Thermotolerance of Histoplasma capsulatum at 40 °C predominates among clinical isolates from different Latin American regions

ABSTRACT The yeast phase of 22 Histoplasma capsulatum clinical isolates from Mexico, Argentina, Colombia, and Guatemala and three reference strains, one from Panama and two from the United States of America (USA), were screened for thermosensitivity characteristics using different analyses. Growth curves at 0, 3, 6, 12, 24, and 30 h of incubation at 37 and 40 °C, the growth inhibition percentage at 40 °C, and the doubling time at 37 and 40 °C were determined for all yeasts studied. Most of the isolates examined exhibited thermotolerant phenotypes at 40 °C, whereas a thermosensitive phenotype at 40 °C was only detected in the Downs reference strain from the USA. Growth inhibition values lower than 33.8% supported the predominance of the thermotolerant phenotype at 40 °C. The doubling time means found for the different isolates were 5.14 h ± 1.47 h at 37 °C and 5.55 h ± 1.87 h at 40 °C. This is the first report to underscore the predominance of thermotolerant and delayed doubling time phenotypes in H. capsulatum clinical isolates from different regions of Latin America.

Variabilidad genética de aislados del complejo Candida parapsilosis en dos servicios de un hospital terciario de la Ciudad de México / Genetic variability of isolates of Candida parapsilosis complex in two services of a tertiary hospital in Mexico City

La infección causada por el complejo Candida parapsilosis puede presentarse esporádicamente o en forma de brotes, por lo que el estudio de la variabilidad genética de los aislados clínicos puede revelar la presencia de genotipos endémicos y la ocurrencia de transmisión horizontal. Este estudio analizó, mediante Amplificación al Azar del ADN Polimórfico (RAPD) con cuatro oligonucleótidos (M13, AP3, T3B y R108), la variabilidad genética de 11 aislados clínicos del complejo C. parapsilosis, obtenidos en los servicios de Medicina Interna y Cirugía General de un hospital de la Ciudad de México, e identificar si los pacientes fueron infectados por el mismo genotipo. La cepa ATCC® 22019™ fue incluida en el análisis. Los aislados se identificaron por VITEK 2 Compact® y PCR. Con base en los perfiles polimórficos,se construyó un dendrograma por UPGMA y se calcularon el coeficiente de correlación cofenética(CCCr), el índice de asociación (I A) y los indicadores de diversidad genética. Todos los aislados fueron identificados como C. parapsilosis sensu stricto. El dendrograma mostró dos grupos (I y II), en el I se encontraron tres genotipos integrados por la cepa 22019 y cinco aislados asociados en su mayoría a candidiasis invasiva; el II mostró seis genotipos integrados por seis aislados asociados en su mayoría a candidiasis mucocutánea. El I A y los indicadores de diversidad genética obtenidos revelaron un sistema de reproducción recombinante. El RAPD con los oligonucleótidos M13, AP3, T3B y R108 es útil en la investigación de posibles brotes causados por C. parapsilosis y en la determinación de su variabilidad genética.

The infection caused by the Candida parapsilosis complex may occur sporadically or in the form of outbreaks, so the study of the genetic variability in clinical isolates may reveal the presence of endemic genotypes and the occurrence of horizontal transmission. This study analyzed the genetic variability of 11 clinical isolates of the C. parapsilosis complex obtained from Internal Medicine and General Surgery services of a hospital in Mexico City, using Random Amplification of Polymorphic DNA (RAPD) with four oligonucleotides (M13, AP3, T3B and R108), also evaluated whether the patients were infected by the same genotype. The strain ATCC® 22019 ™ was included in the analysis. Isolates were identified by VITEK 2 Compact® and PCR. With the polymorphic profiles, a dendrogram was constructed by UPGMA and the cophenetic correlation coefficient (CCCr), the association index (I A), and the indicators of genetic diversity were calculated. All isolates were identified as C. parapsilosis sensu stricto. The dendrogram showed two groups (I and II). Three genotypes integrated by the strain 22019 and five isolates, mostly associated with invasive candidiasis, were found in the group I. The group II showed six genotypes composed of six isolates, mostly associated with mucocutaneous candidiasis. The I A and the indicators of genetic diversity obtained, revealed a recombinant reproduction system. The RAPD with the oligonucleotides M13, AP3, T3B and R108 is useful in the investigation of possible outbreaks caused by C. parapsilosis and in the determination of their genetic variability.

