Experiencia organizativa del Centro de Investigaciones Científicas de la Defensa Civil en el diagnóstico de la COVID-19 / Organizational experience of the Civil Defense Scientific Research Center in the diagnosis of COVID-19

El enfrentamiento a la epidemia de la COVID-19 en Cuba, ha requerido el desarrollo de nuevas capacidades para su diagnóstico en los laboratorios de biología molecular de diferentes instituciones científicas y de salud. El objetivo de este trabajo es mostrar la experiencia del Centro de Investigaciones Científicas de la Defensa Civil en la organización del diagnóstico de la COVID-19. Se revisaron documentos rectores del trabajo del centro, su programa de bioseguridad y los reportados por la Organización Mundial de la Salud para el enfrentamiento a la pandemia. Se expone la experiencia de la estructura adoptada por la entidad para asegurar el diagnóstico de forma ininterrumpida, las funciones del grupo de dirección y la secuencia de las actividades desarrolladas. Se destaca la capacitación del personal en la gestión de riesgos biológicos y las medidas de prevención adoptadas. El uso adecuado de los medios de protección colectivos e individuales, la manipulación segura de las muestras biológicas y la cooperación con otras entidades, han permitido el cumplimiento de la tarea encomendada, sin la ocurrencia de accidentes que comprometan la salud del personal que labora en el diagnóstico, ni afectaciones a la comunidad y al medio ambiente(AU)

Facing the COVID-19 epidemic in Cuba has required the development of new capacities for its diagnosis in the molecular biology laboratories of different scientific and health institutions. The objective of this work is to show the experience of the Cuban Civil Defense Scientific Research Center in organizing the diagnosis of COVID-19. Guiding documents for the Center's work, its biosafety program, and those reported by the World Health Organization for dealing with the pandemic were reviewed. The experience of the structure adopted by the entity to ensure an uninterrupted diagnosis, the functions of the Steering Group and the sequence of activities carried out is exposed; highlighting the training of personnel in the management of biological risks and the prevention measures adopted. The proper use of collective and individual protection means, the safe handling of biological samples and cooperation with other entities, have allowed the fulfillment of the entrusted task, without the occurrence of accidents that compromise the health of the personnel working in the diagnosis, nor effects on the community and the environment(AU)

Estudio de patrones de indeterminados al Western blot en el algoritmo cubano de diagnóstico serológico del Virus de Inmunodeficiencia Humana / Study of Western blot indeterminate patterns in the algorithm followed in Cuba for HIV diagnosis

Cada año un número de personas resultan indeterminadas por las pruebas de Western blot y requieren de seguimiento para esclarecer su condición serológica respecto al VIH. Para profundizar en el conocimiento de este grupo, se estudió la respuesta de anticuerpos a las diferentes proteínas virales en el Western blot de 571 personas que resultaron indeterminadas en el algoritmo de confirmación del Laboratorio de Investigaciones del SIDA en Cuba (LISIDA) durante los años 2004 y 2005, también se investigó la evolución serológica de 57 personas que presentaban reactividad solamente contra las proteínas de 53 y/o 55 Kd, pudiendo estar presente además, reactividad contra la proteína de 17Kd. Se observó de forma significativa (p< 0,001) una mayor reactividad a las proteínas de 53 y 55 Kd, de igual forma resultó significativo el porcentaje de personas que negativizaron su patrón de bandas en el Western blot en la evolución serológica. Los resultados coinciden con lo reportado por otros investigadores en estudios similares y justifican la estrategia de seguimiento serológico y epidemiológico en personas con patrones indeterminados al VIH 1 en el Western blot, aún cuando su reactividad sea solamente contra las proteínas de 53 o 55 Kd, además, confirman que el diagnóstico de VIH va más allá de un criterio de interpretación o el valor de la reactividad a una proteína en particular, el éxito está en la conjugación de los resultados del laboratorio con la clínica y la epidemiologia

