Lysozyme plays a dual role against the dimorphic fungus Paracoccidioides brasiliensis / A lisozima desempenha um papel duplo contra o fungo dimórfico Paracoccidioides brasiliensis

In order to determine the role of lysozyme, an antimicrobial peptide belonging to the innate immune system, against the dimorphic fungus Paracoccidioides brasiliensis, co-cultures of the MH-S murine alveolar macrophages cell line with P. brasiliensis conidia were done; assays to evaluate the effect of physiological and inflammatory concentrations of lysozyme directly on the fungus life cycle were also undertaken. We observed that TNF-α-activated macrophages significantly inhibited the conidia to yeast transition (p = 0.0043) and exerted an important fungicidal effect (p = 0.0044), killing 27 percent more fungal propagules in comparison with controls. Nonetheless, after adding a selective inhibitor of lysozyme, the fungicidal effect was reverted. When P. brasiliensis propagules were exposed directly to different concentrations of lysozyme, a dual effect was observed. Physiologic concentrations of the enzyme facilitated the conidia-to-yeast transition process (p < 0.05). On the contrary, inflammatory concentrations impaired the normal temperature-dependant fungal transition (p < 0.0001). When yeast cells were exposed to lysozyme, irrespective of concentration, the multiple-budding ability was badly impaired (p < 0.0001). In addition, ultra-structural changes such as subcellular degradation, fusion of lipid vacuoles, lamellar structures and interruption of the fibrilar layer were observed in lysozyme exposed conidia. These results suggest that lysozyme appears to exert a dual role as part of the anti-P. brasiliensis defense mechanisms.

Com a finalidade de determinar o papel da lisozima, um peptídeo antimicrobiano que pertence ao sistema imune inato, contra o fungo dimórfico Paracoccidioides brasiliensis, foram feitas co-culturas de uma linha de macrófagos alveolares murinos (MH-S) com as conídias do fungo na presença ou não do TNF-α e/ou um inibidor da lisozima; também foram feitos ensaios que avaliaram o efeito das concentrações fisiológicas e inflamatórias de lisozima diretamente sobre o ciclo de vida do fungo. Observamos que os macrófagos ativados com a citoquina tiveram um efeito significativo na inibição da transição conídia/levedura (p = 0,0043) e exerceram um efeito fungicida importante (p = 0,0044), matando mais de 27 por cento das propágulas do fungo em comparação com os macrófagos não ativados. No entanto, após ser o inibidor seletivo da lisozima adicionado, o efeito fungicida foi revertido. Quando os propágulos do fungo foram expostos diretamente a diferentes concentrações da lisozima, um duplo efeito foi observado. Assim, as concentrações fisiológicas da enzima facilitaram o processo de transição conídia-levedura (p < 0,05). Contrariamente, as concentrações inflamatórias prejudicaram a transição fúngica (p < 0,0001). Quando as leveduras foram expostas a qualquer concentração de lisozima, sua capacidade de multi-brotação foi gravemente prejudicada (p < 0,0001). Além disso, mudanças ultra-estruturais, como a sub degradação, a fusão dos vacúolos dos lípidos, estruturas lamelares e interrupção da camada fibrilar foram observadas em conídios expostos à lisozima. Estes resultados sugerem que a lisozima poderia exercer um duplo papel no mecanismo antifúngico contra P. brasiliensis.

La infección pulmonar y sistémica causada por el Paracoccidioides brasiliensis. Avances recientes y perspectivas terapéuticas / Pulmonary and systemic infection caused by Paracoccidioides brasiliensis. Recent advances and therapeutic perspectives

La paracoccidioidomicosis es una infección fúngica subaguda o crónica adquirida por la inhalación del Paracoccidioides brasiliensis, caracterizada por la presencia de infiltados pulmonares "en mancha", y/o lesiones ulcesosa de la mucosa oronasal y la piel. La linfadenopatía es frecuente. En los casos diseminados, todas las vísceras pueden ser afectadas, pero las glándulas suprarrenales son especialmente susceptibles. El diagnóstico se confirma con el examen microscópico directo de los productos patológicos, la histopatología o el cultivo del agente infeccioso. Las técnicas de seroinmunología pueden ser de utilidad en el diagnóstico. Es endémica en las regiones tropicales y subtropicales de Sudamérica, Centroamérica y México. Los trabajadores con mayor riesgo son aquellos en contacto con el suelo, principalmente los campesinos, agricultores y obreros de la construcción; la incidencia más alta se ha registrado entre los adultos de 30 a 50 años de edad, siendo mucho más prevalente en los hombres que en las mujeres. El reservorio probablemente sea el suelo o la tierra cargada con las esporas del hongo. El medicamento de elección es el itraconazol. La anfotericina B seguida de una terapia prolongada con sulfas, resulta ser más barata pero menos efectiva. Sin embargo, los casos diseminados más graves, y la insuficiencia respiratoria residual representan un reto significativo a la terapéutica disponible.

