Inhibición de la formación de ß-hematina de especies colombianas de Piper spp. y Calophyllum spp. como potenciales agentes antimaláricos / Inhibition of ß-hematin formation of Colombian species of Piper spp. and Calophyllum spp. as potential antimalarial agents

Resumen Nuevos agentes antimaláricos a partir de plantas son estudiados como alternativas en el tratamiento de la malaria. Los principales antimaláricos como la cloroquina tienen varios mecanismos de acción contra parásitos, uno de ellos es la inhibición de polimerización del grupo hemo, modelo que ha permitido el diseño de nuevos candidatos antimaláricos. En este sentido, el objetivo de este trabajo fue evaluar extractos de plantas de género Piper y Calophyllum sobre la capacidad de inhibición de la β-hematina. Se informa las concentraciones inhibitorias de la formación de β-hematina por parte de 40 extractos de diferente polaridad obtenidos a partir de las especies P. piedecuestanum, C. brasiliense, C. longinforium, y Calophyllum. sp. 19 extractos mostraron un mayor potencial para inhibir la formación de β−hematina con CI50 < 3mg / ml. Estas actividades respaldan principalmente, futuros estudios con el género Calophyllum, en el desarrollo y descubrimiento de nuevas sustancias antiplasmodiales con modos de acción conocido.(AU)

Abstract New antimalarial agents from plants are studied as alternatives in the treatment of malaria. The main antimalarials such as chloroquine have several mechanisms of action against parasites, one of which is the inhibition of polymerization of the heme group, a model that has allowed the design of new antimalarial candidates. In this sense the objective of this work was to evaluate extracts of genus Piper and Calophyllum plants on the inhibition capacity of β-hematin. Inhibitory concentrations of β-hematin are reported from 40 extracts of different polarity obtained from the species P. piedecuestanum, C. brasiliense, C. longinforium, and Calophyllum. sp. 19 extracts showed a greater potential to inhibit β-hematin with IC50 < 3 mg/ml. These activities mainly support future studies with the genus Calophyllum in the development and discovery of new antiplasmodial substances with known modes of action.(AU)

Hemisíntesis de un híbrido diosgenonaartesunato y su efecto antiplasmodial / Diosgenone-artesunate hybrid hemisynthesis and its antimalarial effect

Antecedentes: La malaria es una enfermedad causada por parásitos del género Plasmodium y transmitida por mosquitos de género Anopheles. Anualmente, se reportan alrededor de 220 millones de casos de malaria en el mundo, de los cuales mueren aproximadamente 650.000 personas, convirtiendo esta enfermedad en un problema de salud pública. En los últimos años se ha reportado resistencia de los parásitos a los antimaláricos: cloroquina, mefloquina y recientemente a los derivados de artemisininas, como artesunato. Objetivo: Obtener por hemisíntesis un híbrido de diosgenona-artesunato con un conector hidrolizable tipo éster, y valorar su actividad antiplasmodial y citotoxicidad in vitro. Métodos: Para la obtención del híbrido 4, se redujo el grupo carbonilo de la diosgenona en presencia de borohidruro de sodio, para generar un alcohol, el cual se usó para enlazarse con el artesunato, por medio de una reacción de esterificación promovida por el reactivo de Yamaguchi. La actividad antiplasmodial se determinó en la cepa 3D7 de P. falciparum sensible a cloroquina, la citotoxicidad se evaluó en la línea celular HepG2. Resultados: Mediante una reacción de esterificación con el reactivo de Yamaguchi, se obtuvo el primer híbrido diosgenona-artesunato 4 (IC50=0,0157 µM), el cual fue más activo que la molécula de partida diosgenona 1 (IC50=35,49 µM) y la diosgenona reducida 2 (IC50=46,33 µM) pero no más que el artesunato 3 (IC50=0,0020 µM). Conclusiones: Se obtuvo un nuevo híbrido de diosgenona-artesunato el cual presenta mejor actividad que la molécula natural; resultado de importancia para su uso potencial contra cepas resistentes al artesunato.

Diez años de eficacia terapéutica de la cloroquina en malaria no complicada por Plasmodium vivax , Turbo, Antioquia, años 2002 y 2011 / Ten years of chloroquine efficacy for uncomplicated Plasmodium vivax malaria treatment, Turbo, Antioquia, 2002 and 2011

Introducción. La eficacia terapéutica de los antipalúdicos debe ser vigilada permanentemente debido al problema de resistencia. En Colombia existen pocos estudios que evalúen la eficacia de la cloroquina en la malaria no complicada por Plasmodium vivax . Objetivo. Evaluar la respuesta terapéutica de la cloroquina en el tratamiento del paludismo no complicado por P. vivax en el año 2011 en Turbo, Antioquia, y comparar estos resultados con los del estudio realizado en el año 2002 en el mismo municipio. Materiales y métodos. Se llevaron a cabo dos estudios en los que se incluyeron 152 participantes (50 en el año 2002 y 102 en el año 2011), todos mayores de cinco años, con malaria no complicada e infección simple por P. vivax , según los criterios de la Organización Mundial de la Salud (OMS). Se evaluó la eficacia terapéutica de la cloroquina, según los protocolos vigentes de la Organización Panamericana de la Salud (1998) y la OMS (2009); se dio tratamiento estándar supervisado con 1.500 mg de cloroquina en tres días y se hizo seguimiento clínico y parasitológico los días 0, 1, 2, 3, 7, 14 y 21 en el año 2002 y, además, el día 28 en el año 2011. Al finalizar el seguimiento se suministró primaquina a una dosis diaria de 0,25 mg/kg durante 14 días en todos los participantes. Resultados. Los resultados clínico y parasitológicos fueron adecuados en el 100 % de los participantes de ambos estudios. Conclusiones. La cloroquina continúa siendo eficaz para el tratamiento de la malaria no complicada por P. vivax en Turbo, Antioquia.

