Circadian clock of Aedes aegypti: effects of blood-feeding, insemination and RNA interference

Mosquitoes are the culprits of some of the most important vector borne diseases. A species’ potential as a vector is directly dependent on their pattern of behaviour, which is known to change according to the female’s physiological status such as whether the female is virgin/mated and unfed/blood-fed. However, the molecular mechanism triggered by and/or responsible for such modulations in behaviour is poorly understood. Clock genes are known to be responsible for the control of circadian behaviour in several species. Here we investigate the impact mating and blood-feeding have upon the expression of these genes in the mosquito Aedes aegypti . We show that blood intake, but not insemination, is responsible for the down-regulation of clock genes. Using RNA interference, we observe a slight reduction in the evening activity peak in the fourth day after dstim injection. These data suggest that, as in Drosophila , clock gene expression, circadian behaviour and environmental light regimens are interconnected in Ae. aegypti .

Genética molecular dos ritmos circadianos em mosquitos vetores (Diptera: Culicidae) / Molecular genetic of the circadian rhythms in mosquitoes vectors (Diptera: Culicidae)

Relógios biológicos são mecanismos endógenos de marcar a passagem do tempo e podem ser encontrados em animais, plantas, fungos e até organismos unicelulares. No modelo Drosophila, o mecanismo molecular que controla os ritmos circadianos (24 horas) funciona através de alças de retroalimentação negativa envolvendo alguns genes, sendo os principais: period, timeless, cycle e Clock. Os homólogos destes genes já foram encontrados em várias espécies de animais, apontando para uma origem ancestral comum. Mosquitos são vetores de diversos agentes causadores de doenças a humanos e animais, mas apesar da sua importância epidemiológica pouco se conhece sobre os mecanismos moleculares que controlam os ritmos de atividade e hematofagia neste grupo de insetos. O presente trabalho objetivou o estudo do relógio biológico circadiano em mosquitos, usando como modelos a espécie diurna Aedes aegypti e a noturna Culex quinquefasciatus. Os estudos moleculares foram sempre acompanhados de experimentos de monitoramento da atividade/repouso dos insetos. A primeira etapa...Os resultados apontaram para uma alta similaridade em regiões de timeless conhecidas como importantes em Drosophila para manutenção do relógio biológico, sugerindo conservação de sua função nos mosquitos. A segunda etapa...Após estudos...de period, timeless, cycle e Clock na cabeça de fêmeas de Ae. aegypti e Cx. quinquefasciatus. Os resultados sugerem que o relógio central funcione de forma muito semelhante nas duas espécies. Análise da expressão desses genes nos corpos decapitados das fêmeas de Ae. aegypti, entretanto, aponta para padrões diferentes de expressão em relação à cabeça. Foi analisado tembém o efeito da inseminação e da hematofagia na expressão dos genes de relógio em Ae. aegypti. Apesar de dados da literatura mostrarem que a inseminação e a alimentação com sangue (após inseminação), causam alteração no comportamento das fêmeas de mosquito, apenas a hematofagia parece exercer alteração significativa na...

Genética molecular dos ritmos circadianos em mosquitos vetores (Diptera: Culicidae) / Molecular genetics of circadian rhythms in vectors mosquitoes (Diptera: Culicidae)

