RESUMO
ABSTRACT Objective. To evaluate molecular tools to detect low-level parasitemia and the five species of Plasmodium that infect humans for use in control and elimination programs, and in reference laboratories. Methods. We evaluated 145 blood samples from patients who tested positive by nested polymerase chain reaction (nPCR), from asymptomatic individuals and from the WHO Global Malaria Programme/United Kingdom National External Quality Assessment Service. Samples were assayed using the genus-specific RealStar® Malaria PCR Kit 1.0 (alt-Gen; altona Diagnostics) and the RealStar® Malaria Screen & Type PCR Kit (alt-S&T; altona Diagnostics). The results from the molecular tests were compared with those from quantitative PCR (qPCR), nPCR and thick blood smear. Results. The levels of parasitemia ranged from 1 to 518 000 parasites/µL, depending on the species. Compared with nPCR, alt-S&T had a sensitivity of 100%, except for identifying P. falciparum, for which the sensitivity was 93.94%. All samples positive by alt-Gen were also positive by nPCR. When comparing alt-Gen to qPCR, the sensitivity was 100% for P. vivax, P. malariae and P. falciparum. For all Plasmodium species, the correlation between cycle threshold values of alt-S&T and alt-Gen compared with qPCR was significant (P < 0.0001, Spearman's test), with r = 0.8621 for alt-S&T and r = 0.9371 for alt-Gen. When all Plasmodium species were considered, there was a negative correlation between the level of parasitemia and real-time PCR cycle threshold values (P < 0.0001). In this study, only 2 of 28 samples from asymptomatic individuals were positive by thick blood smear; however, all 28 of these samples were positive by alt-S&T. Conclusions. The alt-Gen and alt-S&T assays are suitable for detecting submicroscopic infections for distinct epidemiological purposes, such as for use in surveys and reference laboratories, and screening in blood banks, which will contribute to global efforts to eliminate malaria.
RESUMEN Objetivo. Evaluar herramientas moleculares para detectar bajos niveles de parasitemia y las cinco especies de Plasmodium que infectan a los seres humanos, a fin de emplearlas en los programas de control y eliminación y en los laboratorios de referencia. Métodos. Se evaluaron 145 muestras de sangre de pacientes positivos por reacción en cadena de la polimerasa anidada (nPCR), de individuos asintomáticos y de muestras del Programa Mundial de Malaria de la Organización Mundial de la Salud/Servicio Nacional de Evaluación Externa de Calidad del Reino Unido. Las muestras se analizaron con el kit de PCR RealStar® Malaria 1.0 (alt-Gen; altona Diagnostics), específico para cada género, y con el kit de PCR RealStar® Malaria Screen & Type (alt-S&T; altona Diagnostics). Se compararon los resultados de las pruebas moleculares con los de la PCR cuantitativa (qPCR), la nPCR y el frotis de gota gruesa. Resultados. Los niveles de parasitemia oscilaron entre 1 y 518 000 parásitos/µl, según la especie. En comparación con la nPCR, la prueba alt-S&T tuvo una sensibilidad del 100%, excepto para la identificación de P. falciparum, para el cual la sensibilidad fue del 93,94%. Todas las muestras positivas por alt-Gen lo fueron también por nPCR. Al comparar alt-Gen con la qPCR, la sensibilidad fue del 100% para P. vivax, P. malariae y P. falciparum. Para todas las especies de Plasmodium, la correlación entre los valores del umbral de ciclo de alt-S&T y alt-Gen en comparación con la qPCR fue significativa (P < 0,0001, prueba de Spearman), con r = 0,8621 para alt-S&T y r = 0,9371 para alt-Gen. Cuando se consideraron todas las especies de Plasmodium hubo una correlación negativa entre el nivel de parasitemia y los valores de umbral de ciclo de PCR en tiempo real (P < 0,0001). En este estudio, solo 2 de las 28 muestras de individuos asintomáticos fueron positivas por frotis de gota gruesa; sin embargo, las 28 muestras fueron positivas por alt-S&T. Conclusiones. Los ensayos alt-Gen y alt-S&T son adecuados para detectar infecciones submicroscópicas con distintos fines epidemiológicos, como su uso en investigaciones y laboratorios de referencia y el cribado en bancos de sangre, lo que contribuirá a los esfuerzos mundiales para eliminar la malaria.
