Response Surface Methodology (RSM) for analysing culture conditions of Acidocella facilis strain USBA-GBX-505 and Partial Purification and Biochemical Characterization of Lipase 505 LIP / Metodología de Superficie de Respuesta (RSM) para el análisis de las condiciones de cultivo de Acidocella facilis cepa USBA-GBX-505 y la purificación parcial y caracterización bioquímica de la lipasa 505 LIP / Metodologia de Superfície de Resposta (MSR) para a análise das condições de cultivo de Acidocella facilis cepa USBA-GBX-505 e purificação parcial e caracterização bioquímica da lip ase 505 LIP

Abstract Using Response Surface Methodology (RSM) we evaluated the culture conditions (nitrogen source, carbon source, pH and agitation rate) that increase the biomass of Acidocellafaalis strain USBA-GBX-505 and therefore enhance the production of its lipolytic enzyme, 505 LIP. RSM results revealed that yeast extract and agitation were key culture factors that increased the growth-associated lipolytic activity by 4.5-fold (from 0.13 U.mg-1 to 0.6 U.mg-1). The 505 LIP lipase was partially purified using size-exclusion chromatography and ion-exchange chromatography. Its molecular weight was >77 kDa. The enzyme shows its optimum catalytic activity at 55 °C and pH 7.5. EDTA, PMSF, 1-butanol and DMSO inhibited enzymatic activity, whereas Tween 20, acetone, glycerol and methanol increased it. Metallic ions are not required for the activity of 505 LIP, and even have an inhibitory effect on the enzyme. This study shows the potential use of A. facilis strain USBA- GBX-505 for the production of a newly identified lipolytic enzyme, 505 LIP, which is stable at moderate temperatures and in the presence of organic solvents. These are important characteristics for the synthesis of many useful products.

Resumen Por medio de la Metodología de Respuesta de Superficie (RSM) evaluamos las condiciones de cultivo (fuente de N, fuente de C, pH y tasa de agitación) que incrementan la biomasa de Acidocella facilis cepa USBA-GBX-505 y, como consecuencia, la producción de su enzima lipolítica, llamada 505 LIP. Los resultados de la RSM revelaron que el extracto de levadura y la agitación fueron factores de cultivo claves, que incrementaron de 4 a 5 veces la actividad lipolítica asociada al crecimiento (de 0.13 U.mg-1 a 0.6 U.mg-1). La lipasa 505 LIP se purificó parcialmente usando cromatografía de exclusión por tamaño y cromatografía de intercambio iónico. Su peso molecular fue > 77 kDa. La enzima muestra su actividad catalítica óptima a 55 °C y pH 7.5. El EDTA, el PMSF, el 1-butanol y el DMSO inhibieron la actividad enzimática, mientras que el Tween 20, la acetona, el glicerol y el metanol la incrementaron. La enzima 505 LIP no requiere iones metálicos para su actividad, e incluso se inhibe en presencia de ellos. Este estudio muestra el uso potencial de A. facilis cepa USBA-GBX-505 para la producción de una nueva enzima lipolítica, 505 LIP, que es estable a temperaturas moderadas y en la presencia de solventes orgánicos. Estas son características importantes en la síntesis de muchos productos útiles.

Resumo Utilizando a Metodologia de Superfície de Resposta (MSR) avaliamos as condições de cultivo (fontes de nitrogénio e carbono, pH e taxa de agitação) que aumentam a biomassa de Acidocella facilis cepa USBA-GBX-505, e, portanto, elevam a produção de sua enzima lipolítica 505 LIP. Os resultados da MSR revelaram que o extrato de levedura e a agitação foram fatores de cultivo chave que permitiram aumentar 4 a 5 vezes a atividade lipolítica associada ao crescimento (de 0,13 U.mg-1 a 0,6 U.mg-1). A lipase 505 LIP foi parcialmente purificada utilizando cromatografia por exclusão de tamanho e cromatografia de intercambio iónico. Seu peso molecular foi > 77 kDa. A enzima mostra sua atividade catalítica ótima a 55 °C e pH 7,5. EDTA, PMSF, 1-butanol e DMSO inibiram a atividade enzimática, enquanto que Tween 20, acetona, glicerol e metanol aumentaram esta atividade. Íons metálicos não são necessários para a atividade da 505 LIP, apresentando inclusive efeito inibitório da enzima. Este estudo demonstra o potencial uso de A. facilis cepa USBA-GBX-505 para a produção de uma nova enzima lipolítica, 505 LIP, a qual é estável a moderadas temperaturas e na presença de solventes orgánicos. Estas características são importantes para a síntese de diversos produtos úteis.

