Prevalence of asymptomatic Plasmodium vivax infections in the north-eastern focus of malaria of Venezuela / Prevalencia de infecciones asintomáticas por Plasmodium vivax en el foco malárico oriental de Venezuela

Malaria remains as a public health problem in Venezuela. In 2015 there were 136,402 cases reported by the Ministry of Popular Power for Health, being the parasite prevalence 73.95% for Plasmodium vivax, 17.6% for Plasmodium falciparum, 0.0095% for Plasmodium malariae and 8.42% mixed infections (P. vivax + P. falciparum). During the period 1999-2002 the number of cases in Venezuela ranged between 21,685 and 29,337, being the Sucre State with highest levels of malaria prevalence, with Plasmodium vivax as the unique specie in this region. In 2002 the Municipality of Cajigal had the highest Annual Parasite Incidence (API) of country, being 260 cases per 1000 inhabitants. In view of the difficulty in controlling malaria in this area, the prevalence of asymptomatic carriers was investigated as one of the epidemiological factors contributing to the persistence of malaria transmission. One hundred fifty people were included in the study, with no history of recent malaria infection, or any symptom and also, not having used antimalarial drugs during the 30 days prior to study entry. To do this, a malaria Rapid Diagnostic Test (mRDTs) was used for the determination of antigenemic (OptiMAL®) and PCR (polymerase chain reaction) in conjunction with the reference "Gold Standard", the conventional thick and thin blood smears (TTBS). It was found a prevalence of infection of 1.33% by mRDTs and TTBS and 8% by PCR which allowed the detection of 10 asymptomatic cases in addition, with a sensitivity and specificity of 100% and 93.4% respectively. The presence of asymptomatic carriers in this area reveals the difficulties that face the Malaria Control Program in the eventual elimination of this specific malaria foci. It is necessary reinforces the maintenance of the epidemiological surveillance using more sensitive diagnostic techniques, as well as to adapt the control measures based on the current findings.

La malaria sigue siendo un problema de salud pública en Venezuela. Para el año 2015 el Ministerio del Poder Popular para la Salud reportó 136.402 casos, siendo la fórmula parasitaria 73,95% para Plasmodium vivax, 17,6% para Plasmodium falciparum, 0,0095 para Plasmodium malariae y 8,42% para infecciones mixtas (P. vivax + P. falciparum). Durante el período 1999-2002, el número de casos en Venezuela estuvo entre 21.685 y 29.337, siendo el Estado Sucre el que mostró los niveles más altos de prevalencia de malaria, con P. vivax como única especie en la región. En el año 2002 el Municipio Cajigal registró el Índice Parasitario Anual (IPA) más alto del país, siendo 260 casos por 1000 habitantes. En vista de las dificultades para controlar la malaria en esta área, se investigó la prevalencia de portadores asintomáticos como uno de los factores contribuyentes en la persistencia de la transmisión malárica. Ciento cincuenta personas fueron incluidas en el estudio sin historia de infección reciente por malaria o ningún síntoma, así como no haber consumido drogas antimaláricas durante los 30 días anteriores de ingresar al estudio. Para ello, se usó la prueba rápida de diagnóstico para malaria (PRDxm) para la determinación de antígenemia (OptiMAL®) y la técnica de biología molecular basada en la Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR), conjuntamente con la "prueba oro," como método convencional, la Gota Gruesa y Extendido de Sangre (GGES). Se encontró una prevalencia de infección de 1,33% por GGES y por prueba rápida de diagnóstico OptiMAL® y 8% mediante PCR. La técnica de PCR permitió la detección adicional de 10 casos asintomáticos con una sensibilidad y especificidad del 100% y 93,4% respectivamente. La presencia de portadores asintomáticos en esta área revela las dificultades que enfrenta el Programa de Control de la Malaria en la eliminación eventual de esta parasitosis en este foco. Es necesario reforzar el mantenimiento de la vigilancia epidemiológica usando técnicas de diagnóstico más sensibles, así como adoptar medidas de control basadas en estos hallazgos.

