Random amplification of polymorphic DNA reveals clonal relationships among enteropathogenic Escherichia coli isolated from non-human primates and humans

Enteropathogenic Escherichia coli (EPEC) strains are important agents of infantile diarrhea all over the world, gaining even greater importance in developing countries. EPEC have also been isolated from various animal species, but most isolates belong to serotypes that differ from those recovered from humans. However, it has been demonstrated that several isolates from non-human primates belong to the serogroups and/or serotypes related to those implicated in human disease. The objective of this study was to evaluate the genetic differences between thirteen strains isolated from non-human primates and the same number of strains isolated from human infections. Human isolates belonged to the same serogroup/serotype as the monkey strains and the evaluation was done by analysis of random amplified polymorphic DNA. Dendrogram analysis showed that there was no clustering between human and monkey strains. Human and non-human isolates of the EPEC serotypes O127:H40 and O128:H2 shared 90 and 87 percent of their bands, respectively, indicating strong genomic similarity between the strains, leading to the speculation that they may have arisen from the same pathogenic clone. To our knowledge, this study is the first one comparing genomic similarity between human and non-human primate strains and the results provide further evidence that monkey EPEC strains correlate with human EPEC, as suggested in a previous investigation.

Determination of the efficiency of K99-F41 fimbrial antigen vaccine in newborn calves

Semipurified K99 and F41 fimbrial antigens were used to prepare an oil-emulsified vaccine against bovine enterotoxigenic colibacillosis. Nine Nelore cows about 7 months pregnant were divided into 3 groups (A, B and C) of 3 animals each, which received different doses of vaccine (1,500 HU, 750 HU and 380 HU, respectively) 8 and 2 weeks before delivery, in the neck by the subcutaneous route. As a control (group D), 3 pregnant cows of the same breed were not vaccinated for later challange of their calves. Vaccine efficiency was measured by the serological tests double diffusion and ELISA. Challenge of calves from the vaccinated and from the three control unvaccinated cows was carried out with the virulent Escherichia coli B41 strain (0101), STa+, K99+, F41+). Two of the 3 calves from unvaccinated cows died within 48 h with acute diarrhea. E. coli B4 was recovered as pure culture from their stools. In contrast, none of the calves born from vaccinated cows presented diarrhea. These data suggest that the antibody transfer to calves through colostrum gave full protection aginst the challenge. This semipurified fimbrial vaccine against K99-F41-harboring strains is the first oil-emulsified immunogen prepared in Brazil, which was not only efficient, but also had no adverse effects on vaccinated pregnant cows

Evaluation of an oil emulsified vaccine against bovine colibacillosis using semi-purified K99-F41 adhesins

Os antígenos K99-F41 foram extraídos da amostra de Escherichia coli B41 por aquecimento e semi-purificados pela precipitaçäo com sulfato de amônio e tratamento com desoxicolato de sódio (DOC). Os antígenos semi-purificados foram utilizados na produçäo de uma vacina oleosa contra a colibacilose bovina. Foram preparadas vacinas contendo em cada dose 1.500 HU (Unidades Hemaglutinantes), 750 HU e 380 HU. A eficiência da vacina foi avaliada através do ensaio de imunodifusäo dupla, ensaio imunoenzimático (ELISA) e por um desafio, em que a amostra de Escherichia coli virulenta foi inoculada nos bezerros nascidos de vacas vacinadas e näo vacinadas. Observamos que a vacina contendo 750 HU foi a que melhor induziu a produçäo de anticorpos nas vacas vacinadas, e que estes mostratam-se protetores, uma vez que os bezerros nascidos de vacas vacinadas e que mamaram o colostro, nada sofreram no desafio. Näo se verificou nenhum efeito colateral nas vacas vacinadas

Capacidade hemaglutinante de amostras de Pasteurella multocida isoladas de suínos e sua associaçäo com fímbria e dermotoxicidade / Haemagglutinating capability of Pasteurella multocida strains isolated from swine and their association with fimbriae and dermotoxicity