Production of Brazilian human norovirus VLPs and comparison of purification methods

Abstract Noroviruses (NVs) are responsible for most cases of human nonbacterial gastroenteritis worldwide. Some parameters for the purification of NV virus-like particles (VLPs) such as ease of production and yield were studied for future development of vaccines and diagnostic tools. In this study, VLPs were produced by the expression of the VP1 and VP2 gene cassette of the Brazilian NV isolate, and two purification methods were compared: cesium chloride (CsCl) gradient centrifugation and ion-exchange chromatography (IEC). IEC produced more and purer VLPs of NV compared to CsCl gradient centrifugation.

Associação de hipovitaminose D com Lúpus Eritematoso Sistêmico e inflamação / Association of hypovitaminosis D with Systemic Lupus Erythematosus and inflammation

Introdução: Atualmente, é descrita elevada prevalência de hipovitaminose D no Lúpus Eritematoso Sistêmico (LES), a qual se associa a algumas manifestações clínicas e maior atividade inflamatória. Objetivo: Avaliar a associação entre insuficiência de vitamina D com LES e marcadores inflamatórios. Métodos: Estudo transversal, tendo sido avaliados 45 pacientes com LES e 24 controles sem a doença. Níveis de 25-hidroxivitamina D [25(OH)D] menores que 30 ng/mL foram considerados insuficientes. A atividade da doença foi avaliada pelo Systemic Lupus Erythematosus Disease Activity Index (SLEDAI). Foram avaliados, ainda, proteína C reativa ultrassensível (PCRus) e interleucina-6 (IL-6) para verificação do status inflamatório. Para avaliação do envolvimento renal, foram realizados análise de elementos anormais e sedimentoscopia urinárias (EAS), hematúria e piúria quantitativas, proteinúria e depuração de creatinina em urina de 24 horas e anti-DNA de dupla hélice sérico. Resultados: A prevalência de insuficiência de 25(OH)D foi de 55% nos pacientes lúpicos e 8% nos participantes controles (p = 0,001). A mediana da 25(OH)D foi menor nos pacientes do que no grupo controle. Os pacientes com insuficiência de 25(OH)D apresentaram níveis mais elevados de IL-6 e maior prevalência de hematúria ao EAS. Não houve correlação entre vitamina D, nefrite lúpica e SLEDAI. Conclusão: Em nosso estudo, a insuficiência de vitamina D foi mais prevalente em pacientes com LES e se associou com níveis mais elevados de IL-6 e presença de hematúria. .

Introduction: Nowadays it is described a high prevalence of hypovitaminosis D in Systemic Lupus Erythematosus (SLE), which is associated with some clinical manifestations and increased inflammatory activity. Objective: To evaluate the association between vitamin D insufficiency with SLE and inflammatory markers. Methods: Cross-sectional study, in which have been evaluated 45 SLE patients and 24 controls without the disease. Levels of 25-hydroxyvitamin D [25(OH) D] less than 30 ng/mL were considered inadequate. Disease activity was assessed by the Systemic Lupus Erythematosus Disease Activity Index (SLEDAI). High sensitivity C reactive protein (hsCRP) and interleukin-6 (IL-6) were evaluated for verification of the inflammatory status. For assessment of renal involvement, analysis of abnormal elements and urinay sediment (AES), quantitative hematuria and pyuria, proteinuria and creatinine clearance in 24-hour urine and serum anti-double stranded DNA were performed. Results: The prevalence of 25(OH)D insufficiency was 55% in SLE patients and 8% in the controls participants (p = 0.001). The median of 25(OH)D was lower in patients than in controls. Patients with insufficient 25(OH)D had higher levels of IL-6 and higher prevalence of hematuria in the AES. There was no correlation between vitamin D and SLEDAI or lupus nephritis. Conclusion: In our study, vitamin D deficiency was more prevalent in patients with SLE and was associated with higher levels of IL-6 and hematuria. .