RESUMO Objectivo. Avaliar ferramentas moleculares para detectar parasitemia de baixo nível e as cinco espécies de Plasmodium que infectam humanos, para utilização em programas de controlo e eliminação e em laboratórios de referência. Métodos. Avaliámos 145 amostras de sangue de doentes que testaram positivo por reacção em cadeia da polimerase aninhada (nPCR), de indivíduos assintomáticos, e do Programa Global de Paludismo da Organização Mundial de Saúde/Serviço Nacional de Avaliação da Qualidade Externa do Reino Unido. As amostras foram ensaiadas utilizando o RealStar® Malaria PCR Kit 1.0 (alt-Gen; altona Diagnostics) e o RealStar® Malaria Screen & Type PCR Kit (alt-S&T; altona Diagnostics). Os resultados dos testes moleculares foram comparados com os resultados da PCR quantitativa (qPCR), nPCR e exame da gota espessa. Resultados. Os níveis de parasitemia variaram de 1 a 518 000 parasitas/µL, dependendo da espécie. Em comparação com a nPCR, alt-S&T tinha uma sensibilidade de 100%, excepto na identificação de P. falciparum, para a qual a sensibilidade era de 93,94%. Todas as amostras positivas por alt-Gen foram também positivas por nPCR. Ao comparar alt-Gen com qPCR, a sensibilidade foi de 100% para P. vivax, P. malariae e P. falciparum. Para todas as espécies Plasmodium, a correlação entre os valores limiares de ciclo de alt-S&T e alt-Gen comparados com qPCR foi significativa (P < 0,0001, teste de Spearman), com r = 0,8621 para alt-S&T e r = 0,9371 para alt-Gen. Quando todas as espécies de Plasmodium foram consideradas, houve uma correlação negativa entre o nível de parasitemia e os valores limiares do ciclo de PCR em tempo real (P < 0,0001). Neste estudo, apenas 2 de 28 amostras de indivíduos assintomáticos foram positivas por exame da gota espessa; no entanto, todas estas 28 amostras foram positivas por alt-S&T. Conclusões. Os ensaios alt-Gen e alt-S&T são adequados para a detecção de infecções submicroscópicas para fins epidemiológicos distintos, tais como para utilização em inquéritos e laboratórios de referência e o rastreio em bancos de sangue, o que contribuirá para os esforços globais de eliminação da malária.
RESUMO
ABSTRACT Malaria is the most important vector-borne disease in the world and a challenge for control programs. In Brazil, 99% of cases occur in the Amazon region. In the extra-Amazonian region, a non-endemic area, epidemiological surveillance focuses on imported malaria and on autochthonous outbreaks, including cases with mild symptoms and low parasitemia acquired in the Atlantic Forest biome. In this scenario, cases are likely to be underreported, since submicroscopic parasitemias are not detected by thick blood smear, considered the reference test. Molecular tests are more sensitive, detecting asymptomatic individuals and mixed infections. The aim of this study was to propose a more efficient alternative to detect asymptomatic individuals living in areas of low malaria endemicity, as they are reservoirs of Plasmodium that maintain transmission locally. In total, 955 blood samples from residents of 16 municipalities with autochthonous malaria outbreaks in the Sao Paulo State were analyzed; 371 samples were collected in EDTA tubes and 584 in filter paper. All samples were initially screened by a genus-specific qPCR targeting ssrRNA genes (limit of detection of 1 parasite/µL). Then, positive samples were subjected to a nested PCR targeting ssrRNA and dihydrofolate reductase-thymidylate synthase genes (limit of detection of 10 parasites/µL) to determine Plasmodium species. The results showed a statistically significant difference (K = 0.049; p < 0.0001) between microscopy positivity (6.9%) and qPCR (22.9%) for EDTA-blood samples. Conversely, for samples collected in filter paper, no statistical difference was observed, with 2.6% positivity by thick blood smear and 3.1% for qPCR (K = 0.036; p = 0.7). Samples positive by qPCR were assayed by a species-specific nested PCR that was in turn positive in 26% of samples (16 P. vivax and 4 P. malariae ). The results showed that molecular protocols applied to blood samples from residents in areas with autochthonous transmission of malaria were useful to detect asymptomatic patients who act as a source of transmission. The results showed that the genus-specific qPCR was useful for screening positives, with the subsequent identification of species by nested PCR. Additional improvements, such as standardization of blood plotting on filter paper and a more sensitive protocol for species determination, are essential. The qPCR-based algorithm for screening positives followed by nested PCR will contribute to more efficient control of malaria transmission, offering faster and more sensitive tools to detect asymptomatic Plasmodium reservoirs.
