Evaluation of cell biomarkers as in vitro photoprotective assays for sunscreen formulations

Objectives: The aim of this study was to evaluate cellular indicators, which change with exposure to ultraviolet (UV) radiation and can be used as parameters for measuring sunscreens efficiency. Methods: Commercial strains of L929 and HaCaT cells (skin dermis and epidermis, respectively), from the cell bank of Rio de Janeiro, were exposed to different doses of UVA (350 nm) and UVB (309 nm) radiation. The evaluation of the photoprotective potential of sunscreens was analyzed with cell viability, lipid peroxidation and ROS generation tests. Samples of sunscreen with SPF values ranging from 15 to 60 were applied to a quartz plate superimposed on the top of a microplate containing the cell culture, and then the system was irradiated. Results: The viability and lipid peroxidation of the two cell lines remained unchanged after exposure to UVA radiation. When exposed to UVB radiation, the reduction in viability and the increase in lipid peroxides were dose-dependent, that is, they varied from 3.15% to 95.4%, and from 1.2 to 42.7 nM MDA/pg protein, respectively, both for the L929 strain. The dose of 0.5 J/cm2 reduced by 41.4%±1.67 the number of viable cells, and the dose of 30 J/cm2 promoted the oxidation of 42.7 nM of MDA/pg protein. These doses were selected to evaluate the photoprotective effectiveness of commercial sunscreens. Sunscreens exposed to UVB rays could prevent the loss of cell viability (viability remained around 100% for higher SPF) and the formation of lipid peroxides (30 to 80% reduction of peroxide levels). None of the two cell strains, submitted to UVB radiation, formed amounts of intracellular ROS in a dose-dependent manner. Under exposure to UVA radiation, only the HaCaT cell line produced the largest amounts of ROS in a dose-dependent manner. After treating these cells with photoprotective formulations (20 J/cm2), the researchers observed a reduction in the amount of ROS formed. Conclusions: The parameters of cell viability and lipid peroxidation were promising to evaluate the photoprotective capacity of sunscreens against UVB radiation. The generation of ROS expressed in the HaCaT strain can discriminate the photoprotective potential of formulations against UVA radiation, as sunscreens reduced the formation of ROS. These results suggest that in vitro tests that evaluate the damage caused to cells can predict cellular indicators of the photoprotective effectiveness of sunscreens and contribute to minimize these tests in the initial phase of product research and development.

O processo de supervisão em ensino clínico. Perspectiva dos estudantes e enfermeiros / The Monitoring Process in Clinical Teaching. Perspective from Students and Nurses / El proceso de supervisión en la enseñanza clínica. Perspectiva de los estudiantes y de los enfermeros

Introdução: O grande desafio que se coloca hoje à formação em enfermagem prende-se com o processo de (re) construção de saberes dos estudantes em ensino clínico onde a supervisão assume particular relevância. Objetivo: Conhecer a perceção dos enfermeiros tutores sobre a supervisão de estudantes de enfermagem em ensino clínico e conhecer a perceção dos estudantes de enfermagem sobre a supervisão em ensino clínico realizada pelos enfermeiros tutores, com a finalidade de contribuir com propostas para a praxis da supervisão. Metodo: Paradigma qualitativo, descritivo-exploratório. Participaram quinze estudantes de enfermagem e seis enfermeiros tutores, o instrumento de recolha de dados foi a entrevista semiestruturada, utilizando-se a análise de conteúdo segundo Bardin (1) no tratamento dos dados. Resultados: Os principais resultados revelam que os participantes concebem e percebem supervisão como processo de acompanhamento sistemático e orientação, potenciador do desenvolvimento de competências pessoais e profissionais, recorrendo a estratégias favorecedoras de reflexão. As dificuldades e necessidades dos enfermeiros tutores, relacionam-se com a formação em supervisão e maior disponibilidade para este processo. Os estudantes de enfermagem sugerem que os enfermeiros possuam conhecimento sobre alguns aspetos processuais de formação em ensino clínico e façam uma supervisão efetiva. As estratégias e conceção de supervisão destes participantes são coerentes com a finalidade preconizada para a supervisão de estudantes em ensino clinico, no entanto, emergem constrangimentos ao processo de supervisão. Conclusões: Parece-nos fundamental investir na formação em supervisão tal como numa gestão organizacional que possibilite a disponibilidade necessária para obter maior qualidade e segurança neste processo.