Development and characterization of IgY antibodies against synthetic peptides from Brucella abortus OMP25 and BP26 proteins / Desarrollo y caracterización de anticuerpos IgY contra péptidos sintéticos de las proteínas OMP25 y BP26 de Brucella abortus

Brucellosis is a zoonose produced by bacterial species from the Brucella genus. Its isolation and identification in food using classical microbiological techniques is not practical due to its slow growth rate. Therefore, it is necessary to establish fast and specific methods for the detection of the bacteria in food. The goal of this work was the production and characterization of monospecific polyclonal antibodies in chicken (IgY) against synthetic peptides from Brucella abortus OMP25 and BP26 proteins, suitable for an antigen-capture assay. Conformational as well as antigenic predictions were performed using the ANTHEPROT package. Chemical synthesis was carried out by the multiple manual synthesis using the t-boc strategy. The peptides were used as antigens for the preparation of polyclonal antibodies in chicken. Experimental animals produced specific antibodies against the OMP25 and BP26 peptides constructs determined by ELISA and MABA assays showing correspondence between the predictive study and the immunogenicity obtained in chicken. The IgY proved to be able to recognize B. abortus by MABA assays. The binding activity and specificity of antibodies was determined by Western blot with cell extract from B. abortus. In this study, we demonstrated that OMP25 and BP26 peptides constructs are good candidates for production of specific IgY antipeptide antibodies capable of recognizing proteins from sonicated B. abortus strain S19, indicating the potential usefulness of the IgY antibody for development of immunoassays for detection of Brucella abortus.

La brucelosis es una zoonosis producida por especies del género Brucella. El aislamiento e identificación de la bacteria en alimentos usando las técnicas clásicas de microbiología no es práctico debido a su lenta tasa de crecimiento. Por lo tanto, es necesario establecer métodos rápidos para la detección de la bacteria en alimentos. En el presente trabajo se desarrollaron y caracterizaron anticuerpos policlonales monoespecíficos en gallinas (IgY) contra péptidos sintéticos de las proteínas OMP25 y BP26 de Brucella abortus, que puedan ser utilizados en un ensayo de captura. Para ello, se realizaron estudios conformacionales y de predicción de epítopes en la selección de los péptidos, los cuales se utilizaron como antígenos para la producción de las IgY. Los animales desarrollaron anticuerpos específicos contra los péptidos, mostrando correspondencia entre los estudios predictivos y la inmunogenicidad obtenida. Las IgY reconocieron a B. abortus en un ensayo de MABA y la actividad de unión y especificidad fue determinada por western blot con extracto celular de B. abortus. En este estudio, demostramos que los péptidos de las proteínas OMP25 y BP26 de B. abortus son buenos candidatos para la producción de anticuerpos IgY especificos capaces de reconocer proteínas de extracto de B. abortus cepa S19, indicando el potencial uso de anticuerpos IgY para el desarrollo de inmunoensayos para la detección de Brucella abortus.

Production and evaluation of chicken antibodies against a synthetic peptide from glial growth factor / Producción y evaluación de anticuerpos de gallinas contra un péptido sintético del factor de crecimiento glial

Neuregulins (NRG) are proteins that belong to the family of epidermal growth factors. It is well established that these factors are essential for the development and maintenance of the nervous system. Due to the difficulty of purifying enough quantities of these factors and the lack of specificity from commercially available antibodies, the aim of this work was to produce antibodies against a synthetic peptide capable to detect and identify neuregulin GGFb isoforms. To accomplish this goal, polyclonal antibodies were raised in hens against a synthetic peptide designed from the GGFb1 extracellular sequence. The sequence analysis was made using different epitope-predicting programs. Our results showed that the peptide sequence selected was immunogenic because it was capable of inducing a specific type B immune response in the experimental animal model. These antibodies were also capable of recognizing a recombinant GGF protein and GGF isoforms present in different samples. Our results suggest that the development of immunoglobulin Y (IgY) using synthetic peptides represents, a valuable tool for neuroscience research.

