Tetanus toxoid: 1. purification in 50 kD molecular weight cut-off membrane

The tetanus anatoxin (M.W.=150,000 dALTONS) is the fundamental component for Tetanus Toxoid (TT) combined vaccines production and must follow the parameters established by World Health Organization (WHO). Among other qualifications the purity degree must be equal or greater than 1,000 Lf/mg PN and the residual formaldehyde must be at maximum level of 0,02 per cent. The Tangential Flow Filtration technique with 50,000 Nominal Molecular Weight Limit (NMWL) membranes and gel filtration in Sephadex G-50 were associated to purify 18 consecutive lots of tetanus anatoxin

Effect of beta-propiolactone treatment on the complement activation mediated by equine antisera

A reducao da ativacao do complemento atraves de uma alteracao do fragmento Fc das imunoglobulinas pela beta-propiolactona foi obtida em soros hiperimunes equinos antivirus rabico, venenos Bothrops e toxina difterica. Os resultados foram avaliados por teste de anafilaxia em cobaias, e comparados com aqueles obtidos com os mesmos soros purificados por precipitacao salina (sulfato de amonio), seguidos ou nao por digestao enzimatica com pepsina. Os niveis de pureza proteica foram para o soro antibotropico de 184,5 mg/g e 488,5 mg/g tratado pela beta-propiolactona e digeridos pela pepsina, respectivamente...(au)

Diphtheria anatoxin industrial purification by gel filtration

Diphtheria toxoid is prepared from the toxin produced by fermentative process, of the Park-Williams N§8 strain of Corynebacterium diphteriae grown on F-20 medium. The toxin separeted from the organisms is detoxified and purified. Diphtheria toxoid is the immunizing antigen protecting against the adverse effects of infection by diphtheria organisms and rarely is used alone. It is used in associated vaccines with tetanus toxoid and pertussis vacine. This paper describes the separation of diphtheria anatoxin proteins on Sephadex G-50, Sephacryl S-100 HR and Superdex 75 prep grade

Otimizaçäo do processo de purificaçäo industrial de toxóide tetânico por gel filtraçäo / Improvement in the industrial purification of tetanus toxoid by gel filtration

A metodologia industrial para obtençäo de Toxóide Tetânico(T.T.) atual, consiste na pré-precipitaçäo pelo (NH4)2SO4 seguida de gel filtraçäo em Sephadex G-50, com o qual obtém-se grau médio de pureza de 2.300 Lf/mgNP, sendo que o mínimo exigido pela O.M.S. é 1.000Lf/mgNP. Visando basicamente a diminuiçäo do tempo empregado no processo de purificaçäo do T.T., utilizamos resinas cromatográficas de 2§ e 3§ geraçäo, o Sephacryl S-100HR e o Superdex 75 prepgrade, respectivamente, que possibilitaram a eliminaçäo da etapa de pré-precipitaçäo pelo (NH4)2SO4 obtendo-se resultados com grau de pureza ao redor de 3.000Lf/mgNP. A atividade imunogênica destes produtos quando absorvidos pelo Al (OH)3 em concentraçäo de 15Lf/ml foi de 4,5UI/ml em cobaios. A O.M.S. recomenda que o T.T. induza a formaçäo de no mínimo 2UI/ml nestes animais. O rendimento do processo de purificaçäo foi de 88,46//, que é similar ao obtido no processo atual. A metodologia introduzida permitiu a diminuiçäo do tempo empregado neste processamento assim como a possibilidade de trabalhar-se com purificaçäo em sistema fechado (coluna cromatográfica)

Toxina tetânica: produçäo e purificaçäo em escala industrial / Tetanus toxin: production and purification in large scale

A obtençäo de toxina tetânica purificada em grandes volumes é um passo fundamental para a produçäo de Toxóide Tetânico. A utilizaçäo de vapor para a esterilizaçäo do meio de cultura para a produçäo desta toxina apresentava títulos baixos de toxina tetânica. O emprego da filtraçäo convencional teve como consequência índices insatisfatórios de pureza (Lf/mgNP) e de rendimento (porcentagem) do processo. Com o objetivo de encontrar soluçöes para estas etapas do processo produtivo, foi utilizada a esterilizaçäo por cartuchos para o meio de cultura e a filtraçäo tangencial através de um sistema Prostak, associado à ultrafiltraçäo molecular em 30Kd para a toxina tetânica. A nova metodologia trouxe aumentos significativos em pureza (Lf/mgNP) e em rendimento (porcentagem). A tecnologia empregada e a comparaçäo dos resultados obtidos nos diferentes processos säo apresentadas neste trabalho

