Evaluación de estuches de PCR-tiempo real para detección de virus del papiloma humano de alto riesgo / Evaluation of real-time PCR kits to detect high-risk human papillomavirus

RESUMEN Introducción: El empleo de técnicas moleculares para el diagnóstico de virus del papiloma humano de alto riesgo oncogénico (VPH-AR) es crucial para la detección precoz del cáncer cervicouterino. Objetivo: Evaluar el desempeño analítico de dos estuches de PCR-tiempo real, comercializados por el Centro de Inmunoensayo de Cuba, para detectar VPH-AR. Métodos: Se utilizaron dos paneles de ADN de muestras cervicouterinas: uno con 150 muestras, para validar el estuche SUMASIGNAL HPV 16/18, el proceso de extracción de ADN y su utilidad como prueba cuantitativa, y otro con 163 muestras para evaluar el estuche HPV 13+2. Se determinó la utilidad clínica del estuche HPV 13+2 en 55 muestras cervicovaginales autocolectadas. Se calcularon los indicadores de desempeño analítico de ambos estuches con respecto a pruebas de referencia. Resultados: Los indicadores de desempeño para SUMASIGNAL HPV 16/18 fueron excelentes (> 95 %), concordancia 96 %, índice kappa=0,93 [0,85-1,01]. La extracción de ADN mostró 100 % de especificidad clínica y analítica y 95 % de sensibilidad analítica. Se obtuvo buena correlación con la prueba de referencia cuantitativa (r = + 0,688). El estuche HPV 13+2 tuvo especificidad y sensibilidad clínicas del 100 %, la especificidad analítica fue del 84 % debido a reactividad cruzada con otros VPH-AR. Su aplicación clínica reveló alta frecuencia de infección (41,8 %): 23,6 % con VPH-AR, particularmente en mujeres jóvenes (50 %). La muestra autocolectada resultó útil (100 %). Conclusión: Los ensayos evaluados mostraron altos estándares de calidad, lo que permitiría su uso con una cobertura nacional en una plataforma tecnológica disponible para todo el país.

ABSTRACT Introduction: The use of molecular techniques for the diagnosis of high oncogenic risk human papillomavirus (hrHPV) is crucial for the early detection of cervical cancer. Objective: To evaluate the analytical performance of two real-time PCR kits, commercialized by the Cuban Immunoassay Center, to detect hrHPV. Methods: Two DNA panels from cervical samples were used: one with 150 samples to validate the SUMASIGNAL HPV 16/18 kit, the DNA extraction process and its usefulness as a quantitative test; and another with 163 samples to evaluate the HPV 13+2 kit. The clinical utility of the HPV 13+2 kit was determined in 55 self-collected cervicovaginal samples. The analytical performance indicators of both kits were calculated with respect to reference tests. Results: Performance indicators for SUMASIGNAL HPV 16/18 were excellent (>95%), concordance 96%, kappa index=0.93 [0.85-1.01]. DNA extraction showed 100% clinical and analytical specificity and 95% analytical sensitivity. Good correlation was obtained with the quantitative reference test (r = + 0.688). The HPV 13+2 kit had 100% clinical specificity and sensitivity, analytical specificity was 84% due to cross-reactivity with other hrHPVs. Its clinical application revealed a high frequency of infection (41.8%): 23.6% with hrHPV, particularly in young women (50%). The self-collected sample was viable (100%). Conclusion: The assays evaluated showed high quality standards, which would allow their use with national coverage in a technological platform available for the whole country.

Infecciones múltiples por Alphapapillomavirus, especie 9, en mujeres ecuatorianas con lesiones intraepiteliales y cáncer cervicouterino / Multiple infections by Alphapapillomavirus, specie 9, in Ecuadorian women with intraepithelial lesions and cervical cancer

Introducción: El significado biológico de las infecciones múltiples con virus del papiloma humano de alto riesgo oncogénico (VPH-AR), pertenecientes a la familia Alphapapillomavirus, en la carcinogénesis cervical aún es controversial. Objetivo: Proporcionar información sobre la circulación del VPH-AR del género Alphapapillomavirus-especie 9, e infecciones múltiples en mujeres ecuatorianas con lesiones intraepiteliales y cáncer cervicouterino (CaCU). Métodos: Se estudiaron 300 mujeres, residentes en la región Litoral del Ecuador. Se detectó la infección viral en muestras cervicales, mediante PCR anidada con cebadores genéricos MY09/11 y GP5/GP6. Los genotipos virales fueron identificados con el sistema comercial ANYPLEX II VPH28. La razón de prevalencia (RP) fue utilizada como medida de asociación entre las lesiones citológicas y las infecciones simples, múltiples o combinaciones de genotipos. Resultados: Se detectó VPH en el 92,00 % (276/300) de las mujeres, con frecuencias altas de infección por genotipos individuales, principalmente de alto riesgo oncogénico. Los VPH-AR más frecuentes fueron VPH58 (18,17 por ciento), 70 (8,64 por ciento), 53 (8,34 por ciento), 35 (7,45 por ciento), 16 (7,37 por ciento), 33 (6,55 por ciento), 31 (5,58 por ciento) y 18 (4,24 por ciento). En el 91,66 por ciento (253/276) de las muestras se detectaron infecciones múltiples, hasta con 13 tipos en una misma paciente, incluyendo varias especies del género Alphapapillomavirus. La combinación VPH16/VPH58 fue la más frecuente en lesiones de alto grado (RP = 2,9; p = 0,000), y la coinfección triple VPH16/VPH58/VPH70 predominó en las mujeres con CaCU (RP = 3,5; p = 0,007). Conclusión: Los resultados demuestran que la combinación VPH16/VPH58 del género Alphapapillomavirus, especie 9, podría ser un factor clave en la aparición de lesiones premalignas y su progresión hacia el CaCU(AU)

Introduction: It is still controversial the biological connotation of multiple infections with high-risk human papillomaviruses (hrHPV), that belong to the genus Alphapapillomavirus, for the cervical carcinogenesis. Objective: To provide information on the circulation of hrHPV, genus Alphapapillomavirus, specie 9, and the multiple infections in Ecuadorian women with intraepithelial lesions and cervical cancer. Methods: 300 women, from the coastal region of Ecuador, were screened. Viral infection was detected in cervix samples by nested PCR with MY09/11 and GP5/GP6 generic primers. Viral genotypes were identified using the commercial kit ANYPLEX II VPH28. The prevalence ratio (PR) was used to measure the association between cytological lesions and the simple, multiple or combined genotype infections. Results: Ninety-two percent of women (276/300) tested positive for HPV. Frequency of infection for single genotypes was high, mainly those of high oncogenic risk. The most frequent hrHPV genotypes were HPV58 (18.17 percent), 70 (8.64 percent), 53 (8.34 percent), 35 (7.45 percent), 16 (7.37 percent), 33 (6.55 percent), 31 (5.58 percent) and 18 (4.24 percent). In 91.66 percent (253/300) of the samples, multiple infections were detected, with up to 13 types in a single patient, including various species from the genus Alphapapillomavirus. The combination HPV16/HPV58 was the most frequent on high-grade lesions (PR = 2.9; p = 0,000), and HPV16/HPV58/HPV70 triple co-infection prevailed in women with cervical cancer (PR = 3.5; p = 0.007). Conclusions: The results evidence that the combination HPV16/HPV58, genus Alphapapillomavirus, specie 9, could be a key factor in the occurrence of premalignant lesions and their evolution into cervical cancer(AU)