Las Neuregulinas (NRG) son proteínas que pertenecen a la familia de los factores de crecimiento epidermal. Se ha demostrado que estos factores son esenciales para el desarrollo y mantenimiento de la funcionalidad del sistema nervioso. Debido a la dificultad para purificar estas proteínas y la falta de especificidad de los anticuerpos disponibles comercialmente, el objetivo de este trabajo fue producir anticuerpos contra un péptido sintético capaz de detectar e identificar una isoforma de la Neuregulina (GGFb). Para lograr este objetivo, se desarrollaron anticuerpos en gallinas (IgY) contra un péptido sintético diseñado a partir de la secuencia aminoacídica de la región extracelular de GGFb, utilizando programas de predicción de epítopes. Los resultados demuestran que el péptido seleccionado fue immunogénico debido a que estimuló una respuesta inmune específica tipo B en el modelo utilizado. Estos anticuerpos fueron también capaces de reconocer una proteína recombinante e isoformas de GGF presentes en diferentes muestras biológicas. Nuestros resultados demuestran el potencial valor de las inmunoglobulinas Y (IgY) contra péptidos sintéticos como una herramienta de aplicación para la investigación en neurociencia.

Producción y evaluación in vitro de IgY contra Streptococcus mutans / In vitro production and evaluation of anti-Streptococcus mutans IgY

La caries dental es una enfermedad infecciosa de alcance mundial, producida por Streptococcus mutans. Una estrategia para combatir la bacteria es previniendo su adherencia al esmalte dental mediante el uso de inmunoglobulinas de yema de huevo (IgY). En este trabajo se desarrollaron IgY contra S. mutans y se determinó su reactividad a fin de evaluar su potencial para prevenir la caries dental. Los anticuerpos fueron producidos inmunizando gallinas con un liófilo de la bacteria. Se recolectaron los huevos pre y post inmunes y se purificaron las IgY por precipitación con PEG 6000-cloroformo. El mayor nivel de IgY se obtuvo en el día 42 postinmunización, medido por un ensayo ELISA y la reactividad se evaluó por Western Blot, observándose el reconocimiento de bandas específicas entre 41 y 150 kDa que corresponden a proteínas implicadas en la adherencia a la superficie dental. Por la prueba MABA, se observó reactividad cruzada con S. salivarius. Observamos la aglutinación e inhibición del crecimiento (MIC) de S. mutans in vitro por acción de las IgY. Los resultados demuestran el potencial de estos anticuerpos para ser aplicados en ensayos de inmunización pasiva en nuestro país como una alternativa para prevenir la caries dental.

Dental caries is a worldwide infectious disease produce by Streptococcus mutants. A strategy to combat this bacterium consists in preventing its adherence to tooth enamel through the use egg yolk immunoglobulin (IgY). In this study we developed anti-S.mutans IgY and determined its reactivity to evaluate its potential for preventing dental caries. The antibodies were produced by immunizing hens with lyophilized bacteria. Pre and post immunization eggs were collected and their IgY was purified by precipitation with PEG 6000-chloroform. The highest IgY level was obtained on the 42nd day post-immunization, as measured by an ELISA test. Reactivity was determined by Western Blot, showing the recognition of specific bands between 41 and 150 kDa, which correspond to proteins involved in the adherence to dental surfaces. A MABA test showed cross-reactivity with S. salivarum. IgY activity was shown by in vitro agglutination and growth inhibition (MIC) of S. mutans. These results show the potential of these antibodies for application in passive immunization trials as an alternative to prevent dental caries.

Antígenos de Plasmodium falciparum, blancos de la respuesta inmunitaria humoral en pacientes tratados con cloroquina / Antigens of Plasmodium falciparum, target of humoral immune response in patients treated with chloroquine