Radicales libres y mecanismos de daño tisular en la diabetes mellitus / Free radicals and mechanisms of tissue damage in diabetes mellitus

La diabetes mellitus (DM) es una enfermedad crónico-degenerativa de elevada incidencia y prevalencia a nivel mundial. La hiperglucemia crónica, característica de la diabetes, genera mayor producción de radicales de superóxido, que juegan un papel principal en los mecanismos de daño tisular responsables de las complicaciones clínicas de la DM: la glucosilación de proteínas y acumulación de productos de la glucosilación avanzada, y la activación de las vías del sorbitol, de las hexosaminas y de la proteína cinasa C. Aunque se han desarrollado diferentes fármacos para inhibir las vías de daño, aún no se ha demostrado su verdadero beneficio en diabéticos. Por lo tanto, el buen control de la glucemia sigue siendo el factor fundamental para evitar o retardar el daño tisular.

Diabetes mellitus (DM) is a chronic-degenerative disease with a high incidence and prevalence around the world. Chronic hyperglycemia, a feature of diabetes, induces a higher production of superoxide free radicals, which play a major role in the mechanisms of tissue damage responsible for the clinical complications of DM: advanced glycosylation and activation of sorbitol, hexosamines, and protein kinase C pathways. Although different drugs that inhibit the damaging pathways have been developed, their actual benefit in diabetic patients has not been proved yet. Therefore, adequate glycemia control is still the fundamental factor to prevent or delay tissue damage.

Population structure and diversity of the pathogenic fungus Aspergillus fumigatus isolated from different sources and geographic origins

Fifty-five clinical and environmental Aspergillus fumigatus isolates from Mexico, Argentina, France and Peru were analyzed to determine their genetic variability, reproductive system and level of differentiation using amplified fragment length polymorphism markers. The level of genetic variability was assessed by measuring the percentage of polymorphic loci, number of effective alleles, expected heterozygocity and by performing an association index test (I A). The degree of genetic differentiation and variation was determined using analysis of molecular variance at three levels. Using the paired genetic distances, a dendrogram was built to detect the genetic relationship among alleles. Finally, a network of haplotypes was constructed to determine the geographic relationship among them. The results indicate that the clinical isolates have greater genetic variability than the environmental isolates. The I A of the clinical and environmental isolates suggests a recombining population structure. The genetic differentiation among isolates and the dendrogram suggest that the groups of isolates are different. The network of haplotypes demonstrates that the majority of the isolates are grouped according to geographic origin.

I. El murciélago como reservorio y responsable de la dispersión de Histoplasma capsulatum en la naturaleza. II. Papel de los marcadores moleculares del hongo aislado de murciélagos infectados / I. Bats as reservoirs and responsible of histoplasma capsulatum spreading in nature. II. the role of molecular markers of the fungus isolated from infected bats

Objetivo: El presente trabajo refiere datos acerca de los aislamientos positivos y caracterización de cepas de Histoplasma capsulatum en murciélagos infectados y capturados en los estados de Guerrero, Morelos y Oaxaca: Pteronotus parnellii; P. dauyi; Myotis californicus; Mormoops megalophylla; Natalus stramineus; Artibeus hirsutus; Leptonycteris nivalis y L. Curasoae. Aportaciones sobre el aislamiento del hongo en murciélagos infectados: Para el estado de Oaxaca se aportan nuevos registros de infección de murciélagos por H. capsulatum en P. parnellii, P. dauyi y L. curasoae, siendo las dos últimas especies nuevos registros para el mundo. Los datos indican un alto riesgo de infección en murciélagos que utilizan cuevas con bóvedas bajas, relieve accidentado y abundantes depósitos de guano. Polimorfismo genético de H. capsulatum aislado de murciélagos infectados: Se analizaron los patrones polimórficos del DNA del hongo aislado de doce mulciélagos infectados, capaturados en Guerrero y Morelos, utilizando el polimirfismo del DNA amplificado al azar por la reacción en cadena de la polimerasa (RAPD-PCR), método conocido por su alta sensibilidad. Se encontraron dos patrones polimórficos diferentes en los doce aislados de H. capsulatum obtenidos de murciélagos infectados, que podrían representar marcadores moleculares del hongo para las áreas geografícas estudiadas, además de asociarse con los desplazamientos de los murciélagos en estas áreas. Conclusiones: Se sugiere el papel de los murciélagos como reservorios y responsables de la dispersión de H. capsulatum en la naturaleza, en relación al uso de refugios permanentes (cuevas), a su hábitos alimentarios, y sus desplazamientos y migraciones