In vivo evaluation of homeostatic effects of Echis carinatus snake venom in Iran

Background: The venom of the family Viperidae, including the saw-scaled viper, is rich in serine proteinases and metalloproteinases, which affect the nervous system, complementary system, blood coagulation, platelet aggregation and blood pressure. One of the most prominent effects of the snake venom of Echis carinatus (Ec) is its coagulation activity, used for killing prey. Materials and methods: Subfractions F1A and F1B were isolated from Ec crude venom by a combination of gel chromatography (Sephadex G-75) and ion exchange chromatography on a DEAE-Sepharose (DE-52). These subfractions were then intravenously (IV) injected into NIH male mice. Blood samples were taken before and after the administration of these subfractions. Times for prothrombin, partial thromboplastin and fibrinogen were recorded. Results and conclusions: Comparison of the prothrombin time before and after F1A and F1B administrations showed that time for blood coagulation after injection is shorter than that of normal blood coagulation and also reduced coagulation time after Ec crude venom injection. This difference in coagulation time shows the intense coagulation activity of these subfractions that significantly increase the coagulation cascade rate and Causes to quick blood coagulation. The LD50 of the Ec crude venom was also determined to be 11.1 µg/mouse. Different crude venom doses were prepared with physiological serum and injected into four mice. Comparison of the prothrombin times after injection of subfractions F1A and F1B showed that the rate of mouse blood coagulation increases considerably. Comparing the partial thromboplastin times after injecting these subfractions with this normal test time showed that the activity rate of intrinsic blood coagulation system rose sharply in mice. Finally, by comparing the fibrinogen time after subfraction injections and normal test time, we can infer intense activation of coagulation cascade and fibrin production.(AU)

Proteomic profiling of nephrotic syndrome in serum using magnetic bead based sample fractionation & MALDI-TOF MS.

Background & objectives: At present, the diagnosis of nephrotic syndrome (NS) requires a renal biopsy which is an invasive procedure. We undertook this pilot study to develop an alternative method and potential new biomarkers for diagnosis, and validated a set of well-integrated tools called ClinProt to investigate serum petidome in NS patients. Methods: The fasting blood samples from 49 patients diagnosed with NS by renal biopsy, including 17 mesangial proliferative glomerulonephritis (MsPGN), 12 minimal change nephrotic syndrome (MCNS), 10 focal segmental glomerulosclerosis (FSGS) and 10 membranous nephropathy (MN), were collected and screened to describe their variability of the serum peptidome. The results in NS group were compared with those in 10 control healthy individuals. Specimens were purified with magnetic beads-based weak cation exchange chromatography and analyzed in a MALDI-TOF MS. Results: The results showed 43, 61, 45 and 19 differential peptide peaks in MsPGN, MCNS, MN and FSGS groups, respectively. A Genetic Algorithm was used to set up the classification models. Cross validation of healthy controls from MsPGN, MCNS, MN and FSGS was 96.18, 100, 98.53 and 94.12 per cent, respectively. The recognition capabilities were 100 per cent. Interpretation & conclusions: Our results showed that proteomic analysis of serum with MALDI-TOF MS is a fast and reproducible approach, which may give an early idea of the pathology of nephrotic syndrome.

Spectrum of haemoglobinopathies diagnosed by cation exchange-HPLC & modulating effects of nutritional deficiency anaemias from north India.