Introduction: The therapeutic efficacy of antimalarial drugs should be monitored continuously because of the emergence of drug resistance. In Colombia, there are few studies evaluating the efficacy of chloroquine in uncomplicated malaria by Plasmodium vivax . This study evaluated the therapeutic efficacy of chloroquine at two different times, with an interval of ten years, in the same municipality. Objective: To evaluate the therapeutic response to chloroquine for the treatment of uncomplicated P. vivax malaria in Turbo, Antioquia, in 2002, and to compare these results with those observed in 2011 in the same municipality. Materials and methods: Two studies included 152 volunteers (50 in 2002 and 102 in 2011), older than 5 years old, with uncomplicated malaria according to the World Health Organization (WHO) criteria and simple infection with P. vivax. The efficacy of chloroquine, according to the current standard treatment of the Pan American Health Organization (PAHO) (1998) and WHO (2009), was monitored with 1,500 mg of chloroquine in 3 days and was followed clinically and parasitologically on days 0, 1, 2, 3, 7, 14 and 21 in 2002, and also on day 28 in 2011. At the end of the follow-up a dose of 0.25 mg/kg/day of primaquine was administered to each patient for 14 days. Results: A hundred percent of the volunteers had adequate clinical and parasitological response in both studies. Conclusions: Chloroquine continues to be highly effective for the treatment of uncomplicated P. vivax malaria in Turbo, Antioquia, Colombia.

Evaluación del efecto citotóxico y del daño genético de extractos estandarizados de Solanum nudumcon actividad anti- Plasmodium / Evaluation of cytotoxic effect and genetic damage of standardized extracts of Solanum nudum with antiplasmodial activity

Introducción. La planta Solanum nudum es ampliamente usada en la medicina tradicional del Pacífico colombiano para tratar las fiebres y la malaria, o paludismo, y se ha convertido en una fuente de nuevas moléculas promisorias. Objetivo. Evaluar el efecto citotóxico y daño genético de extractos estandarizados de S. nudum en diferentes modelos celulares. Materiales y métodos. A 66 extractos estandarizados de S. nudum se les evaluó la actividad anti- Plasmodiumin vitro en dos cepas de Plasmodium falciparum, una sensible (NF54) y otra resistente (FCB2) a la cloroquina, y la citotoxicidad en células U937 y HepG2. Se seleccionaron los extractos que presentaron actividad anti- Plasmodium y baja toxicidad, y se les estimó su efecto hemolítico en eritrocitos sanos O + , el efecto mutagénico en las cepas TA98 y TA100 de Salmonella Typhimurium y el efecto genotóxico en células U937. Resultados. Se seleccionaron cinco extractos como promisorios (28MA1, 29MA1, 51MA1, 55MA1 y 61MA1), los cuales fueron activos en las cepas de P. falciparum con concentración inhibitoria 50 (CI 50 ) entre 9,8 y 54,8 µg/ml. El extracto 29MA1 fue el más selectivo para Plasmodium, con índice de selectividad de 4,4 y 14,5 para las células U937 y HepG2, respectivamente. En ningún extracto se observó efecto hemolítico a 250 µg/ml, no causaron mutaciones en las cepas TA98 y TA100 de S.Typhimurium, ni generaron efectos genotóxicos en células U937. Conclusiones. La utilización de extractos estandarizados de S. nudum contribuye con los trabajos encaminados al desarrollo de una nueva formulación farmacéutica para tratar la malaria a partir de productos naturales.

Introduction. The plant Solanum nudum (Solanaceae) is extensively used for the treatment of malaria-related symptoms in traditional medicine practices in the Colombian Pacific. Recently, it has become a significant source of promising new molecules for developing a pharmaceutical malaria treatment. Objective. This research aimed to evaluate the cytotoxic effect and the genetic damage of standardized extracts of S. nudumon different cells. Materials and methods. Sixty six standardized S. nudum extracts were used, evaluating cytotoxicity in U937 and HepG2 cells and the antiplasmodial activity using both a chloroquine-sensitive (NF54) and a chloroquine-resistant (FCB2) strain. The hemolytic effect on healthy O + erythrocytes, the mutagenic effect on S.Typhimurium TA98 and TA100 strains and the genotoxic effect on U937 cells were evaluated. The extracts that displayed both antiplasmodial activity and low toxicity were selected. Results. Five extracts were selected: 28MA1, 29MA1, 51MA1, 55MA1 and 61MA1. These extracts were active against P. falciparum with IC 50 between 9.8 and 54.8 µg/ml and selectivity indexes were calculated between 0.9 and 4.4, the latter for 29MA1. Also, no hemolytic effects in healthy O + erythrocytes were shown at a concentration of 250 µg/ml, nor did they cause mutations in the TA98 and TA100 strains or generate genotoxic effects in U937cells. Conclusion. The use of standardized extracts of S. nudum could contribute to the body of work aimed at developing a new pharmaceutical treatment for malaria using natural products.

Utilidad de los signos clínicos y parasitológicos en el pronóstico de la malaria grave en Colombia

Introducción. El pronto reconocimiento de los signos de peligro en los pacientes con malaria puede reducir las complicaciones y muertes. Sin embargo, se conoce poco sobre su valor pronóstico para la malaria complicada, especialmente en las zonas de transmisión baja e inestable de la enfermedad. Objetivo. Estimar el valor pronóstico de gravedad que tienen diversos signos clínicos y parasitológicos en los pacientes con malaria. Materiales y métodos. Se hizo un estudio en una cohorte prospectiva con pacientes de cinco municipios de Colombia, con diagnóstico de malaria por Plasmodium falciparum y P. vivax, en quienes se estudió la asociación de los signos clínicos y los parasitológicos con la malaria complicada. Resultados. Se obtuvo un modelo de predicción con una sensibilidad de 47,4 % y especificidad de 92,8 %, valor pronóstico positivo de 63,2 % y valor pronóstico negativo de 87,1 %, el cual incluye ictericia, orina oscura, hiperpirexia y signos de deshidratación. Conclusiones. Con el fin de causar un impacto en la morbilidad complicada de la malaria, se propone una estrategia de reconocimiento de los signos de peligro por el personal no médico, que se acompañe de otros elementos de la atención, como el suministro de un tratamiento antipalúdico adecuado y oportuno. Se proponen los criterios del diagnóstico de complicación moderada.