Tipificación de aislados clínicos de Histoplasma capsulatum por métodos fenotípicos y genotípicos / Typing of Histoplasma capsulatum clinical isolates by phenotype and genotype methods

Objetivo: El presente trabajo plantea el estudio fenotípico y genotípico de cinco aislados de Histoplasma capsulatum obtenidos de pacientes mexicanos con hostoplasmosis asociada a síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA), con procedencia geográfica bien establecida. Material y métodos: Se utilizaron para relacionar estos aislados clínicos, electrofóresis en geles de poliacrilamida dodecil sulfato de sodio (SDS-PAGE) y electroinmunotransferencia (EIT) para la fenotipificacion, y el polimorfismo del DNA amplificado al azar por la reacción en cadena de la polimerasa (RAPD-PCR) para la genotificación. Las relaciones enter los patrones electoforéticos y polimórficos de todos los aislado se procesaron en el programa SPSS/PC+ versión 2.3. Resultados y discusión: Por SDS-PAGE se observó que todos los aislados se relacionaron en un 86 por ciento. Por EIT se evidenció que todos los aislados revelaron tres bandas de 43, 28 y 18 kDa con suero inmune específico. Por RAPD-PCR, cuatro aislados se relacionaro en 94 por ciento y el último (EH-319) presentó 77 por ciento de relación con los anteriores. Conclusión: El análisis por RAPD.PCR permitió discriminar ligeras diferencias entre los aislados de pacientes mexicanos con histoplasmosis asociada a SIDA, en comparación con los métodos de caracterizacion fenotípica (SDS-PAGE y EIT)

Genotipificación de cepas de Histoplasma Capsulatum aisladas de pacientes con histoplasmosis asociada al SIDA, mediante el polimorfismo en la longitud de los fragmentos de restricción / Genotypic characterization of Histoplasma capsulatum isolates from AIDS associated-histoplasmosis-patients by using restriction fragment langth polymorphysms (RFLP)

Introducción: La histoplasmosis es una de las más importantes micosis asociada al síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA) en México. En este trabajo se efectuó la caracterización genotípica por el polimorfismo en la longitud de los fragmentos de restricción (RFLP) del DNA total de 31 cepas de Histoplasma capsulatum de pacientes con histoplasmosis asociada a SIDA, y su comparación con cepas de referencia de México, Panamá y Estados Unidos de America (EUA). Material y métodos: Las cepas fueron plenamente identificadas como H. capsulatum mediante su morfología colonial y microscópica, conversión de micelio a levadura y repoducción de exoantígenos probados por inmunodifusión con sueros específicos. El DNA total de las cepas fue obtenido a partir de micelio a levadura y producción de exoantígenos probados por inmunodifusión con sueros específicos. El DNA total de las cepas fue obtenido a partir de micelio macerado con nitrógeno líquido e incubado en presencia de proteinasa K y dodecilsulfato de sodio. El DNA fue diferido con la enzima HaeIII y los productos separados por electroforesis en agarosa y teñidos con bromuro de etidio. Utilizando el programa SPSS/PC+ se construyó un dendrograma a fin de establecer las relaciones polimórficas entre las cepas. Resultados y discusión: Las cepas formaron 10 grupos según sus perfiles de RFLP, obsevándose dos perfiles principales A y C con 33.3 y 29.1 por ciento de las cepas, respectivamente. Los perfiles restantes estuvieron representados por cepas únicas, a excepción del perfil J con dos cepas que mostraron un patrón similar al de la cepa Downs (clase 1, de EUA), No se encontró ningún perfil semejante a los de las cepas prevalentes en EUA o Panamá. El dendrograma mostró una relación de 85 por ciento entre las cepas de los perfiles de mayor prevalencia (A y C) asimismo del perfil J, además de las cepas Downs y FLs1 de los EUA. Los demás aislados con perfiles únicos se relacionaron en un 75 por ciento con las otras cepas