Relógios biológicos são mecanismos endógenos de marcar a passagem do tempo e podem ser encontrados em animais, plantas, fungos e até organismos unicelulares. No modelo Drosophila, o mecanismo molecular que controla os ritmos circadianos (~24 horas) funciona através de alças de retroalimentação negativa envolvendo alguns genes, sendo os principais: period, timeless, cycle e Clock. Os homólogos destes genes já foram encontrados em várias espécies de animais, apontando para uma origem ancestral comum. Mosquitos são vetores de diversos agentes causadores de doenças a humanos e animais, mas apesar da sua importância epidemiológica pouco se conhece sobre os mecanismos moleculares que controlam os ritmos de atividade e hematofagia neste grupo de insetos. O presente trabalho objetivou o estudo do relógio biológico circadiano em mosquitos, usando como modelos a espécie diurna Aedes aegypti e a noturna Culex quinquefasciatusOs estudos moleculares foram sempre acompanhados de experimentos de monitoramento da atividade/repouso dos insetos. A primeira etapa da pesquisa compreendeu a obtenção em Ae. aegypti da seqüência codificante integral do gene homologo a timeless de Drosophila melanogaster e o estudo comparativo da seqüência do mesmo entre as duas espécies. Os resultados apontaram para uma alta similaridade em regiões de timeless conhecidas como importantes em Drosophila para manutenção do relógio biológico, sugerindo conservação de sua função nos mosquitos. A segunda etapa da pesquisa envolveu a determinação do padrão de expressão circadiana de period, timeless, cycle e Clock em mosquitos. Após estudos preliminares sobre a expressão de timeless e cycle em machos de Aedes aegypti, foram obtidas as curvas de expressão circadiana de period, timeless, cycle e Clock na cabeça de fêmeas de Ae. aegypti e Cx. quinquefasciatus. Os resultados sugerem que o relógio central funcione de forma muito semelhante nas duas espécies...

Biological clocks are endogenous time keeping systems that can be found in animals,plants, fungi and even unicellular organisms. In the Drosophila model, the molecularmechanism that controls the circadian rhythm (~24 hours) works through negative feedbackloops composed of a number of genes, among which the principal genes are: period, timeless,cycle and Clock. The homologues of these genes have been found in many animal species andtheir comparison points to a common ancestral origin. Mosquitoes are vectors of severalorganisms and viruses that cause diseases in humans and other animals, however despite theirepidemiological relevance not much is known about the molecular mechanisms controlling theiractivity rhythms and bloodfeeding behaviour. The purpose of the present work was toinvestigate the molecular regulation of the biological clock in mosquitoes, using as models thediurnal species Aedes aegypti and the nocturnal species Culex quinquefasciatus. Analysis of themosquitoes’ activity/rest behaviour was performed in parallel to the molecular studies. The firststage of this research was to obtain, in Aedes aegypti, the full coding sequence of the genehomologue to the timeless gene of Drosophila melanogaster and to perform comparativeanalysis between them. The results showed high similarities between the timeless gene of thetwo species, mainly in regions known, in Drosophila, to have a crucial involvement in theoperation of the biological clock, thus suggesting function conservation of the gene inmosquitoes. The second stage of the research involved the determination of the patterns ofexpression of the clock genes period, timeless, cycle and Clock in mosquitoes. After preliminarystudies of male Ae. aegypti, in which the temporal pattern of the expression of timeless and cyclewas determined, the circadian expression of period, timeless, cycle and Clock was characterisedin the heads of females of the species Ae. aegypti and Cx. quinquefasciatus...

Ecology of Anopheline (Diptera, Culicidae), malaria vectors around the Serra da Mesa Reservoir, State of Goiás, Brazil: 1 - Frequency and climatic factors

Foram estudados aspectos da ecologia de anofelinos (Diptera, Culicidae) em áreas da Usina Hidrelétrica de Serra da Mesa, Estado de Goiás, Brasil. Foram analisados a incidência das populações de anofelinos e os fatores climáticos. Foram realizadas capturas bimestrais, em isca humana e armadilha Shannon, ao longo de 36 meses consecutivos (janeiro de 1997 a dezembro de 1999). Capturamos um total de 5.205 anofelinos adultos, pertencentes a cinco espécies. Anopheles darlingi foi o anofelino mais freqüente (61,4 por cento), seguido de An. albitarsis s.l. (35,4 por cento), An. triannulatus (2,5 por cento), An. oswaldoi (0,4 por cento) e An. evansae (0,2 por cento). O nível da água e a vegetação às margens do reservatório foram determinantes para a freqüência das espécies de anofelinos. Os fatores climáticos tiveram influência secundária. A estabilidade do reservatório, o aumento na freqüência do An. darlingi e a chegada de garimpeiros foram responsáveis pelos casos de malária diagnosticados.

