish Farming Station (Atlántico, Col), were induced with carp pituitary extract (4.5 mg/kg). The semen was diluted with an extender composed of DMSO to three inclusion rates (5%, 10% and 15%); 6% glucose and 12% egg yolk. The sperm was diluted in 1:3, packed in macrotubes of 2.5 mL and freeze with vapors of nitrogen and after three months were thawed at 35°C for 90 s. The fresh sperm was considered as control treatment. The thawed semen was analyzed total motility, types of motility, progressivity, velocities and sperm concentration with the Sperm Class Analyzer SCA® software; further, volume, color and activation time were measured in fresh semen. The fresh sperm showed motility greater than 80% and activation time between 28.5 and 41 s; whereas that sperm concentration ranged between 10188.1 and 14590.2 million/ml. The total motility of thawed sperm was higher when DMSO was included at 5% (40.1±5.0%) or DMSO 10% (43.3±8.7%) (p> 0.05); but with 15% DMSO, were registered the low motility (30.6±7.9%) and the highest percentage of immotile sperm (69.4±7.9%) (p<0.05); which suggests inclusions of DMSO above 10% cause greater damage to dorada spermatozoa. The results showed that DMSO should be included between 5 and 10%, along with 6% glucose and 12% egg yolk for cryopreservation of dorada sperm.

Obtención y evaluación del semen de capibara Hydrochoerus hydrochaeris / Collection and evaluation of semen from the Capybara Hydrochoerus hydrochaeris

Objetivo. Determinar las características del semen y la morfometría de los espermatozoides del Capibara (Hydrochoerus hydrochaeris). Materiales y métodos. Se utilizaron 10 machos con peso entre 21-45 kg, los cuales fueron restringidos y anestesiados. El semen se obtuvo mediante electroeyaculación y se determinó el color, volumen, pH, motilidad en masa, motilidad individual, viabilidad, concentración y morfología. Se realizaron además mediciones de la cabeza y la cola de los espermatozoides. Resultados. Se obtuvo semen en el 100% (10/10) de los animales. El mayor número de eyaculaciones (80%; 8/10), se obtuvo con un voltaje máximo de 6V. El color fue blanco, de aspecto lechoso, los valores promedio fueron volumen 135.5±93.56 µl, pH 8.14±0.38, motilidad masal 32.60±13.46%, motilidad individual 34±19.81%, viabilidad 51.3±19.42%, concentración espermática 127±59.01x106 espermatozoides/mL y morfología 51.3±19.42 espermatozoides normales. La longitud de la cabeza fue 5.41±0.7 µm, el ancho de la cabeza 3.77±0.5 µm y área de la cabeza 75.66±20.6 µm². La longitud de la cola fue 27.9±11.3 µm. Conclusiones. La obtención del semen fue satisfactoria mediante electroeyaculación, sin presentar notables diferencias en las características del semen y morfología de los espermatozoides con otros roedores silvestres de menor tamaño, aunque se observó una alta variabilidad de estas características entre los animales muestreados posiblemente por la heterogeneidad de los animales experimentales.

Objective. Determine the characteristics of semen and morphometry of the Capybara (Hydrochoerus hydrochaeris) spermatozoid. Materials and methods. 10 males, weighing between 21-45 kg, which were restrained and anesthetized, were used in the study. The semen sample was obtained by electroejaculation and the color, volume, pH, mass motility, individual motility, viability, concentration and morphology were determined. Measurements of the head and tail of spermatozoids were also conducted. Results. Semen was obtained from 100% (10/10) of the animals. The highest number of ejaculations (80%; 8/10) was obtained with a maximum voltage of 6V. The color was white, of a milky appearance, average values were volume 135.5 ± 93.56 µl, pH 8.14 ± 0.38, mass motility 32.60 ± 13.46%, individual motility 34 ± 19.81%, viability 19.42 ± 51.3%, sperm concentration 127 ± 59.01x106 spermatozoids / mL and morphology 51.3 ± 19.42 normal spermatozoids. The head length was 5.41 ± 0.7µm, the width of head 3.77 ± 0.5 and head area 75.66 ± 20.6 µm². The tail length was of 27.9 ± 11.3 µm. Conclusions. Semen collection by electro ejaculation was successful, without presenting significant differences in semen characteristics and spermatozoid morphology with other smaller wild rodents, although there was a high variability of these characteristics observed between the animals sampled, possibly due to the heterogeneity of the experimental animals.