Introduction: The challenge nursing education faces today is related to the process of (re)construction of knowledge by students in clinical training, where supervision is important. Objective: To know the perception of nurses tutors on the supervision of nursing students in clinical teaching and the perception of nursing students on clinical teaching supervision carried out by tutor nurses. Method: Qualitative, descriptive and exploratory paradigm. Fifteen nursing students and six tutor nurses participated. The data collection instrument was a semi - structured interview, with a subsequent content analysis according to Bardin. Results: It was revealed that participants conceive supervision as a process of systematic support and guidance, enhancing the development of personal and professional skills for those who resorted to strategies which favored reflection. The difficulties and needs of tutors nurses are training in supervision and greater availability for this process. Nursing students suggest that nurse tutors are aware of some procedural aspects of training in clinical teaching and make an effective supervision. Strategies and monitoring design of these participants are consistent with the purpose of supervising students in clinical teaching; however, limitations arise in the monitoring process. Conclusions: It seems essential to invest in training as an organizational procedure that allows the availability necessary to achieve a higher quality in the process.

Introducción: El desafío que enfrenta hoy la educación de enfermería se relaciona con el proceso de (re)construcción de conocimientos de los estudiantes en la formación clínica, donde la supervisión es importante. Objetivo: conocer la percepción de los enfermeros tutores sobre la supervisión de estudiantes de enfermería en enseñanza clínica y la percepción de los estudiantes de enfermería sobre la supervisión en enseñanza clínica realizada por los enfermeros tutores. Método: Paradigma cualitativo, descriptivo-exploratorio. Participaron quince estudiantes de enfermería y seis enfermeros tutores. El instrumento de recolección de datos fue la entrevista semiestructurada, con análisis de contenido según Bardin en el tratamiento de los datos. Resultados: Se reveló que los participantes conciben la supervisión como proceso de acompañamiento sistemático y orientación, potenciador del desarrollo de aptitudes personales y profesionales, que recurrieron a estrategias favorecedoras de reflexión. Las dificultades y necesidades de los enfermeros tutores son la formación en supervisión y mayor disponibilidad para este proceso. Los estudiantes de enfermería sugieren que los enfermeros tutores tengan conocimiento de algunos aspectos de procedimiento de la formación en la enseñanza clínica y hacer una supervisión efectiva. Las estrategias y el diseño de la supervisión de estos participantes son consistentes con la finalidad de la supervisión de los estudiantes en la enseñanza clínica; sin embargo, surgen limitaciones en el proceso de supervisión. Conclusiones: Parece esencial invertir en la formación como una gestión organizativa que permite la disponibilidad necesaria para lograr una mayor calidad en el proceso.

Ataxia aguda em idade pediátrica? revisão retrospectiva de cinco anos / Acute ataxia in childhood? a five year retrospective review

Objetivos: Caracterizar os casos de ataxia aguda internados em um Serviço de Pediatria e avaliar a sua abordagem no Departamento de Urgência.Métodos: Análise retrospectiva dos registos clínicos das crianças internadas entre janeiro de 2006 e dezembro de 2010 com quadro clínico de alteração da marcha e/ou dos movimentos motores finos com início dentro das últimas 72 horas.Resultados: Foram incluídas 82 crianças, 44 do sexo feminino. A mediana de idade foi de 4 anos. Trinta crianças apresentaram pródromos e 18 tinham história de infecção prévia. Os sintomas concomitantes mais frequentes foram sonolência (46 casos), vômitos (18 casos) e irritabilidade (14 casos). O exame físico não mostrou alterações em dois terços dos casos. Setenta crianças foram sujeitas a pelo menos um exame complementar de diagnóstico. As principais causas identificadas foram intoxicações (53 casos) e ataxia pós-infecciosa (15 casos). Só 16% necessitaram de tratamento específico e a maioria das internações foi de curta duração. Foram referenciados para seguimento em consulta hospitalar 32 casos. Registrou-se uma evolução benigna na maioria dos casos.Conclusões: A atitude face a uma criança com ataxia aguda deve ser ponderada e individualizada, tornando-se difícil a implementação de um protocolo de abordagem uniforme. A maioria dos casos tem um curso benigno e autolimitado, com internação de curta duração e apenas tratamento de suporte. No entanto, causas mais graves devem ser devidamente excluídas. História clínica minuciosa, exame físico e neurológico completos e internação visando a vigilância da evolução clínica são aspectos fundamentais.