Ecologia de mosquitos em áreas do Parque Nacional da Serra da Bocaina. II - Freqüência mensal e fatores climáticos / Ecology of mosquitoes in areas of the National Park of

OBJETIVO: Estabelecer a influência exercida pelos fatores climáticos na freqüência mensal da fauna de mosquitos em áreas do Parque Nacional da Serra da Bocaina, Vale do Paraíba, SP. MÉTODOS: Foram realizadas capturas mensais por meio de isca humana, em três diferentes períodos do dia, durante 24 meses consecutivos (janeiro de 1991 a dezembro de 1992). RESULTADOS: Foram capturados 11.808 espécimes adultos pertencentes a 28 espécies. Anopheles cruzii, Runchomyia reversa e Ru. frontosa foram as espécies mais presentes em todos os meses do ano; An. cruzii ocorreu preferencialmente de outubro a fevereiro; Ru. reversa e Ru. frontosa, em setembro; An. lutzi, Chagasia fajardoi, Coquillettidia chrysonotum, Aedes serratus, Trichoprosopon simile, Wyeomyia theobaldi, Ru. humboldti e Ru. theobaldi, pertencentes ao segundo grupo de espécies mais abundantes, ocorreram preferencialmente nos meses mais quentes, úmidos e chuvosos. A temperatura e as precipitaçöes pluviométricas influenciaram positivamente na incidência da maioria das espécies. CONCLUSOES: A cobertura vegetal de Mata Atlântica bem preservada, as precipitaçöes pluviométricas e a temperatura foram determinantes para a incidência da fauna de mosquitos no parque. Os meses mais chuvosos, úmidos e quentes contribuíram para o aumento da diversidade e da densidade. O período de setembro a março foi o mais favorável. Cerca de 70 por cento das espécies chegaram a desaparecer no período de abril a agosto, os meses mais frios e secos do ano

Ecology of mosquitoes (Diptera: Culicidae) in areas of Serra do Mar State Park, State of Säo Paulo, Brazil. III - Daily biting rhythms and lunar cycle influence

The ecology of mosquito species (Diptera: Culicidae) was studied in areas of the Serra do Mar State Park, State of Sao Paulo, Brazil. The influence of the lunar cycle and the daily biting rhythms of mosquito populations were analyzed. Systematized biweekly human bait collections were made in a silvatic environment for 24 consecutive months (January 1991 to December 1992). A total of 20,591 specimens of adult mosquitoes belonging to 55 species were collected from 545 catches. Sabethini species were captured exclusively during daylight periods, with the exception of Trichoprosopon digitatum, while members of Anophelinae predominated during nocturnal hours. Members of the subfamily Culicinae that were collected primary during nocturnal periods included Culex nigripalpus, Coquillettidia chrysonotum and Cq. venezuelensis while daytime catches included Psorophora ferox and Ps. albipes. Others members of culicines mosquitoes that were collected during both day and night included: Aedes serratus, Ae. scapularis and Ae. fulvus. Lunar cycles did not appear to influence the daily biting rhythms of most mosquito species in the area, but larger numbers of mosquitoes were collected during the new moon. Ae. scapularis were captured mainly during the full moon

Ecologia de mosquitos (Diptera: Culicidae) em áreas do Parque Nacional da Serra da Bocaina, Brasil. I - Distribuiçäo por habitat / Ecology of mosquitoes (Diptera: Culicidae) in areas of Serra da Bocaina National Park, Brazil. I - Habitat distribution

Objetivo: Estabelecer a influência exercida por três diferentes biótipos em áreas do Parque Nacional da Serra da Bocaina (PNSB) sobre a fauna local de mosquitos. Métodos: Foram realizadas capturas mensais em ambiente silvestre e domiciliar, em isca humana, durante três diferentes períodos do dia, pelo período de 24 meses consecutivos, de janeiro de 1991 a dezembro de 1992. Resultados: Foram capturados 11.808 espécimes adultos, pertencentes a 28 espécies. Ru. reversa e An. cruzii foram predominantes, respectivamente 52,5 por cento e 17,9 por cento do total de mosquitos. Ru. reversa representou 59,4 por cento do total de espécimes no ambiente de mata fechada, seguida por Ru. frontosa com 10,5 por cento e An. cruzii com 9,9 por cento. No ambiente formado por campos de altitude e matas de galeria, o An. cruzii predominou com 48,1 por cento, seguido por Ru. reversa com 28,1 por cento. No ambiente modificado pelo homem, o An. cruzii predominou com 73,7 por cento dos espécimes. Coquillettidia chrysonotum foi a única que apresentou preferencialmente nesse biótipo: 14,9 por cento no intra, 19,4 por cento no peri e 65,7 no extradomicílio. An cruzii e Ru. reversa foram constantes em todos os ambientes ao longo do ano. Conclusöes: Com exceçäo de Cq. chrysonotum, com preferência pelo ambiente modificado pelo homem, os mosquitos apresentam hábitos assinantrópicos no PNSB. An. cruzii, embora assinantrópico, se aproxima e adentra o domicílio para realizar a hematofagia. A presença do Ae. serratus no extra e peridomicílio reforça a importância epidemiológica como vetora potencial de arboviroses. Os sebethini apresentaram-se exclusivamente silvestres