Background & objectives: The usefulness of cation exchange high performance liquid chromatography (CE-HPLC) as a tool for detection of thalassaemia/haemoglobin variants was evaluated in a prospective study in a tertiary care centre in north India. We also tried to evaluate the effect of concurrent nutritional deficiency on the HPLC pattern in the local ethnic population. Methods: A total of 800 blood samples were analyzed on the Bio-Rad Variant HPLC system by β-thal short program. The retention times, proportion of the haemoglobin (%), and the peak characteristics for all haemoglobin fractions were recorded. Alkaline and acid haemoglobin electrophoresis was performed to document the identities of the haemoglobin variants, wherever necessary. Many cases were subjected to family studies for a definitive diagnosis. Results: Among 800 samples tested, 553 (69.1%) were found to have normal HPLC pattern. Apart from β- thalassaemia, nine additional variants were encountered; HbS (2.8%), HbE (2.5%) and HbD (1.1%) being the most common variants present. Other variants included Hb Q-India, Hb-Lepore, δβ-thalassemia/ HPFH, HbD-Iran, HbJ-Meerut and HbH disease. There was a significant decrease in the level of HbA2 associated with iron deficiency anaemia (IDA) (P=0.004) and increase in megaloblastic anaemia (P<0.001) among subjects with normal HPLC pattern. Interpretation & conclusions: HPLC was found to be a simple, rapid and reliable method for the detection of hemoglobin variants. An accurate diagnosis can be provided in majority of cases by use of retention time, proportion of total haemoglobin, and peak characteristics of HPLC. Haemoglobin electrophoresis and family studies play a valuable role in difficult cases. Concurrent nutritional deficiency also has an effect on HbA2 levels.

Comparison of fast protein liquid chromatography (FPLC) with HPLC, electrophoresis & microcolumn chromatography techniques for the diagnosis of β-thalassaemia.

Background & objectives: β-thalassaemia is a genetic disorder and an important health problem around the world. Quantitative haemoglobin A2 (HbA2) levels are used for the diagnosis of β-thalassaemia. The conventional methods are high performance liquid chromatography (HPLC), electrophoresis, and microcolumn chromatography techniques. We established a fast protein liquid chromatography (FPLC) method, to measure quantitatively of HbA2 levels, and compared its efficacy with conventional methods. Methods: The FPLC method, using a DEAE Sepharose, Hi Trap anion-exchange column chromatography technique was set up for HbA2 measurement. In this study, 220 blood samples were screened for haemoglobin type by FPLC technique and also using HPLC, microcolumn chromatography and electrophoresis. Results: The FPLC results were highly correlated (r = 0.985, P<0.001) with those of HPLC for quantification of HbA2 as well as cellulose acetate electrophoresis (r = 0.977) and microcolumn chromatography (r = 0.980). The FPLC method showed 100 per cent sensitivity and specificity, positive and negative predictive value for β-thalassaemia diagnosis. In addition, the FPLC method was simple, rapid, low cost and reproducible. The HbA2/E range of FPLC for β-thalassaemia was 6-10 per cent, HbE trait was 10-40 per cent, β-thalassaemia/HbE was 40-60 per cent and homozygous HbE was more than 60 per cent. Interpretation & conclusions: Our findings suggested that FPLC method could be used as a cost-effective method for routine β-thalassaemia diagnosis.

Estudo das interações isoflavonas e proteínas da soja: efeitos sobre a digestibilidade e capacidade antioxidante / Study of interactions between isoflavones and soy protein: effect on the digestibility and antioxidant capacity

Embora a soja em grão seja pouco consumida pela população brasileira, seus derivados protéicos são utilizados como ingredientes em diversos alimentos e a tendência é um aumento significativo do seu uso com a aprovação pela FDA e pela ANVISA da alegação funcional referente ao consumo de proteína de soja. Em paralelo, um número crescente de pesquisas sobre as isoflavonas, fitoestrógenos presentes em quantidades significativas na soja, vem demonstrando diversos efeitos benéficos destes compostos, entre os quais a sua ação antioxidante, anticarcinogênica e hipocolesterolêmica. O objetivo foi estudar as interações entre isoflavonas e proteínas da soja, seu efeito na biodisponibilidade in vitro e in vivo e o status antioxidante das isoflavonas. Os resultados sugerem que a presença da proteína reduz a quantidade e leva a um retardo no tempo de absorção das isoflavonas em relação à administração na forma livre. O efeito sobre a capacidade antioxidante do plasma e sobre a atividade e expressão gênica das enzimas CAT, GPx e SOD divergiu para a suplementação de isoflavonas ou proteínas separadamente ou em associação...

A comparative study of the treatment techniques for controlling THM-precursors in raw and drinking water.