Estudaram-se 76 amostras de P. multocida (Pm), 70 isoladas das cavidades nasais de leitöes afetados com rinite atrófica e seis isoladas de pulmöes, provenientes de 16 propriedades no Sul do Brasil. Amostras de Pm do tipo D e toxigênicas foram isoladas em 10 das 16 propriedades. O tipo capsular D foi prevalente na cavidade nasal (77 por cento das amostras), enquanto que nos pulmöes prevaleceu o tipo A (83 por cento). Todas as amostras toxigênicas isoladas de cavidade nasal (55 por cento) pertenciam ao tipo D e uma, isolada do pulmäo, ao tipo A. Nove padröes de hemaglutinaçäo (HA) foram identificados com as hemácias de suíno, coelho, cobaio, ovelha e galinha. Cinquenta e nove por cento das amostras toxigênicas e do tipo D aglutinavam todas as hemácias citadas (padräo I). O meio de Minca com 10 por cento de soro bovino propiciou os títulos HA mais elevados. Näo se detectou efeito da temperatura de cultivo nos títulos de HA e näo se observou associaçäo entre HA, dermotoxicidade e fimbria

Reproduçäo experimental da rinite atrófica com Pasteurella multocida em leitöes tratados com ácido acético ou inoculados com Bordetella bronchiseptica / Experimental reproduction of atrophic rhinitis with Pasteurella multocida in piglets treated with acetic acid or inoculated with Bordetella bronchiseptica

Avaliou-se a capacidade de diferentes amostras de P. multocida toxigênicas do tipo D, após tratamento da mucosa nasal com ácido acético, em colonizar a cavidade nasal e induzir rinite atrófica (RA) em leitöes, associadas ou näo com B. bronchiseptica. P. multocida foi reisolada mais frequentemente da cavidade nasal dos animais inoculados com B. bronchiseptica do que daqueles tratados com ácido acético. Duas amostras de P. multocida (4735 e 4776) induziram RA grave somente nos leitöes tratados com ácido acético ou inoculados previamente com B. bronchiseptica toxigênica em fase I. A amostra 3497 de P. multocida somente induziu RA grave nos leitöes tratados com ácido acético e quando associada a amostra 4963 de B. bronchiseptica em fase I e toxigênica, sendo reisolada em maior número e com maior frequência das cavidades nasais que as demais amostras de B. bronchiseptica. Existem diferenças entre amostras toxigênicas de P. multocida quanto à capacidade de colonizar a cavidade nasal e induzir RA grave em leitöes

Associaçäo de Pasteurella multocida toxigênica do tipo D ao trato respiratório superior dos suínos / Association of toxigenic type D Pasteurella multocida to the upper respiratory tract of swine

Objetivou-se determinar se associaçäo poderia ser o mecanismo pelo qual P. multocida integra-se com a mucosa nasal dos leitöes. Cortes criostáticos de anéis de traquéias inoculadas com amostra toxigênica de P. multocida do tipo D e de secçöes de tecido amigdalino, fixados em formalina e embebidos em parafina, de leitöes SPF de cinco a oito semanas de idade, inoculados como amostra toxigênica de P. multocida, foram submetidos às técnicas de imunoperoxidase (IP) para detectar P. multocida. Os números de Bordetella bronchiseptica e P. multocida nas secreçöes nasais e amígdalas, de 85 leitöes, foram estimados à necropsia. Os leitöes foram inoculados com amostra toxigênica de P. multocida do tipo D, após terem sido inoculados com B. bronchiseptica ou após terem suas cavidades nasais tratados por ácido acético. P. multocida foi recuperada das amígdalas de 47 (72 por cento) e das secreçöes nasais de 13 (20 por cento) animais inoculados, sendo o número de bactérias recuperado das amígdalas superior (P<0,005) ao das secreçöes nasais. Maior número de B. bronchiseptica foi isolado das secreçöes nasais. P. multocida associou-se ao muco presente no lúmen dos anéis e aderiu pobremente às células mucosas, e foi encontrada dentro das criptas das amígdalas sem invadir o parênquima glandular e sem aderir ao epitélio

Ocorrência de fímbria em amostras toxigênicas de Pasteurella multocida do tipo D isoladas de suínos e tentativas de estabilizar sua expressäo / Occurrence of fimbriae in toxin-producing type D Pasteurella multocida isolated from pigs and attempts to stabilize its expression

