Analyses of photoprotective compounds in red algae from the Brazilian coast

Qualitative and quantitative studies of mycosporine-like amino acids (MAAs) in three species of the genus Gracilaria Greville (G. birdiae, G. domingensis and G. tenuistipitata) were performed. A simple and efficient extraction procedure based on ethanol was described. HPLC, UV and mass spectrometry experiments revealed different profiles between extracts obtained from one species cultivated in the laboratory (G. tenuistipitata) and two species collected in their natural environment (G. birdiae and G. domingensis). The levels detected in the latter two species were approximately 150 times higher than in the species cultivated in vitro. This study revealed that G. birdiae and G. domingensis present a potential source for economical exploration of MAAs.

Importância da metodologia na dosagem de testosterona sérica: comparação entre um imunoensaio direto e um método fundamentado em cromatografia líquida de alta performance e espectrometria de massa em tandem (HPLC/MS-MS) / The importance of methodology in serum testosterone measurement: comparison between a direct immunoassay and a method based on high performance liquid chromatography and tandem mass spectrometry (HPLC/MS-MS)

A dosagem de testosterona sérica, total ou fração livre, é metodologia de alto valor diagnóstico e encontra-se disponível na maioria dos laboratórios clínicos. Esta disponibilidade foi possível pelo desenvolvimento de metodologias simples e diretas, adaptáveis a plataformas de dosagem automatizada. Uma série de publicações recentes tem alertado quanto às limitações destas metodologias, em especial em amostras com baixas concentrações, como mulheres e crianças. Neste trabalho serão apresentados os resultados do emprego de uma metodologia de referência, fundamentada em cromatografia líquida de alta performance e espectrometria de massa em tandem (HPLC/MS-MS), e sua comparação com uma dosagem de rotina (ensaio eletroquimioluminescente - ECLIA). Os métodos são comparados tanto na dosagem de testosterona total (n = 213) quanto na determinação de testosterona livre calculada com base na determinação da testosterona total e da proteína carregadora de hormônios sexuais (SHBG) (n = 135). Os valores obtidos com o ECLIA são significativamente mais elevados, sendo a dispersão mais nítida em soros com baixas concentrações. Tal fenômeno fica mais claro quando apresentado na forma de gráficos de Bland-Altman. Neste trabalho são discutidas as dificuldades de implementação de uma metodologia de referência, como a apresentada, e a convivência com as metodologias de rotina, bem como a literatura recente sobre o assunto.

Serum testosterone in its total or free form, is a highly valuable diagnostic test and is available in the great majority of clinical laboratories. This reality was possible due to the development of simple and direct assays, adaptable to large automatic systems. Recent publications have called attention to the limitations of these simplified methodologies, mainly in samples with low concentration, as women and children. In this paper we present results obtained using a reference method based on high performance liquid chromatography and tandem mass spectrometry (HPLC/MS-MS) and its comparison with those obtained with a commercial routine immunoassay (electrochemiluminescent assay, ECLIA). Methods were compared in total testosterone measurement (n = 213), as well as in free testosterone evaluation based on calculation inclu-ding sex hormone-binding protein (SHBG) levels (n = 135). Values obtained with ECLIA were significantly higher, with more marked dispersion in low concentration. This phenomenon is clearer when presented as a Bland-Altman plot. Difficulties in the implementation of reference methods as the one presented are discussed, as well as the necessity of caution in the interpretation of values obtained with routine assays, a matter of several publications in recent literature.

Dosagem de cortisol e cortisona livres urinários empregando cromatografia líquida associada a espectrometria de massa em tandem (LC-MS/MS) / Measurement of free urinary cortisol and cortisone using liquid chromatography associated with tandem mass spectrometry method

A dosagem de cortisol livre na urina (CLU) é um método útil na triagem de pacientes suspeitos de síndrome de Cushing. Os imunoensaios atuais apresentam limitacões que dificultam sua aplicacão e a comparacão de resultados por diferentes ensaios. No presente método para dosagem de cortisol e cortisona livres urinários, baseado em cromatografia líquida com deteccão por espectrômetro de massa em tandem (LC-MS/MS), uma alíquota de urina 24h (200æL) é misturada com solucão contendo quantidade conhecida de cortisol deuterado e extraída on-line em fase sólida (C18). O eluato é transferido para uma segunda coluna C18 (Phenomenex Luna, 3æ, de 50 x 2mm), e o eluato obtido em modo isocrático é aplicado diretamente no MS/MS modelo Quattro Micro, operando no modo positivo de ionizacão química a pressão atmosférica (APCI). Todo o processo é automatizado e a quantificacão é feita por diluicão isotópica com base nas razões das áreas dos picos dos analitos e do padrão interno deuterado. O estudo de especificidade mostrou que nenhum esteróide testado apresenta reatividade cruzada superior a 1 por cento com cortisol ou cortisona. A sensibilidade funcional é <1æg/L para os dois esteróides, e o CV interensaio <8 por cento. Os estudos de recuperacão e de linearidade foram satisfatórios, e a comparacão entre os resultados obtidos para cortisol em 98 amostras de rotina, pelo ensaio em estudo e por um RIE, mostraram correlacão de r= 0,838, sendo os valores obtidos por LC-MS/MS significativamente mais baixos (medianas de 22,0 e 49,4æg/24h, respectivamente) (P<0,0001). Os valores de referência para cortisol foram definidos entre 11 e 43æg/24h, compatíveis com métodos semelhantes recentemente descritos. A dosagem concomitante de cortisona livre urinária permite o estudo da atividade da enzima 11beta-HSD2 e a pesquisa da síndrome do excesso aparente de mineralocorticóides. O método descrito representa a primeira descricão, em nosso meio, de uma nova geracão de métodos para a medida de esteróides hormonais, baseados em processos preparativos automatizados e leitura por espectrometria de massa em tandem.

Lesoes em DNA produzidas por produtos secundarios da peroxidacao lipidica / DNA damage induced by secondary lipid oxidation products

A lipoperoxidacao tem sido associada a diversos mecanismos celulares deleterios que podem acarretar cancer, inflamacao e envelhecimento. Diversas evidencias indicam que os aldeidos, produzidos durante este processo sao mais toxicos do que os monohidroperoxidos dos quais sao originados. Aqui apresentamos um sumario dos principais resultados obtidos com relacao a danos em DNA produzidos por aldeidos reativos. Apesar dos mecanismos de envelhecimento e formacao de tumores ainda serem obscuros, a literatura recente indica a participacao de produtos secundarios da lipoperoxidacao na lesao cromossomal associada a estes processos

DNA damage induced by secondary lipid oxidation products

Lipid peroxidation in cell membranes has been associated with a wide variety of deleterious processes leading to cellular damage, cancer, inflammation and aging. Aldehydes formed as secondary lipid oxidation products have been suggested to be more toxic than lipid hydroperoxides. Heve we summarize data on DNA damage induced by reactive aldehydes. While the ultimate mechanisms responsible for the aging process and tumorigenesis are obscure, there is growing evidence that aldehydes produced as secondary lipid peroxidation products play a key role in the chromosomal damage associated with these processes.