Prognostic value of clinical and parasitological signs for severe malaria in patients from Colombia.

Introduction. Early recognition of danger signs in patients with malaria can reduce complications and deaths, but little is known about their prognostic value for severe malaria, especially in areas of low transmission and unstable malaria. Objective. To assess the prognostic value for severity of different clinical and parasitological signs in patients with malaria. Materials and methods. A prospective cohort of patients from five municipalities in Colombia with diagnosis of Plasmodium falciparum or P. vivax malaria in whom the association between clinical and parasitological signs with complicated malaria was studied. Results. A predictive model with 47.4% sensitivity, 92.8% specificity, 63.2% positive predictive value and 87.1% negative predictive value was obtained which includes jaundice, dark urine, hyperpyrexia and signs of dehydration. Conclusions. To impact the morbidity of complicated proposed a strategy is proposed for the early recognition of danger signs by non-medical personnel, which could be complemented by other elements of health care, such as providing adequate and appropriate antimalarial treatment. Diagnostic criteria for moderate complication are also proposed.

Malaria en humanos por infección natural con Plasmodium knowlesi / Natural Plasmodium knowlesi malaria infections in humans

El primer caso informado de transmisión natural de Plasmodium knowlesi en humanos se publicó en 1965. En el sureste de Asia la presentación atípica de casos de malaria, tanto por cambios en la distribución de las especies diagnosticadas de Plasmodium, como por su morfología, motivó diversos estudios que han confirmado la infección en humanos por este plasmodio que infecta naturalmente distintas especies de simios, que son endémicos de las selvas de esta región. Los estudios recientes sugieren que la malaria por P. knowlesi no es una enfermedad emergente en humanos sino que no estaba siendo diagnosticada, debido a la similitud morfológica de este plasmodio con P. malariae y P. falciparum, lo cual dificulta su reconocimiento mediante examen microscópico. Actualmente, se puede confirmar el diagnóstico mediante reacción en cadena de la polimerasa que permite identificar cebadores específicos de P. knowlesi. La malaria por P. knowlesi ha ocasionado desenlaces fatales en humanos, lo que plantea diversos retos como la búsqueda de métodos operativos de diagnóstico para las zonas endémicas, el estudio de los vectores involucrados y la eficacia terapéutica de los medicamentos para su tratamiento. En las regiones selváticas de Suramérica se hace imperativa la vigilancia de parásitos y vectores de la malaria en simios, que potencialmente puedan ocasionar esta zoonosis.

The first reported case of natural transmission of Plasmodium knowlesi to humans was published in 1965. In Southeast Asia, the atypical presentation of malaria cases, the changes in the distribution of the Plasmodium species diagnosed and their atypical morphology prompted several studies that confirmed natural infections in humans by this protozoon which naturally infects different species of apes which are endemic in the forests of this region. Recent studies suggest that P. knowlesi malaria is not an emerging disease in humans but was rather being misdiagnosed due to its morphological similarity with P. malariae and P. falciparum, hampering its correct diagnosis by microscopic examination. Currently, the diagnosis can be confirmed by polymerase chain reaction using P. knowlesi specific primers. Malaria by P. knowlesi has lead to fatal outcomes in humans and poses several challenges such as the development of useful diagnostic tools for endemic areas, the study of the vectors involved and the therapeutic efficacy of the drugs for its treatment. In the jungle regions of South America it is imperative to monitor the parasites of simian malaria and the vectors that have the potential to transmit this zoonosis.

Retos para la eliminación de la malaria en Colombia: un problema de saber o de poder / Challenges for the elimination of malaria in Colombia: A problem of knowledge or of power

Introducción. Las prácticas para eliminar la malaria en el mundo han pasado de los programas de control sanitario, conocidos en Colombia como la "lucha higiénica" en los primeros años del siglo XX, a la erradicación en los años 50 y de vuelta al control en 1978. Hoy, después de 43 años de haber fracasado el Programa Mundial de Erradicación, la Organización Mundial de la Salud propone a los países miembro adoptar como meta un programa de eliminación con miras a la erradicación. ¿Será esto posible en Colombia? Objetivo. Revisar las posibilidades de eliminación de la malaria en Colombia desde un análisis histórico del saber y de las prácticas que se desarrollaron para lograrlo. Resultados. Se presentan los obstáculos y las posibilidades para el desarrollo de un programa de eliminación de la malaria en Colombia, donde el modelo etiopatogénico de sufrir una enfermedad infecciosa, basado en la teoría microbiana, sigue vigente y respalda prácticas como la erradicación. Conclusiones. La eliminación de la malaria es no sólo un problema de saber científico, de vacíos en el conocimientos sobre el objeto mismo, sino una forma de sustentar ese conocimiento en una única teoría, la microbiana o la etiopatogénica, para explicar enfermedades como la malaria, y también, un problema de poder; aun cuando el poder político puede ser una forma de saber, se entiende con esto la mezcla de estrategias y de intereses de las instituciones que dictan las políticas públicas, las agencias internacionales, los que venden insecticidas y medicamentos, y los que fabrican reactivos y nuevos dispositivos para diagnósticos.

Introduction. Practices to end malaria in the world have evolved from the sanitary control programs, known in Colombia as the fight for hygiene, in the early twentieth century, to the eradication efforst in the 5´s and back to control in 1978. Today, after 43 years of failure of the malaria eradication program, the World Health Organization proposes its members a program to eliminate malaria malaria with eradication in view. Will this be possible in Colombia? Objective. To review the possibilities of eliminating malaria in Colombia, from a historical analysis of the knowledge and practices developed to reach this aim. Results. We present the obstacles and opportunities for the development of a malaria elimination program in Colombia, where the etiopathogenic model of infectious diseases, based on the germ theory, still remains valid and supports practices such as eradication. Conclusion. Eliminating malaria is not just a scientific problem of the gaps in knowledge, but a way of supporting that knowledge with a single theory, the microbial or the etiopathogenic theory, to explain diseases such as malaria; it is also a problem of power. Even though the political power can be a form of knowledge, understanding it as a mixture of strategies and interests of the institutions that dictate the public policies, the international agencies, the companies selling sellers of insecticides and antimalarials and the producers of new reagents and diagnostic tools.

