Red propolis and L-lysine on angiogenesis and tumor growth in a new model of hamster cheek pouch inoculated with Walker 256 tumor cells / Própolis vermelha e L-lisina na angiogênese e no crescimento tumoral em novo modelo de bolsa jugal de hamster inoculada com células de tumor de Walker 256

ABSTRACT Objective: To evaluate the effect of red propolis and L-lysine on angiogenesis and tumor growth in a new model of hamster cheek pouch inoculated with Walker 256 tumor cells. Methods: The study consisted of two experiments with four groups each (total: 57 hamsters). In the experiment 1, the animals were inoculated with Walker tumor cells, followed by administration of test substances (red propolis 200mg/5mL/kg or L-lysine 150mg/kg) or control substances (gum arabic 5mL/kg or water 5mL/kg) for 10 days. The animals in the experiment 2 received red propolis, L-lysine, gum arabic or water at the same doses, for 33 days prior to inoculation of Walker tumor cells, followed by 10 days of treatment with the same substances. Based on single-plane images, angiogenesis was quantified (mean vascular area), in percentage, and tumor area (mm2) and perimeter (mm). Results: In the experiment 1, compared to animals receiving water, the mean vascular area expressed in percentage was significantly smaller in animal treated with propolis (p<0.05) and L-lysine (p<0.001). Conclusion: Both red propolis and L-lysine inhibited tumor angiogenesis in the new hamster cheek pouch model when administered after tumor inoculation.

RESUMO Objetivo: Avaliar o efeito da própolis vermelha e da L-lisina na angiogênese e no crescimento tumoral em novo modelo de bolsa jugal de hamster inoculada com células de tumor de Walker 256. Métodos: O estudo consistiu em dois experimentos com quatro grupos cada (total: 57 hamsters). No experimento 1, os animais foram inoculados com células de tumor de Walker, tendo em seguida administradas as substâncias teste (própolis vermelha 200mg/5mL/kg ou L-lisina 150mg/kg) ou controle (goma arábica 5mL/kg ou água 5mL/kg) por 10 dias. Os animais do experimento 2 receberam própolis vermelha, L-lisina, goma arábica ou água nas mesmas doses, por 33 dias antes do inóculo das células de tumor de Walker, seguido por 10 dias de tratamento com as mesmas substâncias. Baseado em imagens em plano único, foram quantificados a angiogênese (área vascular média), em termos percentuais, e a área (mm2) e o perímetro (mm) do tumor. Resultados: Comparada aos animais que receberam água, a área vascular média, expressa em percentagem, foi significativamente menor nos animais tratados com própolis (p<0,05) e com L-lisina (p<0,001). Conclusão: Tanto a própolis vermelha quanto a L-lisina inibiram a angiogênese no novo modelo de bolsa jugal de hamsters, quando administradas após a inoculação do tumor.

Immunohistochemistry of the uterine cervix of rats bearing the Walker 256 tumor treated with copaiba balsam

PURPOSE: To investigate the immunohistochemistry of the uterine cervix of 20 Wistar rats (Rattus norvegicus) bearing the Walker 256 tumor, treated with copaiba oil (Copaifera officinalis). METHODS: The animals were grouped into four subgroups, with five rats each: the GCT and GCopT received distilled water and topically copaiba, respectively, while the GCG and GCopG received distilled water and copaiba by gavage, respectively. The substances were administered for nine days. On the 12th day, after euthanasia, the tumor pieces were sent to the identification of T CD4+, T CD8+ and Natural Killer cells. RESULTS: It was found that the pattern of expression for specific markers of phenotypes of cells involved in tumor immune response was similar in all groups, regardless the administration way of copaiba oil (topical or gavage). CONCLUSION: Copaiba balsam, administered either topically or by gavage, did not alter the pattern of tumor immune response in rats bearing Walker 256 Tumor.

Growth inhibition of Walker carcinosarcoma 256 with alcoholic extract of green tea leaves (Camellia sinensis) / Inibição do crescimento do carcinossarcoma 256 de Walker pelo extrato alcoólico de folhas de chá verde(Camellia sinensis)