Ecology of mosquitoes (Diptera: Culicidae) in areas of Serra do Mar State Park, State of São Paulo, Brazil. I - Monthly frequency and climatic factors

The ecology of mosquitoes were studied (Diptera: Culicidae) in areas of Serra do Mar State Park, State of São Paulo, Brazil. Systematized monthly human bait collections were made three times a day, for periods of 2 or 3 h each, in sylvatic and rural areas for 24 consecutive months (January 1991 to December 1992). A total of 24,943 specimens of adult mosquitoes belonging to 57 species were collected during 622 collective periods. Coquillettidia chrysonotum was the most frequent collected mosquito (45.8 per cent) followed by Aedes serratus (6.8 per cent), Cq. venezuelensis (6.5 per cent), Psorophora ferox (5.2) and Ps. albipes (3.1 per cent). The monthly averages of temperature and relative humidity were inserted in the ten-year average limits of maximum and minimum of the previous ten-years. Rainfall accompanied the curve of the ten-year averages. Those climatic factors were influential in the incidence of some species; temperature: Anopheles cruzii, An. mediopunctatus, Ae. scapularis, Ae. fulvus, Cq. chrysonotum, Cq. venezuelensis, Runchomyia reversa, Wyeomyia dyari, Wy. confusa, Wy. shannoni, Wy. theobaldi and Limatus flavisetosus; relative humidity: Ae. serratus, Ae. scapularis, Cq. venezuelensis and Ru. reversa; rainfall: An. cruzii, Ae. scapularis, Ae. fulvus, Cq. venezuelensis Ru. reversa, Wy. theobaldi and Li. flavisetosus.

Ecology of mosquitoes (Diptera: Culicidae) in areas of Serra do Mar State Park, State of São Paulo, Brazil. II - Habitat distribution

The mosquito (Diptera: Culicidae) ecology was studied in areas of Serra do Mar State Park, State of São Paulo, Brazil. Systematized biweekly human bait collections were made three times a day, for periods of 2 or 3 h each, in sylvatic and rural areas for 24 consecutive months (January 1991 to December 1992). A total of 24,943 adult mosquitoes belonging to 57 species were collected during 622 collective periods. Aedes scapularis, Coquillettidia chrysonotum, Cq. venezuelensis, Wyeomyia dyari, Wy. longirostris, Wy. theobaldi and Wy. palmata were more frequently collected at swampy and at flooded areas. Anopheles mediopunctatus, Culex nigripalpus, Ae. serratus, Ae. fulvus, Psorophora ferox, Ps. albipes and the Sabethini in general, were captured almost exclusively in forested areas. An. cruzii, An. oswaldoi and An. fluminensis were captured more frequently in a residence area. However, Cx. quinquefasciatus was the only one truly eusynanthropic. An. cruzii and Ae. scapularis were captured feeding on blood inside and around the residence, indicating that both species, malaria and arbovirus vectors respectively, may be involved in the transmission of these such diseases in rural areas.

Sífilis e audiçäo: relato de caso / Syphilis and hearing: case report

Comumente, na consulta médica otorrinolaringológica, encontramos desafios; um deles é o diagnóstico diferencial das disacusias neurossensoriais. Nesses casos um número infinito de possibilidades podem ser responsabilizadas e uma delas é a sífilis. Nos últimos anos, a incidência de sífilis apresentou um aumento, principalmente com o surgimento do vírus da imunodeficiência adquirida. Neste trabalho, os autores fazem uma revisão da literatura, comentando os achados laboratoriais, diagnóstico e tratamento da otossífilis.

