Influência da qualidade das culturas de Mycobacterium tuberculosis nos resultados negativos dos testes da pirazinamidase / Influence of Mycobacterium tuberculosis cultures quality conditions on negative results on pyrazinamidase testing

A Organização Mundial da Saúde recomenda o uso do teste da pirazinamidase (PZAse) como método alternativo para determinação da resistência do Mycobacterium tuberculosis à pirazinamida, por ser um teste rápido e de fácil execução. Foram objetivos deste estudo: verificar a reprodutibilidade dos resultados negativos do teste da pirazinamidase quando realizado a partir das culturas originais e de seus subcultivos e relacioná-los com a qualidade das culturas originais e com os perfis de suscetibilidade à estreptomicina (S), isoniazida (I), rifampicina (R) e etambutol (E). Foram analisadas 115 culturas de Mycobacterium tuberculosis cujos cultivos originais apresentaram resultados negativos no teste da PZAse, o que representa resistência à pirazinamida. A qualidade das culturas foi avaliada, anotada e um segundo teste foi realizado a partir de subcultivos jovens e abundantes. A concordância entre os resultados do primeiro e do segundo teste foi de 72,2% e a qualidade das culturas mostrou correlação com os resultados (p< 0,001). O teste da pirazinamidase é útil quando utilizado juntamente com técnicas de detecção de suscetibilidade às drogas S,I,R,E, desde que seja realizado a partir de cultivos com boa qualidade, que permitam a utilização de inóculo abundante.

The pyrazinamidase is a fast and easy to perform assay, recommended by the World Health Organization as an alternative technique to determine pyrazinamide resistant Mycobacterium tuberculosis strains. This study aimed to assess the reproducibility of negative results on pyrazinamidase assay using both primary cultures and respective subcultures, and to correlate them with original cultures quality, as well as their susceptibility profile to streptomycin (S), isoniazid (I), rifampin (R) and ethambutol (E). A total of 115 Mycobacterium tuberculosis cultures were analyzed, which the original growth produced negative results on pyrazinamidase assay, implying a resistance to pyrazinamide. The cultures quality was assessed and recorded; a second testing was performed using recent and abundant subcultures. Results from the first and the second tests demonstrated an agreement rate of 72.2%, and the cultures quality showed correlation with the results (p<0.001). Pyrazinamidase testing is useful when it is combined with other techniques for analyzing mycobacteria susceptibility to S, I, R, E since it is performed with high quality cultures which allow the use of abundant inocula.

Culturas mistas de micobactérias: é importante isolar e identificar? / Mixed mycobacterial cultures: is it important to separate and to identify multiple species?

A investigação de culturas mistas de micobactérias é importante pois geralmente estas incluem ao menosuma espécie patogênica ou potencialmente patogênica. Dentre 8.036 culturas recebidas entre 1999 e 2000,pelo Setor de Micobactérias do Instituto Adolfo Lutz, foram selecionadas 21 (0,26%) com resultados sugestivos de culturas mistas. Após o isolamento em meio 7H11 as colônias foram repicadas em Lõwenstein Jensen e incubadas à 37° C. A identificação dos 32 subcultivos foi feita por métodos fenotípicos e pela analise do perfil de restrição do produto da amplificação de 440 pares de base do gene hsp65. Em oito subcultivos foi encontrada a espécie M. tuberculosis associada com MNT, em 3 subcultivos foramencontradas 2 espécies de MNT e nos demais foi identificado apenas um tipo de micobacteria. O tempo decrescimento lento das micobactérias inviabiliza o plaqueamento de todas as culturas pois este procedimentoacarretaria demora na liberação do resultado final dos testes, além de representar gastos excessivos em áreas endêmicas, geralmente com escassos recursos econômicos. Embora as dificuldades mencionadas, os microbiologistas devem estar atentos quanto à presença de culturas mistas de micobactérias e usar todos os métodos disponíveis para separar e identificar as espécies