Pesquisou-se em amostras toxigênicas de P. multocida (tipo D) a presença de fímbrias e analisaram-se algumas possíveis condiçöes para sua expressäo com o intuito de caracterizar esta estrutura como uma possível adesina. Amostras de P. multocida com certos títulos hemaglutinantes elevados, com poucas passagens em meios de cultivos após isolamento de animais inoculados, formaçäo de películas em meios líquidos e variaçöes fenotípicas introduzidas por alfa, alfa, dypiridil (DIB) foram cultivadas em agar sangue (AS), caldo BHI, Minca suplementado com 10 por cento de soro bovino, com e sem agar, caldo de infusäo de conchas nasais e pulmöes, meio de Heddlestone, meio básico com hemina (0,5 a 30 ug/ml) e em AS com 70uM de DIB. Fímbrias foram observadas, à microscopia eletrônica, de forma instável e somente em amostras recém isoladas de suínos, cultivadas em AS. Näo houve aumento da produçäo de fímbria quando as bactérias foram cultivadas nas demais condiçöes testadas

Capacidade adesiva de amostras toxigênicas de Pasteurella multocida do tipo D em células HeLa, HEp-2 e de conchas nasais de suínos / Adhesive capability of toxigenic type D Pasteurella multocida strains in HeLa, HEp-2 and pig nasal turbinate cells

Três amostras toxigênicas de Pasteurella multocida foram submetidas a testes de aderência "in vitro", utilizando-se linhagens de células HeLa, HEp-2 e preparados de células de conchas nasais de suínos (CCNS). Para o teste de adesäo em CCNS, as amostras foram cultivadas em caldo infuso de cérebro e coraçäo, Agar Sangue (AS), meio de Minca com soro bovino e no meio de Heddlestone, com e sem alfa, alfa, dypiridil. Amostras de P. multocida (tipo D) näo aderiram em cultivos de células HeLa e HEp-2. Nos testes de aderência de P. multocida com CCNS, verificou-se que 80 por cento das células ciliadas continham menos do que três bactérias aderidas aos cílios ou ao corpo celular. Entre as células näo ciliadas, este número foi de 5 por cento. As amostras de Pasteurella multocida näo diferiram entre si e nem com relaçäo à E. coli-K12 (controle negativo) na capacidade adesiva. Pelos testes realizados "in vitro", concluiu-se que Pasteurella multocida possui pouca afinidade para as células testadas nas condiçöes discriminadas

Cholera on the American continents

Análise da cólera nas Américas, observando os aspectos epidemiológicos, veículos de transmissão, controle dos surtos, diagnóstico e tratamento, vacinas e vigilância epidemiológica

Teste de coaglutinaçäo para detecçäo de rotavirus / Coagglutination assay for detection of rotaviruses

Resumo: O teste de coaglutinaçäo foi utilizado para a detecçäo de rotavírus em fezes de origem humana e de suínos. Suspensäo de Staphylococcus aureos, produtor de proteina A, foi sensibilizada com uma diluiçäo seriada de antissoro anti-rotavirus do grupo A mostrando que quando foi utilizada a diluiçäo a 1:20, o teste foi capaz de detectar tanto antígeno SA11 como também o extrato fecal, ambos diluídos. Um total de 89 amostras de fezes absorvidas com S. aureus foram testadas por coaglutinaçäo e por um ensaio imunoenzimático. A análise estatística dos resultados obtidos mostrou uma concordância de 0,91 entre os dois testes o que levou-nos a conluir que a coaglutinaçäo é um método simples, rápido, sensível e pouco dispendioso para a detecçäo de rotavírus diretamente do material fecal. Além da utilizaçäo do soro diluído para a sensibilizaçäo de s> aureus ficou demonstrado também que, esta mistura, quando estocada a 4 graus C pode ser utilizada por até 6 meses após o seu preparo, sem implicar em resultados falso-positivos (au)

Gangliosides inhibit serological reactions for the detectionn of cholera and heat-labile enterotoxins of cholera and heat-labile enterotoxins of Escherichia coli

GM1 ganglioside has been identified as the receptor for cholera toxin (CT) and heat-labile (LT) enterotoxin of Escherichia coli in many cell types. Using the radial immune hemolysis (RIH) and indirect hemagglutination (IH) tests described for the detection of these enterotoxins, a study was conducted on the 100% inhibition of these reactions by pre-incubating these enterotoxins, a study was conducted on the 100% inhibition of these reactions by pre-incubating these enterotoxins with GM1, GD 1a and GT1 gangliosides. GM1 was found to be much more efficient than the othjer two. With respect to the RIH test, GT1 was more efficient than GD1a as an inhibitor of enterotoxin binding. Similar results were obtained with the IH test. These data also showed that sheep red blood cells provide a good model system for the study of receptors for CT, LT and probably other enterotoxins which bind to gangliosides