Malaria-related anaemia: a Latin American perspective

Malaria is the most important parasitic disease worldwide, responsible for an estimated 225 million clinical cases each year. It mainly affects children, pregnant women and non-immune adults who frequently die victims of cerebral manifestations and anaemia. Although the contribution of the American continent to the global malaria burden is only around 1.2 million clinical cases annually, there are 170 million inhabitants living at risk of malaria transmission in this region. On the African continent, where Plasmodium falciparum is the most prevalent human malaria parasite, anaemia is responsible for about half of the malaria-related deaths. Conversely, in Latin America (LA), malaria-related anaemia appears to be uncommon, though there is a limited knowledge about its real prevalence. This may be partially explained by several factors, including that the overall malaria burden in LA is significantly lower than that of Africa, that Plasmodium vivax, the predominant Plasmodium species in the region, appears to display a different clinical spectrus and most likely because better health services in LA prevent the development of severe malaria cases. With the aim of contributing to the understanding of the real importance of malaria-related anaemia in LA, we discuss here a revision of the available literature on the subject and the usefulness of experimental animal models, including New World monkeys, particularly for the study of the mechanisms involved in the pathogenesis of malaria.

Effect of Solanum nudum steroids on uninfected and Plasmodium falciparum-infected erythrocytes

Steroids from Solanum nudum (SNs) have demonstrated antiplasmodial activity against erythrocytic stages of the Plasmodium falciparum strain FCB-2. It is well known that steroids can alter the membrane function of erythrocytes. Thus, we assessed alterations in the membranes of uninfected red blood cells, the parasite invasiveness and the solute-induced lysis of parasitised red blood cells (pRBCs). induced by SNs. We found that most merozoites were unable to invade SN-treated erythrocytes. However, transmission electron microscopy revealed no effect on the morphology of uninfected erythrocytes treated with either SN2 or diosgenone and neither SN induced haemolysis of uninfected erythrocytes. SN2 and SN4 inhibited isosmotic sorbitol and alanine-induced haemolysis of pRBCs. In contrast, diosgenone and SN1 did not inhibit solute-induced haemolysis. The inhibition of solute-induced lysis of parasitised erythrocytes by SN2 and SN4 suggest an action of these SNs on new permeability pathways of pRBCs.

Estudio piloto de la eficacia y de los efectos sobre los gametocitos del esquema artesunato-mefloquina-primaquina para la malaria por Plasmodium falciparum / Therapeutic efficacy of a regimen of artesunate-mefloquine-primaquine treatment for Plasmodium falciparum malaria and treatment effects on gametocytic development

Introducción. El tratamiento de la malaria por P. falciparum requiere de un esquema seguro, eficaz y de impacto en la transmisión. En 2006, se implementó en Antioquia el esquema artesunato-mefloquina y se adicionó primaquina para eliminar los gametocitos. Objetivo. Evaluar la eficacia y acción gametocida de los esquemas artesunato-mefloquina-primaquina y artesunato-mefloquina en pacientes con malaria no complicada por P. falciparum de Turbo, Antioquia. Materiales y métodos. Ensayo clínico aleatorio; los tratamientos se suministraron de forma supervisada y se realizó seguimiento clínico-parasitológico en los días 1, 2, 3, 7, 14, 21, 28, 35, y 42, para evaluar la respuesta según el protocolo OMS-2003 modificado. Resultados. Entre abril de 2007 y febrero de 2008, 50 pacientes fueron reclutados; los resultados mostraron una eficacia de 100% (IC95% 86,3%-100%) para el esquema artesunato-mefloquina (con/sin primaquina); la parasitemia y la fiebre fueron eliminadas completamente al tercer día de tratamiento en todos los pacientes. La eliminación de gametocitos fue mayor con el uso de primaquina; al tercer día de seguimiento, el 92% (IC95% 74%-99%) de los pacientes que recibieron primaquina no tuvieron gametocitos, en comparación con 78,3% (IC95% 59%-93%) de pacientes del grupo artesunato-mefloquina. Además, el esquema artesunato-mefloquina-primaquina eliminó la gametocitemia una semana antes que el esquema sin primaquina. Conclusión. Se recomienda el uso del esquema artesunato-mefloquina para la malaria por P. falciparum por su alta eficacia y se sugieren futuras evaluaciones del beneficio de la PQ en la reducción de la densidad y prevalencia de gametocitos.

Introduction. The treatment of Plasmodium falciparum malaria requires a safe and effective therapeutic treatment regimen, which in turn has high impact on the transmission. In 2006, an artesunate (AS)-mefloquine (MQ) treatment program was implemented in Antioquia. In addition, primaquine (PQ) was added to eliminate malaria gametocytes in the bloodstream. Objective. The efficacy and gametocytocidal activity was evaluated for two treatment regimens, AS-MQ-PQ and AS-MQ, in patients with uncomplicated P. falciparum malaria. Materials and methods. Between April 2007 and February 2008, 50 patients were recruited for the trial in Turbo, Antioquia. A randomized clinical trial was conducted. Treatment compliance was supervised, with a clinical and parasitological assessment on days 1, 2, 3, 7, 14, 21, 28, 35, and 42 to evaluate response rate according to the WHO 2003 protocol. Results. Clinical response and parasite elimination efficacy of AS-MQ (with or without PQ) was 100% (95% CI 86.3%-100%), and parasitemia and fever were absent on day 3 of treatment in all patients. Gametocyte elimination was superior when PQ was used--92% (95% CI: 74%-99%) of patients who received PQ had no gametocytes on day 3, compared to 78.3% (95% CI: 59%-93%) of patients who only received AS-MQ. Furthermore, circulating gametocytes were eliminated on average one week faster when the AS-MQ-PQ treatment scheme was used compared to the scheme without PQ. Conclusion. These studies recommend the use of AS-MQ to treat P. falciparum malaria given its good therapeutic efficacy. However, further assessment is suggested concerning the benefit of adding PQ to this treatment scheme.