PURPOSE: To evaluate the antitumor activity of alcoholic extracts of green tea (Camella sinensis). METHODS: Four groups of six Wistar rats were inoculated intramuscularly with 10(6) Walker tumor cells/mL. During 10 days, the animals received by gavage either 0.9% saline solution (Group I; negative control), solution containing 20 mg/Kg of tamoxifen (Group II; positive control), solution containing 0.07 g/Kg alcoholic extract of C. sinensis (Group III), or solution containing 0.14 g/Kg alcoholic extract of C. sinensis (Group IV). Following euthanasia on the tenth day, the tumor, liver, kidneys and spleen were excised and weighed, and tumor volume and tumor growth inhibition were quantified. RESULTS: The average weight of the animals was greater in Group IV than in Group II (p=0.0107). Tumor weight was smaller in Group IV than in Group I (p=0.0062), but did not differ from Group II. Tumor volume was smaller in Groups II and IV than in Group I (p=0.0131). Tumor growth inhibition was observed in Groups II (44.67% ± 32.47), III (16.83% ± 53.02) and IV (66.4% ± 25.82) (p>0.05). The groups did not differ with regard to the weight of the excised organs. CONCLUSION: Alcoholic extracts of green tea have antitumor activity.

OBJETIVO: Avaliar a atividade antitumoral do extrato alcoólico do chá verde (C. sinensis). MÉTODOS: Quatro grupos de seis ratos Wistar foram inoculados com 1x10(6) células/mL do tumor de Walker por via intramuscular. Os grupos foram tratados durante 10 dias, por gavagem, com salina 0,9 % (Grupo I, controle negativo), 20 mg/Kg de tamoxifeno (Grupo II, controle positivo) e extrato alcoólico de C. sinensis nas doses de 0,07 g/Kg (Grupo III) ou 0,14 g/Kg (Grupo IV). O volume e a inibição do crescimento tumoral foram calculados. RESULTADOS: A média dos pesos dos animais foi maior no Grupo IV do que no Grupo II (p=0,0107). O peso tumoral do Grupo IV foi menor do que o Grupo I (p=0,0062), mas não houve diferença quando comparado ao Grupo II. O volume tumoral foi menor nos grupos II e IV quando comparados ao Grupo I (p=0,0131). Inibição tumoral foi observada nos Grupos II = 44,67 ± 32,47, III = 16,83 ± 53,02 e IV = 66,4 ± 25,82 (p>0,05). Não houve diferença no peso dos órgãos entre os grupos. CONCLUSÃO: O extrato alcoólico do chá verde possui ação antitumoral.

The effect of copaiba balsam on Walker 256 carcinoma inoculated into the vagina and uterine cervix of female rats / Efeito do óleo de copaíba no tumor de Walker 256 inoculado em vagina e colo de útero de ratas fêmeas

Purpose: To verify the copaiba balsam (Copaifera officinalis) effect on Walker 256 carcinoma inoculated into vagina and uterine cervix of rats. Methods: Eighteen female Wistar rats weighing between 180-250g were used, distributed into 2 groups (GCop, GC). On the 1st day of the experiment, 0.3 ml of Walker 256 carcinoma (2x10(6) concentration) was inoculated in both groups; on the 3rd day of the experiment, it was given 4.8 ml/kg of distilled water to the GC group, and 4.8 ml/kg of copaiba balsam to the GCop group. On the 12th day, euthanasia was performed and the tumor was grafted, being weighted and verified its volume. The data were submitted to statistical analysis with ANOVA test. Results: It was observed that copaiba balsam presented a negative inhibitory potential of 70 percent. Conclusion: The copaiba balsam stimulated the tumor growth.

Objetivo: Verificar o efeito do óleo de copaíba da espécie Copaifera officinalis no carcinoma de Walker 256 inoculado em vagina e colo de útero de ratas. Métodos: Foram utilizadas 18 ratas da linhagem Wistar, pesando entre 180-250g, distribuídas em dois grupos (CCop, GC). No 1º dia de experimento, em ambos os grupos foi inoculado 0,3ml de tumor de Walker 256 na concentração de 2x10(6); no 3º dia após essa inoculação, foi iniciada a administração de água destilada na dose de 4,8 ml/kg ao GC, e copaíba na dose de 4,8 ml/kg ao GCop. No 12º dia foi realizada a eutanásia das ratas e ressecado o tumor, sendo este pesado e averiguado seu volume. Os dados obtidos foram submetidos à análise estatística pelo método ANOVA. Resultados: Observou-se que o óleo de copaíba apresentou um potencial inibitório negativo de 70 por cento. Conclusão: O óleo de copaíba estimulou o crescimento tumoral.