Characterization of glycoprotein gp43, the major laminin-binding protein of Paracoccidioides brasiliensis

We have demonstrated that laminin mediates the adhesion of P. brasiliensis to monolayers of epithelial cells through specific binding to the surface glycoprotein gp43. This binding seems to be related to the fungal pathogenesis. We now report the confirmation of these findings by scanning electron microscopy and show that some isolates that do not secrete gp43 do express the protein as seen studying whole cell extracts. This results confirm the ability of these strains to produce paracoccidioidomycosis but should not be used for serological purposes since the absence of gp43 in exoantigens may lead to false negative results

In vitro action of some disinfectants on Paracoccidioides brasiliensis yeast forms

Descreveu-se a acao fungicida do hipoclorito de sodio (0,3; 1; 2,5; 5 e 10 por cento); do formaldeido (em solucao aquosa a 2,5 e 10 por cento); e alcool etilico a 70,0 por cento sobre formas leveduriformes de 2 cepas de Paraccoccidioides brasiliensis: Pb 18 e cepa Goiana, recentemente isolada. A incubacao do fungo e desinfetantes foi realizada a temperatura ambiente por periodos de 1, 2, 24, 48 e 72 horas. A viabilidade foi avaliada pelo tratamento com diacetato de fluoresceina-brometo de etideo; pela cultura em meios solidos e liquidos a 36 graus Celsius e 26 graus Celsius; transformacao de levedura em micelio a temperatura ambiente; e estudo radiometrico da atividade metabolica. Todas as concentracoes de todos os desinfetantes estudados foram capazes de inativar ambas as cepas, exceto na incubacao com formaldeido a 2 por cento por 1 hora, em que o tratamento por diacetato de fluoresceina-brometo de etideo revelou 40 por cento e 27 por cento de celulas viaveis, respectivamente, para a cepa Pb 18 e Goiana. A transformacao de levedura em micelio foi considerada um metodo rapido, com resultados semelhantes ao cultivo em meios solidos e liquidos.

Aspectos ultraestruturais da parede celular do Paracoccidioides brasiliensis, nas fases micelial e leveduriforme / Ultrastructural aspects of Paracoccidioides brasiliensis cell wall inthe mycelial and yeast phases

A parede celular de uma cêpa de Paracoccidioides brasiliensis, recém isolada de paciente portador de paracoccidioidomicose, foi estudada ultraestruturalmente, empregando-se a microscopia eletrônica de transmissäo e de varredura. Na fase micelial, as observaçöes com o microscópio eletrônico de transmissäo demonstram que a parede celular é composta por duas camadas eletronicamente distintas, sendo que a mais externa é de difícil visualizaçäo e composta possivelmente por delgadas fibrilas de beta-1,3-glucana. Esta camada relaciona-se com outra intermediária, de natureza quitinosa que sobrepoe-se à membrana plasmática. As células quando observadas em microscópio de varredura, apresentam a superfície lisa com anelaçöes septais e formando ocasionalmente clamidoconídeos sub-globosos. A parede celular da fase leveduriforme quando observada em microscopia de transmissäo, apresenta-se recoberta externamente por uma camada nitidamente fibrilar que desaparece quando as células såo tratadas por soluçöes alcalinas. Presume-se que estas fibrilas sejam compostas principalmente por um polisacarídeo, a alfa-1,3-glucana, responsável pela virulência do Paracoccidioides brasiliensis. Esta camada é intensamente corada por um corante monocatiônico, a safranina 0, podendo-se observar que as fibrilas superficiais extendem-se à distância da parede celular. A mesma fase quando preparada para microscopia de varredura pelo método do ponto crítico, apresenta-se recoberta por uma rede microfibrilar de textura grosseira, também álcali-solúvel, apresentando constantemente células de formato esférico ou sub-globoso. Uma outra cêpa do fungo, isolada e mantida em cultivo por 13 anos, apresenta uma rede microfibrilar superficial de textura diversa à da cêpa de isolamento recente e também uma tendência a desenvolver formas alongadas de brotamento, sugerindo uma alteraçäo constitucional da camada de alfa-1,3-glucana e possivelmente uma diminuiçäo da virulência sem a perda da antigenicidade. Säo discutidas as funçoes da alfa-1,3-glucana na patogenia da paracoccidioidomicose, especulando-se sobre a funçäo protetora deste polissacarídeo contra a destruiçäo pelas células do sistema imune