Aims: To characterize the cases of acute ataxia hospitalized in a Pediatric Department and to evaluate its approach in the Emergency Department.Methods: Retrospective analysis of medical records of children admitted between January 2006 and December 2010 with clinical gait and/or fine motor movements with onset within the last 72 hours.Results: We included 82 children, 44 girls. The median age was 4 years. Thirty children had prodromes and 18 had a history of previous infection. The most frequent accompanying symptoms were somnolence (46 cases), vomiting (18 cases) and irritability (14 cases). Physical examination showed no changes in two thirds of cases. Seventy children have been subjected to at least one further diagnostic examination. The main causes were poisoning (53 cases) and post-infectious ataxia (15 cases). Only 16% needed specific treatment and most admissions were of short duration. Thirty-two cases were referred for follow-up consultation. The course was benign in most cases.Conclusions: The attitude towards a child with acute ataxia should be careful and individualized, making it difficult to implement a uniform protocol for approach. Most cases have a benign and self-limiting course, with short duration admission and only supportive care. However, serious causes must be properly excluded. Detailed clinical history, complete physical and neurological examination, and hospitalization for monitoring of clinical course are crucial.

Anti-inflammatory and toxicity studies of atranorin extracted from Cladina kalbii Ahti in rodents

Atranorin (ATR) is the main compound from the lichen Cladina kalbii Ahti, which grows in the arid regions of northeastern Brazil. This study was conducted to evaluate the anti-inflammatory and toxicological properties of ATR. To evaluate anti-inflammatory properties, paw edema was induced by injecting 0.1 mL of carrageenan into the subplantar region of the right hind paw of rats, and leukocyte migration was induced by injection of 500 µL of carrageenan into the peritoneal cavity of mice. In addition, we determined ATR cytotoxicity in L929 cells by MTT assay and acute (5 g/kg-single dose) and subchronic (50 mg/kg-30 days) toxicity tests in Wistar rats. The results showed that ATR (100 mg/kg and 200 mg/kg) exhibited significant anti-inflammatory activity (paw edema and leukocyte migration). In the acute toxicity test, the animals showed hypoactivity and lethargy during the initial period (first 6 hours) and increase in total protein, total and indirect bilirubin, and alkaline phosphatase after 14 days in ATR-treated male rats. The subchronic toxicity test revealed increases in total protein, globulin, gamma-glutamyl transferase, alkaline phosphatase, and total and direct bilirubin in ATR-treated female rats. Histological analysis revealed no changes in the architecture and morphology of the organs. These results suggest that ATR has significant anti-inflammatory activity, with no significant acute and subchronic toxicity or cytotoxicity.

Atranorina (ATR) é o principal composto do líquen Cladina kalbii Ahti, que cresce em terras áridas do nordeste brasileiro. Este estudo foi realizado para avaliar as propriedades antiinflamatórias e toxicológicas da ATR. Para avaliar as propriedades antiinflamatórias, o edema de pata foi induzido, administrando-se 0,1 mL de carragenina na região subplantar da pata traseira direita e a migração leucocitária foi induzida pela injeção de 500 µL de carragenina no peritônio. Além disso, determinou-se a citotoxicidade da ATR, utilizando-se a linhagem celular L929, através do teste de MTT e dos testes de toxicidade aguda (5 g/kg - dose única) e subcrônica (50 mg/kg-30 dias) em ratos Wistar. Os resultados mostraram que nas doses de (100 mg/kg e 200 mg/kg) a ATR exibiu atividade antiinflamatória significativa nos ensaios de edema de pata e migração leucocitária. Nos testes de toxicidade aguda, os animais apresentaram hipoatividade e letargia no período inicial (primeiras 6 horas) e aumento das proteínas totais, bilirrubinas total e indireta e fosfatase alcalina depois de 14 dias nos machos tratados. Para o ensaio subcrônico, houve aumento das proteínas totais, gama-glutamil-transferase, fosfatase alcalina e bilirrubina total e direta nas fêmeas tratadas com ATR. Não foram encontradas alterações na arquitetura e morfologia das lâminas histológicas observadas. Esses resultados sugerem que a ATR apresenta atividade antiinflamatória significativa, sem apresentar significativa toxicidade aguda, subcrônica e citotoxicidade.