Micobactérias não-tuberculosas: diversidade das espécies no estado de São Paulo / Nontuberculous mycobacteria: species diversity in São Paulo state, Brazil

O gênero Mycobacterium é constituído por espécies do complexo M. tuberculosis e outras denominadas micobactérias não-tuberculosas (MNT). Até o momento, mais de cem MNT foram descritas. Os objetivos deste estudo foram avaliar a diversidade das espécies de MNT identificadas no estado de São Paulo, no período de 1991 a 1997, que antecedeu a expansão da terapia anti-retroviral, e determinar a freqüência dos casos que atenderam alguns critérios bacteriológicos para o diagnóstico das infecções causadas pelas MNT. MATERIAL E MÉTODOS: Foram analisadas 1.892 cepas isoladas de sítios estéreis e não-estéreis de 1.248 pacientes atendidos no estado de São Paulo. RESULTADOS: Do total de pacientes, 1.199 (96,1 por cento) tiveram suas cepas identificadas e 3,9 por cento apresentaram resultados não-conclusivos. As dez espécies encontradas foram o complexo M. avium (MAC), M. kansasii, M. chelonae, M. fortuitum, M. szulgai, M. xenopi, M. marinum, M. gordonae, M. terrae e M. nonchromogenicum. Quarenta e sete (7,8 por cento) casos pulmonares tiveram diagnóstico confirmado pelo isolamento da mesma espécie em três ou mais amostras e 67 (34 por cento) pacientes tiveram o diagnóstico bacteriológico confirmado por isolamento em sítios estéreis. CONCLUSÕES: As espécies de MNT mais freqüentemente isoladas no estado de São Paulo foram MAC e M. kansasii. Uma publicação nacional com recomendações para diagnóstico e tratamento dessas infecções seria fundamental para a conduta correta no diagnóstico e no tratamento de micobacterioses.

Molecular characterization of Mycobacterium kansasii isolates in the State of São Paulo between 1995-1998

Mycobacterium kansasii is the most common cause of pulmonary nontuberculous mycobacteria infection and classical identification of this pathogen needs a time consuming phenotypic tests. Polymerase chain reaction-restriction fragment lenght polymorphism analysis (PRA) of the gene enconding for the 65kDa heat shock (hsp65) protein offers an easy, rapid, and inexpensive procedure to identify and subtype M. kansasii isolates. In the present study, we performed a retrospective analysis of patients who had mycobacteria identified on the basis of phenotypic tests by means of a review of database at Mycobacteria Laboratory of the Instituto Adolfo Lutz in the period 1995-1998. A total of 9381 clinical isolates were analyzed of which 7777 (82.9 percent) were identified as M. tuberculosis complex and 1604 (17.1 percent) as nontuberculous mycobacteria. Of the 296 M. kansasii isolates, 189 (63.8 percent) isolates obtained from 119 patients were viable and were analyzed by PRA-hsp65. Hundred eight two (98.9 percent) were classified as M. kansasii type I. Two isolates were classified as type II and III and five isolates were characterized as other Mycobacterium species. Clinical isolates of M. kansasii in the state of São Paulo was almost exclusively subtype I regardless of HIV status.

Isolamento de micobactérias em espécimes clínicos, utilizando o sistema automatizado MB/BacT-TM / Mycobacteria isolation in clinical specimens using the MB/BacT-TM system

O aumento da incidência da tuberculose e outras micobacterioses têm demonstrado a importância de se isolar e identificar rapidamente as micobactérias. No período de março a dezembro de 2000 foram avaliados 791 espécimes clínicos coletados de pacientes com sorologia positiva para HIV. O sistema MB/BacTTM detectou 30,0 por cento de amostras positivas, enquanto o meio Lowenstein Jensen 19,0 por cento. As identificações das micobactérias foram realizadas pelo sistema molecular de DNA AccuProbe ou por provas fenotípicas. O Sistema Automatizado MB/BacTTM foi mais sensível e rápido para o isolamento de micobactérias que o método tradicional e, acoplado a um sistema de identificação molecular, poderá ser uma ferramenta útil para o Programa de Controle da Tuberculose