Exitoso cultivo in vitro de gametocitos de Plasmodium falciparum / Successful in vitro culture of Plasmodium falciparum gametocytes

Introducción. Los estadios sexuales de Plasmodium falciparum han sido menos estudiados que los estadios asexuales. Al parecer, esto se debe a la carencia de cultivos estandarizados in vitro y a la dificultad de reconocer sus estadios de desarrollo. Estos hechos no permiten el estudio de aspectos biológicos, aspectos metabólicos, expresión de genes y síntesis de proteínas durante los estadios sexuales, temas de interés en la investigación de nuevos medicamentos antipalúdicos, principalmente los aislados de plantas, y la identificación de un potencial blanco contra Plasmodium. Objetivos. Establecer un cultivo in vitro de gametocitos, con la identificación de sus cinco estadios de desarrollo, y asegurar su continua producción. Materiales y métodos. El cultivo in vitro de gametocitos se realizó a partir de la cepa NF54 de P. falciparum en medio RPMI, con determinación de la parasitemia asexual y sexual, adición de glóbulos rojos A-Rh+ sólo el primer día de cultivo y cambio diario del medio con adición de mezcla de gases (90 por ciento N2, 5 por ciento O2; 5 por ciento CO2), asegurándose que el cultivo se mantuviera a 37 °C. Cuando la parasitemia asexual estuvo entre 3 por ciento y 5 por ciento , se comenzó a agregar el doble de volumen de medio. Resultados. Se obtuvieron gametocitos en estadios I, II y III a partir del día 11 de cultivo y estadios IV y V a partir del día 14 de cultivo. Conclusiones. Se estandarizó un cultivo in vitro para estadios sexuales de P. falciparum que puede usarse para futuros estudios de evaluación de compuestos, naturales o sintéticos, que actúen sobre los gametocitos, lo cual podría permitir el desarrollo de nuevas estrategias de control contra el paludismo.

Reporte de cinco casos de malaria neonatal grave por Plasmodium vivax en Urabá, Colombia / Report of five cases of severe neonatal Plasmodium vivax malaria in Urabá, Colombia

Introducción. La malaria neonatal es aquélla que ocurre durante el primer mes de vida. Durante más de medio siglo se reporta la presencia de parásitos de malaria en neonatos, generalmente asociada a transmisión congénita, cuya frecuencia se ha incrementado desde hace algunosaños, especialmente en África. En Latinoamérica su situación es desconocida y sólo hay reportes aislados de casos. Objetivos. Describir los casos de paludismo neonatal diagnosticado en los hospitales de la región del Urabá antioqueño entre marzo de 2002 y marzo de 2004. Materiales y métodos. Se hizo una búsqueda de casos en los hospitales de Turbo y Apartadó que cumplieran los criterios de malaria neonatal. Se buscaron y tabularon datos sobre algunas características: maternas, demográficas de los neonatos, clínicas de la enfermedad y hallazgos de laboratorio. Resultados. Se encontraron cinco casos de malaria neonatal, todos por Plasmodium vivax, de los cuales, sólo uno cumplió los criterios de infección congénita. Aunque tres de los pacientes tuvieron parto institucional y dos antecedentes maternos de malaria gestacional, ninguno fue tamizado para malaria; 25 por ciento (1 de 4) de las madres eran primíparas y la mitad eran menores de 20 años. Todos los neonatos tuvieron fiebre, algún signo de enfermedad grave al examen físico de ingreso y cifras de hemoglobina compatibles con anemia neonatal grave. Ninguno recibió el esquema antipalúdico recomendado.Conclusión. Se trata de un reporte de cinco casos de malaria neonatal grave por P. vivax, especie que habitualmente no se relaciona con complicaciones, sin que existiera en ningún caso la sospecha clínica y con tratamiento inadecuado.

Susceptibilidad in vitro de aislamientos colombianos de Plasmodium falciparum a diferentes antimaláricos / In vitro susceptibility of Colombian Plasmodium falciparum isolates to different antimalarial drugs

Introducción. Los estudios de susceptibilidad in vitro de Plasmodium falciparum a los antimaláricos son herramientas importantes para vigilar la utilidad de esosmedicamentos; tales estudios son escasos en Colombia.Objetivo. Evaluar la susceptibilidad in vitro de aislamientos colombianos de P. falciparum a cloroquina (CQ), amodiaquina (AQ), mefloquina (MQ), quinina (QN) yartesunato (AS).Materiales y métodos. Se obtuvieron aislamientos clínicos de P. falciparum en varias regiones colombianas. De cada antimalárico se probaron siete diluciones dobles seriadas, por duplicado, con la técnica HRP-2 y las cepas FCB2 (cloroquina-resistente) y NF54 (cloroquina-sensible) como controles. Se utilizaron IC50>100, 80, 64, 500 y 10,5 nM como puntos de corte para clasificar la resistencia a CQ, AQ, MQ, QN y AS, respectivamente. Resultados. Veninticinco aislamientos evaluados (72 por ciento Urabá, 8 por ciento Bajo Cauca, 20 por ciento costa Pacífica). Las IC50 promedio de CQ, AQ, MQ, QN y AS fueron 422,9; 131,4; 56,3; 269,7 y 1,88 nM, respectivamente, y la proporción de aislamientos resistentes fue, en el mismo orden, 76 por ciento, 16 por ciento, 32 por ciento, 24 por ciento y 4 por ciento. Conclusiones. La baja sensibilidad a CQ concuerda con otros estudios in vitro y con la baja eficacia terapéutica in vivo. Aunque 96 por cientoR de los aislamientos fueron sensibles a AS, este y otros estudios han observado aislamientos con sensibilidad disminuida a artemisininas (IC50>10,5 nM), lo que sugiere que el uso indiscriminado de estos medicamentos pone en riesgo su efectividad y podría dejarnos sin opciones para el tratamiento de la malaria por P. falciparum.

