Increase in apoptosis and of the stress protein HSP70 in the mouse epididymis produced by the antiandrogen flutamide / El antiandrógeno flutamida produce un aumento de la apoptosis y de la proteína de stress HSP70 en el epidídimo del ratón

The general aim of this paper was to characterize some changes induced by androgen receptors blockage in the epithelial cells of the mouse epididymis. The antiandrogen flutamide was injected (10 mg/Kg b.w.) to adult male mice which were sacrificed 24h. and 72h. after. Controls injected with the vehicle (corn oil) were sacrificed at the same intervals. Cryosections were made of the epididymides and examined by the TUNEL method for quantification of apoptosis and also using immunocytochemistry to visualize the expression of the stress protein HSP70. The highest indexes of apoptosis were observed in the caput epididymis after 72 h. and were of 7.40 cells/1000 in contrast to controls (0.21 cells/1000). HSP70 appeared particularly increased in the caput and cauda epididymis after 72 h. treatment. Results indicated that the blockage of androgen receptors induces apoptosis and a HSP70 expression in the principal epithelial cells of the mouse epididymis, and that these changes occur in a region-specific fashion.

Este trabajo estudia los cambios inducidos por el bloqueador de receptores de andrógeno flutamida en el epitelio del epidídimo del ratón. Varios machos adultos fueron inyectados con flutamida (1Omg/Kg.b.w.) y se sacrificaron a las 24 y 72horas. Otros machos, que sirvieron de controles fueron inyectados sólo con el vehículo empleado para las inyecciones (aceite de maíz) y se sacrificaron a intervalos similares. Los epidídimos tratados y controles fueron examinados mediante el método TÚNEL para cuantificar la apoptosis y mediante procedimientos inmunocitoquímicos para localizar la proteína de stress HSP70. El índice apoptótico más alto fue observado en la cabeza del epidídimo después de 72 horas de tratamiento. HSP70 se observó también a las 72 horas en la cabeza y en la cauda epididimaria. Los resultados indican que el bloqueo de los receptores de andrógenos induce apoptosis y expresión de HSP70 en las células principales del epitelio epididimario, y que estos cambios ocurren afectando a regiones específicas del epidídimo.

Effect of Flutamide in Mouse Spermatogenesis and on the Function of Seminal Vesicle and Prostate

RESUMEN: La espermatogénesis está regulada por el eje hipotálamo-hipófisis-gónada, y los andrógenos juegan un rol fundamental en sus últimas etapas. La administración del antiandrógeno flutamida interfiere con ella y con la función de órganos andrógeno dependientes (próstata (P) y vesícula seminal (VS)). En este estudio se inyectó flutamida (10 mg/Kg peso corporal) a 10 ratones y vehículo al control(n=6). Los ratones se sacrificaron a las 24(n=5) y 72(n=5) horas. En cortes de testículo se midió el diámetro del túbulo (TD) y la altura del epitelio (EH). P y VS se maceraron, y se determinaron las concentraciones de fructosa (VS) y zinc (P). No existe diferencia significativa en el TD entre los grupos. Sin embargo, el grupo de 72 h presenta menor EH respecto al control (p<0.01). La fructosa es menor sólo a las 72 h (p<0.01), intervalo en el cual se presenta la mayor concentración de zinc (p<0.01). La disminución de la EH se explicaría por el desprendimiento de las espermátidas elongadas, debido al bloqueo del efecto de la testosterona, sin reflejarse en el TD a intervalo corto. La disminución de fructosa refleja claramente la deprivación de andrógenos, en tanto que la concentración prostática aumentada a 72 hrs sugiere deficiencia en la secreción de zinc.

Transfection of Gametes: A Method to Generate Transgenic Animals / Transfección de Gametos: Un Método para Generar Animales Transgénicos

The production of transgenic animals (TA) using transfected spermatozoa or eggs is commented. Different methods have been employed to introduce transgenes into the gametes of several vertebrates and invertebrates. Methods for the transfection of gametes have employed naked DNA, viral vectors, DNA/Liposome complexes, electroporation or high velocity microprojectiles. Spermatozoa and oocytes or eggs have showed a good transfection efficience (80% in some cases), and microscopical observations demonstrated that the transgenes appeared localized in the nucleus. Gametes have shown to be naturally protected against the entrance of foreign genes because some semino plasma or plasma membrane proteins block the entrance of foreign genes in spermatozoa. In the female this blockage is undertaken by the egg covers (the zona pellucida in mammals and the perivitelline coat in mollusks). In several cases the production of TA has been described after using the transfected gametes for in vitro fertilization or inseminations. Sometimes, larger percentages of TA were observed (85% in salmon). Nevertheless, these TA were mainly chimeric for the transgene and they were not capable to establish transgenic lines. It seems probable that TA produced by gamete transfections are different from those originated by the conventional microinjection procedures. Furthermore, gametes would develop some kind of mechanisms that modify the integration/expression of transgenes, or that block the integration of transgenes in the germinal line.

Se comentan algunos aspectos sobre la transfección de gametos y su empleo para la producción de animales transgénicos (AT). Para la transfección de gametos han sido empleados ADN desnudo, vectores virales, complejos ADN-Liposomas, electroporación, o microproyectiles de alta velocidad. En general, se han obtenido altos porcentajes de transfección (hasta del 80% en espermatozoides) y se ha observado que los transgenes se localizan en el interior del núcleo. Se ha constatado que los gametos están naturalmente protegidos frente a la entrada de genes extraños: en espermatozoides esta función la cumplen diversas proteínas presentes en los fluidos seminales o en su membrana plasmática; mientras que en los gametos femeninos son las envolturas del huevo (zona pelúcida en mamíferos o membrana perivitelina en moluscos) las que desarrollan esta labor. En muchos casos, los gametos transfectados se han utilizado en fecundaciones in vitro o en inseminaciones a fin de crear AT. En algunos casos, los porcentajes de estos AT han sido altos, como en el salmón (85%). Pero los AT, así creados, han sido en su mayoría quimeras y no han sido capaces de producir líneas transgénicas. Se sugiere que los AT producidos por gametos transfectados, son diferentes a los producidos por el método convencional de microinyección. Es probable que los gametos posean mecanismos, aún no descritos, capaces de modificar la integración/expresión de los transgenes, o que impedirían la integración de los transgenes en la línea germinal.

Ageing induces apoptosis and increases HSP70 stress protein in the epididymis of Octodon degus

Apoptosis has been largely analyzed in the testis. Nevertheless, the epididymis has been scarcely studied. We analyzed the number of apoptotic cells in the different regions (caput, corpus and cauda) of the epididymis of the South American rodent Octodon degus both young and senile. Apoptosis was identified using the TUNEL method which detects in situ DNA fragmentation. Apoptosis was detected in the principal cells of the epididymal epithelium. The caput epididymis was the region more affected. The caput of young animals showed that 0.32/1000 cells were apoptotic in contrast to 5.1/1000 of senile animals. Also in the cauda epididymis apoptosis is increased with age, appearing 0.14/1000 and 3.9/1000 in young and senile animals, respectively. On the other hand, we used a immunocytochemical method to localize the stress protein HSP70. HSP70 appeared notably increased in the principal cells of the cauda epididymis of senile animals. Changes in the epididymal epithelium are probably due to the low androgen levels existing in senile animals and are a region dependent phenomenon