Caracterização imunocitoquímica da expressão da proteína RAP1 em blocos de células escamosas provenientes de citologia cervical em meio líquido / Immunocytochemistry characterization of expression of RAP1 protein in squamous cell blocks from cervical cytology in liquid medium

O diagnóstico precoce acurado do câncer cervical, relevante problema de saúde pública no mundo e no Brasil, pela citologia oncótica (Teste de Papanicolaou), é muito prejudicado pela subjetividade e variabilidade dos resultados falsos negativos e falsos positivos do método, particularmente diante de células escamosas atípicas(ASC). Recentes inovações técnicas, como citologia em meio líquido e imunocitoquímica com biomarcadores de proliferação celular, aumentaram a expectativa de melhorias no rastreamento do câncer cervical. No entanto, a aplicabilidade destas inovações nos estágios mais iniciais de atipia e displasias epiteliais permanecem incertas. Assim, considerando resultado prévio do nosso grupo de pesquisa, que identificou a proteína RAP1 como biomarcador diagnóstico da displasia cervical, este trabalho tem como objetivo caracterizar a expressão da proteína RAP1, comparativamente à expressão dos biomarcadores p16 e Ki-67, por imunocitoquímica, em blocos de células escamosas cervicais para possível aplicabilidade na triagem do câncer do colo do útero. Para tal, 34 amostras, 27 pacientes com diagnóstico de alterações celulares benignas (ACB) e 7 pacientes com diagnóstico de ASC foram coletadas na unidade Jenny Faria do Hospital das Clínicas da UFMG. Os resultados indicaram que 85% das amostras de blocos celulares foram satisfatórias para análise morfológica e a técnica reproduziu os principais parâmetros citopatológicos da citologia convencional...

Em relação a sua utilização para diagnóstico, o bloco de células apresentou sensibilidade de 38,46%,especificidade de 90,47% e uma variabilidade interobservador com taxa de concordância de aproximadamente 30% para os grupos ACB e ASC. A expressão da proteína RAP1 foi positiva na maioria das amostras do grupo “ACB” (15/27 ou55,56%) e resultado negativo na maioria das amostras do grupo “ASC” (4/7 ou 57,14%) com sensibilidade de 16,66%, especificidade de 75, %. As reações imunocitoquímicas das proteínas p16 e Ki-67 demonstraram, em ambos os grupos,apresentaram predomínio absoluto ou totalidade de resultados negativos. O DNA de HPV foi detectado em 9 (33,33%) das 27 amostras do grupo ACB e em 4 (57,14%)das 7 amostras do grupo ASC. O HPV-16 foi detectado nas 4 amostras do grupoASC. Nas amostras do grupo ACB foram detectados os HPV-16, em 5 amostras,HPV-58, em 2 amostras, HPV-45, em 1 amostra e HPV-66 em 1 amostra.Observamos inexistência de relação entre a presença do HPV e a expressão imunocitoquímica de RAP1 em ambos os grupos. Em conclusão, os blocos de células podem complementar o teste de Papanicolaou na triagem do câncer do colo uterino e a expressão da proteína RAP1 está aumentada em células cervicais em ambiente inflamatório, associado ou não à presença de HPV...

Caracterização imunocitoquímica da expressão da proteína RAP1 em blocos de células escamosas provenientes de citologia cervical em meio líquido

O diagnóstico precoce acurado do câncer cervical, relevante problema de saúde pública no mundo e no Brasil, pela citologia oncótica (Teste de Papanicolaou), é muito prejudicado pela subjetividade e variabilidade dos resultados falsos negativos e falsos positivos do método, particularmente diante de células escamosas atípicas(ASC). Recentes inovações técnicas, como citologia em meio líquido e imunocitoquímica com biomarcadores de proliferação celular, aumentaram a expectativa de melhorias no rastreamento do câncer cervical. No entanto, a aplicabilidade destas inovações nos estágios mais iniciais de atipia e displasias epiteliais permanecem incertas. Assim, considerando resultado prévio do nosso grupo de pesquisa, que identificou a proteína RAP1 como biomarcador diagnóstico da displasia cervical, este trabalho tem como objetivo caracterizar a expressão da proteína RAP1, comparativamente à expressão dos biomarcadores p16 e Ki-67, por imunocitoquímica, em blocos de células escamosas cervicais para possível aplicabilidade na triagem do câncer do colo do útero. Para tal, 34 amostras, 27 pacientes com diagnóstico de alterações celulares benignas (ACB) e 7 pacientes com diagnóstico de ASC foram coletadas na unidade Jenny Faria do Hospital das Clínicas da UFMG. Os resultados indicaram que 85% das amostras de blocos celulares foram satisfatórias para análise morfológica e a técnica reproduziu os principais parâmetros citopatológicos da citologia convencional.