Inmunolocalización del complejo polisacárido-proteína en ultraestructuras de la fase micelial y levaduriforme de Histoplasma capsulatum / Immunolocalization of the polysaccharide-protein complex (PPCD-Histo) in the Histoplasma capsulatum mycelium and yeast phase ultrastructures

Introducción: El empleo de un antígeno parcialmente purificado denominado complejo polisacárido-proteína desproinizado de Histoplasma capsulatum (CPPD-Histo), utilizado para discriminar la histoplasmosis de diversas micosis pulmonares y otras enfermedades respiratorias en métodos inmunodiagnósticos de alta sensibilidad, ha sido motivo de estudio desde hace años por nuestro grupo de investigación: Objetivo: En este trabajo se planteó conocer la ubicación celular preferencial del antígeno CPPD-Histo, en las diferentes formas y estructuras de las fases micelial y levaduriforme del hongo. Material y métodos: El estudio se desarrolló mediante inmunolocalización con marcaje de oro coloidal para microscopia electrónica, usando anticuerpos primarios CPPD-Histo específicos. Resultados y discusión: La localización en microscopia electrónica mostró mayor concentración del CPPD-Histo en las zonas de mayor grosor de la capa externa de la pared celular de las proyecciones digitiformes de macroconidios, poco marcaje en pared celular de hifas, y una distribución dispersa de la marca en las levaduras. Conclusión: La pared celular de los macroconidios de la fase micelial del hongo es la estructura fúngica con mayor concentración del antígeno CPPD-Histo

Producción de antígenos fúngicos autóctonos en el inmunodiagnóstico de micosis en México / Production of fungal antigens from local strains for the immunodiagnosis of mycoses in Mexico

La elaboración de antígenos fúngicos con buena reactividad y especificidad son indispensables para las pruebas inmunológicas que son útiles en el diagnóstico y pronóstico de las enfermedades micóticas. Las diferencias antigénicas de cepas provenientes de diversas regiones plantean la conveniencia de conocer las características morfológicas, antigénicas y moleculares. Este documento presenta datos de antígenos crudos y purificados de Histoplasma capsulatum, Coccidioidis immitis y paracoccidioides brasiliensis que son los de mayor patología en México. Los antígenos crudos de histoplasmina, coccidioidina y paracoccidioidina, constituidos principalmente por moléculas glicoproteínicas, muestran buena reactividad en pruebas de precipitación e intradérmicas. Los purificados (CCPD: complejo polisacárido-proteína desproteinizado) exhiben mayor grado de especificidad que los crudos en pruebas de alta sensibilidad como ELISA y fijación de complemento. Los antígenos crudos son de bajo costo, fácil manejo y rápida detección y son ideales para estudios epidemiológicos; los purificados son ideales para precisar mejor un diagnóstico de micosis

Actividades enzimáticas en levaduras de Histoplasma capsulatum / Enzymatic activities from Histoplasma capsulatum yeasts

Se determinaron actividades enzimáticas en 5 cepas de Histoplasma capsulatum en fase levaduriforme (EH46, EH 50, EH51, EH52, EH53) por el micrométodo del APIZYM. De las 19 enzimas probadas se encontraron actividades de fosfatasa alcalina, esterasa lipasa C8, fosfatasa ácida y fosfoamidasa en todas las cepas estudiadas, mientras que la lipasa C14 y la leucina arilamidasa, sólo se determinaron en 4 cepas. Estas últimas enzimas no aparecieron en la cepa EH53 de alta virulencia

Abatimiento de la resistencia a la histoplasmosis murina inducida por anticuerpos / Resistance abrogation to murine histoplasmosis induced by antibody

Se siguió el curso de la respuesta humoral y celular a través de la infección experimental histoplasmosa. Se estudió el posible papel modulador del suero inmune sobre la respuesta mediada por células desarrolladas durante la infección producida por Histoplasma capsulatum. Se demuestra que existe una distribución cíclica de la respuesta inmune celular y hormonal en los ratones infectados, que la transferencia pasiva de anticuerpos anti-Histoplasma abate la sobrevida de los ratones infectados subletalmente, cuando el suero fue transferido 3h antes de la infección. Los resultados de este modelo experimental sugieren que los anticuerpos pueden jugar un papel modulador de la respuesta celular en la histoplasmosis