Se planteó identificar antígenos que pudieran ser reconocidos por los anticuerpos IgG1 e IgG3, descritos como protectores en la infección malárica, en personas con respuesta clínica adecuada (RCA) o falla al tratamiento (FT) antimalárico, provenientes de localidades con diferentes grados de endemicidad. Se evaluaron por Immunoblotting muestras de sueros de individuos provenientes de tres localidades del Edo. Amazonas (Venezuela): Puerto Ayacucho (Atures), San Juan de Manapiare (Manapiare) y Platanal (Alto Orinoco). La reactividad de IgG, IgG1 e IgG3 frente a componentes antigénicos del extracto de P. falciparum (FCB2), permitió identificar un mayor número de moléculas específicas en los pacientes con RCA que en los pacientes con FT. La frecuencia de reconocimiento de polipéptidos fue baja en las tres localidades, algunas moléculas con una frecuencia de reconocimiento igual o mayor al 20% pertenecían a sueros de individuos de las localidades de Puerto Ayacucho y Platanal, ambas con exposición permanente a P. falciparum. Dado el reconocimiento de polipéptidos por IgG, IgG1 e IgG3 en sueros de pacientes con RCA, estos podrían ser considerados como posibles blancos relevantes de la respuesta inmunológica protectora que coadyuven con el tratamiento antimalárico. Esto contribuiría al desarrollo y diseño de vacunas más efectivas, que prevengan la infección malárica y/o potencien la eficacia a la quimioterapia.

Here we studied the presence of antigens recognized by IgG1 and IgG3 antibodies, thought as protective, in patients with adequate clinical response (RCA) or treatment failure (FT), living in areas of different degrees of endemicity. Immunoblotting was evaluated from serum samples of individuals from three locations in the State Amazonas (Venezuela): Puerto Ayacucho (Atures), San Juan de Manapiare (Manapiare) and Pantanal (Alto Orinoco). The reactivity of IgG, IgG1 and IgG3 against antigenic components of the extract of P. falciparum (FCB2) identified a greater number of specific molecules in patients with RCA in patients with AFT. The frequency of recognition of polypeptides was low in all three locations, with some molecules having a recognition rate of greater than or equal to 20% sera of individuals belonging to the towns of Puerto Ayacucho and Platanal, both with cases of P. falciparum. Given the recognition of polypeptides by IgG, IgG1 and IgG3 in sera of patients with RCA, they could be considered as possible targets for relevant protective immune responses that contribute to malaria treatment. This would contribute to the development and design of more effective vaccines that prevent malaria infection and/or enhance the efficacy of chemotherapy.

Evaluation of the OptiMAL® test for diagnosis of malaria in Venezuela

Se evaluó el test rápido OptiMAL® comparándolo con el examen convencional de observación de muestras sanguíneas para la detección de la malaria en dos grupos de individuos procedentes de diferentes áreas endémicas de Venezuela. Uno de los grupos (n = 113) con síntomas sugestivos de malaria, y otro representado por individuos asintomáticos (n = 89). El examen microscópico de las muestras de sangre de estas poblaciones determinó que 67,5 por ciento estaban infectados con P.vivax, 31,3 por ciento con P. falciparum y 1,2 por ciento con infecciones mixtas. La prueba OptiMAL® mostró 96,4 por ciento de sensibilidad, 100 por ciento de especificidad, con valor predictivo positivo de 100 por ciento y valor predictivo negativo de 97,5 por ciento. La detección de cualquier infección malárica en la población total presentó una concordancia óptima (kappa = 0,97). Sin embargo, estos parámetros fueron más bajos cuando la parasitemia era £ 300 parásitos/µL. El congelamiento de las muestras no afectó la sensibilidad y especificidad de la prueba. Nosotros concluimos que esta prueba rápida de malaria es sensible y especifica para el diagnóstico rápido de la malaria en el campo y puede complementar a la microcopia convencional.

Evaluación de la prueba NOW® ICT Pf/Pv para el diagnóstico de malaria en Venezuela / Evaluation of the NOW® ICT P.f/P.v. test for the diagnosis of malaria in Venezuela