Polimorfismos del gen pfmdr1 en muestras clínicas de Plasmodium falciparum y su relación con la respuesta terapéutica a antipalúdicos y paludismo grave en Colombia / Polymorphisms of the pfmdr1 gene in field samples of Plasmodium falciparum and their association with therapeutic response to antimalarial drugs and severe malaria in Colombia

Introducción. El gen pfmdr1 de Plasmodium falciparum se describió como un gen de resistencia a diversos antipalúdicos. Sin embargo, no se han estudiado el papel de su polimorfismo en la respuesta terapéutica al tratamiento con antipalúdicos en Colombia, ni su relación con paludismo grave. Objetivos. Este trabajo determinó la asociación entre los polimorfismos Asn86Tir y Asp1246Tir del gen pfmdr1 con la respuesta terapéutica a cloroquina, amodiaquina y mefloquina, en tres municipios antioqueños, y la asociación de estos polimorfismos con paludismo grave en muestras de pacientes del municipio de Tumaco. Materiales y métodos. Los polimorfismos del gen pfmdr1 se determinaron mediante amplificación de ácidos nucleicos y análisis con enzimas de restricción. Resultados. El alelo silvestre Asn86 se encontró en 97 por ciento (137/141) de las muestras en el estudio de respuesta terapéutica a cloroquina, amodiaquina y mefloquina; no se observó ninguna asociación entre su presencia y la falla terapéutica como sí lo reportan otros autores. El alelo 1246Tir se encontró en una alta proporción en el estudio de respuesta terapéutica, tanto en las muestras del día cero como en los del día de la falla después del tratamiento con los antipalúdicos. Conclusiones. Los polimorfismos 86Tir y 1246Tir en el gen pfmdr1 no son útiles como factores de predicción de falla terapéutica o paludismo grave en los municipios estudiados. Este estudio describe por primera vez la presencia del alelo 86Tir en cuatro muestras clínicas de Suramérica.

Introduction. The pfmdr1 gene of Plasmodium falciparum has been described as a gene conferring resistance to several antimalarial drugs. In particular, polymorphisms on specific codons have been associated with resistance and treatment failure with cloroquine, amodiaquine and mefloquine. However, the role of these polymorphisms in treatment response to antimalarials remains unexplored in Colombia. Furthermore, the relationship of these polymorphisms to severe malaria is unknown. Objective. This work studied the association of the Asn86Tyr and Asp1246Tyr pfmdr1 polymorphisms with response to cloroquine, amodiaquine and mefloquine treatment in three municipalities of Antioquia, and severe malaria cases from the municipality Tumaco. Materials and methods.The polymorphisms were assessed by nucleic acid amplification followed by restriction length polymorphism analysis. Results. The wild-type codon Asn86 was detected in 97% of the clinical samples from the treatment response study. No association was detected between this polymorphism and treatment failure to the three antimalarials administered. The 1246Tyr polymorphism was detected with a higher frequency in the samples from Antioquia 92% (130/141) than in those from Tumaco 22% (20/89). However, again, no association was found between the presence of a specific polymorphism and the presence of severe malaria in the municipality of Tumaco. Conclusions. The 86Tyr and 1246Tyr polymorphisms of the pfmdr1 gene are not useful as predictors of treatment failure or severe malaria in the municipalities studied. In addition, we report for the first time, the presence of the mutant codon 86Tyr in field samples in South America.

Apolipoproteína A1 para evaluar el estado nutricional en niños con y sin malaria / Apolipoprotein A1 to evaluate nutritional status in children with and without malaria

ANTECEDENTES: la apolipoproteína A1 (apoA1) se ha propuesto como indicador del estado nutricional, pero existe controversia al respecto.OBJETIVO: comparar la apoA1 sérica con la evaluación antropométrica como prueba diagnóstica del estado nutricional de niños (4-11 años) con malaria y sin ella.METODOLOGÍA: diseño descriptivo, prospectivo y transversal, con uso ciego y simultáneo de las dos pruebas diagnósticas. ApoA1 sérica se midió con métodonefelométrico (APOA, Laboratorio Beckman®).RESULTADOS: fueron evaluados 262 niños. La frecuencia de algún riesgo antropométrico de desnutrición fue 72 por ciento en niños maláricos y 70 por ciento en niños sin malaria. Dos de cada tres niños presentaron menos de 0,94 g/L (límite inferior normal) de apoA1. No hubo correlación significativa entre apoA1 y cada indicador antropométrico y los coeficientes rho de Spearman fueron siempre menores de 0,1. Entre niños sin malaria, apoA1 tuvo sensibilidad de 31 por ciento y especificidad de 83 por ciento, comparada con la clasificación nutricional antropométrica. Entre niños con malaria, la sensibilidad de apoA1 subió a 83 por ciento y la especificidad cayó a 27 por ciento.CONCLUSIONES: la apoA1 no es una herramienta útil para el diagnóstico del estado nutricional, tanto en niños con malaria como en aquellos sin esta enfermedad.

Seguridad hepática y hemática de la amodiaquina en el tratamiento de la malaria no complicada por plasmodium falciparum / Liver and haematological safety of amodiaquine treatment in non-complicated falciparum malaria

Introducción: Actualmente existe un número limitado de antimaláricos eficaces, entre ellos amodiaquina; sin embargo, su uso se ha restringido por informes previos de toxicidad hepática y hemática a dosis superiores a 1,500 mg administradas como profiláctico para malaria. No obstante, en dosis terapéuticas antimaláricas los efectos adversos son de intensidad leve o moderada, e incluyen náuseas, vómito y prurito. Objetivo: Evaluar la toxicidad hepática y hemática de la amodiaquina en dosis y tiempo establecidos para tratar la malaria por Plasmodium falciparum no complicada. Metodología: Diseño longitudinal con determinación no ciega del efecto. Se captaron 57 pacientes, seguidos por 10 días (evaluación clínico-parasitológica). Resultados: Antes del tratamiento, las variables hemáticas y hepáticas mostraron alteración leve y se normalizaron postratamiento, que fue 100% eficaz. Los días 5 y 10 del tratamiento todas las variables estaban normales, lo que sugiere ausencia de efectos tóxicos imputables al medicamento. Los efectos adversos fueron pocos, leves y desaparecieron completamente el día 10. Conclusiones: Usada en la dosis (25 mg/kg peso) y el tiempo (3 días) definidos para el tratamiento de la malaria por P. falciparum sin complicaciones, la amodiaquina no mostró efectos adversos ni toxicidad hepática ni hemática.