Purificaçäo industrial do toxóide tetânico por gel filtraçäo / Industrial purification of tetanus toxoids by gel filtration

Com o fracionamento pelo sulfato de amônio ou com a precipitaçäo alcoólica, säo obtidos toxóides tetânicos com pureza ao redor de 500 Lf/mg N.P. incompatíveis com as exigências da OMS, de 1000 a 1200 Lf/mg N.P. Foram descritas técnicas eficazes com a utilizaçäo da gel filtraçäo em Sephadex G200, G100 e G75 que, no entanto, pela longa duraçäo do processo, dificultam a produçäo em escala industrial. Introduzimos , assim, uma metodologia baseada na combinaçäo da pré-precipitaçäo pelo sulfato de amônio com a gel filtraçäo em Sephadex G50 com a qual obtivemos toxóides tetânicos com grau médio reprodutivo de pureza ao redor de 2.312,75 Lf/mg N.P. e resposta imunogênica satisfatória

Preparaçäo e teste da toxina botulínica tipo "E" e do seu anti-soro específico / Preparation and test of botulinum toxins type \"E\" and its specific immune sera

Os autores descrevem o método utilizado na preparaçäo do soro antibotulínico tipo E, que näo apresenta reaçäo cruzada com a toxina heteróloga, pela hiperimunizaçäo de equídeos, através do antígeno absorvido pelo alúmen de potássio (sulfato duplo de alumínio e potássio). Empregando o esquema de imunizaçäo anteriormente proposto, conseguiram obter mistura de plasma hiperimunes o qual, após purificado pelo método de Pope, modificado, concentrou até níveis na ordem de 750 a 1.000 UI/ml. Este produto foi diluído convenientemente para que contivesse 500 UI/ml de antitoxina

Produçäo de anticorpos antiveneno total de Crotalus durissus terrificus em cavalos por fosfolipase A2 / Antigens antivenom's total production of Crotalus durissus terrificus in horses by phospholipase A2

Fosfolipases A2 purificada de veneno de Crotalus durissus terrificus ou veneno integral foram usados, como antígenos, para imunizar cavalos e burros. A imunizaçäo de base foi feita injetando os animais, pela via subcutânea, com 5mg do antígeno emulsionado em adjuvante de Freund completo. Quatro meses depois, os animais foram reimunizados injetando-se os antígenos correspondentes, dissolvidos em salina, ao redor dos granulomas resultantes da imunizaçäo primária. Esta injeçäo foi repetida por mais cinco vezes a intervalos de uma semana..

Chromatographic purification of antivenoms and antitoxins

Commercial preparations of antivenoms and antitoxins produced in horses, that are essentially pure F (ab)2 immunoglobulin preparations, were submitted to ion-exchange chromatography. For anticrotalic, anti-bothropic and anti-tetanic sera it is possible to remove 40-60% of the inactive globulins

Esterilizaçäo de soros e vacinas por radiaçäo gama de cobalto / Sterilization of sera and vaccines by cobalt gamma radiation

Os soros antitetânico, antidiftérico e antibotrópico-crotálico e, ainda, a vacina diftérica-pertussis-tetânica foram submetidos a diferentes intensidades de radiaçäo gama, com os seguintes intuitos: verificaçäo da resistência das atividades específicas destes produtos à açäo dos raios gama; avaliaçäo das possibilidades de utilizaçäo deste tipo de energia radiante para a esterilizaçäo de alguns soros hiperimunes heterólogos e vacinas, mais comumente utilizados em saúde pública. Os resultados obtidos, segundo os parâmetros empregados, mostraram a possiblidade de esterilizaçäo sem alteraçöes das atividades específicas, de ordem biológica ou química, dos produtos experimentados.

Soro anti-rábico heterólogo de uso humano: anticorpos inespecíficos / The heterogeneous anti-rabies serum for human use: no specific antibodies

O soro anti-rábico heterólogo de uso humano é constituído de imunoglobinas, que podem ser obtidas do plasma de equídeos hiperimunizados com suspensäo de cérebros de coelhos infectados com o vírus rábico fixo. As imunoglobinas säo purificadas e concentradas por digestäo péptica. Entre as provas efetuadas para a liberaçäo do produto encontra-se a de pirogenicidade, avaliada pela inoculaçäo do soro por via intravenosa em coelhos. Durante a execuçäo desta prova tem-se verificado, em algumas partidas, a morte súbita de coelhos. Pela técnica de imunodifusäo dupla anticorpos antitecido nervoso, anti-soro e de antimaterial extraído de hemácias de coelhos, foram detectados no plasma e também no soro purificado e concentrado, levando os autores à conclusäo de que as mortes dos coelhos estariam ligadas à presença desses anticorpos inespecíficos. Face aos resultados e para a avaliaçäo dos testes de pirogenicidade, recomendam que a hiperimunizaçäo dos animais produtores seja feita, preferencialmente, com vírus rábico desenvolvido em cultivos celulares