Em relação a sua utilização para diagnóstico, o bloco de células apresentou sensibilidade de 38,46%,especificidade de 90,47% e uma variabilidade interobservador com taxa de concordância de aproximadamente 30% para os grupos ACB e ASC. A expressão da proteína RAP1 foi positiva na maioria das amostras do grupo “ACB” (15/27 ou55,56%) e resultado negativo na maioria das amostras do grupo “ASC” (4/7 ou 57,14%) com sensibilidade de 16,66%, especificidade de 75, %. As reações imunocitoquímicas das proteínas p16 e Ki-67 demonstraram, em ambos os grupos,apresentaram predomínio absoluto ou totalidade de resultados negativos. O DNA de HPV foi detectado em 9 (33,33%) das 27 amostras do grupo ACB e em 4 (57,14%)das 7 amostras do grupo ASC. O HPV-16 foi detectado nas 4 amostras do grupoASC. Nas amostras do grupo ACB foram detectados os HPV-16, em 5 amostras,HPV-58, em 2 amostras, HPV-45, em 1 amostra e HPV-66 em 1 amostra.Observamos inexistência de relação entre a presença do HPV e a expressão imunocitoquímica de RAP1 em ambos os grupos. Em conclusão, os blocos de células podem complementar o teste de Papanicolaou na triagem do câncer do colo uterino e a expressão da proteína RAP1 está aumentada em células cervicais em ambiente inflamatório, associado ou não à presença de HPV.

Significance of interplay between Rap1 and cadherin to the development of myelodysplastic syndrome / 中华血液学杂志

<p><b>OBJECTIVE</b>To explore the hematopoietic pathophysiology of myelodysplastic syndrome (MDS) at stem/progenitor cell level by analyzing the gene expression profiles associated with hematopoiesis.</p><p><b>METHODS</b>The differentially expressed genes which were involved in the hematopoiesis were screened by microarray using CD34(+) cells from MDS patients firstly. RQ-PCR was then applied to validate the screened genes using CD34(+) cells from MDS-RA patients who had normal karyotype. The linkages with hematopoiesis among these validated genes were analyzed.</p><p><b>RESULTS</b>Among the differentially expressed genes in CD34(+) cells of MDS-RA patients, Rap1GAP was up-regulated significantly (P < 0.01). Cadherins, which can interplay with Rap1, including N-cadherin and E-cadherin, were down-regulated significantly (P < 0.01). β-catenin, a downstream effector of cadherins, was highly expressed in MDS-RA patients (P < 0.01). c-myc binding protein was down-regulated (P < 0.01), and c-myc promoter binding protein was up-regulated (P < 0.01). Rac1, Rac2 and Cdc42, which belong to RhoGTPases family and are associated with the cell morphology and hematopoiesis, were all expressed highly in MDS-RA patients (P < 0.01).</p><p><b>CONCLUSION</b>The abnormal expression of cadherin, β-catenin and c-myc associated genes were closely related to the dysplastic hematopoiesis of MDS. The down regulation of cadherin was associated with the positive feedback mechanism between Rap1 and cadherin. The aberrant expression of Rac1, Rac2 and Cdc42 may contribute to the morphological dysplasia of MDS.</p>

Expression of TRF1, TRF2 and RAP1 mRNA in peripheral blood mononuclear cells of patients with acquired aplastic anemia / 中国实验血液学杂志