Estratégias para a identificaçäo de espécies do complexo mycobacterium fortuitum / Strategies for identification of the mycobacterium fortuitum complex species

As micobactérias de crescimento rápido anteriormente classificadas como complexo micobacterium fourtuitum foram recentemente designadas M.fortuitum, M. peregrinum, M. chenonae e M. abcessus. A identificaçäo dessas micobactérias é importante para estabelecer a terapêutica adequada, visto que possuem diferentes padröes de resistência às drogas. Dentre 3.441 culturas de micobactérias recebidas em 1999 no Setor de micobactérias do Instituto Adolfo Lutz, foram selecionadas 13 cepas, classificadas como complexo M. fortuitum. O estudo incluiu o isolamento das colônias para certificar-se da pureza das culturas, a adiçäo de testes com carboidratos e citrato de sódio que separam as quatro espécies citadas e o uso da técnica de PCR restriction analysis do gene hsp65 (PRA) para elucidaçäo de resultados duvidosos dos tstes fetípicos. Na análise das 13 culturas, observou-se que oito apresentaram dois tipos de colônias (lisa e rugosa) e as cinco restantes apenas um tipo. As identificaçöes feitas com a técnica de PRA e c om os testes fenotípicos foram concordantes na maioria das cepas. Os resultados desse estudo de referência e implementada com testes específicos para cada espécie, que possibilitem a elucidaçäo rápida do diagnóstico

The rapidly growing mycobacteria, previously classified as Mycobacterium fortuitumcomplex, has recently been designated M. fortuitum, M. peregrinum, M. chelonae and M. abscessus. Theidentification of these mycobacteria is important for establishing the proper treatment, because they havedifferent patterns to drugs. Among 3,441 cultures of mycobacteria received in 1999 by the MycobacteriaLaboratory of the Adolfo Lutz Institute, 13 cultures classified as M. fortuitum complex were selected to bestudied. The study included isolation of colonies in order to ensure the purity of the cultures, the additionof tests with carbohydrate and citrate, which differentiate the four previously mentioned species and theuse of the PCR restriction analysis of hsp65 (PRA) for the analysis of dubious results in conventionaltests. In the analysis of the 13 cultures, it was observed that eight showed two types of colonies (smoothand rough) and the remaining five showed only one type. The identification by PRA technique and byconventional tests agreed to the majority of the strains. The results of this study suggest that theidentification of mycobacteria, due to its complexity, should be centralized in Reference Laboratories andimplemented with specific tests for each specie in order to give a rapid diagnosis

Estudo crítico da utilizaçäo das técnicas de biologia molecular na detecçäo e identificaçäo de micobactérias, em especial, Mycobacterium tuberculosis / Critical study of molecular biology techniques used to detect and identify mycobacteria, specially, Mycobacterium tuberculosis