Taxa de gestação de vacas nelore inseminadas artificialmente em tempo fixo com diferente concentração espermática e momento de inseminação / Tasa de preñez de vacas nelores inseminadas artificialmente en tiempo fijo con diferente concentración espermática y momento de inseminación / The rate gestation of nellore cows submitted fixed time artificial insemination under different sperm concentration and insemination moment

Neste estudo objetivou-se avaliar a taxa de gestação, 86 vacas foram submetidas à inseminação artificial em tempo fixo (IATF), sob o protocolo: D0 (dia zero) inserção do implante intravaginal de progesterona (CIDR®) e aplicação intramuscular (IM) de benzoato de estradiol (2mg - Estrogin®); D7 retirada do implante e aplicação IM de prostaglandina (Veteglan®), D8 administração IM de Gonadotrofina Coriônica Humana (hCG - Vetecor®) e D9 IATF. Na IATF utilizou-se sêmen comercial de qualidade e eficiência comprovada. As vacas foram divididas em: Grupo 1 (35), Grupo 2 (26) e Grupo 3 (25), e inseminadas utilizando-se uma única dose de sêmen, duas doses juntas e duas doses com intervalo de 12 horas, respectivamente. Após 60 dias realizou-se o diagnóstico de gestação pela palpação transretal, que foi comparado pelo teste do Qui-quadrado. Observou-se que a taxa de gestação foi semelhante entre os grupos [31,43% (11/35), 34,62% (09/26) e 20,00% (05/25) para os grupos 1, 2 e 3, respectivamente), bem como, a sincronia entre a chegada dos espermatozóides ao local da fertilização, indicando que a concentração de espermatozóides e o intervalo de 12 horas entre as IATF não influenciaram a fertilidade de vacas Nelore, quando submetidas às condições desse estudo.

The purpose of this study is to evaluate gestation rate of Nellore cows artificially inseminated in fixed time under different methodologies. Eighty-six Nellore cows, kept grazing, supplemented with protein salt and water ad libitum, were submitted to Fixed Time Artificial Insemination (FTAI) on the following protocol: animals received an intravaginal progesterone device (CIDR®) on day zero (D0) and injection IM intramuscular of estradiol (2mg - Estrogin®). After 7 days (D7), the device was removed and prostaglandin (Veteglan®) IM administered. On the eighth day (D8), 1000UI of human chorionic gonadotrofina (Vetecor®) were IM administered, and, on the ninth Day (D9), the FTAI ? when the animals were randomly assigned into three experimental groups: Group 1 (n=35) were inseminated approximately 48h after the removal of the device with a single dose of commercial semen from a tested and quality-attested bull. The animals from Group 2 (n=26) were inseminated at the same time and conditions of the former group; however, two doses of semen were inserted together, whereas the animals from Group 3 (n=25) were inseminated twice, with an interval of approximately 12h between the insertions. The diagnosis of gestation through transrectal palpation was carried out 60 days later and was compared among the groups by the Qui-squared test. Gestation rate was similar for the animals from the different experimental groups (p<0.05): 31.43% (11/35), 34.62% (09/26) and 20% (05/25) for the animals from Groups 1, 2 and 3, respectively. Thus, it is concluded that under the conditions of this study, the conventional dose of semen traditionally used in AI programs does not interfere with the fertility and sync between the arrival of sperm to fertilize location of cows submitted to FTAI.

En este estudio se buscó evaluar la tasa de preñez, 86 vacas sometidas a la inseminación artificial en tiempo fijo (IATF), bajo el protocolo: D0 (día cero) inserción del implante intravaginal de progesterona (CIDR®) y aplicación intramuscular (IM) de benzoato de estradiol (2mg - Estrogin®); D7 retirada del implante y aplicación IM de prostaglandina (Veteglan®), D8 administración IM de Gonadotrofina Coriónica Humana (hCG - Vetecor®) y D9 IATF. En la IATF se utilizó semen comercial de calidad y eficiencia comprobada. Las vacas fueron divididas en: Grupo 1 (35), Grupo 2 (26) y Grupo 3 (25), e inseminadas utilizándose una única dosis de semen, dos dosis juntas y dos dosis con intervalo de 12 horas, respectivamente. Después de 60 días se realizó el diagnóstico de preñez por palpación transrectal, que fue comparado por el test Qui-cuadrado. Se observó que la tasa de preñez fue semejante entre los grupos 31,43% (11/35), 34,62% (09/26) y 20,00% (05/25) para los grupos 1, 2 y 3 respectivamente, así como, la sincronía entre la llegada de los espermatozoides al local de fertilización, indicando que la concentración de espermatozoides y el intervalo de 12 horas entre las IATF no influenciaron la fertilidad de vacas Nelore, cuando sometidas a las condiciones de ese estudio.

Dinâmica ovariana, concentração de progesterona e taxa de gestação em vacas Nelore inseminadas artificialmente em tempo fixo sob diferentes metodologias / The follicular dynamics, progesterone concentration and gestation rate of Nellore cows artificially inseminated in fixed time under different methodologies / Dinámica ovárica, concentración de progesterona e índice de preñez en vacas de la raza Nelore inseminadas artificialmente en tiempo fijo bajo diferentes metodologías