Background: At present there are few effective antimalarial drugs, amodiaquine is one of them; however, its use has been restricted by previous information about hematic and hepatic toxicity when it is administered as prophylactic at doses greater than 1,500 mg. But at therapeutic doses, the side effects are either slight or of moderate intensity and include nausea, vomit and pruritus. Objective: To evaluate the hepatic and hematic toxicity of amodiaquine administered at doses and time recommended for treatment of uncomplicated Plasmodium falciparum malaria. Methods: Longitudinal design with no blind determination of the effect. A total of 57 patients were included and followed up for 10 days (clinical-parasitological evaluation). Results: Hematic and hepatic variables showed slight alteration previous treatment and were normal postreatment. Therapeutic efficacy of amodiaquine was 100%. All variables were normal at days 5 and 10, suggesting absence of toxic effects imputable to amodiaquine. The side effects were few, slight and disappeared completely at day 10. Conclusions: Amodiaquine administered at doses (25 mg/kg weight) and time (3 days) established for treatment of uncomplicated Plasmodium falciparum malaria is safe, it did not show neither hematic nor hepatic toxicity.

Malaria por Plasmodium vivax: curación del ataque agudo con tres dosis diferentes de primaquina y dosis fija de cloroquina. Antioquia, Colombia, 2003-2004 / Plasmodium vivax malaria: treatment of primary attacks with primaquine, in three different doses, and a fixed dose of chloroquine, Antioquia, Colombia, 2003-2004

Introducción. Cloroquina (CQ) y primaquina (PQ) se usan en Colombia para tratar la malaria vivax no complicada, pero son escasas las evaluaciones de su eficacia. Objetivos. a) investigar la clínica de la malaria vivax en dos zonas con muy diferente nivel endémico; b) evaluar la respuesta terapéutica antimalárica obtenida con el tratamiento estándar CQ-PQ tomadas simultáneamente; c) comparar la eficacia del tratamiento estándar y la de otros dos esquemas que conservan la dosis total de CQ pero varían la de PQ; d) identificar los efectos adversos ocurridos durante el tratamiento CQ-PQ. Materiales y métodos. Diseño aleatorio, controlado, no ciego; tres grupos definidos según dosis total de PQ: 45, 105 y 210 mg. Todos recibieron CQ (1500 mg, en 48 horas) y simultáneamente PQ. Pacientes captados consecutivamente, en Turbo y El Bagre. Seguimiento durante 28 días. La respuesta terapéutica antimalárica clasificada en falla precoz, falla tardía y respuesta adecuada. Resultados. Se trataron 228 pacientes y la respuesta terapéutica antimalárica se evaluó en 210. El cuadro clínico encontrado es similar al descrito por otros autores. En todos los tres grupos, la parasitemia se eliminó en 24 horas de tratamiento con CQ en 11 por ciento de los pacientes, en 48 horas en 66 por ciento y en 72 horas en 97 por ciento. Todos los 210 pacientes respondieron adecuadamente al tratamiento CQ-PQ. La dosis variable de PQ no afectó esta respuesta.Conclusiones. CQ-PQ debe conservarse como la primera opción terapéutica y debe evaluarse en otras áreas. Se propone la administración concomitante de CQ y PQ.

Introduction. Chloroquine (CQ) and primaquine (PQ) are used in Colombia for treatment of uncomplicated vivax malaria but there are few efficacy studies of this scheme. Objectives. a) to investigate the clinical picture of vivax malaria in adult patients; b) to evaluate the antimalarial treatment response to the standard scheme CQ-PQ; c) to compare the efficacy of the standard scheme and two alternative schemes with equal dose of CQ and different PQ dose; d) to identify the adverse effects of CQ-PQ treatment.Materials and methods. Randomized, nonblind design; three groups, defined according to total dose of PQ: 45, 105 and 210 mg. All patients received CQ (1500 mg, in 48 hours), which was followed by PQ. Patients were recruited in Turbo and El Bagre. The follow-up period was 28 days. Antimalarial treatment response was classified according to the WHO-2001 protocol (early failure, late failure, adequate response). Results. In total 228 patients were recruited, 18 were lost between days 4 and 27; the antimalarial treatment response was evaluated in 210. The clinical findings were similar to those described by other authors. Parasitaemia clearance was confirmed during the first 24 hours of CQ treatment in 11% of patients. At 48 hours 66% and at 72 hours 97% of patients were negative. All patients (210) displayed adequate treatment response to the CQ-PQ treatment. The different doses of PQ did not affect this response. Conclusions. CQ-PQ should be conserved as the first treatment choice and should be evaluated in other areas. Simultaneous administration of CQ and PQ is proposed.

Concentraciones sanguíneas de sulfadoxina y pirimetamina según la respuesta terapéutica antimalárica, en dos municipios de Antioquia, Colombia / Blood levels of sulfadoxine and pyrimethamine, according to the malaria-treatment response, in two municipalities of Antioquia, Colombia

