Caracterización proteómica de vesículas de membrana externa extraídas de Shigella sonnei / Proteomic characterisation of outer membrane vesicle extracted from Shigella sonnei

Las vacunas compuestas por vesículas de membrana externa (VMEs) previenen de manera exitosa la enfermedad meningocócica del serogrupo B. Esta plataforma tecnológica de obtención puede ser aplicada para otros patógenos bacterianos Gram negativos. Una vacuna de VMEs desarrollada contra Shigella sonnei fue obtenida a través de una extracción de componentes celulares y su caracterización por electroforesis en geles de poliacrilamida unidimensional (1D). Se estudiaron las mejores condiciones de solubilización de las muestras, separación electroforética e identificación a través de espectrometría de masas acoplada a cromatografía de alta presión después del corte de las bandas y su tratamiento enzimático con tripsina. En esta etapa se identificaron un total de 57 proteínas en 23 bandas (2,5 proteínas por banda escindida), 47 de las proteínas no repetidas. Las proteínas inmunogénicas presentes en VMEs de S. sonnei fueron cuantificadas en cuanto a masa molecular por 1D-Western blotting en membranas de nitrocelulosa con anticuerpos obtenidos a partir de ratones inmunizados con las VMEs. Como que las bandas electroforéticas 1D contenían más de una proteína, se estudiaron las mejores condiciones de separación por el método de electroforesis bidimensional (2D) para el establecimiento del mapa proteico; tal que el incremento del tamaño de las tiras, el tiempo de focalización y la aplicación catódica garantizaron la mayor resolución(AU)

Outer membrane vesicles (OMVs) vaccines successfully prevent Group B meningococcal disease. This platform technology may be applied against other Gram negative bacterial pathogens. An OMV vaccine against Shigella sonnei was prepared by detergent extraction of cells and characterised by one-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis (1D). The protein components were quantified by staining and scanning and the composition of bands were defined by coupled high-performance low chromatography/electrospray ionization tandem mass spectrometry after band excision and in-gel trypsin digestion. 57 proteins contained in 23 bands (2.5 proteins/split band) were detected, 47 of them were not repeated. The S. sonnei OMVs immunogenic proteins were identified by 1D-immunoblotting, after transfer of proteins to a nitrocellulose membrane and treatment with antibodies generated by immunisation of mice with the OMVs. The bands detected by 1D had more than a single proteins, that is why we studied the best conditions for molecular separation by two-dimension electrophoresis (2D) for establishing the protein map; such that the increase of strips size, time of isoelectric focusing (IEF) and cup-cathodic loading guaranteed the highest resolution(AU)

Empleo del método de Knight para cultivo de dialisis peritoneal / Use of Knight`s method for culture of peritoneal dialysis

Debido a la baja positividad encontrada en los cultivos practicados a las diálisis peritoneales sembradas directamente en Agar sangre apoyándose en los diferentes autores que plantean mejores resultados con el empleo del medio de tioglicolato como paso intermedio. nos propusimos introducir este nuevo método de cultivo. Se logró un aumento del 10,8 %en la positividad de este tipo de muestra. Se describe el método y se exponen los resultados obtenidos con el método anterior y el empleado actualmente

Aislamiento de bacterias anaerobias en muestras de hemocultivos / Isolation of anaerobic bacteria in blood culture samples

En el Hospital Clinicoquirúrgico "Hermanos Ameijeiras" entre los meses de enero a marzo de 1986, se estudiaron 767 muestras de hemocultivos, tomadas a pacientes ingresados; se emplearon medios y métodos de cultivo aerobio y anaerobio. Para este último se utilizó el método "Anaerocult P" de la Merck. Del total de muestras, resultaron positivas el 24,9% y negativas el 75,1%. En 32 muestras (16,7%) aislamos bacterias anaerobias en cultivo puro y en 159 (83,3%) bacterias aerobias. Se les realizaron a las cepas aisladas: pruebas de sensibilidad a los antibióticos in vitro y diferentes pruebas de identificación. Se encontró que los anaerobios más frecuentes fueron Propionibacterium acnes. Peptostreptococcus intermedius y Bacteroides sp

Diagnóstico de laboratorio de Gardnerella vaginalis / Laboratory diagnosis of Gardnerella vaginalis

Se trabajaron un total de 156 muestras de exudados vaginales, procedentes de pacientes con leucorrea,en el servicio de microbiología del Hospital Clinicoquirúrgico "Hermanos Ameijeiras" desde noviembre de 1985 hasta enero de 1986. Se buscó especialmente Gardnerella vaginalis. Se confeccionó un esquema de trabajo, en base a la bibliografía consultada, que se detalla en forma completa. La identificación final de la especie se efectuó mediante coloración de Gram y pruebas de oxidasa y catalasa; se utilizó además una prueba rápida (Vagibio-test de la Horner) que incluye hidrólisis del almidón e hipurato y fermentación de la rafinosa en anerobiosis. Se logran identificar 29 cepas de Gardnerella vaginalis para el 18% del total de muestras estudiadas; en casi la mitad (48%) de éstas se observaron células "guías"; en todas el pH se encontró por encima de 5 y el hidróxido de potasio (KOH) fue positivo en 8 de las muestras analizadas

Hongos filamantosos más frecuentes en casos clínicos / The most frequent filamentous fungi in clinical cases

Se estudiaron un total de 350 cultivos micológicos de distintas procedencias, de los cuales 134 (25 %) fueron positivos a hongos filamentosos. En muestras de piel, pelo y uñas el Trichophyton rubrum ocupó el primer lugar en orden de frecuencia, mientras que en muestras de esputos, lavados bronquiales y pus se encontraron hongos del género Mucor, Aspergillus y Fusarium, cuyo significado y valor se discuten. Los datos obtenidos fueron procesados mediante técnicas de computación, ofreciéndose tablas de ellos

