RESUMO
Drug resistance is a global threat and one of the main contributing factors to tuberculosis (TB) outbreaks. The goal of this study was to analyse the molecular profile of multidrug-resistant TB (MDR-TB) in the state of Santa Catarina in southern Brazil. Fifty-three MDR
Assuntos
Adulto , Feminino , Humanos , Masculino , Antituberculosos/farmacologia , DNA Bacteriano , Farmacorresistência Bacteriana Múltipla/genética , Mutação/genética , Mycobacterium tuberculosis/efeitos dos fármacos , Tuberculose Resistente a Múltiplos Medicamentos/microbiologia , Técnicas de Tipagem Bacteriana , Brasil , Proteínas de Bactérias/genética , Genótipo , Polimorfismo de Fragmento de Restrição , Análise de Sequência de DNARESUMO
The identification of mycobacteria is essential because tuberculosis (TB) and mycobacteriosis are clinically indistinguishable and require different therapeutic regimens. The traditional phenotypic method is time consuming and may last up to 60 days. Indeed, rapid, affordable, specific and easy-to-perform identification methods are needed. We have previously described a polymerase chain reaction-based method called a mycobacteria mobility shift assay (MMSA) that was designed for Mycobacterium tuberculosis complex (MTC) and nontuberculous mycobacteria (NTM) species identification. The aim of this study was to assess the MMSA for the identification of MTC and NTM clinical isolates and to compare its performance with that of the PRA-hsp65 method. A total of 204 clinical isolates (102 NTM and 102 MTC) were identified by the MMSA and PRA-hsp65. For isolates for which these methods gave discordant results, definitive species identification was obtained by sequencing fragments of the 16S rRNA and hsp65 genes. Both methods correctly identified all MTC isolates. Among the NTM isolates, the MMSA alone assigned 94 (92.2%) to a complex or species, whereas the PRA-hsp65 method assigned 100% to a species. A 91.5% agreement was observed for the 94 NTM isolates identified by both methods. The MMSA provided correct identification for 96.8% of the NTM isolates compared with 94.7% for PRA-hsp65. The MMSA is a suitable auxiliary method for routine use for the rapid identification of mycobacteria.
Assuntos
Humanos , Ensaio de Desvio de Mobilidade Eletroforética , Mycobacterium tuberculosis/isolamento & purificação , Micobactérias não Tuberculosas/isolamento & purificação , /genética , Técnicas de Tipagem Bacteriana , Proteínas de Bactérias/genética , DNA Bacteriano/genética , Infecções por Mycobacterium não Tuberculosas/microbiologia , Infecções por Mycobacterium/microbiologia , Mycobacterium tuberculosis/classificação , Micobactérias não Tuberculosas/classificação , Reação em Cadeia da PolimeraseRESUMO
Estima-se que um terço da população mundial esteja infectada com Mycobacterium tuberculosis, oque resulta em 2 milhões de mortes anualmente. No mundo, são registrados mais de 8 milhões de novos casos de tuberculose (TB) por ano e o Brasil ocupa o décimo nono lugar dentre os 23 países detentores da maior carga de TB. Os fatores determinantes para o controle desta doença incluem a detecção rápida, a terapia adequada e os meios para que sejam evitadas futuras transmissões. O diagnósticoconvencional (baciloscopia e cultura do microrganismo) apresenta limitações quanto ao tempo de execução e à operacionalidade, visto que o resultado pode levar até 60 dias para ser liberado.Portanto, a importância da detecção precoce do bacilo se torna fundamental para o bloqueio da cadeia de transmissão da TB. Já as micobacterioses, doenças causadas pelas micobactérias não tuberculosas, também estão provocando um importante impacto em razão do aumento dos surtos de infecções cirúrgicas. A identificação rápida e específica destes microrganismos é importante para o diagnóstico e a consequente escolha do tipo de tratamento do paciente, que está diretamente relacionada com a espécie. Portanto, o conhecimento dos agentes etiológicos das doenças causadaspelas micobactérias e o diagnóstico sensível e específico permitem o tratamento adequado e,consequentemente, o bloqueio da cadeia de transmissão da TB e o controle dos surtos relacionados às micobactérias não tuberculosas.
It is estimated that one third of the world population is infected with Mycobacterium tuberculosis, resulting in 2 million deaths annually. More than 8 million new cases of tuberculosis (TB) are registered per year worldwide, and Brazil ranks 19th among the top 23 countries with the highest rates of TB. The determining factors for the control of this disease include early detection, appropriate therapy and measuresfor avoiding transmission. The conventional diagnoses (smear and microorganism culture) have time limitations for implementation and operation, since the result may take up to 60 days to be released. Therefore, early detection is critical for blockingthe chain of TB transmission. Mycobacterial diseases caused by nontuberculous mycobacteria are also having a major impact due to increased outbreaks of surgical infections. Thereby, the rapid and specific identification of microorganisms is important for the diagnosis, which will determine the type of treatment (treatment according to species). Knowledge of etiologic agents of mycobacterial diseases, as well as sensitive and specific diagnosis allows proper treatment by blocking the chain of TB transmission and controlling nontuberculous mycobacteria outbreaks.