PROBLEMA: Se ha observado un aumento constante del índice de fracaso terapéutico de la combinación sulfadoxina-pirimetamina (SDX-PIR) en el tratamiento de la malaria por Plasmodium falciparum sin complicaciones. OBJETIVO: Cuantificar, mediante cromatografía de líquidos de alta resolución (HPLC), las concentraciones sanguíneas de SDX-PIR en pacientes con buena respuesta clínica y sin respuesta al tratamiento. MÉTODOS: En 2002 se llevó a cabo un estudio experimental con asignación aleatoria y sin anonimato para evaluar el tratamiento con la combinación SDX-PIR en una población de 79 pacientes de dos municipios del departamento de Antioquia en Colombia (Turbo: 45; Zaragoza: 34), de uno y otro sexo y de 1 a 60 años de edad, con malaria por Plasmodium falciparum sin complicaciones y una densidad de parasitemia de 500 a 50 000 anillos/æL. El tratamiento consistió en una sola dosis, administrada bajo supervisión médica, de SDX (25 mg/kg) y PIR (1,25 mg/kg) combinadas en comprimidos (500 mg y 25 mg de SDX y PIR, respectivamente) y se realizó seguimiento clínico y parasitológico por 21 días. Las concentraciones de SDX y PIR se midieron dos horas después de la administración del medicamento y el día del fracaso terapéutico en los casos en que se produjo. RESULTADOS: A las 2 horas de haberse administrado el medicamento la concentración sanguínea mediana de SDX fue de 136,6 æmol/L en los pacientes que mostraron respuesta clínica adecuada y de 103,4 æmol/L en quienes no respondieron al tratamiento (P = 0,13). La mediana de PIR fue 848,4 y 786,1 nmol/L en pacientes con respuesta clínica adecuada y fracaso terapéutico, respectivamente (P = 0,40). Las concentraciones tampoco mostraron diferencia significativa entre los casos de fracaso temprano y tardío. La correlación lineal entre las concentraciones de SDX y PIR fue cercana a cero (r = 0,13). DISCUSION Y CONCLUSIONES: Con respecto a 1998, el fracaso del tratamiento con la combinación SDX-PIR aumentó de 13 por ciento a 22 por ciento en Turbo y de 9 por ciento a 26 por ciento en Zaragoza. La falta de respuesta en 2002 no pudo explicarse por concentraciones (menores) de los medicamentos en sangre.

Gametocitemia de Plasmodium falciparum según la respuesta terapéutica a sulfadoxina-pirimetamina y cloroquina en dos municipios de Antioquia, Colombia / Gametocyte levels in response to differing malaria treatments in two municipalities of Colombia

Se ha informado que el número de gametocitos circulantes de Plasmodium falciparum está influenciado por aspectos como el nivel de endemicidad de la zona, la clase de esquizonticidas sanguíneos usados y la respuesta terapéutica a ellos. En Colombia son muy pocos los trabajos que han evaluado estas relaciones. Mediante un diseño experimental, se evaluó la gametocitemia (variable efecto) en función del nivel endémico de dos municipios de Antioquia, del tratamiento (sulfadoxina-pirimetamina y sulfadoxina-pirimetamina más cloroquina) y de la respuesta terapéutica (adecuada y fallida). Se estudiaron 148 pacientes con malaria por P. falciparum no complicada. La gametocitemia varía en función del tiempo de padecimiento de la malaria actual (mayor en Turbo que en Zaragoza) y esta variable debe controlarse para eliminar la aparente diferencia en las gametocitemias por municipio. No se hallaron diferencias estadísticamente significativas en la gametocitemia (porcentaje de pacientes con gametocitos circulantes y cantidad de ellos por microlitro) según el tratamiento y la respuesta terapéutica, aunque los niveles de gametocitos son mayores en los pacientes tratados sólo con sulfadoxinapirimetamina, respecto a quienes recibieron sulfadoxina-pirimetamina más cloroquina. Tampoco hubo diferencias en la gametocitemia según el sexo ni la edad de los pacientes, ni se halló correlación de ella con la parasitemia asexual. La diferencia en el nivel de gametocitemia encontrada entre los municiios de Turbo y Zaragoza parece estar influida por el tiempo transcurrido entre el inicio de los síntomas y la instauración del tratamiento.

Plasmodium falciparum gametocyte levels are influenced by level of regional endemicity, the antimalarial treatment, and the therapeutic response of patients. Few previous studies have related these factors in Colombia. Here, gametocytaemia was evaluated with respect to two treatment schemes (sulfadoxine/pyrimethamine and sulfadoxine/pyrimethamine plus chloroquine), the patient response (adequate or failure), and the locality (two areas of varying case frequency). One hundred forty-eight residents of Turbo and Zaragoza (Antioquia), all with uncomplicated malaria, were evaluated. The gametocytaemia and the rates of clinical malaria at the beginning of treatment were greater in Turbo than in Zaragoza. No statiscally significant differences in the gametocytaemia by treatment schemes or therapeutic responses were noted, although the patients who received SP had more gametocytes than those treated with SP+CQ. Gametocytaemia was not correlated with asexual parasitemia or sex and age of patient. The difference in the level of gametocytaemia between Turbo and Zaragoza appears to be influenced by the time elapsed between the appearance of symptoms and the beginning of treatment.

Eficacia terapéutica de tres esquemas de tratamiento de malaria no complida por Plasmodium falciparum, Antioquia, Colombia, 2002 / Therapeutic efficacy of three treatment schemes in uncomplicated Plamodium falciparum malaria in Antioquia, Colombia, 2002

La resistencia a medicamentos antimaláricos aumenta la carga de malaria en un país. En Colombia, la situación de los antimaláricos es apremiante dada la alta resistencia de Plasmodium falciparum a la cloroquina y la escasez mundial de amodiaquina. Ante este panorama, se evaluó la respuesta terapéutica a sulfadoxina/pirimetamina (SDXP) y cloroquina (CQ) como monoterapias y en combinación para el tratamiento de malaria no complicada por P. falciparum, aplicando el protocolo de OMS/OPS 1998, en Turbo y Zaragoza, dos municipios de Antioquía, Colombia. Se diseñó una muestra para grupos balanceados y los pacientes fueron asignados aleatoriamente a los grupos de tratamiento. Se evaluaron 160 pacientes con malaria por P. falciparum sin complicaciones. La distribución de pacientes de ambos municipios en cada grupo de tratamiento fue estadísticamente similar en la mayoría de variables. En Turbo hubo un porcentaje de falla terapéutica de 87,5 por ciento a CQ, 22,2 por ciento a SDXP y de 22,6 por ciento a la combinación, mientras en Zaragoza la falla terapéutica fue de 77 por ciento a CQ, 26,5 por ciento a SDXP y 12,1 por ciento a SDXP/CQ. Durante el seguimiento, 50 por ciento y 33,3 por ciento de los pacientes con falla terapéutica tardía en Turbo y Zaragoza, respectivamente, fueron asintomáticos. Este estudio encontró un alto nivel de falla terapéutica con CQ en ambos municipios, mientras la SDXP y la combinación mostraron niveles de falla cercanos al 25 por ciento. Es de anotar el hallazgo de pacientes con falla tardía parasitológica y el riesgo que significa esta situación en la permanencia de la transmisión.