Antioxidant activity and physical-chemical properties of spray and spouted bed dried extracts of bauhinia forficata / Atividade antioxidante e propriedades físico-químicas de spray e leito de jorro extratos secos de bauhinia forficata

Two distinct drying methods (spouted bed and spray drying) were used for production of dried extracts of Bauhinia forficata Link (Leguminosae, Caesalpinoideae). High-quality powder products in terms of physical and chemical properties were obtained. HPLC fingerprints revealed that the chromatographic profiles of flavonoid compounds present in the dried extract did not change significantly, due to drying. In general, the spouted bed drying caused a degradation of total flavonoids than was lower than that of the spray drying. Antioxidant properties of the dried extract, examined by their radical scavenging activity using 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl radical (DPPHò) and inhibition of lipid peroxidation induced by Fe+2 assays (LPO), confirmed their antioxidant potential. The slight reduction in scavenging activity of the dried extracts may be associated with the occurrence of oxidative reactions, decomposition or losses of thermolabile compounds, induced by the heat.

Neste trabalho foram utilizados dois distintos secadores (leito de jorro e spray dryer) para a produção de extratos secos de Bauhinia forficata Link (Leguminosae, Caesalpinoideae) obtendo-se um produto seco com elevada qualidade em termos de suas propriedades físicas e químicas. Análises qualitativas obtidas por CLAE revelam que os perfis cromatográficos dos compostos flavonóides presentes nos extratos secos não apresentaram significativas mudanças durante a secagem quando comparados aos perfis obtidos para os extratos concentrados. Em geral, a secagem por leito de jorro acarreta menores perdas dos flavonóides totais do que a secagem em spray drying. A atividade antioxidante dos extratos secos foi examinada pelos métodos de (DPPHò) e peroxidação lipídica induzida por Fe+2 (LPO). Uma pequena redução na atividade sequestradora de radicais livres observada para os extratos secos pode ser associada com a ocorrência de reações oxidativas, decomposição e/ou perdas de compostos termolábeis induzidas pelo calor.

Assessment of in vitro methodologies to determine topical and transdermal delivery of the flavonoid quercetin / Avaliação de metodologias in vitro para determinar a liberação tópica e transdérmica da quercetina

To be effective against the oxidative damages induced by UVB irradiation in the skin, the drug needs to release from the formulation in which it was incorporated and reach the skin layers where the ROS are generated. Thus, it is very important the development of a robust and sensitive methodology to extract and quantify in different skin layers the antioxidant agent delivered from topical formulations. Therefore, in the present work suitable methods to extract and quantify quercetin in skin samples and receptor phase after in vitro penetration studies were developed. The results demonstrated that the recovery from two different layers of skin, the SC and [E+D], using two different methods of quantification (DPPHò assay and HPLC, respectively), was 93.8 percent when the quercetin spiked dose was 50 µg/mL, 100.4 percent when it was 100 µg/mL and 89.9 percent for 250 µg/mL and the average recovery of the quercetin extraction from receptor phase when dichloromethane was used as extractor solvent was 96 percent. These results demonstrate that the described methods have a potential application to in vitro skin penetration studies of quercetin, since it showed to be accurate and sensitive.