Every year a number of individuals are interpreted as indeterminate when tested by Western blot, then, a follow up is required to clear up their HIV serological status. To deepen in the study of this group, 571 persons whose Western blot was interpreted as indeterminate in the confirmatory algorithm of the AIDS Research Laboratory in Cuba (LISIDA) during the years 2004 and 2005 were studied for antibody response to the different HIV viral proteins; the serological evolution of 57 persons who only showed reactivity to p53 and/or p55 Kd, with a probable reactivity to p17 Kd protein was also studied. A greater reactivity (p < 0,001) to proteins 53 and 55 Kd was observed, and the percentage of persons who became negative in their Western blot bands pattern during the serological evolution was also significant. The results correlate with those reported by other researchers in similar studies, and justify the strategy of serological and epidemiological follow up in HIV- 1 individuals with Indeterminate Western blot tests, even when its reactivity is only against proteins 53 or 55 Kd, it also confirms the fact that HIV diagnosis is beyond an interpretation criteria or the reactivity value to a particular protein, success lies on the conjugation of clinical and epidemiological laboratory results

Evaluación de la inmovilización de un péptido de gp36 de VIH-2 en membranas de nitrocelulosa / Evaluation of the immobilization of one HIV-2 gp36 peptide in nitrocellulose membrane

Introducción: la inmovilización de antígenos a soportes sólidos se utiliza para el desarrollo de diversos inmunoensayos. Una de las primeras tecnologías desarrolladas fue la adsorción de proteínas por aplicación directa sobre la nitrocelulosa. Objetivo: normalizar la inmovilización de un péptido sintético de la proteína de transmembrana gp36 del VIH-2, a un soporte de nitrocelulosa para fines diagnósticos y evaluar los parámetros de desempeño en un grupo de muestras de sueros con reactividad de interés conocida. Métodos: el péptido se inmovilizó de forma libre, conjugado a la albúmina de suero bovina (BSA) y a la hemocianina de lapa marina (KLH) como proteínas portadoras. Se analizaron los parámetros de inmovilización y se determinó la variante óptima. Con la variante escogida se evaluó la sensibilidad y especificidad diagnóstica frente a paneles de referencia del Laboratorio de Investigaciones del SIDA. La especificidad analítica se evaluó con muestras reactivas a VIH-1 y HTLV-I. Resultados: el análisis de las variantes de péptido inmovilizadas a las membranas de nitrocelulosa, demostró que el péptido gp36-BSA, fue el que logró la mayor diferenciación entre muestras positivas y negativas. Se obtuvo 100 por ciento de sensibilidad y 95,2 por ciento de especificidad diagnóstica, así como 100 por ciento de especificidad analítica. Conclusiones: el péptido gp36-BSA inmovilizado en membranas de nitrocelulosa es eficaz en el diagnóstico serológico del VIH-2, lo cual permitirá considerarlo para su empleo con fines diagnósticos en sistemas que utilicen como fase sólida la nitrocelulosa.

Introduction: antigen immobilization in solid supports is used for the development of several immunoassays. One of the first technologies developed was the protein adsorption by direct application to nitrocellulose. Objective: to standardize the immobilization of a synthetic peptide of the HIV-2 transmembrane protein gp36 to nitrocellulose support for diagnostic purposes and to evaluate the performance parameters in a group of serum samples with recognized interesting reactivity. Methods: the peptide was freely immobilized, conjugated to bovine serum albumin (BSA) and to keyhole limpet hemocyanin (KLH) as carrier proteins. Immobilization parameters were analyzed and then, the optimal immobilization alternative was determined. Using the chosen variant, the diagnostic sensitivity and specificity against reference panels of the AIDS Research Laboratory were evaluated. Analytical specificity was evaluated with reactive samples to HIV-1 and HTLV-I. Results: the analysis of the immobilized peptide variants to nitrocellulose membranes showed that the gp36 peptide-BSA was the one that succeeded in setting the greatest differentiation between positive and negative samples. There were observed 100 percent sensitivity, 95.2 percent diagnostic specificity and 100 percent analytical specificity. Conclusions: the gp36-BSA peptide immobilized on nitrocellulose membranes showed efficacy for the serological diagnosis of HIV-2, which will allow considering this peptide for diagnostic uses in systems with nitrocellulose based solid phase.