O exame microscópico para o diagnóstico da tuberculose pulmonar é um componente essencial do Programa de Controle da Tuberculose. A cultura é necessária para a detecçäo das formas paucibacilares da tuberculose pulmonar (pacientes imunodeprimidos ou crianças) e das formas extrapulmonares. Com os métodos tradicionais säo necessárias em torno de 8 semanas para o fornecimento do resultado da cultura. A realizaçäo do teste de sensibilidade às drogas ou a identificaçäo das demais espécies do gênero aumenta esse tempo em 2 semanas. Atualmente, com os novos sistemas bacteriológicos, a detecçäo do crescimento é, em geral, em torno de 2 semanas e no caso de espécimes biológicos com baciloscopia negativa o tempo pode ser mais longo. Diversos testes de amplificaçäo e detecçäo de DNA ou rRNA do complexo M. tuberculosis têm sido propostos para o diagnóstico rápido da tuberculose. Os estudos para verificaçäo da validade desses testes säo efetuados em comparaçäo com a cultura e/ou o diagnóstico clínico do paciente. A revisäo sistemática de diversos estudos, possibilita a comparaçäo de um grande número de amostras com interpretaçäo estatística dos dados e pode ser usada para resolver incertezas quando os trabalhos publicados apresentam dados discordantes. Foram identificados 81 trabalhos, publicados no período de janeiro de 1991 a dezembro de 1998, que adotaram as seguintes técnicas de amplificaçäo de ácidos nucléicos: a reaçäo em cadeia da polimerase - o PCR (näo comercial) IS6110 e o teste AMPLICOR - e a amplificaçäo mediada pela transcriçäo - o teste AMTD. A média dos valores de sensibilidade, especificidade, valor preditivo positivo e valor preditivo negativo e acurácia foi calculada quando a comparaçäo do teste de amplificaçäo de ácidos nucléicos foi efetuada com a cultura e o diagnóstico clínico

Análise comparativa dos exames anatomopatológico e bacteriológico no diagnóstico laboratorial da linfadenite por microbactérias em pacientes HIV/AIDS / Comparative analysis of anatomopathological and bacteriological exams for diagnosis of mycobacterial lymphadenitis in HIV/AIDS patients

O objetivo deste estudo foi avaliar a histopatologia e a bacteriologia como recursos laboratoriais no diagnóstico de linfadenite por micobactérias, em pacientes HIV/AIDS em nosso meio. Foram realizados concomitantemente os exames anatomopatológico e bacteriológico de 136 linfonodos superficiais de sítios variados. Destes, 72 (53 por cento) foram positivos para micobactérias na análise histológica e/ou bacteriológica. Entre estes, 68 (94,4 por cento) casos foram positivos pelo histopatológico e 64 (88,9 por cento) pelo bacteriológico. Houve concordância de positividade em 83,3 por cento de casos e concordância de negatividade em 88,9 por cento. Entre os 136 linfonodos cultivados, 44,1 por cento foram positivos para micobactérias, sendo 98,3 por cento identificadas como M.tuberculosis e 1,7 por cento como pertencente ao complexo M. avium. Pela estatística, o nível de concordância entre as duas análise näo permite a escolha de uma delas como preferencial para o diagnóstico de linfadenite por micobactérias, mas sim pela complementariedade emtre ambas

An alternative biphasic culture system for recovery of mycobacteria and for differentiation of species other than M. tuberculosis complex from blood specimens

Micobacteremia constitui uma das manifestaçöes oportunísticas mais frequentes dos estágios mais avançados da infecçäo pelo virus da imunodeficiência humana. Diversas metodologias tem sido propostas para o seu diagnóstico, no entanto, a maioria destas apresentam custo elevado ou complexidade de operaçäo técnica. Baseados nestes fatos nos propusemos a avaliar um sistema alternativo de cultura bifásico contendo Middlebrook 7H9 modificado Lowenstein Jensen (mod 7H9/LJ), especificamente adaptados para (i) o isolamento de micobacterias, (ii) triagem de outras espécies que näo as do complexo Mycobacterium tuberculosis (MOTT) através da adiçäo de ácido p-nitrobenzoico aos meios (mod 7H9/LJ + PNB). Para a primeira etapa do estudo comparou-se os meios mod 7H9/LJ e 7H9/LJ convencional, realizando-se curva de crescimento das espécies M. tuberculosis e M. intracellulare em ambos os meios. Na segunda etapa do estudo isolou-se um total de 64 cepas de micobacterias a partir de 537 espécimes de sangue (11,9 por cento), das quais 64 (100,0 por cento) em 7H9/LJ e 62,0(96,9 por cento) em mod 7H9/LJ. Verificou-se um tempo semelhante de detecçäo destas micobacterias em ambos os sistemas. Para a terceira etapa do estudo, cultivou-se um total de 1091 espécimes de sangue nos sistemas mod 7H9/LJ e 7H9 mod/LJ contendo 500µml de ácido p-nitrobenzoico, constatando-se que um total de 72 por cento dos organismos isolados e pertencentes ao complexo Mycobacterium avium puderam ser presuntivamente identificados como MOTT em 27 dias. Estes resultados, associados a simplicidade e baixo custo destes sistemas bifásicos constituem elementos potenciais para sua aplicabilidade na rotina diagnóstica em países em desenvolvimento