This study was aimed to investigate the expression levels of TRF1, TRF2 and RAP1 mRNA in peripheral blood mononuclear cells of patients with acquired aplastic anemia, and to explore their relation with onset of acquired aplastic anemia. Peripheral blood mononuclear cells of 40 patients with acquired aplastic anemia and 20 normal subjects as control were collected to detect mRNA expression of TRF1, TRF2 and RAP1 by using real-time quantitative polymerase chain reaction. The results showed that the expression levels of TRF1 and RAP1 in peripheral blood mononuclear cells of patients with acquired aplastic anemia were significantly higher than that in normal controls (P < 0.05), while the expression level of TRF2 was lower than that in normal controls (P < 0.01). There was significant correlation between TRF2 and RAP1 expressions level (r = 0.522, P = 0.001). It is concluded that the changes in expression levels of TRF1, TRF2 and RAP1 may play a role in the pathogenesis of acquired aplastic anemia.

The tumor suppressor RASSF1A is a novel effector of small G protein Rap1A

Rap1A is a small G protein implicated in a spectrum of biological processes such as cell proliferation, adhesion, differentiation, and embryogenesis. The downstream effectors through which Rap1A mediates its diverse effects are largely unknown. Here we show that Rap1A, but not the related small G proteins Rap2 or Ras, binds the tumor suppressor Ras association domain family 1A (RASSF1A) in a manner that is regulated by phosphorylation of RASSF1A. Interaction with Rap1A is shown to influence the effect of RASSF1A on microtubule behavior.

Regulatory function and expression of rap1gap gene in hematopoietic cells-review / 中国实验血液学杂志

Rap1 is a small G protein belonging to the RAS superfamily. Rap1 signalling has effects on cell growth, cell proliferation and involves in regulation of the mitogen activated protein (MAP) kinase or ERK (extracellular signal regulated kinase) cascade. Rap1 will directly activate ERK through B-Raf. B-Raf is a member of Raf family, and presents in neuronal and hematopoietic cells. Oncogenic mutations of gene RAS are most frequent and detected in 20% - 30% of human leukemias and 10% - 15% of MDS cases. The review summarizes the regulatory function of Rap1 in development of hematopoietic cells and effect of Rap1 in hematologic malignancies.

Expression and significance of Rap1A in testes of azoospermic subjects / 亚洲男科学杂志(英文版)

<p><b>AIM</b>To evaluate the Rap1A mRNA expression and its significance in the testes of normal and azoospermic subjects.</p><p><b>METHODS</b>A cDNA microarray that contained Rap1A and some other genes such as RBM, EIF1AY was used to identify the differential gene expression profiles between the normal and azoospermic testes. cDNA probes were prepared by labeling mRNA from azoospermic and normal testicular tissues through reverse transcription with Cy5-dUTP and Cy3-dUTP, respectively. The mixed cDNA probes were then hybridized with cDNA microarray (each containing 4096 unique human cDNA sequences). The fluorescent signals were scanned and the values of Cy5-dUTP and Cy3-dUTP on each spot were analyzed and calculated. In situ hybridization was employed to detect the expression of Rap1A in the testes of 10 fertile and 39 azoospermic subjects.</p><p><b>RESULTS</b>One hundred and twenty-eight differentially expressed genes were found to be possibly related to azoospermia, of which 56 were up-regulated and 72, down-regulated genes. The mRNA expression of Rap1A in the spermatogenic cells of azoospermic was stronger than that in those of the fertile testes.</p><p><b>CONCLUSION</b>Rap1A may play certain roles in the development of azoospermia.</p>

A study of aspermia-related genes by genchips and analysis of the RAP1A gene / 中华男科学杂志

<p><b>OBJECTIVE</b>To study the differential gene expression profiles between the normal and aspermia human testes by genechips.</p><p><b>METHODS</b>Probes were prepared from mRNA extracted from both normal and aspermia testes and employed on Biostar H-40s genechips to detect the differential gene expression profiles. A distinctly up-regulated gene RAP1A was analyzed by bibliogrphic retrieval.</p><p><b>RESULTS</b>Six hundred and twenty-three differential expressed genes were found, among which the distinctly up-regulated gene RAP1A was closely related to human sperm regulation.</p><p><b>CONCLUSIONS</b>Screening the differential gene expression profiles between the normal and aspermia human testes by genechips can be used in the study of aspermia-related genes.</p>