Comparison of indirect immunofluorescencee with agar gel immunodiffusion for the diagnosis of bluetongue virus infection

Sera from 190 cows and from 72 sheep were examined to compare the results obtained with the agar gel immundiffusion (AGIP) and indirect immunofluorescence (IIF) tests for the diagnosis of bluetongue (BT) disease. In the AGIP test, 96 of 190 (50.5%) cattle serum samples and 38 of 72 (52.7%) sheep serum samples were positive, for a total of 134 out of 262 (51.1%) sera. In the IIF test, 98 of 190 (51.6%) cattle serum samples and 39 of 72 (54.2%) sheep serum samples were positive, for a total of 137 out of 262 (52.3%) sera. The fluorescence of the IIF test presented a granular cytoplasmic aspect, which in some cells was observed only on the cell membranes. Statistical analysis of the data showed close agreement between the two techniques, regardless of the kind of sera examined. The IIF test showed high sensitivity (93.8% and 92.1%), specificity (91.4% and 88.2%) and positive (91.8% and 89.7%) and negative (93.48% and 90.9%) predictive values for cattle serum and sheep serum, respectively. The results obtained with obtained with IIF were comparable to those obtained with the AGIP test, indicating that both techniques can be used routinely in epidemiologic studies of BT. However, the IIF offers the additional advantages that it can be used for antibody quantification and for the detection of viral antigens in BT-infected cell lines

Escherichia coli enterotoxigenicas e rotavirus detectados em criancas com gastroenterite aguda em Belem, Para. / Enterotoxigenic Escherichia coli isolated from children with acute gastroenteritis, Belem, Para

Procurou-se pesquisar, em Belem do Para, a presenca de Escherichia coli enterotoxigenica e outros enteropatogenos, incluindo agentes virais, nas fezes de 44 criancas de 0 a 5 anos de idade, com quadro diarreico agudo. A presenca de bacterias enteropatogenicas foi investigada pela coprocultura e a pesquisa de rotavirus atraves das tecnicas de ELISA e contra-imunoeletroosmoforese. O isolamento de enterovirus foi feito em cultura de celulas (Vero e HEp 2) e camundongo recem-nascido. Helmintos e protozoarios intestinais foram procurados pelo metodo direto. Trinta e tres (75%) dos casos foram positivos para um ou mais enteropatogenos, sendo 30,3% de etiologia bacteriana, 39,4% de origem viral e 30,3% de infeccao mista. A procura de enterotoxina LT e ST em 153 cepas de E.coli isoladas dos pacientes, foi feita, pelos testes de imuno-hemolise passiva (PIH) e camundongo recem-nascido (Teste de Dean), respectivamente. Cepas enterotoxigenicas de E. coli, em numero de 17 foram isoladas de sete dos 44 pacientes estudados. Em nenhuma amostra ocorreu producao simultanea de duas enterotoxinas

Purificacao da enterotoxina termo-estavel (ST) de Escherichia coli. / Purification study thermostable (ST) enteroxin of Escherichia coli

A enterotoxina termo-estavel (ST) de E.coli, proveniente de amostra humana, foi parcialmente purificada por cromatografia em coluna de permutador anionico, equilibrado com acetato de amonio 0,01M, pH 9, dialise em sacos tratados com piridina e andrido acetico (V/V) e filtracao em coluna de Sephadex G-15 foi examinado por cromatografia descendente em papel, no sistema de solventes acido acetico, butanol e agua (1:4:5). Conseguiu-se distinguir diversas substancias presentes na amostra e localizar, apos eluicao e analise pelo teste do camundongo recem-nascido, a mancha correspondente a enterotoxina ST. Em recromatografia da toxina ST eluida, no mesmo solvente, obteve-se apenas uma mancha. Entretanto, em vista do baixo rendimento observado neste ultimo metodo, o seu uso deve ser indicado, apenas como um processo analitico da purificacao de ST