Silica gel adsorption, strong base anion exchange IRA 400-OH form resin were evaluated for the treatment of trihalomethane precursors present in raw and drinking water. A powdered silica gel having 60 to 120 mesh size and a previously dried IRA 400-OH form resin having 20-50 mesh size have been applied to artificial water samples and a specific analytical approach was used for selective removal of humic acid present in the water. This study aims to evaluate the role of contact time, pH, adsorption dose, concentration of humic acid (H.A.), flow rate on the reduction of THM-precursors as a result of adsorption of H.A. while passing raw water through silica gel and IRA 400 OH form resin column. Freundlich adsorption isotherm constants K for silica gel and IRA 400-OH form resin were determined as 1.13 x 10(-3) and 4.2 x 10(-3) mg/g respectively and l/n were found to be 0.9927 and 1.069 respectively.

Ion-exchange chromatography used to isolate a spermadhesin-related protein from domestic goat (Capra hircus) seminal plasma

Mammalian seminal plasma contains among others, proteins called spermadhesins, which are the major proteins of boar and stallion seminal plasma. These proteins appear to be involved in capacitation and sperm-egg interaction. Previously, we reported the presence of a protein related to spermadhesins in goat seminal plasma. In the present study, we have further characterized this protein, and we propose ion-exchange chromatography to isolate this seminal protein. Semen was obtained from four adult Saanen bucks. Seminal plasma was pooled, dialyzed against distilled water and freeze-dried. Lyophilized proteins were loaded onto an ion-exchange chromatography column. Dialyzed-lyophilized proteins from the main peak of DEAE-Sephacel were applied to a C2/C18 column coupled to an RP-HPLC system, and the eluted proteins were lyophilized for electrophoresis. The N-terminal was sequenced and amino acid sequence similarity was determined using CLUSTAL W. Additionally, proteins from DEAE-Sephacel chromatography step were dialyzed and submitted to a heparin-Sepharose high-performance liquid chromatography. Goat seminal plasma after ion-exchange chromatography yielded 6.47 +/- 0.63 mg (mean +/- SEM) of the major retained fraction. The protein was designated BSFP (buck seminal fluid protein). BSFP exhibited N-terminal sequence homology to boar, stallion and bull spermadhesins. BSFP showed no heparin-binding capabilities. These results together with our previous data indicate that goat seminal plasma contains a protein that is structurally related to proteins of the spermadhesin family. Finally, this protein can be efficiently isolated by ion-exchange and reverse-phase chromatography.

Comparison of two methods for purification of plantaricin ST31, a bacteriocin produced by Lactobacillus plantarum ST31

Dois métodos de purificação de plantaricin ST31, uma bacteriocina produzida por Lactobacillus plantarum ST31 foram usados neste estudo - o método de precipitação pelo sulfato de amônia usando cartucho Sep-pack C18 para a filtração e HPLC de fase reversa em coluna de C18 Nucleosil, e o método de purificação direta por troca catiônica SP Sepharose "Fast Flow column Amersham" (Pharmacia Biotech). A pureza dos produtos obtidos pelos dois protocolos foi examinada através da determinação dos pesos moleculares, composição e seqüência dos aminoácidos. A comparação destes resultados revelou que, em termos da pureza dos produtos, não havia diferenças entre os dois métodos de purificação podendo-se, portanto, utilizar qualquer um dos protocolos de purificação testados. No entanto, o rendimento da purificação pelo método da troca catiônica foi de 5.9 per center enquanto o do método HPLC foi de 0.8 per center.

Obtenção de hemoglobina purificada. Uso de resinas de troca aniônica para a eliminação de fosfolipídeos residuais / Stroma-free hemoglobin: Using anion-exchange chromatography to eliminate residual phospholipids