Seguimiento seroepidemiológico de contactos sexuales de individuos seropositivos al HTLV-I en Cuba / Seroepidemiological follow-up of sexual partners of HTLV-I seropositive individuals in Cuba

INTRODUCCIÓN: el virus linfotrópico de células T humanas tipo I (HTLV-I) es endémico en el Caribe, con tasas de seroprevalencia de 3 a 6 %. Se transmite por las vías sexual, vertical y parenteral. Aunque con seroprevalencia mucho menor, en Cuba también circula el HTLV-I y la transmisión heterosexual es una forma de contagio frecuentemente reportada. OBJETIVO: determinar la seroprevalencia del HTLV-I en los contactos sexuales de individuos con infección conocida por HTLV-I y valorar factores de interés epidemiológico con posible influencia en la transmisión. MÉTODOS: se realizó un estudio prospectivo de seguimiento seroepidemiológico de los contactos sexuales de los individuos con infección por HTLV-I, identificados por el Programa Nacional de Control de las ITS/VIH/sida. Previa consejería y obtención de consentimiento informado se confeccionó una encuesta epidemiológica, con datos sobre los contactos sexuales y su seguimiento serológico. El diagnóstico se realizó con los sistemas de ELISA y Western blot DAVIH HTLV-I y DAVIH BLOT HTLV-I, respectivamente, y el procesamiento estadístico mediante el programa EPIDAT. RESULTADOS: la seropositividad de los contactos sexuales de los hombres resultó significativamente mayor en comparación con los de las mujeres (53,3 % vs. 9,09 %, p< 0,05). El tiempo promedio de exposición de los contactos positivos y negativos de hombres y mujeres no mostró diferencia significativa. CONCLUSIONES: los resultados indican mayor eficiencia en la transmisión del HTLV-I del sexo masculino al femenino y evidencian su presencia en Cuba como una infección de transmisión sexual. Los autores consideran que esta información debe ser utilizada durante el servicio de consejería.

INTRODUCTION: the Human T Cell Lymphotropic Virus type I (HTLV-I) is considered to be endemic in the Caribbean area, with rates of seroprevalence from 3 to 6 %. Its routes of transmission are sexual, vertical and parenteral. It also circulates in Cuba, though seroprevalence is much lower. Heterosexual transmission is a frequently reported way of contagion. OBJECTIVES: to determine HTLV-I seroprevalence in the sexual partners of HTLV-I infected individuals and also to assess important epidemiological factors that could have an impact on the transmission. METHODS: a prospective sero epidemiological follow-up study was conducted with the sexual partners of the HTLV-I infected individuals who were identified by the National Program of STD/HIV/aids. After counseling sessions and well-informed consent, an epidemiological survey was designed using data from the sexual partners and their serological follow up. Diagnosis was based on the ELISA and Western Blot DAVIH HTLV-I and DAVIH BLOT HTLV-I systems, and the statistical processing used EPIDAT program. RESULTS: seropositivity of the sexual partners was significantly higher in men than in women (53.3% vs. 9.09%, p< 0.05). The average time of exposure of the positive and negative partners of men and women did not show significant difference. CONCLUSION: the results revealed greater efficiency in the transmission of HTLV-I from men to women and also evinced its presence in Cuba as sexually-transmitted disease. The authors believe that this information should be used during the counseling service.

Fluido oral y orina como muestras alternativas en el diagnóstico confirmatorio de la infección por VIH-1 / Oral fluid and urine as alternative samples in confirmatory testing of HIV-1 infection

Se evaluó el fluido oral y la orina como muestras opcionales en el diagnóstico confirmatorio del VIH-1 con el sistema DAVIH-BLOT (Laboratorios DAVIH, La Habana, Cuba), para lo cual se comparó con las correspondientes muestras de sueros en un grupo de 125 individuos. En el análisis de los patrones de bandas reveladas, los anticuerpos predominantes en las muestras positivas de fluido oral y orina contra la p34, p68, gp41 y gp120, no tuvieron diferencias con sus correspondientes sueros según la prueba de comparación de proporciones (p< 0,001). La sensibilidad y especificidad relativas del sistema resultaron de 100 por ciento en el análisis del fluido oral; 98,75 y 100 por ciento, respectivamente, en las muestras de orina. Estos resultados apoyan el empleo opcional del fluido oral y la orina que, con ligeras modificaciones introducidas en el sistema diagnóstico, pueden aplicarse para la confirmación de anticuerpos contra el VIH-1.