Na tentativa de maximizar a eficiência de rebanhos bovinos, a utilização da sincronização de estros e ovulação, associados à IATF, tem sido divulgada e estudada pelas vantagens que oferece. Estudos envolvendo IATF são muitos, atuais, com protocolos e resultados variáveis. No entanto, continua-se pesquisando a precisão do momento da ovulação, a concentração ideal de espermatozóides na dose de sêmen e a redução nas preparações hormonais e custos, viabilizando a utilização rotineira com melhores resultados, e acessibilidade econômica. Pretende-se, com este estudo, avaliar a dinâmica folicular, a concentração de progesterona e a taxa de gestação de vacas Nelore inseminadas artificialmente, em tempo fixo, sob diferentes metodologias. Para tanto, 86 vacas da raça Nelore, de diferentes categorias, mantidas sob pastejo, suplementadas com sal proteinado e água ad libitum, foram submetidas à IATF, seguindo o seguinte protocolo: implante intravaginal de progesterona (CIDR®) no dia zero (D0) e aplicação de estradiol. Após sete dias (D7) o implante foi retirado e aplicou-se PGF2alfa (Veteglan®). No oitavo dia (D8) administrou-se 1000UI de hCG (Vetecor®) e, no nono dia (D9), a IATF, quando as fêmeas foram divididas aleatoriamente, em três grupos experimentais. Dos animais experimentais, escolheram-se aleatoriamente sete animais, para coleta de sangue para dosagem de progesterona sérica, pela técnica de radioimunoensaio de fase sólida, que foi realizada nos dias do implante, na retirada, aos 2, 10, 15, 18 e 23 dias após a retirada do implante. Esses mesmos animais foram submetidos, duas vezes ao dia (manhã e tarde), à ultrassonografia transretal, para avaliação do momento da retirada do implante de progesterona até a IATF, do número de folículos em cada ovário (direito e esquerdo) e do diâmetro do maior folículo presente em cada um deles.

In an attempt to maximize the efficiency of cattle, the use of synchronization of estrus and ovulation associated to FTAI has been published and studied as a result of the advantages it provides. There are a number of current studies related to FTAI - with varied results and protocols. However, the accuracy of the moment of ovulation, the ideal concentration of spermatozoids within the dose of semen, the reduction of hormone preparations, and costs, thus making practical the routine use with better results and economical accessibility, have been researched. The purpose of this study is to evaluate the follicular dynamics, progesterone concentration and gestation rate of Nellore cows artificially inseminated in fixed time under different methodologies. Eight-six Nellore cows, from different categories, kept grazing, supplemented with protein salt and water ad libitum, were submitted to FTAI on the following protocol: animals received an intravaginal progesterone device (CIDR®) on day zero (D0) and injection of estradiol. After 7 days (D7), the device was removed and PGF2alpha (Veteglan®) administered. On the eighth day (D8), 1000UI of hCG (Vetecor®) were administered, and, on the ninth Day (D9), the IATF - when the animals were randomly assigned into three experimental groups. Seven animals were chosen from the experimental animals and had their blood collected for the dosage of serum progesterone by the solid-phase radioimmunoassay technique, which was conducted on the days of the insertion, on the removal, on days 2, 10, 15, 18, and 23 after the insertion removal. The same animals were submitted, twice a day (morning and afternoon), to transrectal ultrasonography for the assessment of the moment of the removal of the device until the FTAI, the amount of follicles in each ovarium (right and left) and the diameter of the longest follicle in each of them.

Con la intención de maximizar la eficiencia de rebaños bovinos, la utilización de sincronización de estros y ovulación, asociados a la IATF, ha sido divulgada y estudiada por las ventajas que ofrece. Estudios involucrando IATF son muchos, con protocolos y resultados variables. Sin embargo, se busca la precisión del momento de la ovulación, la concentración ideal de espermatozoides en dosis de semen y la reducción en preparaciones hormonales y costos, viabilizando la utilización rutinera con mejores resultados y accesibilidad económica. Este estudio pretende evaluar la dinámica folicular, la concentración de progesterona e índice de preñez en ganado lechero de la raza Nelore inseminadas artificialmente, en tiempo fijo, bajo diferentes metodologías. Para tanto, 86 vacas de la raza Nelore, de diferentes categorías, mantenidas bajo pastaje, suplementadas con sal, proteínas y agua ad limitum, fueron sometidas a la IATF, siguiendo el protocolo: implante intravaginal de progesterona (CIDR®) en el día cero (DO) y aplicación de estradiol. Tras siete días (D7) el implante fue retirado y se aplicó PGF2alfa (Veteglan®). En el octavo día (D8) se inyectó 1000UI de hCG (Vetecor®) y, en el noveno día (D9) la IATF, cuando las hembras fueron divididas al alzar, en tres grupos experimentales. De los animales sometidos al experimento, al alzar se eligió siete animales, para recolección de sangre para dosificar progesterona sérica, por la técnica de radioinmunoensayo de fase sólida, que fue realizada en los días del implante. Esos mismos animales fueron sometidos, dos veces al día (mañana y tarde), a la ultrasonografía transrectal, para evaluación del momento de la retirada del implante de progesterona hasta la IATF, del número de folículos en cada ovario (derecho e izquierdo) y del diámetro del mayor folículo presente en cada uno de ellos.