A hemoglobina humana (Hb)vem sendo usada como ponto de partida para o desenvolvimento de substitutos para o sangue. Antes de ser submetida a reações de modificação química, a Hb precisa ser obtida com alto grau de pureza. Neste trabalho, concentrados de hemácias foram tratados por métodos convencionais para a obtenção de amostras de Hb, sob a forma de carbonil-hemoglobina (HbCO). A técnica de cromatografia de troca iônica foi usada com o objetivo de verificar-se a eficiência de resinas aniônicas na eliminação de fosfolipídeos da parede celular, ainda residuais nas soluções de HbCO. Experimentos foram realizados com duas resinas de troca aniônica, uma fraca e outra forte. Os extratos orgânicos da solução de purificada adicionalmente por meio de cromatografia em resina de troca aniônica forte, AG MP-1, foram analisados por cromatografia líquida de alta pressão (HPLC). Os resultados mostraram que a resina AG MP-1, sob as condições utilizadas, foi capaz de reter grande parte do total de fosfolipídeos pesquisados

Um método para o desenvolvimento e avaliação de softwares instrucionais / The method for development and evaluation of instructional software

Este trabalho visa estabelecer um método de desenvolvimento de softwares instrucionais dedicados ao aprimoramento de habilidades cognitivas. Três dos softwares desenvolvidos são descritos, versando sobre três técnicas experimentais de Bioquímica: cromatografia de permeação em gel, cromatografia de afinidade e cromatografia de troca iônica. A organização do conteúdo e a interface dos softwares têm como objetivo favorecer a reflexão sobre os princípios físico-químicos das técnicas. Os softwares foram avaliados com estudantes de cursos de graduação das áreas de Biologia e Saúde, segundo método estabelecido neste trabalho. Os estudos de avaliação demonstram que o software pode ser usado com êxito para o aprendizado dos princípios físico-químicos das técnicas em nível de Compreensão e Aplicação

Purificação de glicose-6-fosfato desidrogenase (G6PDH) em sistemas de duas fases aquosas utilizando PEG/citrato / Purification of glucose-6-phosphate dehydrogenase (G6PDH) by aqueous two-phase system by using PEG/citrate

Foi estudada, neste trabalho, a purificação por extração líquido-líquido da enzima glicose-6-fosfato desidrogenase (G6PDH), de Saccharomyces cerevisiae, em sistemas de duas fases aquosas, preparados com polietilenoglicol (PEG) e sal citrato. Foram avaliados, também, a estabilidade e o equilíbrio do sistema, além do efeito da concentração de citrato de sódio, concentração e massa molar do PEG na partição desta enzima, com auxílio de um planejamento experimental do tipo fatorial 2ü. Os resultados das extrações mostraram que é possível purificar a G6PDH nesse tipo de sistema, com a condução do processo em duas etapas. A primeira delas, conduzida com 17 porcento (p/p) de PEG 400 e 20 porcento (p/p) de citrato...

Purificaçäo e mecanismos de açäo de uma bacteriocina produzida por Lactobacillus sake 2a isolado de lingüiça frescal / Purification and mechanistic action of the bacteriocin produced by Lactobacillus sake 2a isolated of Brazilian meat product (lingüiça)

Uma bacteriocina produzida por uma cepa de Lactobacillus sake 2a, isolada de lingüiça frescal comercial foi purificada, caracterizada e seu modo de ação foi estudado com o objetivo de ser utilizada como bioconservante em alimentos. A bacteriocina apresentou efeito bactericida contra Listeria monocytogenes em meio de cultura. Algumas cepas como Listeria welshimeri, Listeria seeligeri e Listeria inocua foram sensíveis, mas Staphylococcus aureus e Escherichia coli O157H7 foram resistentes a esta bacteriocina. O melhor meio de cultura para a sua produção foi o meio MRS à 25 ou 30 ºC durante a fase logarítmica de crescimento, obtendo-se 450 UA/ml de bacteriocina. Observou-se estabilidade a 121 ºC por 15 minutos...