The objective of this report was to evaluate oral fluid and urine as optional samples for HIV-1 confirmatory test using DAVIH-BLOT system (Laboratorios DAVIH, La Habana, Cuba), for which they were compared with their corresponding serum samples in a group of 125 individuals. In band pattern analysis, predominant antibodies in positives oral fluid and urine samples against p34, p68, gp41, gp120, were no different from their corresponding sera according to the proportion comparison test (p<0,001). Relative sensitivity and specificity of this system were 100 pernent in oral fluid and 98, 75 pernent and 100 pernent in urine samples respectively. These results support optional use of oral fluid and urine that, with slight modifications in the diagnostic system, can be applied for HIV-1 antibody confirmation testing.

Seroprevalencia de la infección por HTLV-I en diferentes grupos de riesgo estudiados en Cuba / Infection HTLV-I seroprevalence in risks groups in Cuba

Se estudiaron, en el período comprendido desde 1991 hasta 1996, 26 352 muestras de suero procedentes de diferentes grupos de riesgo y donantes de sangre para conocer la seroprevalencia de anticuerpos contra el virus linfotrópico de las células T humanas tipo I (HTLV-I) y como continuación de investigaciones realizadas entre 1989 y 1990. Se empleó el sistema de ELISA DAVIH-HTLV-I para el pesquisaje de anticuerpos y como prueba confirmatoria, el Western Blot DAVIH-Blot HTLV-I, ambos de Laboratorios DAVIH, Cuba. Se confirmó la presencia de anticuerpos anti HTLV-I en 10 personas y en la mayoría de ellas el estudio epidemiológico logró esclarecer la vía probable de contagio. El índice de seropositividad observado fue de 0,037 porciento, lo que en comparación con las tasas de seroprevalencia reportadas para el área del Caribe resulta bajo.

Determinación de anticuerpos al virus de la inmunodeficiencia humana tipo 1 (VIH-1) en muestras de sangre seca en papel de filtro

Se estudia la posibilidad de detectar anticuerpos al VIH-1 mediante un estuche de Immunoblotting, en un papel de 125 muestras conocidas de sangre seca colectadas en papel de filtro y su correspondiente muestra de suero. No se apreciaron diferencias en los patrones de bandas con ambos tipos de muestras, así como en la sensibilidad y especificidad, donde se alcanzaron cifras del 100 %, lo que permitió concluir que la muestra de sangre tomada en papel de filtro puede ser empleada para la detección de anticuerpos al VIH-1 por el sistema DAVIH-BLOT y puede ser conservada a 4 ºC por 30 semanas.

The possibility of detecting HIV-1 antibodies by an inmunoblotting kit is studied in a panel of 125 known specimens of dried blood spotted on filter paper and their corresponding serum samples. No differences were observed in the patterns of bands with both types of samples or in the sensitivity and specificity, where 100 % figures were attained, allowing to conclude that the blood specimen taken on filter paper may be used for the detection of HIV-1 antibodies by the DAVIH-BLOT system and may be kept at 4 ºC during 30 weeks.

Evaluación del sistema DAVIH-Blot TLV-I para la confirmación de anticuerpos al HTLV-I/II / Evaluation of the DAVIH-BLOT HTLV-I system for the confirmation of HTLV-I/II antibodies