Prevalencia de anofelinos (Diptera: Culicidae) no crepusculo vespertino em areas da usina hidreletrica de Itaipu, no municipio de Guaira, Estado do Parana, Brasil / Prevalence of anophelines (Diptera: Culicidae) during sunset in areas of the Itaipu hydroelectric usine in Guaira county, State of Parana, Brazil

Systematic collections of anophelines were conducted from November 1994 to August 1995 from 18:00 to 20:00 hr using Shannon traps and human-bait along the lake margin which forms the Itaipu hydroelectric reservoir, State of Parana, Brazil. Species prevalence was studied at 15 min intervals. Anopheles albitarsis sensu latu and An. galvaoi, were the most frequently collected mosquitoes. All Anopheles species populations peaked between 18:45 and 19:30 hr. The observations illustrate the existence of a haematophagic activity cycle during the early evening hours: exogenous stimulus (the beginning of sunset) - Shannon trap (light attraction) - human bait (haematophagy) - rest and digestion - exogenous stimulus - Shanon trap or surrounding vegetation. The grater abundance of An. albitarsis collected in human-bait and Shannon trap suggests it may be a potencial malaria vector in the region.

Síndrome de Usher: descriçäo de quatro casos / Usher's syndrome: a report of four cases

A síndrome de Usher se representa pela associaçao de disacusia e retinite pigmentosa e é a mais freqüente causa de cegueira-surdez em humanos. Dois tipos sao aceitos clinicamente: o tipo I, caracterizado por disacusia progressiva, retinite pigmentosa e perda da funçao vestibular; e o tipo II, que é mais brando e apresenta-se com disacusia moderada e severa, nao chegando a anacusia, associado a retinite pigmentosa e com preservaçao da funçao vestibular. Relatamos quatro casos de síndrome de Usher tipo II de uma mesma família, descrevemos as alteraçoes encontradas e comparamos com os relatos da literatura.

Consideraçöes preliminares no estudo do teste de fala com ruído em indivíduos normais / Preliminar considerations in the study of speech with noise test in normal subjects

Neste trabalho tivemos como objetivo verificar a interferência do Ruído Branco (White Noise) e do Ruído Rosa (Speech Noise) no teste convencional de discriminaçao vocal, em 80 mulheres de 18 a 22 anos de idade com níveis de audiçao normais. Cada um destes ruídos foi aplicado na mesma orelha, junto com o estímulo lingüístico numa relaçao fala-ruído de 0 db para o White Noise (WN) e de + 10 db para o Speech Noise (SN), de modo que acreditamos estar provocando as mesmas mudanças nos limiares auditivos proposcionalmente a efetividade de cada um dos ruídos. A partir dos resultados julgamos válido concluir que o WN e o SN interferiram pouco no reconhecimento de palavras monossilábicas em indivíduos normais, e que o WN interferiu mais que o SN no reconhecimento destas palavras.

Achados audiológicos em pacientes portadores de traumatismo cranioencefálico / Audiological findings in patients with craniocerebral trauma

Com o intuito de observar a ocorrência do tipo e grau de perda auditiva, configuraçäo do audiograma, curvas timpanométricas e reflexos acústicos em pacientes portadores de traumatismo cranioencefálico foram avaliados 12 indivíduos, com faixa etária variando de 6 a 55 anos de idade. Estes foram previamente submetidos à avaliaçäo otorrinolaringológica, no Ambulatório de Otorrinolaringologia da Escola Paulista de Medicina. A avaliaçäo audiológica constou de Audiometria Tonal Liminar, Limiar de Recepçäo da Fala, Discriminaçäo Vocal e Impedanciometria (Timpanometria e Pesquisa do Reflexo Acústico). Frente aos resultados obtidos pudemos observar a prevalência de perda auditiva bilateral, predominantemente neurossensorial com perda maior nas freqüências agudas. A Impedanciometria mostrou-se compatível com a Audiometria