Caracterização e implicações fisiológicas das interações da proteína prion celular com o seu receptor de 60-66 kDa e com a laminina / Caracterization and physiological implications of the cellular prion protein interactions with its 60-66 kDa receptor and with laminin

Prions são definidos como partículas protéicas infecciosas compostas, quase que exclusivamente, por uma proteína conhecida como prion scrapie (PrPsc). O envolvimento dessas partículas na etiologia de doenças neurodegenerativas, tanto em homens como em animais, já está bem determinado. Acredita-se que o PrPsc seja sintetizado através de modificações pós-traducionais que ocorreriam na isoforma celular da proteína prion (PrPc), uma glicoproteína expressa constitutivamente na superfície de vários tipos celulares, principalmente de neurônios, ancorada na membrana plasmática por glicosil-fosfatidil inositol (GPI). Apesar de ser uma molécula conservada em várias espécies, a função de PrPc ainda permanece desconhecida. Interessados nos possíveis papéis fisiológicos desempenhados pelo PrPc, decidimos investigar certas interações que o PrPc poderia realizar com outras moléculas, na tentativa de se encontrar pistas sobre a função dessa proteína em células normais...

Efecto agregante plaquetario de 2 citolisinas: sti y stii purificadas de la anémona marina Stichodactyla helianthus / Platelet aggregation effect of 2 cytolysins: sti and stii purified from the sea anemone Stichodactyla helianthus

Las citolisinas Sticholysina I (St I) y Sticholysina II (St II) inducen la agregación plaquetaria en el plasma rico en plaquetas en el rango de concentraciones ensayadas (0,5 a 10 µg/mL). Para ambas citolisinas se obtienen porcentajes de agregación plaquetaria superiores al 90 porciento con menos del 50 porciento de lisis celular. La agregación plaquetaria se mantiene elevada aún cuando la lisis celular disminuye a menos del 20 porciento. El EDTA 2 mM/L y el verapamilo 100 mM/L inhiben significativamente la agregación inducida por StI, lo que evidencia que el calcio extracelular tiene una función importante en este proceso y probablemente esta citolisina tiene una función similar a la de un ionóforo de calcio. Con StII no se obtuvo inhibición significativa de la agregación en presencia de EDTA y verapamilo. La agregación inducida por ambas citolisinas no está influida por el aumento del AMPc intracelular y es independiente de la formación de tromboxano A2 en la plaqueta

Purificación de C1r a partir de la fracción I de Cohn / Purification of C1r starting from Chron's fraction I

Se describe un método de purificación del componente C1r del sistema complemento a partir de la fracción I de Cohn mediante cromatografías secuenciales en Bio Rex 70, DEAE Sephacel y Sephacryl S 200. La presencia de C1r en las fracciones eluidas en las diferentes corridas cromatográficas se detectó por nefelometría. La pureza del C1r obtenido se determinó por inmunoelectroforesis contra un suero anti proteínas séricas humanas y un antisuero específico. A partir del C1r purificado se produjo en conejos un antisuero de buena calidad, útil para la cuantificación del C1r sérico

Preparación de un conjugado anti IgG de raton peroxidase en cabra / Preparation of anti-mouse IgG peroxidase conjugate in goat

Se preparó un conjugado con peroxidasa a partir de los anticuerpos específicos aislados de un antisuero de cabra anti IgG de ratón (molécula completa). Los anticuerpos se aislaron por cromatografía de afinidad y el conjugado se preparó por el método de oxidación con peryodato. El conjugado obtenido presentó una relación molar IgG/peroxidasa de 1,31, un valor de RZ de 0,285 y resultó evaluado satisfactoriamente en cuanto a su especificidad y reactividad en los ensayos inmunoenzimáticos realizados.

Purificação e caracterização das ß-glicosidases digestivas de Spodoptera frugiperda (Lepidoptera) / Purification and caracterization of digestive ß-glicosidase of Spodoptera frugiperda (Lepidoptera)

Foram purificadas através de uma combinação de cromatografias as duas ß-glicosidases digestivas (Mr 47.000 e 50.000 - denominadas ßgli47 e ßgli50, respectivamente) encontradas na larva de S. frugiperda. Experimentos de competição entre substratos e modificação química mostraram que a ßgli47 possui dois sítios ativos. Um desses sítios denominado aril ß-glicosidase apresenta um subsítio -1 que liga galactose mais eficientemente do enquanto que o subsítio +1 prefere pequenos grupos hidrofóbicos cíclicos. O segundo sítio, denominado celobiase, possui um subsítio -1 que prefere glicose. Já a região de ligação do aglicone apresenta 4 subsítios, que ligam glicose com afinidade decrescente à medida que afstam-se do ponto de clivagem do substrato...