Se evaluó la prueba NOW® malaria ICT P.f/P.v. en personas con síntomas de malaria provenientes de dos áreas andémicas de Venezuela: estado Sucre en la región noreste costera (n=71) y el estado Amazonas en el sur (n=86). 102 muestras resultaron positivas (73 P. vivax, 25 P. falciparum, 2 P. malariae y 2 infecciones mixtas), 55 muestras resultaron negativas mediante el exámen microscópico. La sensibilidad, especificidad, VPP y VPN del NOW® malaria ICT P.f/P.v. para el diagnóstico de la malaria fue 81,4%, 100%, 100% y 74,3%, respectivamente y un Kappa de 0,75. En Sucre la sensibilidad fue de 96,3%, especificidad 100%, VPP 100%, VPN 90,5% y Kappa 0,85 para P. vivax. En Amazonas, la sensibilidad fue 81%, especificidad y VPP 100%, VPN 90,5% y Kappa 0,85 para infecciones activas por P.vivax y P. malariae. Esta sensibilidad para P. vivax aumenta con parasistemias entre 101-500 par/µL. La concordancia encontrada en este estudio entre la prueba Now®malaria ICT P.f/P.v. y el método parasitológico para las especies P. vivax/P. malariae, aunque no para P. falcifarum, aporta un valor adicional a las ya conocidas características de la prueba tales como procedimiento fácil, rapidez e interpretación de los resultados en áreas de díficil acceso, por lo que concluimos que es una herramienta alternativa para el diagnóstico de malaria, sin llegar a sustituir el método parasitológico convencional.

Sharing of antigens between Plasmodium falciparum and Anopheles albimanus

The presence of common antigens between Plasmodium falciparum and Anopheles albimanus was demonstrated. Different groups of rabbits were immunized with: crude extract from female An. albimanus (EAaF), red blood cells infected with Plasmodium falciparum (EPfs), and the SPf66 synthetic malaria vaccine. The rabbit's polyclonal antibodies were evaluated by ELISA, Multiple Antigen Blot Assay (MABA), and immunoblotting. All extracts were immunogenic in rabbits according to these three techniques, when they were evaluated against the homologous antigens. Ten molecules were identified in female mosquitoes and also in P. falciparum antigens by the autologous sera. The electrophoretic pattern by SDS-PAGE was different for the three antigens evaluated. Cross-reactions between An. albimanus and P. falciparum were found by ELISA, MABA, and immunoblotting. Anti-P. falciparum and anti-SPf66 antibodies recognized ten and five components in the EAaF crude extract, respectively. Likewise, immune sera against female An. albimanus identified four molecules in the P. falciparum extract antigen. As far as we know, this is the first work that demonstrates shared antigens between anophelines and malaria parasites. This finding could be useful for diagnosis, vaccines, and the study of physiology of the immune response to malaria.

Epítopes de antígenos compartidos entre Plasmodium falciparum y Anopheles albimanus fueron identificados. Diferentes grupos de conejos fueron inmunizados con: extracto crudo de mosquito hembra de An. albimanus (EAaH), glóbulos rojos infectados con P. falciparum (EPfs) y la vacuna antimalárica sintética SPf66. Los anticuerpos policlonales producidos en conejos fueron evaluados por ELISA, inmunoensayo simultáneo de múltiples antígenos (MABA) e Immunoblotting. Todos los extractos resultaron inmunogénicos cuando se evaluaron por ELISA, MABA e Immunoblotting. Diez moléculas fueron identificadas en los mosquitos hembras y diez en los antígenos de P. falciparum por los sueros autólogos. El patrón electroforético por SDS-EGPA fue diferente para los tres antígenos evaluados. La reactividad cruzada de moléculas entre An. albimanus y P. falciparum fue demostrada por ELISA, MABA e Immunoblotting. Anticuerpos anti-P. falciparum y anti-SPf66 reconocieron diez y cinco componentes respectivamente en el extracto crudo de anofelinos (EAaH). Asimismo, sueros inmunes contra An. albimanus hembra identificaron cuatro moléculas en el extracto del antígeno de P. falciparum. Hasta el presente, este es el primer estudio en el que se demuestra la presencia de antígenos compartidos entre anofelinos y los parásitos de malaria. Este hallazgo podría ser de relevancia para el diagnóstico, vacunas e interpretación de la fisiopatología de la respuesta inmunitaria en malaria.