RESUMO
Fundamento: A raíz de las transformaciones necesarias en el sector de la salud se requiere de una mejor organización del proceso de enseñanza aprendizaje para garantizar la calidad de la formación de los futuros egresados. Objetivo: Evaluar la utilidad de la multimedia metodológica para perfeccionar la planificación, ejecución y control del proceso de enseñanza aprendizaje de las ciencias médicas. Metodología: Investigación de desarrollo tecnológico que tiene tres fases: la fase de diagnóstico (la identificación de necesidades de aprendizaje mediante el grupo focal); la fase de diseño, la cual contiene una sección superior con las imágenes de la Universidad Médica, una sección central que registra los contenidos fundamentales de la multimedia y una sección lateral con las temáticas fundamentales; y la fase de evaluación con la entrevista al azar a 762 profesores de los 24 departamentos docentes de la provincia Sancti Spíritus. Resultados: El 100 % de los entrevistados refirió que la multimedia facilita acceder a las principales normativas para el trabajo docente metodológico, más del 95 % que ayuda a una correcta planificación y control, además, que contribuye a la auto preparación y actualización pedagógica. Conclusiones: La multimedia metodológica resultó de gran utilidad para perfeccionar la planificación, ejecución y control del proceso de enseñanza aprendizaje por su nivel de generalización y actualización.
Background: Soon after the necessary transformation in the health sector is required a better organization of the process of teaching- learning to guarantee the quality of the formation of the future graduated. Objective: To evaluate the utility of the methodological multimedia to perfect the planning, execution and control of the process of teaching- learning of the medical sciences. Methodology: Investigation of technological development that has three phases: the phase of diagnostic (the identification of learning necessities by means of the focal group); the design phase, which contains a superior section with the images of the Medical University, a central section that registers the fundamental contents of the multimedia and a lateral section with the most important thematic; and the evaluation phase with the interview at random to 762 professors of the 24 educational departments of the municipality of Sancti Spíritu. Results: 100% of the interviewees referred that the multimedia facilitates to have access to the main normative for the methodological educational work, more than 95% that helps to a correct planning and control, also that contributes to the self- preparation and pedagogic upgrade Conclusions: The methodological multimedia was of great utility to perfect the planning, execution and control of the process of teaching- learning by its generalization level and upgrade.
Assuntos
Multimídia , Materiais de Ensino , Mídia AudiovisualRESUMO
La hemorragia subaracnoidea secundaria a ruptura de aneurismas intracraneales, representa una patología frecuente en nuestro medio, predominando en individuos previamente sanos y en la edad productiva de la vida. Se analizaron retrospectivamente 52 historias clínicas de pacientes con HSA que ingresaron al HUAL entre 1978-88, con los siguientes resultados: predominio en el sexo femenino y mayores de 61 años, siendo los signos meníngeos y la cefalea los datos clínicos más resaltantes. Al ingreso la evaluación de la escala de Boterell permitió clasificar más pacientes en el grado II. La HTA fue la enfermedad más frecuentemente asociada. Las alteraciones del LCR son las descritas tradicionalemente. La TAC de cráneo fue normal en el 34 por ciento de los casos realizados. La ubicación de los aneurismas a través de la arteriografía fue más frecuente en la interna. el tratamiento utilizado fue: antiedema, hipotensores, protección gastroduodenal, anticonvulsivantes, calcioantagonistas. Sólo en el 5,8 por ciento de los casos hubo resolución quirúrgica. la mortalidad fue del 19,2 por ciento. En los años estudiados existió una alta mortalidad en nuestro medio inherente a la falta de recursos diagnósticos y bajo índice quirúrgico, lo cual en la actualidad ha cambiado. Aún no existen agentes farmacológicos que garanticen la prevención efectiva del vasoespasmo y/o resangramiento. La expansión del volumen vascular sigue siendo el único tratamiento efectivo en la isquemia secundaria al casiespasmo ayudado por los calcioantagonistas, pero involucra el riesgo de resangramiento. Por lo tanto sigue siendo la solución quirúrgica precoz y la poeterior expansión vascular los pilares fundamentales para reducir la morbimortalidad por esta patología