Mycobacterium avium complex (MAC) isolated from AIDS patients and the criteria required for its implication in disease

Anterior a pandemia de AIDS, o Complexo Mycobacterium avium (MAC) era responsavel pela maioria das vezes, por pneumopatias acometendo pacientes com doenca pulmonar cronica de base como enfisema e bronquite cronica. Em 1981, com o advento da sindrome de imunodeficiencia adquirida (SIDA), o MAC passou a representar mais uma das doencas bacterianas mais frequentes em pacientes com essa sindrome, sendo a doenca disseminada a principal forma de manifestacao clinica da infeccao. Entre Janeiro de 1989 e Fevereiro de 1991, no Setor de Microbacterias do Instituto Adolfo Lutz em Sao Paulo, o MAC foi isolado de 103 pacientes a partir do cultivo de diferentes especimes estereis processados coletados de 2.304 pacientes atendidos no Centro de Referencia e Treinamento AIDS e/ou Instituto de Infectologia Emilio Ribas...

Mycobacterium avium complex (MAC): an unusual potential pathogen in cerebrospinal fluid of AIDS patients

O complexo Myocobacterium avium (CMA) e frequentemente isolado de pacientes com complicacoes tardias de Sindrome de Imunodeficiencia Adquirida (AIDS), especialmente na America do Norte e Europa. Entretanto, existem poucos relatos do isolamento deste complexo a partir do sistema nervoso central (SNC) nestes paises da Africa e America Latina. Neste trabalho relatamos o isolamento do CMA do liquor de 11 pacientes portadores de AIDS dentre 1723 (0,63 por cento) atendidos no Centro de Referencia e Treinamento-AIDS, de Sao Paulo, e discutimos a significancia deste achado.

Bacterial agents isolated from cerebrospinal fluid of patients with acquired immunodeficiency syndrome (AIDS) and neurological complications

Amostras de liquido cefalorraquidiano (LCR) de 2083 pacientes com Sindrome de Imunodeficiencia Adquirida (SIDA) e complicacoes neurologicas foram examinados durante um periodo de 7 anos (1984-1990). A porcentagem de pacientes que tiveram pelo menos um agente bacteriano cultivado do LCR foi de 6,2 por cento Mycobacterium tuberculosis foi o mais frequentemente isolado (4,3 por cento), seguido do complexo Mycobacterium avium ou MAC (0,7 por cento), de Pseudomas spp (0,5 por cento), Enterobacter spp (0,4 por cento), e Staphilococcus aureus (0,3 por cento). Entre 130 pacientes com cultura positiva, de 89 (68,5 por cento) foi isolado o M. tuberculosis e de 15 (11,6 por cento) MAC. A frequencia de isolamentos bacterianos foram mais frequentemente isolados de pacientes na faixa etaria de 21-30 anos e de mulheres (p<0.050).