The oophorectomy effect on Walker 256 tumor inoculated into the vagina and uterine cervix of female rats / Efeito da ooforectomia no tumor de Walker 256 inoculado em vagina e colo de útero de ratos fêmeas

PURPOSE: Verify the effect of oophorectomy on the evolution of the Walker 256 tumor inoculated into the vagina and cervix of female rats. METHODS: Ten Wistar, female rats were used, distributed into two groups with 05 animals each: Tumor group (TG): Rats inoculated with Walker 256 tumor; Oophorectomy group (OG): oophorectomized rats inoculated with Walker 256 tumor. The day before the tumor vaginal inoculation, acetic acid was inoculated into the vaginas of both groups of rats; the following day, the vaginal walls were scarified with an endocervix brush, and then Walker 256 tumor was inoculated. After 12 days, the tumor was removed together with the vagina and uterine horns for macro and microscopic analyses. The data were submitted to statistical analyses. RESULTS: There was no statistical difference between the two groups; however it was observed that the behavior of tumor growth on the OG group presented greater invasion, compromising the uterine horns. CONCLUSION: The results of the study on the GO group presented a macroscopic behavior different from the TG group, however, both of them presented similar development in terms of tumor mass.

OBJETIVO: Verificar o efeito da ooforectomia à inoculação do tumor de Walker 256 em vagina e colo de útero de ratas. MÉTODOS: Foram utilizadas 10 ratas Wistar, fêmeas, virgens, adultas, distribuídas em dois grupos de estudo com 05 animais cada: grupo tumor (GT): ratas inoculadas com tumor de Walker 256, e grupo Ooforectomia (GO): ratas ooforectomizadas e inoculadas com tumor de Walker 256. No dia anterior à inoculação vaginal do tumor, foram inoculados 0,3ml de ácido acético na vagina das ratas de ambos os grupos; no dia seguinte, foi realizada a escarificação da parede vaginal com uma escova de endocérvice e inoculado tumor de Walker 256. Após 12 dias, foi removido o tumor em bloco com vagina e cornos uterinos para análise macro e microscópica. Os dados foram submetidos à análise estatística. RESULTADOS: Não houve diferença estatística entre os dois grupos; no entanto, notou-se que o comportamento de crescimento do tumor no grupo GO apresentou maior invasividade em extensão, comprometendo cornos uterinos. CONCLUSÃO: Observou-se que o grupo GO apresentou comportamento macroscópico diferente ao grupo GT, no entanto, em termos totais de massa tumoral ambos apresentam desenvolvimento similar.

Radiographic and histological evaluation of bisphosphonate alendronate and metotrexate effects on rat mandibles inoculated with Walker 256 carcinosarcoma

PURPOSE: To investigate the effects of bisphosphosnate alendronate (ALD) and metotrexate (MTX) on an experimental model of Walker 256 carcinosarcoma developed in the oral cavity of rats. METHODS Walker 256 carcinosarcoma cell suspension (0,1 mL) containing 10(6) cell/mL was implanted in the alveoli of the first and second molars. The animals were divided and treated with saline, MTX, ALD, and MTX plus ALD. Later, the animals were sacrificed, the tumors were measured and the mandibles were removed for radiographic and histological analysis. RESULTS: In the control group, the radiographic images demonstrated radioluscency with poorly defined borders, and the microscopic examination revealed tumor infiltration into the peripheral and central regions of the bone. Areas of necrosis were commonly seen. In the treated groups with ALD, associated or not with MTX, the radiographic analysis revealed circumscribed tumor-induced osteolysis and various degrees of radiotransparence; while, histologically, preserved bone trabeculae with osteoid formation was observed among malignant cells. CONCLUSION: The bisphosphonate alendronate exherted an osteoprotective effect and induced bone neoformation on the Walker 256 carcinosarcoma inoculated in rat mandibles. The combination of metotrexate with bisphosphonate alendronate is more successful than treatment with the agents alone in controlling the growth of neoplastic cells and in stimulating reactive new bone. Therefore, this may be an alternative treatment to malignant lesions of maxillaries with osteolysis.