Assuntos
Humanos , Micobactérias não Tuberculosas , Mycobacterium/classificação , Mycobacterium/patogenicidade , Tuberculose Pulmonar/diagnóstico , Tuberculose Pulmonar/epidemiologia , Vigilância SanitáriaRESUMO
OBJETIVO: Identificar micobactérias não tuberculosas (MNT) isoladas de sítios estéreis em pacientes internados no Hospital Universitário Clementino Fraga Filho, Rio de Janeiro (RJ) entre 2001 e 2006. MÉTODOS: Durante o período do estudo, 34 isolados de MNT de sítios estéreis de 14 pacientes, a maioria HIV positivos, foram submetidos a identificação fenotípica e hsp65 PCR-restriction enzyme analysis (PRA, análise por enzimas de restrição por PCR do gene hsp65). RESULTADOS: A maioria dos isolados foi identificada como Mycobacterium avium, seguida por M. monacense, M. kansasii e M. abscessus em menores proporções. CONCLUSÕES: A combinação de PRA, um método relativamente simples e de baixo custo, com algumas características fenotípicas pode fornecer a identificação correta de MNT na rotina de laboratórios clínicos.
OBJECTIVE: To identify nontuberculous mycobacteria (NTM) isolated from sterile sites in patients hospitalized between 2001 and 2006 at the Clementino Fraga Filho University Hospital, located in the city of Rio de Janeiro, Brazil. METHODS: During the study period, 34 NTM isolates from sterile sites of 14 patients, most of whom were HIV-positive, were submitted to phenotypic identification and hsp65 PCR-restriction enzyme analysis (PRA). RESULTS: Most isolates were identified as Mycobacterium avium, followed by M. monacense, M. kansasii, and M. abscessus. CONCLUSIONS: The combination of PRA, a relatively simple and inexpensive method, with the evaluation of a few phenotypic characteristics can allow NTM to be accurately identified in the routine of clinical laboratories.
Assuntos
Adolescente , Adulto , Humanos , Pessoa de Meia-Idade , Adulto Jovem , Proteínas de Bactérias/análise , /análise , Genes Bacterianos/genética , Infecções por Mycobacterium não Tuberculosas/microbiologia , Micobactérias não Tuberculosas/genética , Reação em Cadeia da Polimerase/métodos , Mapeamento por Restrição/métodos , Técnicas Bacteriológicas , Brasil , Enzimas de Restrição do DNA , DNA Bacteriano/análise , Hospitais Universitários , Pacientes Internados , Complexo Mycobacterium avium/isolamento & purificação , Infecção por Mycobacterium avium-intracellulare/microbiologia , Micobactérias não Tuberculosas/isolamento & purificaçãoRESUMO
INTRODUÇAO: As taxas de resistência aos fármacos constituem um dos pilares da avaliação dos programas de controle da tuberculose. A demora na obtenção dos resultados, conseqüência da metodologia convencional utilizada, faz com que haja a necessidade de avaliação de novos testes, mais rápidos e menos onerosos. OBJETIVO: Comparar técnicas fenotípicas rápidas para determinação do perfil de susceptibilidade de M. tuberculosis, utilizando indicadores de viabilidade celular, com o teste das proporções em Lõwenstein-Jensen, padrão-ouro. MÉTODO: Foram utilizadas 166 cepas de M. tuberculosis com o perfil de susceptibilidade conhecido. A concentração mínima inibitória de cada fármaco foi determinada, em microplaca, utilizando-se meio líquido e os indicadores de oxi-redução, Alamar Blue® e brometo de tetrazolium. O ponto de corte entre a cepa sensível e a resistente foi estabelecido como concentração mínima inibitória maior ou igual a 0,2 mg /mL para isoniazida e 1,0 mg /mL para rifampicina. RESULTADOS: Houve concordância total entre os dois métodos de determinação da concentração mínima inibitória. Comparando os resultados dos testes com o padrão-ouro, obteve-se uma concordância de 95 por cento, para isoniazida e rifampicina. O tempo para obtenção dos resultados foi de 7 dias, contrastando com os 28 dias pelo método convencional. CONCLUSAO: Os testes para determinação da concentração mínima inibitória, em meio líquido, utilizando indicadores de oxi-redução, são rápidos e podem se utilizados como alternativa rápida na determinação de susceptibilidade de cepas de M. tuberculosis.