Péptidos sintéticos para el diagnóstico y vigilancia epidemiológica en esquistosomosis mansoni / Synthetics peptides for the diagnose and vigilance epidemiologic in schitosomiasis mansoni

El diagnóstico de laboratorio de la esquistosomosis es uno de los problemas por resolver, especialmente en áreas de bajas cargas parasitarias, como Venezuela, además de ser también una de las limitantes la evaluación de las nuevas vacunas contra esta parasitosis. Por esta razón, nos planteamos desarrollar métodos de inmunodiagnóstico basados en la detección de anticuerpos y de antígenos circulantes utilizando la estrategia de la síntesis química, para elaborar péptidos derivados de la captesina B (Sm31) y la asparraginil endopeptidasa (Sm32). Tres de los péptidos de la Sm31 fueron reconocidos al menos por el 49 por ciento de los pacientes y de ellos el IMT-180, lo fue por el 86 por ciento, exhibiendo además una alta especificidad (100 por cierto). Dos de los péptidos de la Sm31 y 3 de la Sm32 indujeron en conejos, el reconocimiento de las respectivas moléculas, inclusive en cortes histológicos. Resultados preliminares de inmunoensayos de captura anti-Sm32 han revelado una baja sensibilidad

Colonization and laboratory maintenance of Anopheles albimanus Wiedemann in Venezuela

Anopheles albimanus e dos principais vetores da malaria na America Central e Caribe, sendo a primeira vez que conseguimos sua colonizacao na Venezuela. Os mosquitos foram capturados no Estado Aragua e colonizados no laboratorio atraves de um metodo simples e eficiente. Estimaram-se parametros populacionais usando tabelas de vida em condicoes laboratoriais bem controladas, observando-se probabilidade de sobrevivencia constante proxima a 1 para os estadios imaturos. O potencial reprodutivo esta representado por uma taxa reprodutiva (Ro) de 3,83, periodo entre geracoes de 24,5 dias e uma taxa intrinseca de crescimento (rm) de 0,05

Protocolo de vacunación antimalárica en fase III municipio Las Majadas Estado Bolívar Venezuela / Antimalaric vaccination protocol III municipio las Majadas Bolivar State Venezuela

El presente proyecto se realizó con el proposito de obtener información sobre la eficacia, seguridad,tolerancia y aceptabilidad de la vacuna sintética SPf66n contra plasmodium falciparum, en una área holoendémica, las majadas del estado Bolívar. La muestra estará representada por 330 individuos, femeninos y masculinos divididos en 2 grupos; uno vacunado y el otro no vacunado, mayores de 12 años y que no presenten criterios de exclusión. La vacuna se administraráen 3 dosis de 2 mgs de la proteina SPf66n por cada inmunización de 0,5 cc subcutaneo. El estudio tendrá un período de observación de un año posrerior ala tercera dosis. Los análisis y resultados se presentarán en un informe final al terminar el estudio

Plasmodium cathemerium, cepa de Icteridae inoculable a palomas, patos y pavos; sus vectores y utilidad en enseñanza e investigación / Plasmodium cathemerium contaminate icterocephalus to pigeons and turkey poults, his vectors and teaching and research usefulness

Se presenta un estudio detallado de una cepa de Plasmodium (H) cathemerium Hartman, 1972, aislada de Agelaius icterocephalus (Icteridae), el cual fue capturado en el municipio Tocuyo de la Costa, Falcon. Con esta cepa se logró infectar a palomas, patos y pavos. Los mosquitos que resultaron en el laboratorio vectores del parásito fueron: Culex beauperthuyi, Culex inflictus y Culex nidripalpus, de los cuales se mantienen con facilidad colonias en el laboratorio. Se estudió el ciclo eritrocítico incluyendo la periodicidad, el exoeritrocítico y el esporogónico. Se práctico un estudio diario del desarrollo de los ooquistes y una peculiaridad que se encontró fue la presencia de una vesícula en ellos, en la cual se acumulan los gránulos de pigmento que muestran tipicos movimientos brownianos aún en los últimos días de desarrollo. Las más intensas infecciones en los mosquitos se presentaron en Culex beauperthuyi, las que creemos comparables a las producidas por P.gallinaceum en Aedes aegypti. Se destaca la utilidad de este modelo experimental en la enseñaza e investigación en la América Latina, por ser el único que no presenta peligrosidad en esta región. Se advierte que ha habido la sugerencia de que C.beauperthuyi pueda ser sinónimo de C.saltanensis