Criterios de predicción de urocultivos mediante el campo oscuro / Predictive criteria of urocultures by darkfield

Se hace una valoración de algunos criterios de predicción de urocultivos, tanto negativos, como positivos o contaminados utilizando la microscopia de campo oscuro (CO) para el conteo de leucocitos, gérmenes y cálulas epiteliales. Nuestra conclusión es que la observación de menos de un germen por campo, como promedio, es el único criterio válido para descartar las muestras como negativas y no pueden predecirse ni las positivas ni las contaminadas desde la observación microscópica por campo oscuro

Aislamiento de propionibacterium acnes en muestras de hemocultivos / Isolation of propionibacterium acnes in sample of hemocultures

Se procesaron un total de 9 433 muestras de hemocultivos por métodos aerobios y anaerobios simultáneamente, durante la etapa comprendida desde enero de 1986 hasta agosto de 1987, todos procedentes de pacientes hospitalizados. Se plantea por diferentes autores que el germen anaerobio más frecuentemente aislado es el Propionibacterium acnes. Se discute actualmente su valor patógeno por ser un caso típico de los llamados gérmenes oportunistas. Por lo expresado anteriormente nos propusimos revisar las características de esta especie, realizar el aislamiento eidentificación de ella para analizar los resultados obtenidos en relación con este microorganismo. Se lograron aislasr 89 cepas de Propionibacterium acnes para un positividad de 4,3 %: De éstos 56 cepas (62,9 %) en cultivos puros y 13 (14,6 %) en cultivos mixtos. Es notable que en el 10 % de las muestras analizadas se aisló más de una vez y en cultivo puro lo cual coincide con lo registrado por otros autores

Actualización en el diagnóstico de los hongos del género cándida / Bringin up-to-date the diagnosis of fungi of genus candida

Se brinda una actualización con respecto al diagnòstico de los hongos del género Cándida. Se presentan los resultados obtenidos en 354 cepas de este género, en los que se emplearon para la clasificaciòn por especies las pruebas de blastosis, clamidosporulación, zimograma y auxanograma, y se describe el esquema de trabajo utilizado

Uso de la técnica de microhemaglutinacion para anticuerpos antitreponemas / Use of microhemagglutination technique for antitreponema antibodies

Se presenta una breve revisión de las pruebas serológicas treponémicas para el diagnóstico de la sífilis. Se describe una técnica de microhemaglutinación, reconocida extensamente en el mundo, que utiliza un set de reactivos de procedencia japonesa y un antígeno de Treponema pallidum. En 31 de 80 pacientes estudiados en el Hospital Clínico-quirúrgico "Hermanos Ameijeiras", la prueba dio resultados negativos. Se interpretó que estos pacientes no tenían anticuerpos antitreponémicos; en el resto de los pacientes -49 muestras-, dio resultados positivos (61,2%), lo que demostró que tenían anticuerpos específicos para sífilis. Se concluyó que la prueba de MHA-TP es de fácil empleo y sencilla. Se requiere de mayor experiencia para conocer su correlación con el estadío clínico de los pacientes

Utilización de la microscopía de campo oscuro para descartar orinas negativas en muestras de urocultivos / Use of dark field microscopy to lay aside negative urines in samples of urocultures

Se presentan los resultados de la técnica de microscopia de campo oscuro (CO) para detectar y descartar orinas negativas en muestras de urocultivos, con la utilización simultánea del cultivo de las mismas en forma cuantitativa. Se obtienen, después de procesar 500 muestras, 82 positivas por CO, de las cuales 72 se confirmaron por cultivo, y 380 muestras negativas por CO, de las cuales 360 tembién lo fueron por cultivo. Se indica que no se tuvieron en cuenta 38 muestras consideradas contaminadas. Se expresa que, de acuerdo con los resultados, el método mostró una especificidad del 97,3% para las muestras negativas. El valor predictivo, al considerar el 20% de positividad de los urocultivos, resultó de 94,6% para los resultados negativos. Se recomienda que en pacientes renales se realice siempre el cultivo

Uso de la tinción con naranja de acridina para la detección temprana de hemocultivos positivos / Use of orange acridine dye for early screening of positive blood cultures

Se presentan los resultados obtenidos con el uso de una técnica para detectar precozmente la presencia de gérmenes en la sangre, mediante la tinción con naranja de acridina y la observación en un microscopio de fluorescencia. Se procesaron 925 muestras de hemocultivos. De los 189 positivos, el 43,9 fue detectado entre las 6 y 18 horas de incubación. Se concluye que la técnica recomendada como un reciente avance de las técnicas de Microbiología Diagnóstica, resultó muy útil y práctica para obtener información rápida de gran importancia en la orientación de la terapéutica

Aislamiento de bacterias anaerobias en muestras de casos clínicos humanos / Isolation of anaerobic bacteria from human clinical specimens

Se estudian 32 muestras de productos patológicos tomados a pacientes con indicios clínicos de infecciones por anaerobios, empleando medios y métodos de cultivo aerobio y anaerobio. Para el cultivo anaerobio se utilizó el Anaerocult P de la Merck. Del total de muestras resultaron 16 positivas y 16 negativas, el 50 de cada una. En 10 muestras (31,25 ), se aislaron bacterias anaerobias, 6 en cultivo puro y 4 mezclados con aerobios. A cada una de las cepas anaerobias le realizaron pruebas de sensibilidad a los antibióticos in vitro y diferentes pruebas de identificación, encontrándose los géneros Bacteroides y Peptococcus. Este estudio se realizó en el Hospital Clinicoquirúrgico "Hermanos Ameijeiras" en los meses de diciembre de 1984 y enero de 1985