El sistema DAVIH-HTLV-I del Laboratorio DAVIH (La Habana, Cuba) para la confirmación del diagnóstico serológico de anticuerpos contra el HTLV-I/II se evaluó frente a 223 sueros de individuos que representan diferentes grupos de riesgo, de ellos 47 confirmados seropositivos al HTLV-I, 86 muestras tomadas de pobladores de áreas endémicas, 52 de donantes de sangre, 16 de seropositivos al VIH-1, 16 de pacientes con lupus eritematoso sistémico (LES) con anticuerpos anti-DNA y 6 con anticuerpos contra antígenos HLA clases I y II. Se cumplieron los criterios de confirmación como positivos en 46 de las 47 muestras y una resultó indeterminada. Entre los pobladores de áreas endémicas se encontró el 18,6 porciento de muestras positivas y el 19,7 porciento de indeterminadas, con una alta frecuencia de reactividad frente a la p24. En los donantes de sangre ninguna muestra fue positiva y el 5,77 porciento de indeterminados, con reactividad frente a la p19 y p24. En el resto de las muestras no hubo casos positivos ni indeterminados. Además, se comparó este sistema confirmatorio con el sistema HTLV-I Western blot de la firma Diagnostic Biotechnology (Singapur) y se obtuvo una concordancia del 95,6 porciento

Pesquisaje de anticuerpos contra el virus linfotrópico de células T humanas tipo I (HTLV-I) en donantes de sangre y grupos de riesgo / Screening of antibodies against HTLV-I in blood donors and risk groups

Se estudió la presencia de anticuerpos contra el virus linfotrópico de células T humanas tipo I (HTLV I) en 3 774 sueros; de ellos, 1 409 eran donantes de sangre, 1 444 de pacientes que habían padecido recientemente alguna enfermedad de transmisión sexual (ETS) y 921 de enfermos politransfundidos. Se emplearon los sistemas DAVIH HTLV I (ELISA) y DAVIH BLOT HTLV 1 (Western Blot) producidos en Laboratorios DAVIH (La Habana, Cuba), para el pesquisaje y confirmación, respectivamente. De los 68 sueros reactivos en la prueba de ELISA, en 2 se confirmó la presencia de anticuerpos al HTLV I/II y 12 fueron considerados indeterminados por el Western Blot

Evaluación de un sistema de Western Blot (DAVIH-BLOT) para la confirmación de anticuerpos al VIH-1 / Evaluation of am Western blot system (DAVIH-BLOT) to confirm HIV-1 antibodies

Se reporta la evaluación del sistema DAVIH-BLOT (Laboratorios DAVIH, Cuba) frente a los paneles de proficiencia enviados al Laboratorio Nacional de Referencia del SIDA, por la Organización Mundial de la Salud (OMS), para el aseguramiento de la calidad en el diagnóstico de anticuerpos al VIH en los años 1989, 1991 y 1993, así como la comparación del sistema con los de las firmas Du Pont y Diagnostic Pasteur en un grupo de 467 sueros positivos por ELISA. En el estudio de las muestras de la OMS el sistema demostró ser altamente sensible y específico. Al compararlos con los estuches HIV-1 Western blot IgG versión 1.2 (DuPont company, EE.UU.) y New LAV-blot 1 (Diagnostic Pasteur, Francia) tuvo una coincidencia del 100 y 97 por ciento, respectivamente

Desarrollo de una técnica de ELISA para detectar anticuerpos monoclonales de ratón / Development of an ELISA technique to detect mouse monoclonal antibodies

Se describe una técnica de ELISA que permite el pesquizaje masivo y rápido de sobrenadantes de cultivos de hibridomas secretores de anticuerpos monoclonales. Se preparan microplacas de 96 pocillos (poliestireno) recubiertos con solución que contiene 5 *g/mL de antisuero de conejo antiinmunoglobulinas de ratón, que se emplean como soporte. Se utilizan 150 *L de una dilución 1:5 de cada muestra en estudio y como segundo anticuerpo se emplea un antisuero de carnero antiinmunoglobulinas de ratón conjugado con peroxidasa. La peroxidasa enlazada se cuantifica mediante el uso de un sistema peroxidasa-H2 O2-dihidrocloruro de 0-fenilendiamina y lectura en el espectrofotómetro vertical a 492 nm. Como controles positivos se incluyen diluciones de suero normal de ratón y anticuerpos monoclonales purificados (OKT11) y como controles negativos, sobrenadantes de cultivos de células no secretoras de inmunoglobulinas. La técnica permite la detección de inmunoglobulinas de ratón en concentraciones entre 5 y 175 *g/mL