Micobactérias outras que näo o Mycobacterium tuberculosis: análise da ocorrência e de aspectos relevantes ao diagnóstico da infecçäo / Mycobacteria other than Mycobacterium tuberculosis: ocurrence analysis and of relevant aspects at infection diagnosis

Foram identificados no período de 1985 a 1990, 289 cepas de micobactérias outras que näo Mycobacterium tuberculosis (MOTT), oriundas de 228 pacientes com suspeita de infecçäo, matriculados em diversas unidades de assistência médica do Estado de Säo Paulo. Destes apenas 31 tiveram o diagnóstico etiológico confirmado apenas MOTT através de critérios básicos clínicos e laboratoriais. As espécies relacionadas com estas infecçöes foram, M. kansasii, M. avium intracellulare, M. chelonae, M. scrofulaceum, M. marinum e M. szulgai. A presença de MOTT nas amostras dos demais pacientes foi considerada meramente ocasional, sem significado clínico

Microscopia de fluorescência como procedimento para a realizaçäo do exame baciloscópico em hanseníase / Fluorescent microscopy how procedure for the realization of the baciloscopic examination in leprosy

Visando comparar os métodos de microscopia fluorescente e de Ziehl-Neelsen para evidenciaçäo de bacilos álcool-ácido resistentes em material proveniente de derme de pacientes hansenianos, foram examinados 355 esfregaços. Obteve-se 98,81 por cento de concordância ajustada (KAPPA) entre os métodos. Verificou-se no entanto aproximadamente 55 por cento de resultados discordantes em relaçäo ao índice baciloscópico (Ridley), decorrentes de conatagens de bacilos por campo mais levadas pelo método fluorescente

Aspectos citológicos de amostras de escarro de pacientes com tuberculose pulmonar / Cytologic findings in sputum of patients with pulmonary tuberculosis

A tuberculose pulmonar é uma moléstia de ainda alta incidência em nosso país. Outras patologias podem estar associada a ela, como processos alérgicos pulmonares e parasitoses com estágio pulmonar em seu ciclo. a presença de eosinófilos no escarro de tuberculosos pode ser indicativa de uma dessas associaçöes. Este trabalho apresenta o estudo citológico de 74 esfregaços de escarro de pacientes sem tratamento, com diagnóstico inicial de tuberculose por baciloscopia e cultura. Células epitelióides e gigantes foram observadas em alguns esfregaços. A maioria deles mostrava fundo necrótico e substrato inflamatório intenso, com predomínio de linfócitos e/ou neutrófilos. Trinta e dois casos (43%) apresentavam quantidade significativa de eosinófilos, em contraste com a porcentagem de 20% de casos com eosinófilos no grupo controle (baciloscopia e cultura negativas). Esse achado sugere que os pacientes, além da tuberculose, podem apresentar outro processo patológico, que deve ser pesquisado

Estudo comparativo das variantes do método de coloraçäo de micobactérias / Comparative study of the staining method variation for mycobacteria

Este artigo tem a intençäo de mostrar qual é o melhor método de coloraçäo para micobactérias. As amostras foram coletadas e processadas pelos métodos de Ziehl-Neelsen a quente, Ziehl-Neelsen a frio, Ziehl Gabbet e Ziehl-Neelsen com azul de metileno alcalino. Após microscopia por cinco pessoas diferentes o método selecionado foi o de Ziehl-Neelsen a frio

Staphylococcus aureus produtor de termonuclease em alimentos / Thermonuclease production by Staphylococcus aureus from foods

Foram testadas, quanto à produção de desoxirrtbonuclease (DNAse) e termonuclease (TNAse), 382 cepas de Staphylococcus aureU8, isoladas de 205 amostras de alimentos, separadas em grupos como segue: grupo a, 236 cepas isoladas de 158 amostras de alimentos não-causadores de enfermidades e, grupo b, 146 cepas isoladas de 47 amostras de alimentos recebidas para elucidação do agente causador de intoxicação alimentar, com sintomas clínicos nos afetados compatíveis aos causados pela en terotoxina estafilocócica. Considerando os resultados obtidos, no caso do grupo a, observou-se a presença de cepa não-produtora de DNAse e TNAse em amostra de macarrão e cepas produtoras de DNAse mas não de TNAse provenientes de leite em pó e bife frito, não sendo portanto 100% concordantes os resultados referentes à produção de DNAse e TNAse; no g.rupo b, verificou-se que todas as cepas demonstraram produção de DNAse e TNAse (AU).