OBJETIVO: Avaliar o efeito do bisfosfonato alendronato (ALD) e do metotrexato (MTX) em modelo do carcinossarcoma 256 de Walker na mandíbula de ratos. MÉTODOS: Uma suspensão de células tumorais do carcinossarcoma 256 de Walker (0,1mL), na concentração de 10(6) células/mL, foi implantada nos alvéolos de ratos previamente abertos por exodontia. Os animais foram divididos em grupos e tratados com salina, MTX, ALD e associação do MTX com ALD. Após o sacrifício, os tumores foram medidos e as mandíbulas removidas para exames radiográfico e histológico. RESULTADOS: No exame radiográfico do grupo controle foi verificada área lítica, sem evidência de reparo na região dos alvéolos, e no microscópico, infiltração óssea periférica e central, de pequenas células tumorais com diversas áreas de necrose. Nos grupos tratados com ALD, associado ou não ao MTX, a análise radiográfica mostrou redução da osteólise tumor-induzida com graus variados de radiotransparência na estrutura óssea; enquanto que, na análise histopatológica, trechos de tecido ósseo preservado, com formação de osteóide em meio a células tumorais foram observados. CONCLUSÃO: O bisfosfonato alendronato exerceu um efeito osteoprotetor e induziu neoformação óssea em mandíbulas de ratos implantadas com células de carcinossarcoma de Walker 256. A combinação do metotrexato com o bisfosfonato alendronato foi mais eficaz que o tratamento com os agentes isoladamente no controle do crescimento das células neoplásicas e na estimulação da formação óssea. Sendo assim, essa associação constitui-se uma alternativa de tratamento das neoplasias malignas dos maxilares com invasão e comprometimento ósseo.

Experimental inoculation model of Walker 256 carcinoma into vagina and cervix uteri of female rats

PURPOSE: To establish an inoculation model of Walker 256 carcinoma on cervix uteri and vagina of rats. METHODS: Fifteen female rats were used, and assigned to three groups each one with five rats: group A - rats with 4x10(6) cells of Walker 256 carcinoma without acid acetic inoculation; group B - rats with 2x10(6) cells of Walker 256 carcinoma with acid acetic inoculation and group C: rats with 4x10(6) cells of Walker 256 carcinoma with acid acetic inoculation. The day before tumor cells inoculation the rats from groups B and C were anaesthetized with diethylether and 0,3 ml of acetic acid was inoculated into their vaginas. Tumor cell inoculation into the vagina and cervix was done under general anesthesia with diethylether. Then a endocervical brush was used to scrape the vaginal wall and after that 0,3 ml of the liquid containing tumor cells was inoculated on the vagina and cervix. For the tumor analysis, animals were euthanized at day 12 following tumor cell implantation by an excessive inhalation of diethylether. Tumor was resected entirely and weighed and the tumors were then sectioned and counter stained with hematoxylin and eosin for histopathologic evaluation. It was also calculated the percentage of tumor equivalent to the body weight by the formula: P= tumor weight / body weight x 100. Data were analyzed by one-way analysis of variance - ANOVA. P values < 0.05 were taken to indicate statistical significance. RESULTS: Implantation and growth on GB and GC was 100 percent and on GA 20 percent. There was no statistical difference between GB and GC averages. CONCLUSION: According to the methods used, the Walker 256 carcinoma inoculation model into vagina and cervix have an implantation and growth rate of 100 percent when associated with previous acid acetic inoculation and there is no behavioral difference between using 2x10(6) or 4x10(6) cells on its inoculation.

OBJETIVO: Estabelecer um modelo de inoculação de Tumor de Walker 256 em vagina e colo de útero de ratas. MÉTODOS: Foram utilizadas 15 ratas fêmeas, virgens, adultas, pesando entre 200-250g, distribuídas em três grupos de estudo com cinco animais cada: grupo A (GA): ratas com tumor de Walker 256 em concentração de 4x10(6) sem ácido acético; grupo B (GB): ratas com tumor de Walker 256 em concentração de 2x10(6) células com ácido acético; grupo C (GC): ratas com tumor de Walker 256 em concentração de 4x10(6) células com ácido acético. No dia anterior à inoculação do tumor, foi realizada a inoculação de 0,3 ml de ácido acético a 10 por cento na vagina das ratas de GB e GC; no dia seguinte, tanto estas como as ratas do grupo GA foram anestesiadas, feita a escarificação da parede vaginal com uma escova de endocérvice e inoculado 0,3ml de tumor na concentração de 4x10(6) células nos grupos GA e GC e 2x10(6) células no grupo GB. Após 12 dias, foi realizada a eutanásia e removido o tumor em bloco com vagina e cornos uterinos para análise, sendo pesado e averiguado seu volume e calculado as relações entre o seu peso e o peso final da rata e o seu volume e o peso final da rata. Os dados foram colhidos e submetidos à análise estatística pelo método ANOVA (um critério). RESULTADOS: A pega em GB e GC foi 100 por cento e em GA 20 por cento. Não houve diferença estatística entre as médias obtidas entre GB e GC. CONCLUSÃO: De acordo com a metodologia utilizada, o modelo de tumor de Walker 256 na vagina apresenta pega de 100 por cento quando associado a ácido acético e não há diferença de comportamento com a inoculação de 4x10(6)ou 2x10(6) células.