Níveis de antitoxina tetânica em migrantes internos em Säo Paulo, Brasil / Tetanus antitoxin levels in internal migrants in Säo Paulo, Brazil

De 3464 migrantes em trânsito por Säo Paulo, de dezembro de 1970 a dezembro de 1971, foram obtidas informaçöes sobre dados demográficos e econômico-sociais, tendo sido titulados os níveis de antitoxina tetânica dos soros pela Reaçäo de Hemaglutinaçäo Indireta. Em 25 soros selecionados, com diferentes níveis de antitoxina tetânica pela reaçäo de hemaglutinaçäo indireta, foram dosados os títulos de antitoxina tetânica pela reaçäo de neutralizaçäo "in vivo". A correlaçäo entre os títulos dos soros por ambos os métodos, feita pela análise de regressäo, mostrou que a reaçäo de hamaglutinaçäo indireta apresenta baixo poder preditivo (47%), mas corresponde a uma técnica adequada nos estudos de inquéritos populacionais, considerando-se sua alta sensibilidade, fácil execuçäo e baixo custo. A ausência de antitoxina circulante em 55,5% do grupo em estudo, associada à pequena proporçäo de títulos considerados protetores em 1% da populaçäo total e em 0,3% da populaçäo de mulheres de 15 a 44 anos - "grupo de risco especial" - explicam os altos índices de morbidade e mortalidade devidos ao tétano em nosso meio, revelando a precariedade da organizaçäo dos serviços de Saúde Pública

Reaçöes locais e níveis de antitoxina circulante decorrentes de administraçäo do toxóide tetânico: estudo comparativo entre ped-o-jet e seringa hipodérmica / Local reactions and antitoxin circulating levels induced by the administration of tetanus toxoid: comparative study between ped-o-jet and hypodermic syringe

Com o objetivo de comparar reaçöes locais e conversäo sorológica apresentadas por adultos que receberam o toxóide tetânico através de Ped-o-Jet (via subcutânea) ou de seringa hipodérmica (via intramuscular), o toxóide foi administrado a 472 recrutas do Exército. Em observaçöes realizadas 4 a 24 horas após a vacinaçäo verificou-se que as reaçöes locais dos indivíduos vacinados com Ped-o-Jet eram significativamente mais frequentes e mais intensas do que aquelas dos vacinados com seringa hipodérmica, näo tendo ocorrido, entretanto, reaçöes graves. A conversäo sorológica dos näo imunes vacinados com Ped-oJet ocorreu numa frequencia maior do que nos indivíduos vacinados com seringa hipodérmica. Conclui-se portanto, que o Ped-o-Jet pode ser utilizado em campanhas de vacinaçäo em massa contra o tétano, embora a via de administraçäo preferencial, até o momento, seja a intramuscular

Obtenção de antitoxina perfringens do tipo A em escala industrial / Production of perfringens antitoxin type A in industrial scale

Descreve-se o método utilizado na preparação da antitoxina perfríngica do tipo A, em escala industrial, pela hiperimunização de cavalos, através de antígeno misto, adsorvido pelo alúmen de potássio. Empregando-se esquema de imunização próprio, conseguiu-se obter soro antigangrenoso perfríngico tipo A, dosando ao redor de 200 UI/ml, título este que, após a concentração pelo método de Pope, elevou-se ao nível antitóxico de 850 a 1.000 UI/ml. O soro purificado e concentrado foi diluído convenientemente para compor o soro antigangrenoso polivalente (AU).

A method is described for the preparation of Clostridium perfringens type A antitoxin,on industrial scale, by the hyperimmunization of horses with mixed alum-adsorbed antigen. With the use of the immunization method idealized in laboratory of Instituto Butantan, São Paulo, an antigangrenous Cl. perfringens type A antitoxin was obtained with a dosage of about 2'00 lU Iml,a titrethatafterconcentrationby .Pope'smethod,increasedto antitoxicIevelsof850to 1.000 lU Iml. The purified and concentrated antitoxin was conveniently diluted to constitute a polyvalent gas gangrene antitoxin. (AU)