Para ser efetiva contra os danos oxidativos induzidos pela radiação UVB na pele, é necessário que o ativo seja liberado da formulação na qual foi incorporado e alcance as camadas da pele onde são geradas as EROS. Desta forma, torna-se de grande importância o desenvolvimento de métodos eficazes e sensíveis para extrair e quantificar, nas diferentes camadas de pele, o agente antioxidante liberado de formulações tópicas. No presente trabalho foram desenvolvidos métodos adequados para extrair e quantificar a quercetina em amostras de pele e na fase receptora após estudos de penetração cutânea in vitro. Os resultados demonstraram que a recuperação das camadas de pele, EC e [E+D], quando do uso de duas diferentes metodologias de quantificação (ensaio de DPPHò e CLAE, respectivamente), foi de 93,8 por cento quando aplicada uma dose de 50 µg/mL de quercetina, 100,4 por cento para 100 µg/mL e 89,9 por cento para 250 µg/mL e a recuperação média da extração da quercetina da fase receptora, quando do emprego de diclorometano como solvente extrator, foi de 96 por cento. Tais resultados demonstram que os métodos descritos têm grande potencial de aplicação em estudos de penetração in vitro já que apresentaram exatidão e sensibilidade.

Metronidazole-containing gel for the treatment of periodontitis: an in vivo evaluation

The aim of this investigation was to monitor metronidazole concentrations in the gingival crevicular fluid (GCF) collected from periodontal pockets of dogs after treatment with an experimental 15 percent metronidazole gel. Five dogs had periodontitis induced by cotton ligatures placed subgingivally and maintained for a 30-day period. After the induction period, only pockets with 4 mm or deeper received the gel. Each pocket was filled up to the gingival margin by means of a syringe with a blunt-end needle. GCF was collected in paper strips and quantified in an electronic device before and after 15 minutes, 1 h, 6 h, 24 h and 48 h of gel administration. The GCF samples were assayed for metronidazole content by means of a high performance liquid chromatography method. Concentrations of metronidazole in the GCF of the 5 dogs (mean ± SD, in µg/mL) were 0 ± 0 before gel application and 47,185.75 ± 24,874.35 after 15 minutes, 26,457.34 ± 25,516.91 after 1 h, 24.18 ± 23.11 after 6 h, 3.78 ± 3.45 after 24 h and 3.34 ± 5.54 after 48 h. A single administration of the 15 percent metronidazole gel released the drug in the GCF of dogs in levels several-fold higher than the minimum inhibitory concentration for some periodontopathogens grown in subgingival biofilms for up to one hour, but metronidazole could be detected in the GCF at least 48 hours after the gel application.

Validation of HPLC, DPPH• and nitrosation methods for mesalamine determination in pharmaceutical dosage forms

Mesalamine (5-aminosalicylic acid, 5-ASA) is used because of its local effects in the treatment of inflammatory bowel disease. Therefore, the aims of this work were to compare and validate three analytical methods for the quality control of commercial coated tablets containing 5-ASA: high performance liquid chromatography (HPLC), 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl radicals (DPPH•) and nitrosation. The parameters linearity, precision and accuracy were studied in this work. HPLC with ultraviolet detection at 254 nm was carried out with a C18 column and a mobile phase constituted of 30 mmol/L monobasic phosphate buffer (pH 7.0) and methanol (70:30; v/v), with 25 percent tetrabutylammonium hydrogen sulphate. The DPPH• method was performed at 517 nm and using 100 mmol/L acetate buffer, pH 5.5, ethanol and 250 æmol/L ethanolic solution of DPPH•. The nitrosation method was accomplished by using a platinum electrode and standard 0.1 mol/L sodium nitrite as titrant solution. Repeatability (intra-day) and intermediate precision (inter-day), expressed as RSD, were lower than 3 percent. The experimental recoveries were between 72.5 and 99.9 percent. Statistical analysis by one-way ANOVA, followed by the multiple comparison test of Bonferroni showed no significant difference among the three methods. All proposed methods can be used for the reliable quantitation of 5-ASA in pharmaceutical dosage forms.

Mesalazina (ácido 5-aminosalicílico, 5-ASA) é utilizado devido seu efeito local no tratamento de doença inflamatória intestinal. Assim, o objetivo deste trabalho foi comparar e validar três métodos analíticos para o controle de qualidade de comprimidos comerciais revestidos contendo 5-ASA: cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE), radical 1,1-difenil-2-picril-hidrazil (DPPH•) e nitrosação. Os parâmetros linearidade, precisão e exatidão foram estudados neste trabalho. CLAE com detecção ultravioleta em 254 nm foi realizada utilizando coluna C18 e a eluição em fase móvel constituída de tampão fosfato monobásico 30 mmol/L (pH 7,0) e metanol (70:30; v/v), com 25 por cento de sulfato hidrogênio de tetrabutilamônio. Para o método de DPPH• utilizou-se tampão acetato 100 mmol/L, pH 5,5, álcool etílico e 250 æmol/L solução etanólica de DPPH• a 517 nm. Para o método de nitrosação utilizou-se um eletrodo de platina e um padrão de nitrito de sódio 0.1 mol/L como solução titulante. Repetibilidade (intra-dia) e precisão intermediária (inter-dia), expressado como DPR, foi menor que 3 por cento. A recuperação experimental foi entre 72,5 e 99,9 por cento. Análise estatística por "one-way" ANOVA, seguida de comparação múltipla do teste de Bonferroni, não mostrou significância entre os três métodos. Os métodos propostos podem ser usados para análise quantitativa do5-ASA em formas farmacêuticas.

The potential of an Aspergillus fumigatus Brazilian strain to produce antimicrobial secondary metabolites

Em estudos desenvolvidos para encontrar produtos naturais biologicamente ativos provenientes de fungos, uma cepa de Aspergillus fumigatus foi avaliada para a produção de atividade antimicrobiana. Quatro parâmetros, consistindo de meio de cultura, pH, temperatura e tempo de fermentação, foram investigados. Os extratos obtidos das culturas do fungo apresentaram perfis cromatográficos diferentes e produziram, ao menos, uma zona de inibição quando avaliados por bioautografia. Zonas de inibição sobrepostas na faixa de Rf 0.09 a 0.65, contra Kocuria rhizophila, foram detectadas na bioautografia do extrato clorofórmico obtido da cultura desenvolvida no meio de Jackson, pH inicial 6,0 e incubação a 40ºC por 144 horas. Entretanto, os extratos obtidos por desenvolver a cultura do fungo no meio de Vogel forneceram o menor número de compostos ativos. Os perfis cromatográficos obtidos dos extratos das culturas do fungo por cromatografia líquida de alta eficiência com detector de arranjo de diodos foram distintos, permitindo inferir que a produção de metabólitos secundários por Aspergillus fumigatus pode ser afetada pela modificação dos parâmetros investigados. Deve ser ressaltado que uma notável diferença nos perfis cromatográficos obtidos por CLAE foi observada por utilizar diferentes meios de cultura.

Evaluation of the influence of cetylamine fluoride and sodium fluoride on acid production by S. mutans

The acidogenic character of Streptococcus mutans has been pointed out as one of the most important physiological aspects associated with dental caries establishment. Fluoride is a key component of oral health promotion. Amine fluorides (AmF) have been used in products such as mouth rinses, toothpastes, gels and other topical fluoride agents for over 30 years in several European countries. In Brazil, the use of such substances was limited to toothpaste until August 2000, when a new resolution was published to approve the use of three AmFs in mouth rinses and other formulations for odontological purposes. In this report the influence of cetylamine fluoride (CAmF) and sodium fluoride (NaF) on acid production...

Partial purification and characterization of exopolygalacturonase II and III of penicillium frequentans

Previous studies from our laboratory have demonstrated that the fungus Penicillium frequentans produces high levels of polygalacturonase and pectinesterase. Endopolygalacturonase I (Endo-PG I) and Exopolygalacturonase I (Exo-PG I) were previously purified and characterized. In the present study two extracellular polygalacturonases were separated, partially purified and biochemically characterized. Both were characterized as exopolygalacturonases so they were named exopolygalacturonase II (Exo-PG II) and exopolygalacturonase III (Exo-PG III) which had a molecular mass of 63 kDA (Exo-PG II) and 79 kDA (Exo- PG III). The K(m) values were 1.6 and 0.059 g/L and the V(max) values were 2571 and 185 U/mg, respectively. The optimim temperature was 50ºC for both enzymes, while the optimum pH was 5.0 for Exo-PG II and 5.8 for Exo-PG III.